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La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido que se queda fijo en la misma
posicin. La fase mvil puede ser un lquido o un gas que corre a travs de una
superficie y de la fase estacionaria. Las sustancias que estn en un sistema de
cromatografa interaccionan tanto con la fase estacionaria como con la fase mvil. La
naturaleza de estas interacciones depende de las propiedades de las sustancias as
como tambin de la composicin de la fase estacionaria.
La rapidez con que viaja una sustancia a travs del sistema de cromatografa depende
directamente de la interaccin relativa entre las sustancias y las fases mvil y
estacionaria. En el caso de una mezcla, si cada componente interacciona diferente con
la fase mvil y la fase estacionaria, cada uno de ellos se mover diferente.
Cromatografa de capa fina: basa en el principio del reparto entre dos fases. En
general, una cromatografa se realiza permitiendo que la mezcla de molculas que se
desea separar (muestra) interaccione con un medio que se denomina fase
estacionaria. Un segundo medio la fase mvil que es inmiscible con la fase
estacionaria se hace fluir a travs de sta para elur a las molculas en la muestra.
Debido a que las distintas molculas en la muestra presentan diferente coeficiente, la
fase mvil a los distintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos
que en la fase mvil sern eludos ms rpido que los que sean preferencialmente
solubles en la fase estacionaria.
Introduccin
Significa "Escribir en Colores.
Los componentes de una mezcla pueden presentar una tendencia diferente a
permanecer en cualquiera de las fases involucradas.
Es la separacin de dos o ms compuestos qumicos en un medio
Conceptos generales
Cromatografa plana: La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre
un papel.
Las principales tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna: La fase estacionaria se sita dentro de una columna.
Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos
Aspectos histricos de los distintos tipos de cromatografa
Cromatografa en papel
Funcionamiento
En unas condiciones determinadas sern retenidas en la columna las muestras
que tengan una carga complementaria a la de la matriz de la gel, siendo eluidas
las restantes.
Para eluir las muestras retenidas se puede variar la carga inica del solvente o su
pH de forma que se alcance el punto isoelctrico de la muestra de inters o el de la
matriz, neutralizando de este modo la fuerza que retiene a la muestra en la
columna.
Aspectos histricos de los distintos tipos de cromatografa
Cromatografa de gel-filtracin
Fodin y Porath en 1958 descubren que usando como fase estacionaria geles
se puede separar polmeros sintticos de alto peso molecular.
Cromatografa de afinidad.
Porath en 1967 utiliza un pptido o protena unida covalentemente a un ligando
y la utiliza para la separacin de molculas proteicas.
Cromatografa de gas.
Es una de las tcnicas ms utilizadas e importantes.
Ha revolucionado el campo de la qumica analtica.
Cromatografa de exclusin
o La cromatografa de exclusin molecular o de filtracin en gel, separa las
muestras en base a su tamao.
o La matriz de la columna esta formada por un polmero entrecruzado con poros
de tamaos determinados.
o Las muestras de mayor tamao migran a lo largo de la columna con mayor
velocidad que las de tamao pequeo.
o Las muestras de menor tamao, entran en los poros y se mueven a lo largo de
la columna lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se
encuentran en el interior de las bolas de polmero en su marcha a lo largo de la
columna.
o Hay diferentes tamaos de partcula para un gel:
a menor tamao mayor resolucin y menor gasto en la columna.
o Esta tcnica se emplea en la separacin de protenas de alimentos,
determinacin de glucosa y fructosa en zumos de fruta, etc.
Caractersticas de las matrices
Deben ser estables.
Tener bajo contenido en grupos inicos.
Uniformidad de poro y tamao.
Los compuestos utilizados pueden ser derivados de:
Dextranos (Sephadex)
Agarosa (Sepharosa)
Acrilamidas (Biogel P)
Esferas de vidrio
Cromatografa de afinidad
Cromatograma correspondiente a una cromatografa liquida en fase reversa para compuestos fenlicos
Fase mvil es la fase que se mueve en una direccin definida. Puede ser un
lquido (cromatografa de lquidos o CEC). un gas (cromatografa de gases) o
un fluido supercrtico (cromatografa de fluidos supercrticos). La fase mvil
consiste en la muestra que est siendo separada/analizada y el disolvente, que
se mueven por el interior de la columna. En el caso de la cromatografa lquida
de alta resolucin, HPLC, la fase mvil es un disolvente no-polar como el
hexano (fase normal) o bien algn disolvente polar (cromatografa de fase
reversa) y la muestra que va a ser separada.. La fase mvil se mueve a travs
de la columna de cromatografa (fase estacionaria) de forma que la muestra
interacciona con la fase estacionaria y se separa.
Cromatografa preparativa se usa para purificar suficiente cantidad de
sustancia para un uso posterior, ms que para anlisis.
Tiempo de retencin es el tiempo caracterstico que tarda un analito particular
en pasar a travs del sistema (desde la columna de entrada hasta el detector)
bajo las condiciones fijadas.
Muestra es la materia que va a hacer analizada en la cromatografa. Puede
consistir en un simple componente o una mezcla de varios. Cuando la mezcla
es tratada en el curso del anlisis, la fase o fases que contienen los analitos de
inters es llamada igualmente muestra mientras el resto de sustancias cuya
separacin no resulta de inters es llamada residuo.
Soluto es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
Disolvente es toda sustancia capaz de solubilizar a otra,y especialmente la
fase lquidamvil en cromatografa de lquidos.
Fase estacionaria es la sustancia que est fija en una posicin en el
procedimiento de la cromatografa. Un ejemplo es la capa de silica en la
cromatografa en capa fina.