CICLO DE KREBS

El ciclo de Krebs, tambin llamado ciclo de los cidos tricarboxlicos o ciclo del citrato,
constituye una va oxidativa comn para los glcidos, cidos grasos y aminocidos,
quienes hacen ingresar al ciclo su esqueleto carbonado el que es convertido en CO2. La
funcin ms importante asignada al ciclo de Krebs es la de liberar energa a travs de
reacciones de oxidacin propias del ciclo para ser usada en la sntesis de ATP y se
constituye en la principal va para la sntesis de ATP en la mayora de seres vivos,
incluyendo el hombre. Las reacciones del ciclo de Krebs se dan exclusivamente en la
matriz mitocondrial y por lo tanto cerca de los intermediarios de la cadena respiratoria,
que sern finalmente usados para explicar la gran sntesis de ATP que determina.
Adems de su funcin energtica, el ciclo de Krebs desempea un papel principal en la
gluconeognesis, en la transaminacin, desaminacin y lipognesis. Algunos de estos
procesos se realizan en casi todos los tejidos, pero el heptico es el nico donde todos
tienen importancia extrema. Por tanto, las repercusiones son profundas cuando, por
ejemplo, gran nmero de clulas hepticas estn daadas o han sido reemplazadas por
tejido conectivo, como en la hepatitis aguda y en la cirrosis, respectivamente.

En la primera reaccin del ciclo de Krebs el oxaloacetato se condensa con el acetil Co A

originado citrato, que a travs de 7 reacciones importantes, en donde suceden dos
descarboxilaciones, regenera el oxaloacetato con lo cual se completa el ciclo (Figura 1).

Figura 1. Regeneracin del oxaloacetato en el ciclo de Krebs.

1. DESCARBOXILACION OXIDATIVA DEL PIRUVATO.

Una reaccin muy importante que permite explicar el ingreso del piruvato al ciclo de Krebs
es la catalizada por la piruvato deshidrogenasa (PDH), en donde ocurre la
descarboxilacin oxidativa del cetocido para ser convertido irreversiblemente en acetil
coenzima A. Este compuesto tambin puede ser usado para la sntesis de cidos grasos,
como se ver despus.
El piruvato tambin puede carboxilarse, con el requerimiento de biotina y ATP y convertirse
en oxaloacetato, con la participacin de la enzima piruvato carboxilasa (PC). El
oxaloacetato es necesaria para iniciar las reacciones del ciclo de Krebs y es adems un
importante sustrato gluconeogentico.
Un destino del piruvato, que solo ocurre en microorganismos (levaduras y ciertas bacterias
como las de la flora intestinal) permite su conversin en etanol, con la formacin del
acetaldehdo como intermediario. La tiamina pirofosfato es necesaria para la formacin
previa del acetaldehdo.

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El piruvato, producto final de la va glicoltica aerbica, debe ingresar a la mitocondria antes
de ser descarboxilado oxidativamente para dar acetil coenzima A e iniciar el ciclo de Krebs.
El ingreso del piruvato se hace mediante el uso de un transportador especfico que le
ayuda a atravesar la membrana mitocondrial interna. El complejo de la piruvato
deshidrogenasa (PDH) es quien convierte el piruvato en acetil coenzima A y corresponde
a un agregado molecular de 3 enzimas, la piruvato descarboxilasa (E1), la dihidrolipoil
transacetilasa (E2) y la dihidrolipoil deshidrogenasa (E3), que estn presentes en copias
mltiples. Cada una de estas 3 enzimas cataliza una etapa del total de la reaccin en vista
de su asociacin fsica, lo que tambin permite que los intermediarlos que se van formando
no quedan libres. Adems de las enzimas sealadas, el complejo de la PDH tiene
fuertemente unidas dos enzimas regulatorias, la piruvato deshidrogenasa quinasa y la
piruvato deshidrogenasa fosfatasa.

a. Mecanismo de accin del complejo de la PDH

La secuencia de etapas en esta reaccin catalizada por el complejo de la PDH es la
siguiente: (Figura 2)
El piruvato es descarboxilado para rendir un hidroxietil que est unido al pirofosfato de
tiamina que es la coenzima de la E1.
El hidoxietil es oxidado y transferido al cido lipoico que est covalentemente unido a
la E2.
El acetil unido como un tister al cido lipoico es transferido a la coenzima A.
La forma sulfihidrilo del cido lipoico es oxidada por la E3 que tiene como grupo
prosttico al FAD, permitiendo la regeneracin de la forma oxidada del cido lipoico.
El FADH2 formado, es reoxidado a FAD, tambin con la participacin de E3, pero
usando como coenzima al NAD, quien al aceptar los hidrgenos se reduce a NADH+H.

b. El complejo de la PDH tiene 5 formas activas de vitaminas

El complejo de la piruvato deshidrogenasa contiene 5 coenzimas que actan como
transportadores u oxidantes para los intermediarios en las reacciones que hemos
sealado. La piruvato descarboxilasa (E1) requiere de pirofosfato de tiamina, la forma
activa de la tiamina. La dihidrolipoil transacetilasa (E2) requiere de cido lipoico y de la
coenzima A, la forma activa del cido pantotnico. La dihidrolipoil deshidrogenada requiere
de FAD y NAD+, formas activas de la riboflavina y niacina, respectivamente.

Figura 2. Complejo de la Piruvato Deshidrogenasa (PDH). Tomado de Lehninger

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 En los pacientes deficientes en tiamina o niacina se encuentran alteraciones a nivel
del sistema nervioso y que se explican por la menor actividad de la piruvato
deshidrogenasa que determina menos utilizacin del piruvato como fuente de ATP
en el ciclo de Krebs.

c. La fosforilacin y defosforilacin regula la actividad del complejo de la PDH

Las dos enzimas regulatorias (PDH quinasa y PDH fosfatasa) que forman parte del
complejo de la piruvato deshidrogenasa regulan su actividad actuando sobre la E1.
La PDH quinasa, que es independiente del cAMP fosforila a E1 y al hacerlo la
inhibe; en tanto que la PDH fosfatasa al defosforilar a E1, la activa.
De otro lado, la PDH quinasa es alostricamente activada por el ATP, acetil CoA y
NADH, mientras que el acetil CoA y NADH inhiben alostricamente a la forma
defosforilada (activa) de la E1. Es decir que en presencia de estos tres compuestos
altamente energticos, se inactiva la piruvato deshidrogenasa.
Cuando las concentraciones de piruvato son elevadas, la enzima E1 estar muy
activa, lo que se explica porque el cetocido inhibe a la PDH quinasa. El Ca2+ es
un potente activador de la PDH fofatasa, lo que aumenta la actividad de la E1. Esto
es til para el msculo ya que durante la contraccin, que requiere de ms energa
del Ca2+ activar a la PDH y habr una mayor sntesis de ATP.
Estos mecanismos de activacin inactivacin de la actividad del complejo de la
piruvato deshidrogenasa a travs de su componente (subunidad) E1, se ilustran en
la figura 3.

Figura 3.- Activacin e inactivacin de la PDH- E1.

d. La deficiencia de la piruvato deshidrogenasa es la causa ms frecuente de acidosis

lctica congnita
La deficiencia de la PDH, particularmente de su componente (subunidad E1) es la
causa ms frecuente de acidosis lctica congnita. Esta situacin determina una
incapacidad de convertir el piruvato en acetil Co A y el piruvato acumulado hace
que se destine a la mayor formacin de lactato usando la LDH. En estas
condiciones el cerebro se ve afectado, no solamente por la acidosis sino tambin
porque la oxidacin del piruvato representa la principal fuente de ATP para el
cerebro ya que no puede oxidar a los cidos grasos.
La E1 es un tetrmero constituido de dos subunidades y dos subunidades ,
siendo la subunidad la ms frecuentemente comprometida. El gen que codifica
para la subunidad de la E1 est localizando en el cromosoma X, pero en razn a
la importancia que tiene esta enzima para el cerebro, tanto hombres como mujeres
se ven afectados, aunque los primeros estn ms comprometidos. Es por esta

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 razn que se considera a la enfermedad ocasionada por esta deficiencia como
dominante ligada a X.
Las manifestaciones de la deficiencia de PDH cursan con una variedad de
sntomas destacando aquellos que son consecuencia del compromiso cerebral.

e. El arsnico tambin interfiere con la descarboxilacin oxidativa del piruvato

El arsnico interfiere con la va glicoltica a nivel de la reaccin catalizada por la
gliceroaldehido 3P deshidrogenasa. Sin embargo la accin daina del arsnico
ms importante es a nivel de las enzimas que requieren de cido lipoico, como la
piruvato deshidrogenasa, particularmente su componente E2 y la cetoglutarato
deshidrogenasa.
Est demostrando que el arsnico forma un complejo estable con el grupo tiol (-
SH) del cido lipoico, anulando la participacin de este compuesto en la reaccin.
Al unirse el arsnico al complejo de la PDH, se acumula el piruvato y
consecuentemente el lactato. Esto explica que en las intoxicaciones por arsnico
comprometen ms el cerebro y determinen alteraciones neurolgicas y finalmente
la muerte.

2. LAS REACCIONES PROPIAS DEL CICLO DE KREBS

En los organismos aerbicos, el ciclo de Krebs resulta una va esencial ya que junto
a la gliclisis, a la descarboxilacin del piruvato y a la fosforilacin oxidativa
permiten la conversacin qumica de los glcidos, lpidos y aminocidos en CO2 y
agua, liberando una gran cantidad de energa que en un alto porcentaje podr ser
almacenada en la moneda energtica de la clula, es decir en el ATP.
En la figura 4 se muestra, usando frmulas, todas las reacciones del ciclo de Krebs,
las cuales pasaremos a describir individualmente a continuacin.

a. El citrato se forma por condensacin del acetil Co A con el oxaloacetato

En la primera reaccin del ciclo de Krebs sucede la condensacin del acetil
coenzima A con el oxaloacetato para rendir citrato, mediante la participacin de
la citrato sinteasa. El equilibrio de esta reaccin est largamente desplazada
hacia la formacin de citrato por lo que la reaccin se hace irreversible. La
disponibilidad de sustrato resulta ser clave para la actividad de la enzima, ya
que la unin del citrato cambia la conformacin de la enzima, generando un
lugar de unin para el acetil CoA.
El citrato resulta ser un intermediario clave para regular la actividad de otras
enzimas. Inhibe la actividad de la enzima regulatoria de la gliclisis, la
fosfofructoquinasa y veremos ms adelante como activa a la acetil Co A
carboxilasa, que es una enzima clave para la sntesis de los cidos grasos.

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 Figura 4. Las reacciones del ciclo de Krebs:
(1) Citrato sinteasa. (2) Aconitasa. (3)Isocitrato deshidrogenasa. (4) Alfa ceto
glutarato deshidrogenasa. (5) Succinato Tioquinasa. (6) Succinato
deshidrogenasa. (7) Fumarasa. (8) Malato deshidrogenasa.

b. La isomerizacin del citrato

En la segunda reaccin del ciclo de Krebs, el citrato es convertido en isocitrato
con la participacin de una enzima fierrosulfurada, la aconitasa. Esta enzima es
inhibida por el fluoroacetato y esto explica su uso como veneno para ratas. El
fluoroacetato para poder actuar se convierte en fluorocitrato que es el verdadero
inhibidor.
En el curso de la reaccin catalizada por la aconitasa se persigue que el grupo
alcohlico unido a un carbono terciario en el citrato pase a un carbono secundario
y asi resulte ms oxidable. En la primera etapa de la reaccin se elimina una
molcula de agua y se forma el cis aconitato, el mismo que se hidrata en la segunda
etapa y con ello se forma el isocitrato.

c. El isocitrato se oxida y se descarboxila para dar alfa ceto glutarato

La isocitrato deshidrogenasa cataliza la descarboxilacin oxidativa e irreversible
del isocitrato para rendir alfa ceto glutarato, rindiendo en una primera etapa una
molcula de NADH +H (la primera de las 3 que se formarn) y liberando CO2 en la
segunda etapa. Esta es una reaccin limitante del ciclo de Krebs, ya que est sujeta
a mecanismos de regulacin. La enzima es activada por el ADP y Ca2+ e inhibida
por el ATP La enzima es activada por el ADP y Ca2+ e inhibida por el ATP y NADH
+H.

d. La descarboxilacin oxidativa del alfa ceto glutarato es similar a la del piruvato

En la cuarta reaccin del ciclo de Krebs, el alfa ceto glutarato es descarboxilado
oxidativamente para rendir succinil coenzima A, con la participacin del complejo
5
enzimtico de la ceto glutarato deshidrogenasa. El mecanismo de esta
reaccin es muy similar al usado por la piruvato deshidrogenasa para convertir
piruvato en acetil CoA.
La enzima libera CO2 del sustrato (el segundo liberado) y se forma la segunda
molcula de NADH +H. El complejo de la alfa ceto glutarato deshidrogenasa
requiere tambin las 5 formas activas vitamnicas que necesitaba la piruvato
deshidrogenasa (NAD, FAD, pirofosfato de tiamina, coenzima A y cido lipoico) y
su participacin en la reaccin es anloga a la descrita para la piruvato
deshidrogenasa (PDH). Debe tenerse muy en cuenta que el complejo de la ceto
glutarato deshidrogenasa a diferencia de la PDH no es regulado por fosforilacin o
defosforilacin. El complejo de la alfa ceto glutarato deshidrogenasa es inhibido
alostricamente por ATP, GTP, NADH y succinil CoA y es activado por Ca2+.
El equilibrio de esta reaccin esta largamente desplazado hacia la formacin del
succinil coenzima A, siendo el Go de la reaccin de -8.0 kcal/mol y que explica su
irreversibilidad. El producto, succinil CoA tiene un enlace tioster de alta energa
similar al de acetil coenzima A.

e. La conversin del succinil CoA en succinato permite la sntesis de ATP por

fosforilacin a nivel de sustrato
En la quinta reaccin del ciclo de Krebs, se rompe el enlace tioster del succinil Co
A para dar succinato. La reaccin es catalizada por la succinato tioquinasa o
succinil CoA sinteasa. El Go para esta reaccin es de -7.0 kcal/mol.
La energa que se desprende en el curso de la reaccin es usada inicialmente para
fosforilar el GDP a GTP. En vista que el GTP y ATP son energticamente
interconvertibles por la accin de la enzima nuclesido difosfato quinasa,
finalmente se consigue la formacin de una molcula de ATP. Este ATP formado
corresponde al nico que se forma en el ciclo de Krebs por fosforilacin a nivel de
sustrato, ya que los otros 11 son formados usando la fosforilacin oxidativa.
Recordemos que la formacin del ATP en la reaccin catalizada por la succinato
tioquinasa, no es inhibida por el 2,4 dinitrofenol ya que este impide slo la sntesis
de ATP asociado al transporte mitocondrial de electrones.

f. Con la participacin del FAD el succinato se convierte en fumarato

En la sexta reaccin del ciclo de Krebs, el succinato es oxidado a fumarato con la
participacin de la enzima succinato deshidrogenasa que tiene como aceptor de
electrones al FAD. Esta enzima es la nica del ciclo de Krebs que esta empotrada
en la membrana interna mitocondrial, constituyendo el complejo II de la cadena
respiratoria. La succinato deshidrogenasa o deshidrogenasa succnica es activada
alostricamente por el fosfato, succinato y el mismo fumarato e inhibida
competitivamente por el oxaloacetato.
Recordemos que el fumarato es formado en el ciclo de la urea, durante la sntesis
de los nucletidos pricos y en la degradacin de la fenilalanina y tirosina.

g. La hidratacin reversible del fumarato lo convierte en malato

La stima reaccin del ciclo de Krebs implica la participacin de la enzima fumarasa
o fumarato hidratasa, que en una reaccin reversible hidrata al fumarato para
convertirlo en malato.

h. La oxidacin del malato regenera el oxaloacetato

En la ltima reaccin del ciclo de Krebs, el malato es oxidado y regenera el
oxaloacetato, con la intervencin de la coenzima NAD y la participacin de la
enzima malato deshidrogenasa o deshidrogenasa mlica. Debemos recordar que
es la tercera y ltima molcula de NAD+ que se reduce en el ciclo de Krebs y que
tambin ser oxidada por la cadena respiratoria para liberar energa disponible
para la sntesis de ATP.

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 El Go para esta reaccin es alto y positivo (+7.1 kcal/mol), sin embargo la reaccin
es propulsada por la alta exergonicidad de la reaccin siguiente que inicia un nuevo
ciclo, es decir la catalizada por la citrato sinteasa.

Balance energtico y resumen

Por cada molcula de acetil CoA que ingresa al ciclo de Krebs se liberan dos
molculas de CO2.
Por cada vuelta del ciclo de Krebs se forman tres molculas de NADH +H y una de
FADH2. Las molculas de NADH +H se forman durante las reacciones de oxidacin
de isocitrato, ceto glutarato y malato, en tanto que la molcula de FADH2 se forma
durante la oxidacin del succinato. Al oxidarse una molcula de NADH +H por la
cadena respiratoria se libera energa para la sntesis de aproximadamente 3 ATP
y que al hacerlo el FADH2 se generan aproximadamente 2 ATP.
En la reaccin que convierte succinil CoA en succinato se forma un enlace de alta
energa en el GTP, el cual permite luego la sntesis de ATP por accin de la
difosfonucleotido quinasa.

Al formarse 3 molculas de NADH+H se sintetizaran 3 x 3 = 9 ATP

Al formarse 1 molcula de FADH2 se sintetizaran 1 x 2 = 2 ATP
Con la molcula de GTP se sintetizar 1 x 1 = 1 ATP
Total 12 ATP

Preguntas de repaso
1. Las reacciones del ciclo de Krebs se dan exclusivamente en:
-
2. Mencione 2 aspectos relacionados con la importancia del Ciclo de Krebs:
-
-
3. Enzima que participa en la descarboxilacin oxidativa del piruvato:
-
4. El complejo de la piruvato deshidrogenasa (PDH) comprende 3 enzimas:
-
-
-
5. El complejo de la PDH tiene fuertemente unidas dos enzimas regulatorias:
-
-
6. El complejo de la piruvato deshidrogenasa contiene 5 coenzimas:
-
-
-
-
-
7. Explique la accin de las dos enzimas regulatorias del complejo de la piruvato
deshidrogenasa:
-
-
8. Qu origina la deficiencia de la PDH y qu rgano se ve principalmente afectado?
-
9. En qu consiste la accin daina del arsnico?
-
10. Explique la primera reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
11. Explique la segunda reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
7
12. Explique la tercera reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
13. Explique la cuarta reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
14. Explique la quinta reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
15. Explique la sexta reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
16. Explique la stima reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
17. Explique la octava reaccin que presenta el ciclo de Krebs
-
18. Cul es el inhibidor de la enzima aconitasa?
-
19. Mencione las etapas en las que se forman las molculas de NADH +H y se liberan
las de CO2.
-
-
20. Mencione una similitud y una diferencia relacionada con la descarboxilacin
oxidativa del alfa ceto glutarato y la del piruvato.
-
-

La oxidacin de un mol de glucosa hasta CO2 y agua usando el ciclo de Krebs

genera 36 o 38 moles de ATP
Tenemos ya la informacin suficiente como para estimar el rendimiento energtico
que tiene la oxidacin completa de la glucosa en condiciones aerbicas, es decir
hasta CO2 y agua y expresarlo en el nmero de moles de ATP generados por mol
de glucosa oxidada. Tengamos en cuenta las etapas que permiten sintetizar ATP.
En la va glicoltica: Cuando un mol de glucosa se convierte en 2 de piruvato,
el rendimiento neto es de 2 moles de ATP.
En la misma va glicoltica (aerbica), se forman dos moles de NADH, que
al ingresar sus hidrgenos a la mitocondrias y oxidarse en la cadena
respiratoria podran generar 6 ATP su usa la lanzadera del malato que
trabaja con el NAD mitocondrial, como ocurre en hgado, corazn y rin o
slo 4 ATP si usa la lanzadera del glicerolfosfato que trabaja con el FAD,
como ocurre en el msculo esqueltico y en el cerebro. Queda claro que
son 6 4 ATP porque son 2 NADH los que se forman en la va glicoltica
por molcula de glucosa que se degrada.
Cuando el piruvato, producto final de la gliclisis aerbica, ingresa a la
mitocondria y se convierte en acetil Co A, se forma una molcula de NADH
por molcula de piruvato oxidada, pero como son 2 piruvatos los que vienen
de la gliclisis al final sern 2 NADH. Como cada molcula de NADH
oxidada en la cadena respiratoria, genera 3 ATP, se tendr finalmente en
esta etapa la sntesis de 6 ATP.
Cuando el acetil Co A se oxida completamente en el ciclo de Krebs, se
generan 12 molculas de ATP por cada molcula de acetil Co A, pero como
son 2 las que proceden del piruvato, se obtendr finalmente 24 ATP.
La suma de los ATP obtenidos en cada una de estas permite obtener la
cifra de 36 38 moles de ATP por mol de glucosa oxidada completamente

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 hasta CO2 y agua. Como lo hemos sealado, la diferencia se explica por
tipo de aceptor de los hidrgenos (FAD o NAD), que proceden del NADH, a
nivel de la membrana mitocondrial.

3. REGULACION DEL CICLO DE KREBS

A diferencia de la va glicoltica, que es regulada fundamentalmente por la actividad
de una enzima (fosfofructoquinasa), el ciclo de Krebs se regula por la actividad de
varias enzimas, dentro de las cuales destacan aquellas que catalizan reacciones
que cursan con Go alto y negativo, como las catalizadas por la citrato sinteasa, la
isocitrato deshidrogenasa y la - ceto glutarato deshidrogenasa.
Como sealamos antes, la citrato sinteasa es inhibida por el NADH, succinil Co A
y citrato. La isocitrato deshidrogenasa es inhibida por NADH y ATP y activada por
ADP y Ca2+, la -ceto glutarato deshidrogenasa es inhibida por ATP, GTP, NADH
y succinil Co A por Ca2+ (tabla 3)

ENZIMA ACTIVACION INHIBICION

Citrato sinteasa NADH,
Succinil Co A
y, Citrato
Isocitrato deshidrogenasa Ca2+ y ADP NADH y ATP
2+
A-ceto glutarato Ca NADH, ATP y
deshidrogenasa GTP

Tabla 3.- Regulacin del ciclo de Krebs.

Bibliografa

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