PRCTICA N 6

DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA EN

SANGRE

LOGROS DE APRENDIZAJE

Describe la estructura y funcin de la hemoglobina.

Realiza la dosificacin de hemoglobina.
Reconoce las alteraciones clnicas ms importantes relacionadas con la hemoglobina.

JUSTIFICACIN

La hemoglobina es una de las principales protenas del organismo, presente en los glbulos rojos, cuya
principal funcin consiste en transportar oxgeno hacia los tejidos del cuerpo, y CO2 hacia los pulmones.
Las consecuencias clnicas debido a la disminucin o aumento de sus niveles en sangre provocan un sin
nmero de signos y sntomas que alteran la homeostasis del organismo; de ah, la importancia de la
determinacin de su concentracin en sangre (2, 5).

MARCO TERICO

ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA

La hemoglobina es una hemoprotena que contiene una parte proteica denominada globina, y un grupo
prosttico hem (hemo), el cual consta de un tomo de hierro en estado ferroso ( Fe +2) y cuatro anillos
pirrlicos (1).

FIGURA 1. ESTRUCTURA DEL GRUPO HEMO. TOMADO DE: MURRAY R (2).

La hemoglobina es un tetrmero (cuatro cadenas polipeptdicas), formado por dos tipos de subunidades
proteicas llamadas globinas y que se denominan con letras griegas: , , , las cuales determinan el
tipo de hemoglobina. Las principales clases de hemoglobinas son: 2 2 ( Hb A, normal del adulto 97%), 2
2( Hb F, fetal 3%), 2 2 ( Hemoglobina A2, menor del adulto 2%) (2).

Para que las protenas como la hemoglobina adquieran funcionalidad biolgica, es indispensable que
alcancen conformacin proteica como estructuras superiores. Al ser la hemoglobina una protena
tetramrica, su nivel mximo de organizacin corresponde a la estructura cuaternaria en donde las
cadenas polipeptdicas se mantienen unidas gracias a la diversidad de interacciones entre ellas (2).

FIGURA 2. ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA. TOMADO DE: MURRAY R (2).

SNTESIS DE HEMOGLOBINA

Sntesis del grupo hemo: El grupo hemo se sintetiza en la mitocondria y citosol de los glbulos rojos
inmaduros, a partir de glicina y succinil CoA formando un grupo pirrol, la unin de cuatro grupos
pirrlicos constituyen un anillo de protoporfirina IX la cual se incorpora al hierro ferroso formando el
grupo hemo. ( Fe+2).

Sntesis de globina: La globina es una protena conformada por cadenas polipeptdicas sintetizadas en
los ribosomas de acuerdo al cdigo gentico que al ser liberadas se pliegan de manera espontnea en sus
configuraciones tridimensionales.

Finalmente la unin entre el grupo hemo y las globinas constituyen la molcula tetramrica, globular de
la hemoglobina cuya sntesis est regulada principalmente por la concentracin del hemo (3, 4).

DEGRADACIN DE LA HEMOGLOBINA

El sistema retculo endotelial retira de la circulacin los hemates luego de 120 das de su formacin,
dividindolo en sus componentes: el grupo hemo (el anillo de protoporfirina y el hierro) y las globinas.
El anillo del hemo se oxida para dar lugar a pigmentos biliares que sern excretados en la bilis, el hierro
puede ser reutilizado mientras que las cadenas de globinas se incorporan a la reserva de aminocidos
orgnicos. El anillo del hemo por accin de la enzima hemo oxigenasa se convierte en biliverdina que
posteriormente se reduce a bilirrubina, la cual se transporta al hgado unida a la albmina. Una vez en el
hgado la bilirrubina se conjuga con glucoronato (bilirrubina conjugada) para ser excretada hacia la bilis,
llegar al intestino y convertirse en estercobilingeno y estercobilina la cual puede ser expulsada en las
materias fecales y parcialmente reabsorbida para llegar nuevamente al hgado para ser reexcretada en la
bilis. Cierta cantidad reabsorbida no es captada por el hgado y pasa a la circulacin general excretndose
por el rin (4).

FIGURA 3. DESTINO DEL ANILLO PORFIRINICO DE LA HEMOGLOBINA. FUENTE: BAYNES J (5).

FUNCIN DE LA HEMOGLOBINA

La hemoglobina es la responsable del transporte de oxgeno desde los alveolos capilares hacia los tejidos,
formando un compuesto qumico llamado oxihemoglobina; y del transporte del 20% del CO2, formando
carboxihemoglobina o carbamino que ser eliminado al exterior. Otra funcin que cumple la hemoglobina
es la de actuar como amortiguador de los iones H+ para mantener el equilibrio cido base (1).

Cada tomo de hierro en estado ferroso (Fe++), tiene la capacidad de unirse reversiblemente a una
molcula de oxgeno mediante un proceso de oxigenacin, cuando esto sucede los enlaces de las unidades
de globina se liberan generando una configuracin relajada capaz de incrementar la afinidad de la
hemoglobina por el oxgeno. La curva de disociacin de la hemoglobina indica el porcentaje de
hemoglobina saturada segn la presin parcial de oxgeno. Cuando la sangre se equilibra con oxgeno, la
hemoglobina se satura en la misma proporcin, lo que establece los distintos grados de saturacin en
sangre venosa y arterial (6).
 FIGURA 4. CURVA DE SATURACIN DE OXGENO DE LA MIOGLOBINA Y DE LA HEMOGLOBINA. TOMADO DE: MURRAY R (2).

DESARROLLO DE LA PRCTICA

REACTIVOS

- Muestra de sangre anticoagulada (desconocido)

- Kit de dosificacin de hemoglobina (estndar y reactivo de color)
MATERIALES

- 3 tubos de ensayo
- 1 gradilla
- 1 pinza de madera
- 3 cubetas para espectrofotmetro
- 1 pipeta automtica de 20 L
- 2 puntas amarillas
- 1 pipeta de 5 mL
- 1 pera de caucho
EQUIPOS

- Espectrofotmetro
- Bao Mara
FUNDAMENTO QUMICO

La hemoglobina en presencia de ferricianuro presente en el reactivo de color, se oxida a

metahemoglobina, que a su vez se combina con el in cianuro (CN) convirtindose en
cianometahemoglobina que se determina colorimtricamente (7).

Hb (Fe +2) + Fe (CN)6 Hb (Fe+3) + Fe (CN)6

Hb (Fe+3) + CN- Hb (Fe+3) CN

 FIGURA 5. FORMACIN DE LA CIANOMETAHEMOGLOBINA. FUENTE: WIENER LAB (7).
PROCEDIMIENTO

1. Rotular los tubos de ensayo: B = blanco, S = estndar y D = desconocido

2. Tomar 20 L de estndar con una pipeta automtica y colocarlos en el tubo S.
3. Tomar 20 L de sangre anticoagulada con una pipeta automtica y colocarlos en el tubo D.
4. Colocar 5 mL de reactivo de color en cada tubo (B, S y D)
5. Mezclar y esperar 3 minutos.
6. Trasvasar el contenido de los tubos en cubetas para espectrofotmetro rotuladas de la misma
manera que los tubos de ensayo.
7. Leer en el espectrofotmetro a 540 nanmetros. llevando el aparato a cero con el blanco

CLCULO

Para conocer la cantidad de hemoglobina de la muestra aplicamos una regla de tres:

X = valor del estndar

Y = valor del desconocido

S = hemoglobina del estndar (g/dl)

Hemoglobina del desconocido = (Y x S) / X

Hemoglobina del estndar Absorbancia del estndar

Dividir

Hb del desconocido

Absorbancia del desconocido

VALORES DE REFERENCIA

Los valores de referencia de hemoglobina se establecen de acuerdo a varios factores tales como: edad,
gnero, lugar de residencia (por la altura a nivel del mar), embarazo. Los valores normales de
hemoglobina en adultos son: para la mujer 12 - 16 g/ dL y para el hombre 14 18 g /dL (8).

En la ciudad de Cuenca a 2 500 m de altitud sobre el nivel del mar los valores son 16,5 g/dL para el
hombre y 14,5 g/dL en la mujer (9).

INTERPRETACIN:
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CONCLUSIONES:
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 APLICACIN CLNICA

La anemia es una condicin patolgica por disminucin de glbulos rojos o de la concentracin

de hemoglobina, por debajo de los valores referenciales de acuerdo a: edad, gnero, lugar de
residencia, embarazo. Existen varias clases de anemias de acuerdo a la etiologa:

- Anemia secundaria debida a trastornos de la mdula sea que ocasiona dficit en la

produccin de eritrocitos.
- Anemia por deficiencia de vitamina B12 y cido flico.
- Anemia por defecto gentico en la sntesis de globina originando las talasemias
- Anemia secundaria por deficiencia de hierro ocasionando defecto en la sntesis del
hemo. ( anemia ferropnica o ferropenia)
- Anemia por destruccin incrementada de los hemates.
- Anemia por causas diversas como enfermedades crnicas, insuficiencia renal, embarazo
(10).

CUADRO 1. CONCENTRACIONES DE HEMOGLOBINA PARA DIAGNOSTICAR ANEMIA A NIVEL DEL MAR (g/L). TOMADO DE: OMS (11).

Anemia ferropnica.

La OMS estima que millones de personas en el mundo padecen de anemia, siendo la ferropnica
la ms frecuente, la cual afecta principalmente a mujeres embarazadas y nios, presentndose
como un problema de salud pblica, pues se considera que ms del 30% de la poblacin
mundial presenta este tipo de anemia. La anemia ferropnica es una enfermedad causada por:
disminucin del hierro en la alimentacin, incremento de las necesidades y/o aumento de las
prdidas, lo que provoca la falta de sntesis del hemo; presentndose consecuencias tales como:
reduccin en la capacidad de concentracin, bajo rendimiento y hasta la muerte inclusive. Por
este motivo la OMS ha establecido programas de control de la concentracin de vitamina B12,
cido flico y vitamina A en la dieta tiles para mantener normales los valores de hemoglobina,
sobre todo de nios, adolescentes y mujeres embarazadas, con el fin de prevenir la anemia
(12).

Las principales fuentes de hierro en la dieta la constituyen frutos secos, semillas, verduras y
legumbres, que aportan con el 90% y el restante 10% proviene de huevos, carnes rojas y
pescado; de tal forma que, la regulacin de la concentracin de hierro en el organismo depende
del grado de absorcin intestinal y de la excrecin a travs de heces, orina y piel por
descamacin celular. Los sntomas que se presentan en la anemia y en la ferropenia dependen
de la concentracin de hemoglobina: palidez (7 - 8 g/dL), taquicardia, problemas cardacos,
irritabilidad, anorexia y letargia, astenia y fatiga excesiva (5 6 g/dL) (13).

FIGURA 5. RECOMENDACIN DE INGESTIA DIARIA DE HIERRO DE ACUERDO A LA EDAD. FUENTE: OMS (11).
TRABAJO AUTNOMO

1. Grafique la estructura de la hemoglobina identificando sus partes.

2. Investigue en un artculo cientfico actualizado de los ltimos 5 aos acerca de la anemia

ferropnica en nuestro pas.
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3. Realice una investigacin bibliogrfica acerca de las causas genticas de alteraciones de las
cadenas de la hemoglobina
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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Laguna J, Pia E et. al. Bioquimica de Laguna. 7a edicin. Mxico, D.F: Manual
Moderno; 2013.
2. Murray R, Bender D, Botham K, Kennelly P, Rodwell V, Weil P. Harper Bioqumica
ilustrada. Editorial McGrawHill. 29 Edicin. Mxico. Ao 2012.
3. Blanco A. Qumica Biolgica. 8 edicin. Editorial El Ateneo. Ao 2013.
4. Henry J. Laboratorio en el Diagnstico Clnico. 20a edicin. Editorial Marban.
Estados Unidos. Ao 2010.
5. Baynes J, Dominiczak M. Bioqumica Mdica. 4 Edicin. Editorial Elsevier.
Barcelona, Espaa. Ao 2014.
6. Barret K, Barman S, et al. Fisiologa Mdica. 24 edicin. Editorial Mc Graw Hill.
Mxico D.F. Ao 2013.
7. Wiener Laboratorios. Mtodo colorimtrico para determinacin de hemoglobina.
Rosario, Argentina. Ao 2000.
8. Rozman C, et al. Medicina Interna. 17 edicin. Editorial Elsevier. Barcelona,
Espaa. Ao 2012
9. Sempertegui J. Correlacin entre la medicina del laboratorio y las ciencias bsicas y
clnicas. Imprenta Grficas Lituma. Cuenca, Ecuador. Ao 2012.
10. Jaime J, Gmez D. Hematologa La sangre y sus enfermedades. Editorial Mc Graw
Hill. Mxico. Ao 2012.
11. Organizacin Mundial de la Salud. Concentraciones de hemoglobina para
diagnosticar la anemia y evaluar su gravedad. Ginebra. Ao 2011. Disponible en:
http://www.who.int/vmnis/indicators/haemoglobin/es/
12. Organizacin Mundial de la Salud. Prevalencia mundial de la anemia ferropnica y
nmero de personas afectadas. Ginebra. Ao 2016. Disponible en:
http://www.who.int/vmnis/database/anaemia/anaemia_data_status_t2/es/
13. Pediatra Integral. Programa de Formacin Continuada en Pediatra
Extrahospitalaria. Vol. 20 Num 5 Junio. Espaa. Ao 2016.