RESUMEN DE ARTCULO
sustracciones. Medir la actividad del agua o la concentracin
El artculo se basa en las recomendaciones de la iniciativa
STRENDA (Estndares para el Reporte de Informacin en
Enzimologa) en el contexto de la enzimologa pura y para
biocatlisis. Pero aade otros ms. Provee indicaciones para
asuntos como la selectividad, especificidad, productividad y
estabilidad de los biocatalizadores (enzimas y clulas
completas), as como problemas metodolgicos relacionados
con las reacciones en sistemas de fase mltiple, y los aspectos
que se deben tomar en cuenta al reportar caractersticas de
biocatalizadores.
Caracterizacin de una reaccin biocataltica
El biocatalizador requiere estabilidad en donde su vida
media puede ser reportada nicamente por decaimiento
exponencial simple (grado 0), se prefiere la estabilidad
operacional a la estabilidad trmica, las condiciones deben ser
claras tanto para el ensayo como para la pre-incubacin, la
medida del tiempo y los tratamientos deben ser claros en
estudios de re-uso de lote (ej. estudio de estabilidad en
solvente) y para los biocatalizadores inmovilizados las
limitaciones de la transferencia de masa deben ser
consideradas. En cuanto a las clulas ntegras libres, debe
tomarse en cuenta su posicin en la curva de crecimiento;
para las inmovilizadas hay que tomar en cuenta la cantidad y
proporcin enzima/clula, la cantidad inmovilizada, la
actividad, el contenido residual de agua, el dato de
soporte/distribucin entre partculas (cuando est disponible).
De las enzimas libres hay que especificar las impurezas y
aditivos, el fabricante con nombre y direccin, nombre
completo del producto y codigo de fabricante, nombre de la
reaccin catalizador/ nmero-EC, y si aplica, el nmero de
acceso de la secuencia / organismo / especie y cepa.
De la reaccin necesitamos informacin para comparar la
eficacia del proceso, para ello se colectan datos especficos; la
actividad especfica de biocatlisis, la transformacin del
equilibrio de mximo rendimiento para reacciones
controladas, la temperatura ptima puede ser reportada solo
cuando haya tasa ptima clara y la productividad del reactor
con dimensiones correctas. En la informacin de cintica se
deber definir la Vmax, kcat, kcat/Km, Km, la cantidad de
experimentos independientes asi como la informacin sobre
errores producto de rplicas de anlisis indicando exactitud.
Adems se deber especificar cmo se obtuvo el parmetro
dado, usandose un rango S/Km modelo usado para determinar
los parmetros. En la parte metodolgica se deber medir la
reaccin, la temperatura, presin, otros componentes del
ensayo y componentes de variables, rangos de concentracin,
concentracin de enzima y protena. Para una reaccin no
acuosa o de fase mltiple se debe tomar en cuenta las
condiciones de mezcla. A la muestra se le debe extraer toda la
mezcla de reaccin o revisar la concentracin en todas las
fases, no perturbando las condiciones de reaccin con
de agua en todas las fases o describir el pre-equilibrio a un
valor definido de actividad de agua, la base de calibracin de
pH. Para reacciones acuosas diluidas se especifica el pH, el
buffer y su concentracin, las sales metlicas y sus
concentraciones, el total de fuerza inica. Respecto a la
selectividad hay que hacer una comparacin clara de la
reaccin, especificar la regio-, quimio- o enantioselectividad,
para sta ltima reportando la tasa enantiomrica.
Elementos que me pareci importante remarcar:
Clulas completas: El desempeo de una clula como
biocatalizador puede ser afectado drsticamente por su
posicin en la curva de crecimiento. Especificar variables
como; medio, detalles del inculo de cultivo, condiciones de
aireacin y agitacin, temperatura, algn control aplicado
durante el crecimiento (como pH).
Sistemas multifase: Para mezclas reactivas que tienen ms de
una fase presente (ej. biocatalizador slido suspendido, fases
lquidas inmiscibles, sustratos o productos insolubles). En tales
sistemas hay que agitar continuamente durante la reaccin, y
eso puede afectar el progreso de la reaccin observada
(debido a que la agitacin puede afectar la tasa de
transferencia de masa que son limitantes).
Unidades para reportar la actividad cataltica: se recomienda
usar el SI katal (mol s-1) o sus submltiplos, o las unidades
previamente preferidas en enzimologa mol min-1. La
actividad especfica debera ser dada en unidades como kat kg-
1 o mol min-1mg-1.
Nmero de cambio: Antes utilizado en enzimologa para
referirse a kcat de la enzima. En la catlisis se refiere al nmero
de moles de producto formado por cada mol de catalizador
sobre el tiempo de reaccin. Esta tasa adimensional puede ser
aludida correctamente como un nmero, a diferencia de kcat,
que tiene unidades de tiempo-1.
Especificidad y selectividad: Se refiere a cuando el
biocatalizador puede hacer una distincin entre dos o ms
sustratos posibles, o entre dos o ms reacciones posibles en
un solo sustrato. Algunos autores asignan distintos
significados a cada uno, por lo que se debe especificar.
FUENTE:
Gardossi L, Poulsen PB, Ballesteros A, Hult K, Svedas VK, Vasi-
Racki D, Carrea G, Magnusson A, Schmid A, Wohlgemuth R,
Halling PJ; European Federation of Biotechnology Section on
Applied Biocatalysis. (2010) Guidelines for reporting of
biocatalytic reactions. Trends Biotechnol. Apr;28(4):171-80.