Aislamiento Del Rumen Vacuno

grupo 13 de INGENIERIA SANITARIA
APAZA CONDORI, Angela Marietta CARRILLO DAZA, Grecia

GOMEZ ALVAREZ, Kimberlyn Johana HUANCA LLACHO, Abel
MURGA LLAMOCCA, Joseline
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

AGUSTIN
AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS DEL

RUMEN VACUNO
GRUPO: 13
INTEGRANTES:
APAZA CONDORI, Angela Marietta
CARRILLO DAZA, Grecia
GOMEZ ALVAREZ, Kimberlyn Johana
HUANCA LLACHO, Abel

TURNO:
Viernes de 4:30-6:10
1
AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS DEL RUMEN

VACUNO
OBJETIVOS
1. Aislar las bacterias anaerobias del rumen de bovinos, utilizando medios de

cultivos selectivos( agar sangre).
MARCO TEORICO
LOS RUMIANTES
Los rumiantes son animales herbvoros cuyo principal alimento son las plantas que
contienen carbohidratos fibrosos, su principal caracterstica y lo que lo diferencia de
las especies de estmago simple o no rumiantes, es la posibilidad de degradar el
alimento ingerido compuesto principalmente de celulosa, hemicelulosa y pectina.
Los rumiantes poseen la capacidad de digerir los alimentos en dos etapas, primero los
ingiere y luego realiza la rumia, que es un proceso que consiste en regurgitar el
material semidigerido y volverlo a masticar para deshacerlo, agregarle saliva y una
nueva deglucin. Los rumiantes tienen un aparato digestivo complejo de importancia
fundamental en los procesos de digestin y absorcin.
Los rumiantes, por tener una dieta de vegetales ricos en celulosa, dependen de las
poblaciones microbianas que se encuentran en su aparato digestivo, para la
degradacin de la celulosa, los mismos que producen una hidrlisis preliminar de la
celulosa antes de que alcance el intestino.
Taxonoma de los Rumiantes
Por las caractersticas zoolgicas los rumiantes son parte del suborden Ruminantia
del Orden Artiodactyla.
2
Tabla 1. Clasificacin y caractersticas del orden Artiodactyla.
Anatoma, Estmago
Suborden Familia Representantes
y Rumia
Suidae Porcino, jabal Estmago verdadero
Tayassuidae Pecares con 1 o 2 divertculos.
Suiformes
Ausencia de
Hippopotamidae Hipoptamo
verdadero retculo,
rumen u omaso. No
rumia.
Camello, llama, alpaca, Estmago tricameral
Tylopoda Camelidae
vicua, guanaco correspondiente a
rumen, retculo y
Ruminantia Tragulidae Ciervo-ratn
abomaso. Rumia.-
Cervidae Ciervos, caribes
Giraffidae Jirafa, okapi
Estmago
Ruminantia Antilocapridae Antlope
tetracameral. Rumia
Bovino, ovino, caprino,
Bovidae
bfalo
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En los subrdenes Suiformes, Typoda y Ruminantia, las especies poseen

estmagos con varios compartimentos, pero los Ruminantia de la familia
Cervidae, Giraffidae, Antilocapridae y Bovidae, poseen estmagos de
mayor complejidad por ser estmagos de cuatro compartimentos.
Aparato Digestivo de los Rumiantes
El aparato digestivo de los rumiantes, es utilizado para que los alimentos

ingeridos sean fragmentados mecnica y qumicamente, en sus molculas
constitutivas para que puedan ser absorbidos y utilizados en la
produccin de energa, en el crecimiento y en la renovacin celular y
tisular.
El aparato digestivo incluye la boca, esfago, un estmago de cuatro

compartimientos (tres preestmagos y un estmago verdadero), intestino
delgado e intestino grueso.
Estmago de los Rumiantes
El estmago de los rumiantes es muy importante, debido a que permite

aprovechar los alimentos ingeridos. El estmago de los rumiantes pertenece
al tipo de varias cavidades y est compuesto por cuatro compartimentos.
Rumen o panza
Retculo o redecilla o bonete
Omaso o libro
Abomaso o estmago glandular.
Las tres primeras partes se las conocen como preestmagos o proventrculo y

no poseen membrana glandular que cubra el epitelio escamoso estratificado.
En los compartimentos del preestomago se da la degradacin enzimtica y la
4
subdivisin de los alimentos, principalmente la celulosa, por medio de la

flora microbiana y de la sntesis de cidos grasos de cadena corta.
El estmago de los rumiantes ocupa la totalidad de la mitad izquierda de la

cavidad abdominal y una parte de la mitad derecha.
Ilustracin 7. Estomago de los rumiantes.
Rumen
El rumen es el primer preestmago y el ms grande. El rumen o panza es un

saco aplanado, lateralmente dilatado y de gran capacidad. Ocupa la totalidad
de la cavidad abdominal izquierda y con su porcin caudoventral atraviesa
parcialmente la lnea media y llega a la mitad derecha del abdomen. Este
compartimento, constituye ms del 65% del volumen total del estmago y
puede contener hasta 115 litros de material con el 10% al 20% de materia
seca. (Hutjens, 2003)
5
El rumen y el retculo se forman, a partir de la regin craneal del estmago

embrionario, cranealmente llega hasta el diafragma y caudalmente se
extiende hasta la entrada de la pelvis.
En el rumen, se distinguen dos superficies, una dirigida hacia las vsceras o

cara visceral, que es algo irregular y est relacionada fundamentalmente con
el omaso, el abomaso, el intestino, hgado, pncreas, rin izquierdo,
glndula adrenal homolateral, la aorta y la vena cava caudal. (Getty, Sisson,
& Grossman, 2005) Y la otra superficie, dirigida hacia la pared del abdomen
o cara parietal, que es convexa, y est relacionada con el diafragma, la pared
izquierda del abdomen y el bazo.
Adems posee dos bordes; el borde dorsal, que se relaciona con la

musculatura sublumbar y el diafragma, y el borde ventral que se relaciona
con la pared abdominal ventral y el abomaso. (Gloobe, 1989).
Las paredes del retculo rumen son musculares, poseen un exenso sitema
nervioso intrnseco y son capaces de desarrollar y coordinar patrones de
movimiento muy complejos, que permiten la retencin selectiva en el rumen
del material fermentable y la liberacin de los residuos no fermentables.
El rumen proporciona un ambiente apropiado, con un suministro de

alimentos, para el crecimiento y reproduccin de microorganismos, por ello
la digestin en esta zona es nicamente por accin de microorganismos. En la
obra Los cidos grasos voltiles, fuente de energa en los Rumiantes de
Zavaleta, se menciona que en el interior del rumen, las poblaciones
microbianas a travs de enzimas intra y extracelulares, convierten los
materiales vegetales en cidos grasos voltiles de bajo peso molecular como:
el cido frmico, el actico, el propinico, el butrico, el isobutrico, el 2-
metil butrico, el valrico, el isovalrico, el caproico y el caprlico, que son
absorbidos por las paredes del rumen y satisfacen las necesidades nutritivas
6
del animal, adems se produce dixido de carbono y metano, los cuales se

eliminan como productos residuales.
Retculo
El retculo toma su nombre, de la disposicin en forma de red de los pliegues

de su mucosa, y est situado entre el diafragma y el rumen; en la regin
intratorxica de la cavidad abdominal, entre el sexto y octavo espacio
intercostal hacia la lnea mediana. Esta cavidad se comunica con el rumen, a
travs del pliegue retculo-ruminal que los convierte en una sola unidad
funcional. Los cidos grasos producidos por la fermentacin microbial son
absorbidos en el rumen y el retculo.
Omaso
Se encuentra en su mayor parte en el lado derecho de la regin intratorxica

de la cavidad abdominal, entre la sptima y onceava costilla, posee forma
esfrica y presenta dos partes claramente diferenciadas, el cuerpo y el canal
omasal.
Abomaso
El abomaso es el estmago verdadero de los rumiantes, tiene forma de una

pera prolongada y est situado sobre la pared ventral del abdomen.
Microorganismos del Rumen
El rumen constituye un medio favorable, para el desarrollo de determinados

microorganismos; entre los que predominan bacterias anaerbicas y
protozoos ciliados, sin embargo, tambin se encuentran protozoos flagelados,
bacterifagos y hongos en menor cantidad.
Tabla 2. Microorganismos del rumen.
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% Biomasa
Grupo Biomasa Mg./100ml
total
Bacterias pequeas 1600 60-90
Selenomonas 300
Oscillospira flagellates 25
Protozoos ciliados 10-40
Entodinia 300
Dashytricha + Diplodinia 300
Isotricha+Epidinia 1100
Hongos 5-10
Fuente: Adaptado de Andrea Montalbetti, Microbiologa del Rumen,

2009.
El nmero de microorganismos en el rumen, depende de la composicin y

estructura de la dieta, as como de las mltiples interacciones entre ellos. Las
poblaciones microbianas interactan en el ecosistema ruminal, para
maximizar la eficiencia de fermentacin del alimento. La ausencia de aire en
el rumen, favorece el crecimiento de especies exclusivas de bacterias, como
las que pueden digerir las paredes de celulosa de plantas para producir
azucares sencillos.
Hongos
Los hongos constituyen hasta el 8% de la biomasa ruminal, contribuyen a la

digestin de alimentos fibrosos durante las primeras horas despus de
consumidos. Tienen la capacidad de penetrar en los residuos celulsicos y
excretan las celulasas
en sitios internos de las partculas celulsicas. Los hongos no predominan en

el rumen debido a su baja tasa de multiplicacin en comparacin con las
bacterias.
8
Bacterias
Las bacterias, representan la fraccin de la poblacin ruminal

imprescindibles para la vida del rumiante. En 1 ml de lquido de la panza hay
11
hasta 10 clulas bacterianas y constituye de un 5 a 10% (peso seco) del
contenido de la panza. (Schlegel, 1997)
Adems las bacterias contribuyen de dos formas a la nutricin de los

rumiantes; la primera por medio de los cidos formados durante la
degradacin de los polisacridos, ya que las bacterias tienen la habilidad
bioqumica de producir celulasas, que son las enzimas que intervienen en el
proceso de hidrlisis de la celulosa, y la segunda por efecto de la sustancia
celular de las bacterias, que es degradada en el intestino y tambin es
reabsorbida.
Las bacterias del rumen, son predominantemente anaerobias estrictas, pero

tambin coexisten con anaerobias facultativas, adheridas a las paredes del
rumen, stas usan el O2 que proviene del torrente circulatorio y son muy
importantes en las funciones del rumen.
Protozoos
En el rumen solo se encuentran protozoos ciliados, que forman entre un 20 a

40% de la biomasa en el rumen. Su contribucin al metabolismo de los
rumiantes es pequea, en comparacin a las bacterias. A pesar de estar
normalmente presentes no son imprescindibles para la funcin ruminal ni
para la supervivencia del animal.
Microorganismos Celulolticos
En los animales superiores, que presentan la capacidad para alimentarse con

celulosa, la accin de degradacin no es directa; sino que, en el
9
estmago presentan microorganismos, como bacterias y hongos aerobios y

anaerobios, que tienen la capacidad bioqumica para degradar celulosa. En
el rumen de los bovinos losmicroorganismos celulolticos representan
entre el 1 y 5% de la flora ruminal. (Rodriguez, 2005)
Metabolismo de los Rumiantes
Para el metabolismo de los diversos compuestos de la dieta del rumiante, el

rumen permite el crecimiento y desarrollo de microorganismos ruminales, as
como contribuye a mantener las condiciones fisicoqumicas apropiadas como
la temperatura, pH y el control de la dinmica de reciclaje de los compuestos
en el rumen.
El metabolismo de los rumiantes, se basa en la simbiosis microorganismos-

rumiante, debido a que los enlaces de tipo beta presentes en los carbohidratos
estructurales, solo pueden ser atacados por enzimas microbianas, liberadas
por la flora ruminal en los procesos digestivos fermentativos.
El proceso metablico inicia en el retculo-rumen, en el que las paredes que

poseen una musculatura fuerte realizan movimientos ruminales, que mezclan
eficazmente el contenido, facilitando as una fermentacin continua de los
alimentos ingeridos.
Los procesos de digestin en el tubo digestivo de los rumiantes dura entre 20

a 40 horas, lo cual es entre 10 a 20 veces ms rpido que en los ecosistemas
naturales externos. (Rodrguez, 2005)
Metabolismo Ruminal de los Hidratos de Carbono
La mayor parte de la energa utilizada por los rumiantes, proviene de los

carbohidratos, los mismos que constituyen la principal dieta de los
rumiantes.
10
Durante el proceso digestivo de los hidratos de carbono, los microorganismos

celulolticos, se adhieren a la superficie de los pedazos de fibra vegetal; que
fueron previamente cortadas por el efecto de la masticacin, mezclado y
rumia.
Los microorganismos adheridos en las fibras vegetales, liberan celulasas, que

son enzimas que liberan oligosacridos solubles, capaces de realizar la
digestin extracelular de la celulosa, produciendo residuos pequeos,
especialmente celobiosa que es incorporada a la bacteria y atacada por la
enzima celobiasa, que la desdoblar en dos glucosas.
Finalmente, la glucosa es utilizada por los microorganismo para obtener

energa va glucoltica y producir cidos grasos voltiles (AGV), que son
absorbidos a travs de la pared ruminal a una velocidad similar a su
velocidad de produccin. Alrededor de un 80% de la energa fermentada en
el rumen es convertida en AGV, el resto se pierde como calor y metano.
Metabolismo Ruminal del Nitrgeno
Las protenas constituyen el componente principal de nitrgeno en los

rumiantes, los forrajes verdes de la dieta del animal forman entre el 60 al
80% del nitrgeno total ingerido. (Buxad, 1994). Una parte de las
protenas ingeridas llega al intestino, pero la mayor parte, es degradada
generalmente por microorganimos, que somenten a las protenas a distintos
procesos enzimticos para su hidrolisis.
Las protenas son degradadas por los microorganismos ruminales, a
compuestos ms simples como pptidos, aminocidos y amonaco (NH 3),

que son de fcil asimilacin. La degradacin de las protenas en el rumen,
est influenciada por la solubilidad de las mismas en el lquido ruminal.
Protenas como albminas y globulinas, poseen una alta solubilidad en
soluciones salinas diluidas y la tasa de degradacin ruminal es alta, sin
11
embargo, protenas como prolaminas y gluteninas tienen una baja tasa de

degradacin en el rumen.
Metabolismo Ruminal de las Grasas
Las grasas son los lpidos ms importantes en la alimentacin animal. La

digestin y absorcin de las grasas se realiza con fines energticos, as
como para la constitucin de tejido adiposo y sntesis de grasa lctea.
(Buxad, 1994)
Las grasas de los alimentos sufren dos transformaciones en el rumen; la

primera la liplisis, que es la liberacin de los cidos grasos de los steres
presentes en los lpidos de los alimentos, y la segunda es la
biohidrogenacin, que es el procesos de saturacin de los dobles enlaces de
los cidos grasos. (Martnez, Prez, Prez, Gmez, & Carrin, 2010)
.
Bacterias del Rumen
Las bacterias son los microorganismos ms abundantes en el complejo

retculo-rumen, existe alrededor de 10 billones de clulas bacterianas por
gramo de contenido ruminal. Las bacterias, en este complejo presentan una
gran diversidad de gnero y especies, debido a la presencia de una amplia
gama de alimentos existentes en rumen. Se estima, que existen alrededor
de 200 a 250 especies, las mismas que son responsables de la degradacin
de los nutrientes de los alimentos, siendo indispensables para desarrollo de
los rumiantes. (Rodrguez y Valencia, 2008)
Las bacterias del rumen, son altamente especializadas en la degradacin de

los compuestos que existen en esta cavidad; tomando en cuenta que
diferentes dietas en los rumiantes modifican el la flora bacteriana del
rumen.
12
La fermentacin en los rumiantes est acoplada al crecimiento microbiano,

por ello algunas bacterias pueden utilizar el amoniaco o urea como fuentes
de nitrgeno para producir aminocidos, que de otra manera, estos
compuestos seran intiles para los rumiantes. As mismo, las protenas
bacterianas producidas en el rumen constituyen la fuente principal de
aminocidos para el animal.
Las fibras y otros polmeros vegetales insolubles, que no pueden ser

degradados por las enzimas del animal, son fermentados por bacterias a
cidos grasos voltiles, principalmente actico, propinico, butrico y a
gases como CO2 y CH4. Los AGV atraviesan las paredes del rumen y
pasan a la sangre, luego son oxidados en el hgado y pasan a ser la mayor
fuente de energa para las clulas.
Tambin algunas bacterias degradan componentes txicos de la dieta,
como los aminocidos mimosina y sus derivados, que inhibe a algunas
bacterias del rumen, pero es hidrolizada por otras.
Las bacterias del rumen, varan de acuerdo al sustrato que degradan, la

mayora utiliza monmeros o polmeros. Entre las bacterias especialistas
encontramos a
Ruminobacter amylophilus, que utiliza solo almidn; tambin est
Fibrobacter succinogenes, que utiliza principalmente celulosa; en
contraste, con las cepas de Butyrivibrio fibrisolvens, que son generalistas,
es decir que pueden degradar un amplio rango de sustratos incluido
almidn, celulosa, xilano y pectina. (Hosbson y Stewart, 1997)
Algunas de las Bacterias presentes en el rumen se describen a

continuacin.
Tabla 3. Algunas bacterias del rumen.
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Productos de
Organismo Morfologa Movilidad Sustrato
fermentacin
Fibrobacter Succinato, acetato,
succinogenes Bacilo - Celulosa
formiato
Acetato, formiato,
Butyrivibrio Bacilo
fibrisolvens + lactato, butirato, H2 y Celulosa
curvado
CO2
Ruminococcus albus Coco - Acetato, formiato, H2 y Celulosa

CO2
Clostridium Bacilo Acetato, formiato,
lochheadii + Celulosa
(espora) butirato, H2 y CO2
Ruminococcus Acetato, succinato y
Coco Celulosa
Flavefaciens H2
Clostridium Bacilo Acetato, formiato, Celulosa
polysaccharolyticum (espora) butirato y H2 Almidn
Bacteroides Formiato, acetato y
ruminicola Bacilo - Almidn
succinate
Ruminobacter Formiato, acetato y
Bacilo - Almidn
amylophilus succinate
Selenomonas Bacilo Acetato, propionato y
ruminantium + Almidn
curvado lactate
Succinomas Acetato, propionato y
amylolytica Ovalado + Almidn
succinate
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Streptococcus bovis Coco - Lactato Almidn

Bacilo
Selenomonas lactilytica + Acetato y succinato Lactato
curvado
Acetato, propionato,
Megasphaera elsdenii Coco - butirato, valerato, Lactato
coproato, H2 y CO2
Acetato, propionato y
Viellonella prvula Coco Lactato
H2
Bacilo Acetato, formiato,
Lachnospira multiparus + Pectina
curvado lactato, H2 y CO2
Acetato, propionato y
Anaerovibrio lipolytica Bacilo Lipoltico
succinate
Formiato, butirato,
Eubacterium ruminantium Bacilo Xilano
lactosa y CO2
Lactobacillus ruminis Bacilo Lactosa Azucares
Lactobacillus vitulinus Bacilo Lactosa Azucares
Methanobrevibacter
Bacilo - CH4 Metangenos
ruminantium
Methanomicrobium
Bacilo + CH4 Metangenos
mobile
Eubacterium
Bacilo Lactosa y H2 Aromticos
oxidoreducens
Fuente: Adaptado de Andrea Montalbetti, Microbiologa del Rumen, 2009.

Funcin de las Bacterias en el Rumen
Las bacterias que se encuentran en el rumen, son las encargadas de realizar varias
funciones vitales para el bienestar de los rumiantes.
Poseen la capacidad de degradar fibras y carbohidratos en AGV, dixido de

carbono y metano.
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La fermentacin est vinculada al crecimiento microbiano y las protenas

sintetizadas son la mayor fuente de protenas para el animal.
Los microorganismos del rumen sintetizan vitaminas necesarias para el rumiante.
Algunas bacterias del rumen degradan los componentes txicos de la dieta del
animal.
Respiracin de las Bacterias en el Rumen
Las principales bacterias del rumen son anaerobias estrictas, que estn adaptadas a la
ausencia de oxgeno y slo crecen en un medio exento de O 2; ya que es txico para
este tipo de bacterias. Pero existe una gran proporcin de especies, que pueden crecer
tanto en condiciones aerbicas como en anaerbicas, llamadas bacterias facultativas;
que tienen la capacidad de obtener energa tanto por respiracin en presencia de O 2,
como por fermentacin en ausencia de O2.
Condiciones para el Desarrollo de Bacterias Ruminales
Las condiciones en el rumen, usualmente son estables y se mantienen controladas por

el tipo, cantidad y calidad del alimento consumido. El factor de temperatura en el
rumen es alrededor de 39 C y puede variar entre 38 C a 42 C. Adems en el rumen
est presente una pequea cantidad de oxgeno, el pH es razonablemente estable con
valores entre 5.8 y 7.0, que est influenciado directamente por la saliva. (Jouany,
1991); tambin posee osmolaridad media de 280-340 mOsm/L y condicin redox de
-250 a -450 mV (Alvarez, Prez, De la Cruz, Quincosa & Snchez, 2009)
Productos de la Fermentacin Ruminal
Los productos de la fermentacin ruminal son muy variados, entre los principales se
encuentran el lactato y succinato, que sirven como sustratos de energa primarios
16
para otras bacterias, pero la mayor concentracin de productos obtenidos por

fermentacin ruminal son los cidos grasos voltiles
.
Clasificacin de las Bacterias Ruminales
Las bacterias del rumen son microorganismos muy complejos y pueden clasificarse
de muchas formas, en base a la morfologa, a la presencia de apndices, a la
composicin qumica celular, en base a los sustratos atacados y a los productos
finales de su metabolismo.
Las bacterias ruminales en base a los principales sustratos que emplean se clasifican
en:

Celulolticas

Hemicelulolticas

Amilolticas

Proteolticas

Lipolticas

Metanognicas

Bacterias que utilizan los cidos intermedios

Bacterias que utilizan azucares
Bacterias Celulolticas
Las bacterias celulolticas tienen la capacidad para degradar los hidratos de carbono
polimricos a compuestos sencillos como los acidos grasos y los alcoholes. Las
bacterias principalmente degradan celulosa a travs de un complejo enzimtico
celulsico y por la excrecin de celulasas extracelulares.
El pH dentro del rumen es un factor que afecta al desarrollo bacteriano, ya que las
bacterias celulolticas se desarrollan mejor en el extremo menos cido de pH entre
6,0 a 6,9. Muchas especies celulolticas pueden tambin degradar la himicelulosa.
17
La accin de las bacterias celulolticas en el rumen, se incia en los primeros cinco

segundos en el que los alimentos vegetales ingresan al rumen, colonizando la
superficie de los restos vegetales; adems la presencia de amonio en el medio facilita
la multiplican de las bacterias rpidamente. Entre las bacterias celulolticas existe
diferentes formas de degradacin de celulosa segn se trate de los grupos aerobios o
anaerbicos. Con algunas excepciones, los grupos anaerbicos degradan celulosa a
travs de un complejo enzimtico celulsico, y los grupos aerbicos, degradan la
celulosa a travs de la excrecin de celulasas extracelulares.
Entre los gneros que llevan a cabo el proceso de degradacin de celulosa tenemos
Cellulomonas, Bacteroides, Clostridium, Ruminococcus y Acetivibrio; los mismos
que poseen los mayores complejos multienzimticos extracelulares, llamados
celulosomas. (Rodriguez, 2005)
Bacterias Hemicelulolticas
La hemicelulosa es un importante componente de las paredes celulares y est

compuesta por hexosas, pentosas y generalmente cidos urnicos. El porcentaje de
hemicelulosa en la madera puede ser hasta del 25%. (Lomenca, 1970)
Los organismos capaces de degradar celulosa, habitualmente pueden utilizar

hemicelulosa; pero algunas especies hemicelulolticas no pueden utilizar la celulosa
como fuente de energa.
Las principales bacterias hemicelulolticas del rumen son: Butyrivibrio fibrisolvens,

Bacteroides rumincola y Ruminococcus spp.
Bacterias Amilolticas
Las bacterias amilolticas se encuentran en el rumen, en mayor cantidad cuando la

dieta del rumiante es rica en almidn, las bacterias poseen enzimas amilolticas que
aseguran la conversin de materiales amilceos en cidos grasos voltiles. Las
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bacterias celulolticas tienen la capacidad de digerir almidn, sin embargo, algunos

microorganismos amilolticos no pueden utilizar celulosa.
Especies importantes que digieren almidn son: Bacteroides amylophilus,

Succinomona amyloltica, Butyrividrio fibrisolvens, Lachnospira multparus y
Bacteroides rumincola.
Bacterias Proteolticas
Las protenas digeridas por los rumiantes son degradadas principalmente por las
bacterias proteolticas del rumen. (Martnez, Alarcon, & Moyano, 2000) Entre ste
tipo de bacterias encontramos a especies como: Bacteroides amylophilus, B.
ruminicola, algunas cepas de Buty-rivibrio fibrisolvens y Streptococcus bovis.
Bacterias Lipolticas
Las bacterias lipolticas producen la enzima lipasa, que se encarga de catalizar la

hidrlisis de las grasas o cidos grasos y el glicerol. Las bacterias del rumen
participan activamente en la hidrogenacin de los cidos grasos insaturados de
cadena larga y son responsables de la composicin constante de la grasa corporal de
los rumiantes.
Bacterias Metanognicas
Las bacterias metanognicas son las encargadas de regular la fermentacin total en el

rumen, ya que eliminan el hidrogeno gaseoso (H2), mediante la formacin de metano
(CH4). Las bacterias metanognicas, adems promueven el crecimiento de otras
especies bacterianas en el rumen y permiten una fermentacin ms eficaz. La
reduccin de CO2 con H2 gaseoso es el mtodo primario por el cual se produce el
metano en el rumen
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Algunas de las bacterias metanognicas son: Methanobrevibacter ruminantium,

Methanobacterium formicicum y Met-hanomicrobium mobile.
Las bacterias que utilizan cidos intermedios en el rumen, realizan la fermentacin

secundaria de los productos finales de otras bacterias del rumen, los cidos pueden
ser el lactato, succinato y metanato.
Bacterias que utilizan Azcares
La mayora de las bacterias del rumen que son capaces de utilizar carbohidratos
complejos, pueden fermentar disacridos o monosacridos como la glucosa.
Identificacin Bacteriana
Para la identificacin bacteriana es necesario realizar un estudio sobre las

caractersticas tintoriales, morfolgicas y bioqumicas de los microorganismos. La
identificacin por coloracin permite conocer los detalles morfolgicos de las
bacterias, existen varias tcnicas empleadas, pero la coloracin de Gram permite
distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas; debido a la diferente
estructura qumica que se presenta en la pared celular de las bacterias. Las bacterias
Gram positivas forman un compuesto estable con el violeta de genciana y aparecen
teidas de violeta y las Gram negativas se tien de rosado.
Las caractersticas morfolgicas de una bacteria, como organismo individual vienen

dadas por la rigidez de su pared. Las bacterias suelen adoptar fundamentalmente una
de las siguientes formas: esfrica, cilndrica, helicoidal, filamentosa o formas
intermedias de los casos anteriores.
Las pruebas bioqumicas, se basan en la habilidad de las bacterias para producir

diferentes enzimas, codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano.
Estas enzimas involucradas en el metabolismo bacteriano, pueden ser detectadas en
20
medios de cultivo especiales que contienen los substratos sobre los cuales las
enzimas actan, junto con un sistema indicador que permitir visualizar la
degradacin del substrato o la presencia de un metabolito especfico.
Adems las pruebas bioqumicas evalan varios parmetros, como la presencia o
ausencia de flagelos, mediante la prueba de movilidad, la produccin o no de
hemolisinas, el requerimiento o no de algunos factores especiales, la produccin o no
de algunas toxinas, etc.
MATERIALES Y METODOS
MATERIAL REQUERIDO:
a) Materiales de vidrio
Matraz de 250 ml
Probeta de 100 ml
b) Equipos
Estufa a 37C
Autoclave
Balanza
c) Reactivos
Agar sangre
d) Otros materiales
Mechero de Bunsen
Asa de Kolle
Anticoagulante
Papel de aluminio
Muestra de rumen
Bicarbonato de sodio
Agua destilada
Acido ctrico
Bolsas ziploc
Placas Petri
Deposito con tapa
Vela
Encendedor
21
Localizacin del lugar de Muestreo

El lquido ruminal utilizado para el aislamiento de las bacterias, se lo obtuvo de la
Empresa Municipal de Rastro y Plazas de Ganado del Cantn Cuenca, ubicado en la
va a Patamarca y calle del camal.
Ilustracin 8. Ubicacin del Camal de Rio Seco
Fuente: Mapa Google maps
Muestreo del Lquido Ruminal

Las muestras de lquido se obtuvieron con la ayuda del encargado del faenamiento
durante la maana.Se obtuvieron muestras del rumen en envases estriles de 50ml.
22
Ilustracin 10. Estomago de bovino.
Envase con la muestra de lquido ruminal.
Medio de cultivo y Aserrn
Para el crecimiento de microorganismos se emple Agar Base Sangre adicionado

con el 1% de aserrn como medio base para el cultivo de los microorganismos
ruminales.
El aserrn fue utilizado como nutriente para los microorganismos y permiti el

crecimiento y aislamiento de microorganismos que emplean celulosa como nutriente.
El tamao de partcula del aserrn empleado fue menor a 2 mm y fue esterilizado en
autoclave a 15 PSI durante 15 minutos, antes de mezclarlo con el agar.
23
Ilustracin 12. Medio de cultivo y aserrn.
Preparacin Lquido Ruminal
El lquido ruminal de cada muestreo se filtr para retener los materiales gruesos
flotantes, y obtener nicamente el material lquido que contiene los
microorganismos.
Descripcin y preparacin de Agar Sangre
Agar Base Sangre
Medio para propsitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos

microorganismos. Es un medio general rico en nutrientes, por lo que permite el
crecimiento de una amplia variedad de bacterias.
Con la adicin de sangre, el medio es til tanto para el aislamiento y cultivo de

microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una
gran variedad de muestras, como para la observacin de reacciones de hemlisis.
Composicin Agar Base Sangre
Agar Base Sangre
24
Infusin de corazn vacuno 500g

Triptosa 10g
Cloruro sdico 5g
Agar 15g
pH final 6,8
Preparacin
Para su preparacin pesamos 2.2 g de agar base para 60 ml de agua destilada

Se agrega 0.022 g de aserrn en un matraz de 250 ml
Mezclar perfectamente hasta obtener una suspensin homognea.
Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto.
Esterilizar 15 minutos a 121C.
Enfriar a 45-50C agregar sangre desfibrinada al 5%.
Homogeneizar y distribuir en placas o tubos.
25
Siembra
Por inoculacin directa del material en estudio, sobre la superficie del medio de
cultivo.
Usamos el mtodo de siembra por estras
26
Con el asa de Kolle se distribuye el inoculo por estras en zig-zag con escasa
separacin unas de otras
27
Incubacin
Incubamos a 37 C por 48 horas en estufa
Si no contamos con la estufa creamos un ambiente parecido en una caja de carton
colocando un foco de 25 watts por 48 horas
Condiciones de Anaerobiosis
Para crear una atmosfera anaerobia, dentro de una bolsa ziploc se emple cido
ctrico (C6H8O7) y bicarbonato de sodio (NaHCO3) combinados con agua, que
produce una reaccin que emite dixido de carbono (CO2), el mismo que desplaza al
oxgeno y permite un ambiente adecuado para el crecimiento de los microorganismos
anaerobios.
28
Condiciones de anaerobiosis en laboratorio.
Tambin podemos crear anaerobiosis colocando las placas en un envase con tapa y
cerrando con una vela prendida adentro.
La vela ser apagara y asi se consumir el oxgeno creando un ambiente anaerobio
Aislamiento de Bacterias
Permite la separacin de los microorganismos al estado de pureza a partir de una

muestra del problema. En nuestro caso .rumen vacuno.
Se requiri medio solido con gran superficie para que los microorganismos al ser
diseminados sobre el medio, generen su propia cepa por formacin de colonias
separadas ( el que usamos fue el agar sangre)
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Resultados:
El aislamiento de bacterias anaerobias a partir del rumen vacuno
Conclusiones
Mediante el uso de medios selectivos para microorganismos y a partir del

fluido ruminal fresco es posible aislar bacterias ruminales
29
Los inculos utilizados para el aislamiento de las bacterias, se obtuvieron de

vacas, con lo que se comprueba la presencia de bacterias degradadoras de
aserrn en bovinos..
La baja actividad celuloltica de las bacterias, puede estar directamente

relacionada con el tipo de sustrato y los medios de cultivo empleados para los
anlisis; ya que stos no incluyen todas las condiciones fisicoqumicas y
nutritivas presentes en el rumen. Adems de la falta de interacciones con
otros microorganismos que estimulan la actividad celuloltica de las bacterias.
6.2 Recomendaciones
Las bacterias aisladas corresponden a una pequea parte de la poblacin

bacteriana del rumen de bovinos, para identificar a una mayor cantidad de
especies bacterianas es necesario, incrementar el nmero de muestras de
lquido ruminal, as como emplear diferentes medios de cultivo y pruebas de
identificacin.
Se debe sembrar con la presencia del mechero de Bunsen prendido para evitar
microorganismos y contaminacin
Se debe mejorar las condiciones de laboratorio para este tipo de

investigaciones, ya que es posible, que algunas bacterias aisladas durante la
investigacin provinieron de la transmisin de contaminacin en laboratorio.
Es necesario experimentar con las bacterias aisladas en esta investigacin,

realizando la tincion gram para diferenciar bacterias gram-positivas y gram-
negativas
ANEXO 1
Tincin de Gram.
El principio de la tincin es de acuerdo con la estructura y grosor de la pared

bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positas y Gram negativas. Las Gram
30
positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicn y carecen de membrana externa,

por lo que fijan el colorante cristal violeta. Las Gram negativas tienen una capa ms
delgada de peptidoglicn y poseen una membrana externa, y no se fija el colorante.
Tcnica:
1. Extensin de una fina capa de muestra sobre el porta objetos.

2. Secar de la muestra al aire.
3. Fijacin por flameado de la placa
4. Adicin del colorante
i. Cubrir la placa con cristal violeta durante 1 a 2 minutos y lavar.
ii. Cubrir la placa con Lugol durante 1 a 2 minutos y lavar.
iii. Se decolora la muestro con alcohol-cetona durante 20 segundos
iv. Cubrir la placa con safranina durante 1 minuto y lavar.
5. Secar la muestra
6. Se coloca una gota de aceite de inmersin y se observa en el microscopio.
Resultados
Segn la forma se clasifican en:

Cocos: esfricos.

Bacilos: bastones (algunos bacilos pequeos se denominan cocobacilos)

Espirales: coma, forma S o espiral.

Pleomrficas: adoptando diferentes formas. (aspecto gelatinoso)
Segn el color se clasifican en:
Gram negativas (-): estarn teidas de un color rosceo.
Gram positivas (+): estarn teidas de un color violeta.

ANEXO 2: fotos
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49
50
51
52
53
54
BIBLIOGRAFIA
ALVAREZ, A, y otros. 2009. Fisiologa Animal Aplicada. Medellin : Universidad

de Antioquia, 2009.
ARIAS, Jos Luis. 1982. Monografas Medicina Veterinaria.

http://www.monografiasveterinaria.uchile.cl. [En lnea] Junio de 1982. [Citado el: 12
de 04 de 2011.]
http://www.monografiasveterinaria.uchile.cl/CDA/mon_vet_simple/0,1420,SCID%2
53D7679%2526ISID%253D411%2526PRT%253D7669,00.html.
BEYER, Hans, BARLUENGA, Jos y WOLFGANG, Walter. 1987. Manual de

Qumica Orgnica. Barcelona : Editorial Revert, 1987.
BLANCO, Ma. Rosario. 1999. Produccin Animal. Bacterias Ruminales. [En lnea]
1999. [Citado el: 12 de 01 de 2011.] http://www.produccion-
animal.com.ar/informacion_tecnica/manejo_del_alimento/69-
bacterias_ruminales.pdf.
BREED, R, MURRAY, E y SMITH, N. 1957. Bergey's Manual of Determinative

Bacteriology. Sptima. Baltimore : The Williams & Wilkins Company, 1957.
WADE, L. G. 2004. Quimica Orgnica. Quinta. Madrid : Editorial Pearson, 2004.

pg. 547.
WATTIAUX, Michel A y GRUMMER, Ric R. "Metabolismo de lpidos en las

vacas lecheras". Babcock Institute. [En lnea] [Citado el: 23 de 02 de 2011.]
http://babcock.wisc.edu/sites/default/files/de/es/de_04.es.pdf.
ZAVALETA, Eglantina. "Los cidos grasos voltiles, fuente de energa en los

Rumiantes". [En lnea] [Citado el: 12 de 04 de 2011.]
55
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_agronomia/Zootecnia/Nutrici%C
3%B3n_Animal/Metabolismo_de_AGVs_en_Rumiantes.pdf.
56

Aislamiento Del Rumen Vacuno

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grupo 13 de INGENIERIA SANITARIA

APAZA CONDORI, Angela Marietta CARRILLO DAZA, Grecia

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS DEL

APAZA CONDORI, Angela Marietta

CARRILLO DAZA, Grecia

GOMEZ ALVAREZ, Kimberlyn Johana

HUANCA LLACHO, Abel

MURGA LLAMOCCA, Joseline

AISLAMIENTO DE BACTERIAS ANAEROBIAS DEL RUMEN

1. Aislar las bacterias anaerobias del rumen de bovinos, utilizando medios de

Taxonoma de los Rumiantes

Tabla 1. Clasificacin y caractersticas del orden Artiodactyla.

En los subrdenes Suiformes, Typoda y Ruminantia, las especies poseen

Aparato Digestivo de los Rumiantes

El aparato digestivo de los rumiantes, es utilizado para que los alimentos

El aparato digestivo incluye la boca, esfago, un estmago de cuatro

Estmago de los Rumiantes

El estmago de los rumiantes es muy importante, debido a que permite

Las tres primeras partes se las conocen como preestmagos o proventrculo y

subdivisin de los alimentos, principalmente la celulosa, por medio de la

El estmago de los rumiantes ocupa la totalidad de la mitad izquierda de la

Ilustracin 7. Estomago de los rumiantes.

El rumen es el primer preestmago y el ms grande. El rumen o panza es un

El rumen y el retculo se forman, a partir de la regin craneal del estmago

En el rumen, se distinguen dos superficies, una dirigida hacia las vsceras o

Adems posee dos bordes; el borde dorsal, que se relaciona con la

El rumen proporciona un ambiente apropiado, con un suministro de

del animal, adems se produce dixido de carbono y metano, los cuales se

El retculo toma su nombre, de la disposicin en forma de red de los pliegues

Se encuentra en su mayor parte en el lado derecho de la regin intratorxica

El abomaso es el estmago verdadero de los rumiantes, tiene forma de una

Microorganismos del Rumen

El rumen constituye un medio favorable, para el desarrollo de determinados

Tabla 2. Microorganismos del rumen.

Fuente: Adaptado de Andrea Montalbetti, Microbiologa del Rumen,

El nmero de microorganismos en el rumen, depende de la composicin y

Los hongos constituyen hasta el 8% de la biomasa ruminal, contribuyen a la

en sitios internos de las partculas celulsicas. Los hongos no predominan en

Las bacterias, representan la fraccin de la poblacin ruminal

Adems las bacterias contribuyen de dos formas a la nutricin de los

Las bacterias del rumen, son predominantemente anaerobias estrictas, pero

En el rumen solo se encuentran protozoos ciliados, que forman entre un 20 a

En los animales superiores, que presentan la capacidad para alimentarse con

estmago presentan microorganismos, como bacterias y hongos aerobios y

Metabolismo de los Rumiantes

Para el metabolismo de los diversos compuestos de la dieta del rumiante, el

El metabolismo de los rumiantes, se basa en la simbiosis microorganismos-

El proceso metablico inicia en el retculo-rumen, en el que las paredes que

Los procesos de digestin en el tubo digestivo de los rumiantes dura entre 20

Metabolismo Ruminal de los Hidratos de Carbono

La mayor parte de la energa utilizada por los rumiantes, proviene de los

Durante el proceso digestivo de los hidratos de carbono, los microorganismos

Los microorganismos adheridos en las fibras vegetales, liberan celulasas, que

Finalmente, la glucosa es utilizada por los microorganismo para obtener

Metabolismo Ruminal del Nitrgeno

Las protenas constituyen el componente principal de nitrgeno en los

Las protenas son degradadas por los microorganismos ruminales, a

compuestos ms simples como pptidos, aminocidos y amonaco (NH 3),

embargo, protenas como prolaminas y gluteninas tienen una baja tasa de

Metabolismo Ruminal de las Grasas

Las grasas son los lpidos ms importantes en la alimentacin animal. La

Las grasas de los alimentos sufren dos transformaciones en el rumen; la

Las bacterias son los microorganismos ms abundantes en el complejo