Barreras de contencin empleadas en

laboratorios microbiolgicos (Parte I)

El termino "contenedor" se emplea para la descripcin de los mtodos seguros para el manejo de agentes
infecciosos en el rea del laboratorio, donde los mismos se manipulan y/o almacenan. Los riesgos de
contaminacin por exposicin a diferentes microorganismos, de parte del personal de laboratorio, es
minimizado por el uso adecuado de los respectivos equipos de seguridad. El principal objetivo de este tipo de
barrera de contencin es el control de aerosoles, principal causa de contaminacin por parte del operador. En
el sentido ms amplio, este tipo de equipo debe ser altamente efectivo para aislar al personal del riesgo
infeccioso y/o txico a ser procesado. En otras circunstancias, sin embargo, la situacin es todo lo contrario:
proteger el producto o el rea de trabajo de una posible contaminacin, ocasionada por el operador o por el
medio ambiente que lo rodea. En ultima instancia, hay equipos diseados para la proteccin, tanto del
operador, como del producto; por ejemplo durante la manipulacin de cultivos celulares, muestras clnicas,
cepas de microorganismos, etc. Se conocen dos tipos de barreras de contencin: primarias y secundarias.

Barreras primarias:

Este tipo de equipo de seguridad incluye tanto las cabinas biolgicas, como contenedores cerrados para
centrifugacin, dispositivos para manipulacin de pipetas, homogeneizadores, equipos de ultrasonido, agitadores;
indumentaria personal (batas, tapabocas, guantes, lentes de seguridad, mascaras, etc.). En determinadas
situaciones, en las cuales no se puede operar en cabina, la indumentaria protectora del operador forma la barrera
primaria ms importante entre el personal y el agente infeccioso; ej.: estudios relacionados con la manipulacin de
animales de experimentacin (inoculaciones, necropsias, etc.).

Barreras secundarias:

El diseo de las instalaciones de un laboratorio es un paso importante para proporcionar tanto una barrera de
proteccin personal durante sus operaciones como del entorno, evitando fugas de aerosoles al medio ambiente. El
diseo de dichas instalaciones incluye 3 tipos de infraestructuras, en orden ascendente de su nivel de proteccin:
laboratorio bsico, laboratorio de contencin y laboratorio de contencin mxima.

En esta primera parte nos ocuparemos solamente de las barreras de contencin primaria: cabinas, dispositivos para
pipetas, equipos de ultrasonido, homogenizadores, agitadores, mezcladores, indumentaria personal, etc.

CABINAS DE BIOSEGURIDAD.

La mayor parte de los procedimientos microbiolgicos ocasionan aerosoles que diseminan material infeccioso en el
rea de trabajo, representando un riesgo de infeccin para el operador. Dichos dispositivos de contencin se
emplean ampliamente para prevenir la fuga de aerosoles y/o gotitas, protegiendo adicionalmente el material que se
manipula en el interior de la cabina de la contaminacin ambiental. Existen en el comercio 3 tipos de cabinas de
bioseguridad, de acuerdo a cada conveniencia: clase I, II y III. La eficacia de estos equipos se basa en la
comprobacin de la eficacia de los filtros, el sistema de ventilacin y la capacidad de contencin general, as como
en otros factores, tanto de diseo como de fabricacin (ver esquemas anexos).

Cabina de seguridad biolgica clase I:

Este equipo est formado por una cmara de manipulacin con apertura frontal, provista de un dispositivo de
evacuacin de aire, a fin de proteger tanto al operador como al medio ambiente, por medio de una corriente de aire
que aleja las partculas del operador, arrastrndolas hacia su interior, pasando a travs de un filtro HEPA antes de
salir al exterior. Las cabinas clase I estn destinadas a trabajos con microorganismos que entraan un riesgo leve o
moderado. Cuando en investigaciones microbiolgicas se utilicen productos qumicos txicos en cantidades de 1
microgramo o compuestos radioactivos en volmenes muy reducidos, se deben emplear cabinas de bioseguridad
clase I especialmente diseadas y construida para esos fines. Antes de su uso se deben practicar pruebas de
contencin, para determinar la velocidad de entrada de aire que se necesita para un empleo satisfactorio de la
cabina, que debe de estar comprendida entre 0,4 y 1,0 m/s.
 Figura 1. Cabina de seguridad biolgica clase I

Cabina de seguridad biolgica clase II:

Este equipo est constituido por una cmara de manipulacin abierta parcialmente en la parte frontal, que
protege al personal y al medio ambiente de los riesgos biolgicos leves o moderados, a travs de una barrera
de aire circulante, situada en la abertura de la cabina; la misma cantidad de aire sale de la cmara a travs
de un filtro HEPA. Se utiliza este tipo de cabina para la manipulacin de microorganismos que implican un
riesgo biolgico bajo o moderado, debindose especificar en su cara anterior las limitaciones de su empleo.

Las cabinas de clase II sirven tambin para proteger el producto y/o el trabajo experimental de la
contaminacin, mediante una corriente de aire filtrado HEPA que circula en sentido descendente, uniforme y
unidireccional (flujo laminar). La velocidad de la corriente de aire descendente debe ser suficiente como para
conferir proteccin contra la contaminacin cruzada, y a su vez evitar que se rebose. La eficacia de la barrera
de aire deber confirmarse mediante pruebas de contaminacin provocada. Cuando se alcanza un buen nivel
de contencin, hay que medir la velocidad de salida del aire expulsado y consignar el valor obtenido para
utilizarlo como referencia en las pruebas peridicas de rendimiento. Este valor no ha de ser inferior a 0,4 m/s,
tomando como base el volumen de aire medido en funcin de la abertura frontal de la cabina (velocidad
mnima de penetracin del aire). Como la capacidad de contencin de este tipo de cabina de bioseguridad
depende de la uniformidad y del buen equilibrio del flujo de aire, habr que comprobar peridicamente estas
caractersticas.

Las cabinas de bioseguridad clase II se clasifican en 2 tipos: A y B, basadas en sus caractersticas de

construccin, velocidad de flujo de aire y sistema de extraccin. Las cabinas de bioseguridad clase II tipo A
son especiales para tareas de investigaciones microbiolgicas, en ausencia de compuestos qumicos voltiles
y/o txicos, as como de sustancias radioactivas, ya que el aire recircula en el rea de trabajo. La misma
expulsa el aire a travs de filtros HEPA, bien sea dentro del laboratorio mismo o hacia el exterior, a travs de
una conexin hacia el ducto de salida. Las cabinas clase II tipo B, a su vez, pueden incluir 3 subtipos: B1, B2
y B3. En el esquema anexo se pueden observar las diferencias y aplicaciones de cada una de ellas. Poseen
ductos hermticos y muy resistentes y contienen presin negativa. Estos hechos, adicionales a una
incrementada velocidad de 100 Ifpm, permiten la manipulacin de compuestos tanto txicos, como
radioactivos.
Figura 2. Cabina de seguridad biolgica clase II
 Figura 3. Cabina de seguridad biolgica clase II

Cabina de seguridad biolgica clase III:

Este equipo esta constituido por estructuras totalmente cerradas y hermticas, en cuyo interior las
manipulaciones se realizan por medio de guantes recambiables, que recubren todo el brazo del operador. La
cabina recibe aire, que penetra a travs de un filtro HEPA y se evacua a travs de 2 filtros del mismo tipo
montados en serie. Las manipulaciones dentro de la misma se realizan bajo presin negativa, lo cual asegura la
proteccin tanto del personal como del producto y del medio ambiente .Este tipo de cabina puede ser usada para
todo tipo de microorganismo, no as para la manipulacin de lquidos o gases inflamables, a causa del riesgo de
explosin. La presin negativa en su interior deber ser de al menos 200 Pa. El flujo total de aire debe ser capaz
de disipar el calor producido en el interior. El flujo de aire debe ser lo suficiente como para que se puedan abrir
dos de los portaguantes, obteniendo una velocidad mnima de 0,75 m/s.

Dentro de esta categora pueden incluirse tambin los "aisladores de plstico flexible con presin negativa". Los
mismos estn constituidos por una envoltura maleable montada y conformada sobre un bastidor metlico, pero,
debido a su menor resistencia, no puede considerarse como una alternativa eficiente de los actuales equipo de
contencin mxima.
 Figura 4. Cabina de seguridad biolgica clase III

Figura 5. Esquemas que muestran las caractersticas de las cabinas

clase I (presin negativa) y clase II (flujo laminar vertical).

Dispositivos para pipetas:

Las pipetas se encuentran entre los utensilios ms comunes que se manipulan en laboratorios microbiolgicos y
biomdicos en general. Su mal empleo est asociado a un elevado numero de accidentes profesionales. Los
riesgos ms frecuentes que entraa el uso de pipetas proviene de la succin bucal. Adems, puede producirse
el paso de agentes patgenos a la boca cuando se coloca un dedo contaminado en el extremo de la pipeta por
el que se hace la aspiracin. Un riesgo menos conocido es la inhalacin de los aerosoles causados por la
succin; el tapn de algodn no constituye un filtro bacteriano eficaz en caso de presin, tanto positiva como
negativa, permitiendo el paso de partculas durante dicha operacin. Cuando el citado tapn est muy apretado,
es necesario hacer una succin muy enrgica, con el consiguiente riesgo de aspirar a la vez el algodn y el
material biolgico. Tambin pueden originarse aerosoles cuando el lquido de la pipeta salpica la superficie del
mesn de trabajo o cuando se mezclan suspensiones al alternar succiones e insuflaciones, as como al soplar
para que salga la ltima gota. Pese a todo lo expuesto, aun existe mucho personal de laboratorio que insiste en
el pipeteo bucal, tcnica que debe ser erradicada totalmente mediante la concientizacin y el entrenamiento del
personal en el empleo de dispositivos adaptados a las pipetas por parte de quien tiene a cargo la supervisin de
ese tipo de personal. Hoy en da existen innumerables dispositivos de ese tipo, disponibles en el comercio.

Homogenizadores, agitadores, mezcladores, equipos de ultrasonido:

Este tipo de aparato y todos sus similares pueden crear aerosoles de riesgo y conducir a exposicin del personal
que no cumple precauciones extremas al respecto. De acuerdo al tipo de material biolgico que se manipule con
ellos, deber o no utilizar la cabina de bioseguridad indicada. Las tapas y empacaduras de este tipo de equipo
deben ser evaluadas peridicamente, pues durante su operatividad pueden dejar salir aerosoles altamente
contaminantes.

Respiradores:

En este grupo se incluyen tanto los respiradores de capucha con presin positiva, como las caretas respiratorias
de cubierta completa y las de cubierta parcial.

Respiradores de capucha con presin positiva: Son capuchas ligeras de cloruro de polivinilo transparente, que
recubren la cabeza. el cuello y los hombros. El aire penetra a presin por detrs de la cabeza y se dispersa
alrededor de la cara y el cuello, saliendo por los lados de los hombros. Hay otros modelos en los cuales el aire
proviene de botellas porttiles o llega por tuberas conectadas a compresores ubicados en el exterior; los
primeros tienen el inconveniente de que su tiempo de utilizacin est limitado a slo 15 30 minutos. Un
modelo ms sofisticado de respirador de capucha es el que recibe el aire a travs de un pequeo ventilador de
pilas provisto de filtros HEPA, pudiendo dar una autonoma de 6-7 horas. Su eficacia depende del buen estado
de los filtros, por lo cual sern reemplazados peridicamente.

Caretas respiratorias de cobertura completa: Estos respiradores recubren la mayor parte de la cara, los ojos y
las vas respiratorias, pudiendo estar equipados a la vez de un filtro biolgico y de un cartucho qumico. Este
ltimo resulta innecesario cuando la careta se utiliza exclusivamente para asistir a pacientes y realizar trabajos
de laboratorio biolgico. Su filtro debe ser del tipo HEPA y su localizacin debe ser lateral, para que permitan
una mejor visualizacin por parte del operador. La eficacia de este tipo de caretas depende de factores tales
como: dificultad respiratoria, que puedan acarrear la molestia al usuario, y la correcta adaptacin de sus bordes
a los contornos faciales. Es importante que quede bien encajada, a fin de que el aire inhalado pase siempre por
el filtro; de lo contrario, la proteccin ser escasa o nula.

Caretas respiratorias de cobertura parcial: La misma slo protege la nariz y la boca, dejando al descubierto los
ojos; puede contener a la vez un filtro biolgico y un cartucho qumico. Este ltimo resulta innecesario si la
careta se utiliza slo para atender pacientes y/o realizar trabajos biolgicos. El filtro debe ser del tipo HEPA,
debiendo estar colocado en un sitio donde no entorpezca la visibilidad. Este tipo de equipo tiene el
inconveniente de que no viene en una talla universal, por lo cual es necesario adquirir una gama de tamaos,
siendo de ms difcil adaptacin al rostro del operador que la de cobertura total. La careta de cobertura parcial
deber emplear una proteccin separada para los ojos. En estos casos se recomienda emplear una visera o
pantalla facial de plstico que recubra toda la cara, siempre que se consiga un modelo que se adapte bien a la
careta respiratoria, de lo contrario es preferible el uso de anteojos de seguridad.

Viseras, anteojos y lentes de seguridad: Las salpicaduras de ciertos productos qumicos, ej.: desinfectantes
utilizados en los laboratorios de Microbiologa, pueden provocar ceguera si entran en contacto con la mucosa
ocular. Las viseras que recubren toda la cara ofrecen una ptima proteccin, cuando no hay riesgo de infeccin
transmitida por el aire. Conviene que estas viseras puedan levantarse a voluntad, para descubrir el rostro, y
sean fciles de quitar en caso de accidentes. Los anteojos deben adaptarse muy bien en torno a la cuenca
ocular, para protegerla de eventuales emanaciones irritantes. Debemos recordar que los lentes de contacto no
ofrecen ninguna proteccin ocular. Cuando es importante asegurar la proteccin del producto biolgico, habr
que utilizar al mismo tiempo una careta respiratoria para la cara y una capucha para la cabeza. En estos casos
la proteccin de los ojos tambin es de gran importancia, ya que pueden presentarse infecciones por va
conjuntival.

Indumentaria personal protectora: Las batas de laboratorio, guantes, delantales, tapabocas, mascaras, gorros,
protectores de calzado, etc., ofrecen al operador cierto grado de proteccin, al ser empleados en combinacin
con otros elementos de seguridad, como las cabinas. Las batas protegen nuestra ropa de calle de eventuales
contaminaciones, pero no deben ser empleadas fuera del rea de trabajo, ej.: corredores, baos, cafetines,
calle, etc. Cada una de las citadas indumentarias personales tienen una funcin protectora especfica cuando las
circunstancias lo requieran. Los guantes, por ejemplo, son de particular importancia cuando se maneja material
infeccioso como sangre y otros fluidos biolgicos, as como muestras clnicas. Los tapabocas y mascaras,
conjuntamente con los anteojos, son muy tiles para la proteccin de mucosas (ojos, nariz, boca) de
salpicaduras contaminantes durante operaciones de riesgo realizadas particularmente fuera de las cabinas de
bioseguridad. El empleo de protectores para calzado no es muy frecuente en un laboratorio rutinario de
Microbiologa, pero s en reas donde se manipulan cultivos celulares, envase de productos biolgicos, manejo
de agentes infecciosos de niveles de riesgo III y IV, etc.

BIBLIOGRAFA:

Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Section II: Priciples of Biosafety, pp. 4-10. CDC/NIH,
1999.

Biosafety in the Laboratory. Cap. 3. Safe Handling of Infectious Agents. pp. 13-33. National Academy Press,
1989.

Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. Parte III: Gua del Material de Bioseguridad, pgs. 90-109. OMS,
Ginebra, 1984.