UNMSM - FAC MED - DPTO: CCDD

CURSO BIOQUIMICA APLICADA A LA MEDICINA

PRACTICA N 07

HIDRLISIS DE LAS GRASAS POR LA LIPASA PANCRETICA

COMPETENCIAS:

Al finalizar la prctica, el alumno ser capaz de:

1.- Determinar por titulacin cido-base la cantidad de miliequivalentes de cidos grasos
libres generados por a accin enzimtico de la lipasa pancretica.
2.- Apreciar el efecto de las sales biliares sobre el aceite y la correspondiente generacin
de los cidos grasos por accin de la lipasa pancretica.

INTRODUCCION

La lipasa pancretica es una enzima que se produce en el pncreas y se secreta en el

intestino delgado donde ayuda a descomponer las grasas (lpidos) de la dieta en cidos
grasos y glicerol. El pncreas constituye el origen principal y primario de la lipasa srica.
La lipasa pancretica humana es una glucoprotena, con un peso molecular de 45.000
daltons.
El jugo pancretico contiene adems diversas enzimas para la digestin de lpidos,
llamadas lipasas. Entre las principales lipasas pancreticas destacan la triacilglicerol
hidrolasa, el colesterol ster hidrolasa y fosfolipasa A2.

La lipasa pancretica es especfica para steres en la posicin 1 del glicerol y prefiere

acidos grasos de cadena larga (mayores a 10 atamos de carbono); hidroliza a los
triacilgliceroles en diacilgliceroles, liberando el cido graso de la posicin 1 3 del glicerol.
Los diacilgliceroles es hidrolizado hasta monoacilglicerol posicin 2 y acido graso libre.

FUNDAMENTO:

La actividad de la enzima se evala por el incremento en el medio de incubacin de los

cidos grasos libres que se liberan en el curso de la hidrlisis de la grasa por la lipasa
pancretica. La concentracin de los cidos grasos libres se determina mediante la
valoracin con NaOH 0,05N; en consecuencia a mayor acidez producida, mayor gasto del
titulante y mayor actividad enzimtica.

PARTE EXPERIMENTAL

Seguir el siguiente protocolo:

1 B1 2 B2
mL. Aceite neutralizado 1.0 --- 1.0 ---
mL. Buffer Fosfato 0,1M pH 8 --- --- 2.0 2.0
mL. Sales biliares 1% en buffer 2.0 2.0 ---- ---
mL. Agua destilada 2.0 3.0 2.0 3.0
mL de Pancreatina 1% (en buffer) 5.0 5.0 5.0 5.0
La Pancreatina es un extracto de enzimas que contiene a la lipasa pancretica. Agitar los
tubos fuertemente por 1 min. Incubar por 1 hora a 37C (Bao Mara).
Mezclar los tubos cada 10 minutos en el la hora de incubacin. Adicionar II gotas de
indicador de fenolftalena a cada tubo antes de la titulacin.
Titular cada tubo con NaOH 0.05N hasta coloracin rosa, anotar el gasto en mL. Restar
el gasto de los tubos blancos (B1 y B2) a los tubos 1 y 2 respectivamente.
Expresar la acidez de cidos grasos liberados en miliequivalentes. Interpretar los
resultados

CUESTIONARIO

1.- Qu funcin cumple las sales biliares en la presente prctica.

2.- Qu es el aceite neutralizado, y por qu fue necesario usarlo de esta manera.
3.- Que funcin cumple los tubos blancos B1 y B2 en la prctica.
4.- Para qu es necesario agitar los tubos
5.- Expresar los miliequivalentes hallados en mEq por litro de sustrato.
6.- Se titula un ensayo de lipasa pancretica. Donde se us 2 ml de sustrato y se gast
2 ml del NaOH 0,02 M y 4 ml de NaOH 200 mg %. Del tubo Blanco gasto 4 ml NaOH
1/16 M. Hallar los miliequivalentes por litro d sustrato.