Laboratorio De Bioqumica II
Prctica No. 6 Produccin de Piruvato y Acetaldehdo a
Partir de Glucosa y Determinar su Presencia (Levaduras)
Universidad Autnoma de Ciudad Jurez Instituto de Ciencias Biomdicas
Licenciatura en Qumica Laboratorio de Bioqumica II
Gabriela Guadalupe Gonzlez Gonzlez
OBJETIVO:
Determinar la presencia de piruvato por la
fermentacin de la glucosa por levadura.
INTRODUCCIN:
La fermentacin es la primera etapa del
catabolismo de glucosa es la produccin de
piruvato. Este proceso, que se efecta
mediante una serie de reacciones que
involucran un nmero considerable de
intermediarios, se conoce como gluclisis. La
reaccin total de una molcula de glucosa
produce dos molculas de piruvato, dos
molculas de ATP y dos molculas de NADH.
Este cofactor se encuentra en cantidades
catalticas (es necesario reoxidarlo para que el
proceso no se suspenda), y es utilizado por la
cadena respiratoria para obtener ATP dando as
NAD+. Esto no es posible en condiciones
anaerbicas y en este caso la reoxidacin se
efecta cuando el piruvato se convierte en
acetaldehdo, y luego en alcohol [1]
Los intermediarios metablicos son metabolitos
como el piruvato y acetaldehdo se encuentran
presentes normalmente en muy baja
concentracin, por lo tanto, para demostrar su
existencia como intermediarios en el camino
metablico, es necesario impedir que sean
transformados en otros compuestos. Este
procedimiento se usa mucho para estudiar
caminos metablicos y se puede realizar:
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.
Bloqueando la enzima que cataliza la
conversin del compuesto que se esta
investigando mediante inhibidores.
Cambiando las condiciones fisiolgicas para
que la enzima funcione a una velocidad muy
por debajo de su actividad mxima.
Usando un agente que atrape el intermediario y
que forme un compuesto que no pueda
metabolizarse. La piruvato descarboxilasa no
es activa en soluciones ligeramente alcalinas,
de manera que el piruvato se acumula y su
presencia puede demostrarse por la reaccin
con nitroprusiato de sodio o 2,4
dinitrofenilhidrazina [2].
METODOLOGA:
En dos tubos de ensaye se colocaron 5 mL de
glucosa, al tubo 1 se le agregaron 5 mL de
levadura con Na2HPO4 (alcalina) y al tubo 2 se
le agregaron 5 mL de levadura con KH2PO4
(cida). Se pusieron a bao mara a 37C
durante 1 hr ms 2 mL de ac. triclorocetico, se
mezclaron y se centrifugaron por 10 min a 2500
rpm. Se tomaron 2 mL de sobrenadante del tubo
de cada tubo y se colocaron en otros tubos y se
les agrego 1 gr de sulfato de amonio, se
mezclaron y se le agrego por las paredes
amoniaco concentrado, se observaron los
resultados. Se tomaron 2 mL de sobrenadante
del tubo de cada tubo y se colocaron en otros
tubos con 1 mL de fenilhidrazina, se mezclaron
y se le aadi 1 mL de NaOH, se diluyeron
hasta obtener 5 mL con agua, se observaron los
resultados.
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 Laboratorio De Bioqumica II .

La presencia del piruvato se encuentra en muy

RESULTADOS:
Se pudo observar que en el tubo 1 se formaron
dos fases con un anillo en la superficie de la
muestra, en el tubo 2 se observo la formacin
de un anillo de color rojo en la muestra.
bajas concentraciones, por lo cual se
recomienda recurrir a este tipo de tcnicas para
comprobar su presencia.
BIBLIOGRAFA:

[1]
http://es.scribd.com/doc/49000859/Bioquimica-
Practica-Plummer-Chp10a

Imagen 1. Observacin de la produccin de piruvato.
http://books.google.com.mx/books?id=GXKf
6ibU5gUC&pg=PA511&lpg=PA511&dq=por
que+se+forman+tioles+en+la+produccion+
de+piruvato+y+acetaldehido&source=bl&ot
s=BKiUjVSNsU&sig=HK72vYq4W6vD5YIX
nzbQAGKGR5Q&hl=es&sa=X&ei=bbtwT6
WdDqWe2AWDq6TjDg&sqi=2&ved=0CCM
Q6AEwAQ#v=onepage&q=porque%20se%
20forman%20tioles%20en%20la%20produc
cion%20de%20piruvato%20y%20acetaldeh
ido&f=false

DISCUSIN Y CONCLUSIN:

Para determinar la presencia de piruvato

mediante nitroprusiato de sodio, se pudo
observar la formacin de interfaces y de un
anillo lo cual indico la presencia de grupos tioles
en donde se observa en coloracin azul o
verdosa la reaccin del piruvato como se puede
observar en el primer tubo, en el segundo tubo
se pudo observar la formacin de un aro color
rojo lo cual indica que si hay presencia de
piruvato ya se utilizo un agente que atrapo el
intermediario y este form un compuesto que no
pudo metabolizarse. La piruvato
descarboxilasa no es activa en soluciones
ligeramente alcalinas, de manera que el
piruvato se acumula y su presencia puede
demostrarse por la reaccin con nitroprusiato
de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrazina formando un
anillo de color rojo en la superficie, lo cual indica
que la prueba fue positiva.

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