1-Falar os fatores que influenciam na cintica de um bioprocesso e como se pode identificar a
presena de inibio pelo substrato. A cintica de um bioprocesso influenciada pela temperatura (temperatura tima deve ser observada para no haver interferncias negativas no processo, como a morte dos microrganismos ou desnaturao de protenas), Ph (geralmente tem o neutro como uma faixa tima), pela disponibilidade de fontes de carbono e demais nutrientes (macro e micro), agitao (aerao e homogeneizao) e pela formao de um produto inibidor, concentrao do substrato, presena de inibidores inicialmente no cultivo. A presena de inibio pelo substrato pode ser identificada quando um valor alto de concentrao inicial [S] pode, ao invs de aproximar x de max, provocar uma inibio do crescimento celular. uma situao comum na prtica, especialmente em processos descontnuos. 1 1 1 Equao de Manod: = + .
2-Propor um mtodo de esterilizao para o meio de cultivo e equipamento de uma indstria.
Justificar sua escolha. Esterilizao de equipamento: calor mido em forma de vapor saturado> um dos mtodos de esterilizao mais efetivos, desnatura irreversivelmente protenas e o grau de desnaturao proporcional ao grau de hidratao da clula, possui alta penetrao, destruindo bactrias e esporos em tempos bastante curtos, econmico e no deixa resduos txicos. Esterilizao de meio de cultivo: aquecimento com vapor> realizada para processos contnuos e descontnuos. Ocorre em 3 fases em processos descontnuos: aquecimento at a temperatura de esterilizao (cerca de 120C); esterilizao mantendo a temperatura constante por tempo adequado; resfriamento at a temperatura de fermentao. A morte dos microrganismos se d entre o aquecimento e o resfriamento. Entre as vantagens est o menor risco de contaminao e uma desvantagem o alto gasto energtico. No processo contnuo, a esterilizao feita por meio de uma tubulao com fluxo contnuo. O meio j esterilizado troca calor com o meio que entra para esterilizao, dessa forma o meio a ser esterilizado recebe um aquecimento inicial, em seguida ele aquecido at a temperatura necessria e percorre uma tubulao de comprimento adequado para que ele permanea na temperatura pelo tempo necessrio, em seguida ele sai e troca calor com outro meio a ser esterilizado. 3-De que forma se d a reproduo microbiana? A forma de reproduo depende do tipo de microrganismo em questo. As bactrias se reproduzem por fisso binria (assexuada), as leveduras por brotamento ou gemulao (assexuada) ou fisso binria (assexuada), os fungos de forma assexuada ou sexuada (esporulao). O crescimento dos fungos se d por extenso das hifas e a morfologia do seu miclio pode variar em funo do meio ambiente. A morfologia e crescimento influenciam na velocidade de crescimento e na formao de produtos. Em geral, um microorganismo necessita de gua, oxignio e nutrientes (fontes de carbono e nitrognio) para se reproduzirem, liberando produtos, gua e dixido de carbono para o meio. 4-Quais so as fases do crescimento microbiano? Quando um microrganismo inoculado em um meio de composio e volume conhecidos, o cultivo passa por uma srie de fases. -Fase de latncia (lag): o perodo de tempo que se segue inoculao no meio de cultura e quando as clulas se adaptam ao novo meio. Durante esse perodo pode no haver multiplicao celular ou o crescimento no significativo, mas pode haver, por exemplo, a sntese de novas enzimas que so necessrias sntese de compostos essenciais ao crescimento. Pode ter uma durao mais ou menos longa dependendo do estado fisiolgico da cultura usada como inoculo e as condies de crescimento. -Fase de crescimento exponencial (log): Fase mais importante do crescimento microbiano, fornece dados para estudos de fisiologia e cintica, pois a velocidade constante e mxima nessa fase, permite tambm estudar influencia de fatores no crescimento dos microrganismos. -Fase de declnio: fase onde o nmero de microrganismos que morre torna-se progressivamente superior ao nmero de microrganismos que surgem. -Fase estacionria: fase onde no h mais aumento da populao, seja por falta de nutrientes ou oxignio ou pelo acmulo de algum produto txico no meio. 5-Quais so os fatores que influenciam no crescimento microbiano? -Temperatura: para todos os microrganismos existe uma faixa de temperatura mnima e mxima que eles suportam para poderem crescer e uma temperatura tima, que a temperatura ideal para o crescimento. Temperaturas acima ou abaixo das citadas podem comprometer o crescimento dos microrganismos. -pH: Como para a temperatura, tambm existe um pH timo, mnimo e mximo para o crescimento microbiano. A maioria dos microrganismos prefere pHs em torno da neutralidade, mas outros preferem o pH cido. -Agitao: a agitao muito importante pois facilita a aerao para microrganismos aerbios (a difuso do oxignio no meio acontece de forma mais efetiva), facilita a homogeneizao do meio, a transferncia de massa e calor, mantem slidos em suspenso, elimina gradientes de concentrao e temperatura. -Outros fatores tambm podem interferir diretamente no crescimento microbiano, como a concentrao de substrato e nutrientes, tipo de matria-prima, formao de produto inibidor, presena de inibidores inicialmente no cultivo, entre outros fatores. 6-Qual a importncia e os princpios fundamentais da Cintica dos Processos Fermentativos? O estudo da cintica dos processos fermentativos essencial para possibilitar o aumento da escala dos processos biolgicos. Para que este estudo seja realizado, deve-se quantificar o substrato no meio em que ele est inserido. O substrato limitante (geralmente fonte de C), ou de interesse econmico escolhido para ser quantificado. O estudo da cintica dos processos fermentativos tambm importante por indicar a velocidade de um processo, permitir que o controle e otimizao do processo, seja assim, feito de forma mais efetiva. 7-Como se classificam os processos fermentativos? A classificao dos processos fermentativos relacionada formao de produtos e crescimento microbiano: -Produo associada ao crescimento: Produto formado (metablito primrio, que produzido durante a fase exponencial do microrganismo) est diretamente ligado s reaes do catabolismo ou decomposio do substrato. Ex: produo de etanol. -Produo parcialmente associada: Produo defasada em relao ao crescimento. Formao de produto no est diretamente relacionada produo de energia. Ex: produo de cido ctrico por Aspergillus niger. -Produo no associada: Produto formado um metablito secundrio (produzido durante a fase estacionria). A clula no necessita de tais produtos para crescer e sim para outras finalidades. Ex: antibiticos (penicilina). 8- O que esterilizao e qual sua importncia? A esterilizao engloba todos os processos fsicos, qumicos e mecnicos, que tem como objetivo destruir, remover ou inativar microrganismos contaminantes, que podem estar sob a forma vegetativa ou esporulada. A esterilizao age comprometendo ou destruindo estruturas microbianas, como parede celular e material gentico ou inativando protenas e enzimas. Ela deve ser realizada porque muitos processos fermentativos tm que ocorrer sem organismos estranhos no meio. A esterilizao pode ou deve ser realizada nos equipamentos (biorreatores, bombas, tubulaes, etc), no meio de cultivo, no ar que entra nos biorreatores e nas embalagens finais. 9-Cite a diferena entre desinfeco, antissptico e assepsia. A desinfeco no implica necessariamente na eliminao de todos os microrganismos, somente na dos mais prejudiciais ao processo e normalmente envolve o uso de algum agente qumico (desinfetante ou germicida). Antisspticos so desinfetantes aplicados aos seres humanos e animais para eliminar patgenos. Assepsia o conjunto de mtodos utilizados com o intuito de impedir a entrada de microrganismos em locais que no os contenham. 10-Quais os tipos de agentes esterilizantes so comumente utilizados? -Calor mido: possui alta eficincia devido sua penetrao, destruindo esporos e bactrias em tempos bastante curtos. Injeo de vapor saturado. -Calor seco: Calor transferido lentamente e o processo menos eficaz do que o calor mido. -Radiao ultravioleta (V): Absorvida mais significativamente pelos cidos nuclicos, onde normalmente ocorrem as leses, que so letais. -Radiao ionizante: alguns exemplos so as alfa, beta e gama, podem alterar grupos qumicos ou at romper fitas de DNA, pois produzem radicais qumicos altamente reativos. -Outros: xido de etileno e glutaraldedo. 11-Explique como ocorre a esterilizao de equipamentos por agentes fsicos. Calor mido: Pode ser usado para esterilizar tubulaes, reatores vazios ou com meio de cultura. Reatores Vazios: Injeta ar no reator e expulsa o ar presente, injeta novamente at atingir uma temperatura e presso, injeta novamente para manter as condies (por um determinado tempo). Reatores com meio de cultura: Circulao de vapor por meio de uma serpentina promovendo a aquecimento do meio de cultura, em seguida feita a expulso do ar e esterilizao dos equipamentos auxiliares, injeta vapor no tanque (com o meio de cultura), at atingir 100C,ento o reator fechado e continua a injeo at uma temperatura superior e o resfriamento feito pela injeo de gua fria na serpentina. Deve-se haver agitao durante todo o processo e isso gera um aumento de volume do meio de cultura, por isso a concentrao deve ser maior. Para os reatores serem esterilizados por calor mido eles devem ter um filtro esterilizante adequado e uma vlvula de segurana para casos de nveis muito altos de presso. Calor seco: empregado para vidrarias, metais e slidos resistentes ao calor. Todo o material deve ser mantido na temperatura de esterilizao por um perodo mais longo, geralmente 4 horas. Radiao ultravioleta: geralmente feita por uma lmpada emissora e um mtodo com baixa capacidade de penetrao, por isso demanda bastante tempo. Radiao gama: Co 60 ou Cs 137, tem alto poder de penetrao e danos irreversveis s molculas de DNA. 12-Explique como ocorre a desinfeco de equipamentos por agentes qumicos. Germicidas: so agentes sanitizantes lquidos e atuam em temperatura ambiente, tempo de contato maior para o efeito desejado, tem maior acao para vrus, pois as bactrias so mais resistentes a esses agentes. Agentes gasosos: utilizados para salas e laboratrios. Ex: xido de etileno e xido de propileno. 13-O que o tempo de esterilizao pode afetar? O tempo de esterilizao deve ser respeitado e primordial para o sucesso da esterilizao, pois um temo abaixo do desejado pode comprometer o processo por no eliminar todos os microrganismos, mas um tempo longo, dependendo do mtodo (principalmente altas temperaturas) pode desnaturar protenas e nutrientes necessrias ao meio de cultivo. Geralmente, quanto maior for a temperatura, menor ser a desnaturao, pois o meio ser exposto por pouco tempo a essa temperatura atpica. Como num meio de cultivo podem existem mais de uma espcie de microrganismo, o clculo do tempo de esterilizao feito com base no mais resistente. Os clculos tambm mudam para o tipo de processo (contnuo ou descontnuo). 14-Por que e como realizada a esterilizao do ar? A desinfeco do ar importante porque alguns bioprocessos devem ocorrer em condies de assepsia. O nvel de necessidade de desinfeco leva em conta o tipo de bioprocesso em questo. No ar existem diversos microrganismos em suspenso, alguns associados partculas de poeira, por isso uma desinfeco do ar muitas vezes requerida. Para certificar que o ar est esterilizado, utilizada a tcnica dos amostradores, em que uma amostra de ar coletada e deixada em condies propcias para o desenvolvimento dos microrganismos, a partir da possvel estimar a concentrao dos microrganismos no ar. A esterilizao do ar pode ser feita por mtodos como o aquecimento do ar, a radiao ou a filtrao. A filtrao, por exemplo, mais adequada para a obteno de altas vazes de ar esterilizado e geralmente usa filtros confiveis, de baixo custo (o mais usado o filtro de l de vidro, mas existem outras fibras, como as microporosas). 15-Quais fatores que afetam a construo de um biorreator? Cintica do bioprocesso, clculos dos equipamentos e tubulaes necessrios para a manuteno da esterilidade, caractersticas hidrodinmicas do meio reacional, transferncia de massa de nutrientes na clula, transferncia de massa de oxignio para a clula, transferncia de calor metablico, controle da fisiologia microbiana. 16-Como se realiza a classificao dos biorreatores? Reatores em fase aquosa: possuem as clulas e enzimas livres e podem ou devem ser agitados mecanicamente, agitados pneumaticamente ou serem reatores de fluxo pistonado, possuem tambm clulas ou enzimas imobilizadas em suporte ou confinadas entre membranas. Reatores em fase no-aquosa: podem ser reatores estticos (bandejas), reatores com agitao (tambor rotativo), reatores com leito fixo ou reatores com leito fluidizado gs-slido. 16-Cite os tipos de reatores e suas caractersticas. Reatores agitados mecanicamente (STR): representam cerca de 90% dos reatores utilizados industrialmente, necessita de muita energia para a agitao mecnica, podem afetar a morfologia celular, possui ps e turbinas e a razo da altura/dimetro 2:1 ou 3:1. Biorreatores agitados pneumaticamente: Bolhas gasosas promovem a agitao do lquido, sistemas biolgicos susceptveis a foras cisalhantes, elevada relao altura/dimetro (6:1 a 20:1) Biorreatores de fluxo pistonado: Inculo e meio de cultura so misturados na entrada do sistema e a cultura flui com velocidade constante; variao da concentrao dos nutrientes e das clulas ao longo do comprimento do reator. Reatores de leito fixo/fluidizado: Reatores de leito fixo tem movimentao relativa das partculas praticamente inexistente. Os de leito fluidizado tem movimentao intensa de partculas. Fluidizao - injeo de ar ou gs inerte ou por corrente de recirculao de lquido no reator. Biorreatores com membranas: clulas confinadas entre membranas semipermeveis; reteno da atividade cataltica das clulas, que podem ser usadas repetida e continuamente. 17-Quais so as caractersticas desejadas para um suporte? E quais so os mtodos utilizados para imobilizao das clulas? [O que imobilizao? - A imobilizao pode ser definida como o movimento no independente das clulas ou enzimas na parte aquosa do sistema, por estarem alojadas dentro ou na superfcie do agente imobilizador; - Fixao de enzimas ou clulas vivas em um ambiente, de maneira que sua atividade cataltica no seja afetada negativamente; - Confinamento numa regio particular de um biorreator.] Caractersticas desejadas de um suporte: Grande rea superficial, com grupos funcionais para adeso celular; facilidade de manipulao e regenerao; no ser txico s clulas; alta capacidade de reteno; resistncia ao ataque qumico e microbiano; baixa sensibilidade compresso, tenses de cisalhamento, presses internas e externas; o suporte e a tcnica de imobilizao devem ser simples, de custo acessvel e passvel de escalonamento. Os principais mtodos de imobilizao em suportes so: ligao ou adsoro sobre a superfcie de um suporte slido; envolvimento em uma matriz porosa; formao de agregados celulares por floculao (natural) ou ligao com o uso de agentes qumicos (induzida artificialmente); conteno das clulas atrs de uma barreira. 18-Explique como funciona cada mtodo de imobilizao. Imobilizao sobre a superfcie de um suporte slido: A imobilizao ocorre por adsoro, devido interao por foras eletrostticas entre a membrana celular e a superfcie do suporte, ou por meio de ligaes covalentes. O suporte pode ser de material celulsico ou inorgnico. Imobilizao por envolvimento em matriz porosa: Confinamento das clulas em uma matriz polimrica formadora de um gel hidroflico. Os poros da matriz so menores que as clulas contidas no seu interior e permitem a transferncia de nutrientes e metablitos. Os produtos formados difundem-se atravs do gel e se acumulam no meio de cultura. Entre os materiais usados podemos citar a quitosana, o colgeno e a gelatina. Imobilizao por floculao celular (agregao): Agregao de clulas formando uma unidade maior. Propriedades das clulas de quando esto em suspenso, formarem agregados e sedimentarem (floculao natural) ou pode-se usar agentes floculantes para induzir a floculao ou mesmo para um agregado ser usado em outras culturas celulares (floculao artificial). Imobilizao por conteno das clulas atrs de uma barreira: utilizao de membranas micro porosas que envolvem as clulas em microcpsulas. A imobilizao geralmente realizada entre dois lquidos imiscveis. 19-Quais as vantagens de se imobilizar as clulas? Atividade e estabilidade prolongadas do biocatalizador; maior densidade de clulas por unidade de volume do biorreator com maior produtividade volumtrica, menor tempo de cultivo, eliminao de fases de crescimento celular no produtivas; maior consumo de substrato e aumento do rendimento; aumento a resistncia a maiores concentraes de substrato e menor inibio pelo produto final; maior facilidade na recuperao do produto, diminuindo a necessidade de separao e filtrao; regenerao e reutilizao dos biocatalizadores em produes em batelada sem ser preciso retir-los do reator, levando a cultivos semi-contnuos; reduo do risco de contaminao microbiana devido alta concentrao celular; possibilidade de uso de biorreatores menores, com processos mais simplificados e diminuindo os custos. 20-Qual a importncia de se realizar a aerao e agitao em um biorreator? Quais fatores influenciam? A agitao e aerao servem para homogeneizar o meio, manter os slidos em suspenso, tornar eficiente o transporte de massa e energia, eliminar gradientes de concentrao e temperatura. A aerao tambm importante ao difundir o oxignio no meio, j que a maioria dos bioprocessos so aerbios e o oxignio muito pouco solvel em gua. Os fatores que influenciam a agitao e a aerao so os tipos de lquidos (densidade e viscosidade), impelidor, altura do tanque e dimetro. 21-De que formas possvel transferir oxignio para o sistema? Existem duas formas: aerao superficial, onde a transferncia de oxignio se d do ar atmosfrico para o meio (ex: lagoas, filtros aerbios) e aerao em profundidade, quando ar borbulhado para dentro do lquido (aqui, a altura do tanque tem que ser bem superior ao dimetro para aumentar o tempo de residncia do ar). 22-O que afeta a concentrao de oxignio no meio? A concentrao de oxignio no meio aumenta com o aumento da presso parcial de oxignio na fase gasosa (pode inibir microrganismos aerbios), diminui com o aumento da temperatura (tem- se que ficar atento com a temperatura tima de cada microrganismo, o que torna muitas vezes um aumento de temperatura invivel) ou da concentrao de algum sal dissolvido, nutrientes e metablitos podem alterar a quantidade de O2 dissolvido. 23-O que fermentao no estado slido e quais suas caractersticas? Fermentao no estado slido se d pelo crescimento microbiano em slidos umedecidos ou em slidos inertes, onde a quantidade de gua livre mnima ou inexistente. O crescimento microbiano acontece na superfcie ou entre os fragmentos do substrato e nesse processo vai haver o consumo de substrato pelos microrganismos e a secreo de metablitos. As caractersticas da fermentao no estado slido so: a fase slida muitas vezes serve como suporte e fonte de nutrientes; o ar necessrio ao desenvolvimento microbiano deve atravessar os espaos vazios do meio a presses relativamente baixas; substrato no deve apresentar aglomeraes em suas partculas individuais para o ar poder passar entre as partculas; o crescimento microbiano se d em condies prximas s do seu habitat natural; alguns resduos agroindustriais podem ser utilizados como substratos e podem ter que passar, na maioria das vezes, por um tratamento prvio. 24-Como se d o processo e FES em um biorreator? O meio adicionado ao reator, feita inoculao do substrato e incubao por tempo determinado. O processo mais empregado batelada. Aps o tempo necessrio para o desenvolvimento dos microrganismos, feita a extrao do produto atravs de suspenso do meio em gua, soluo tampo ou outro tipo de solvente. 25-Quais as principais variveis devem ser controladas na FES? Umidade (grau necessrio depende da natureza do substrato, necessidades do microrganismo e produto desejvel), temperatura (calor pode ser produzido em grande escala durante o processo e precisa ser dissipado para que no prejudique o processo e com isso, a aerao muito importante), pH (difcil controle pela consistncia e heterogeneidade do meio de cultivo => uso de substrato com capacidade tamponante ou adio de soluo tampo durante a umidificao do substrato), agitao (homogeneizao do meio de cultivo, dificulta a formao de agregados, favorece a troca de calor do meio), transferncia de oxignio e nutrientes, caractersticas do substrato, estimativa de crescimento. 26-Quais as vantagens e desvantagens da FES? Vantagens: maior velocidade de reao devido ao maior contato do microrganismo com o meio; substratos so em sua maioria de baixo custo; normalmente no requer suplementao de nutrientes e/ou aditivos; fcil aerao devido aos interstcios existentes entre as partculas; reduz probabilidade de contaminaes; o fermentado seco tem outras finalidades, como uso para racao animal. Desvantagens: A dissipao de calor no meio um problema; dificuldade de controle de ph, temperatura, umidade, aerao e crescimento microbiano; dificuldade na coleta de amostras durante o processo; no indicado para fermentao com bactrias (formao de esporos). Aplicaes: produo de enzimas e alguns alimentos fermentados (como laticnios: queijo), etanol, compostagem de resduos (aplicao socioeconmica) 27-Qual a importncia da separao e purificao de produtos biotecnolgicos? Com o bioprocesso encerrado, necessrio retirar do meio o produto de interesse. So primordiais no processo e devem ser estudados para que o custo do processo no seja muito aumentado. O processo a ser escolhido depende da localizao do produto, do seu tamanho molecular, concentrao, solubilidade, polaridade, volatilidade. 28-Quais so as fases do processo de separao e purificao? 1)separao das clulas e seus fragmentos do meio de cultivo (clarificao). No caso de produtos associados s clulas, deve-se realizar o rompimento celular 2)concentrao e/ ou purificao de baixa resoluo 3)purificao de alta resoluo 4)acondicionamento final do produto 29-O que a clarificao e como ela pode ser realizada? Clarificao a primeira etapa do processo de purificao e determinada pela separao das clulas suspensas do meio de cultivo e o meio resultante chamado de clarificado ou filtrado. Operaes realizadas em escala industrial: a)filtrao convencional: utilizada para grandes volumes de suspenses diludas e quando a assepsia no necessria. b)filtrao tangencial: relacionada aos processos de microfiltrao. Fluido de alimentao escoa tangencialmente superfcie do meio filtrante. Aplicado a substancias termosensveis. c)centrifugao: sedimentao das clulas presentes em um meio lquido por ao de um campo gravitacional. Indicada quando o produto est associado s clulas ou quando a assepsia deve ser preservada. Baseia-se na diferena de densidade. Rompimento celular: necessrio quando o produto de interesse se encontra dentro da clula em questo. Pode ser mecnico (homogeneizador de alta presso e moinho de bolas, as elevadas foras de cisalhamento podem destruir organelas celulares e desnaturar enzimas), no mecnico (congelamento-descongelamento, aquecimento, secagem), qumico (realizado com solventes, detergentes, cidos, etc) ou enzimtico (indicado para quando as biomolculas so sensveis a tenses de cisalhamento ou presso de trabalho gerados pelos mtodos mecnicos, como vantagem tem a facilidade de controle de T e P e a alta especificidade) . EXPLICAR CADA UMA 30-O que so as tcnicas de baixa resoluo e como ela pode ser realizada? As tcnicas de baixa resoluo servem para separar a molcula-alvo de molculas com caractersticas fsico-qumicas diferentes. Pode ser realizada por precipitao (recuperao do produto por separao slido-lquido, geralmente antecede um processo de alta resoluo): Precipitao por sais: adio de sais que faz as protenas se precipitarem em altas concentraes salinas. Precipitao por solvente: Solventes orgnicos miscveis em gua so usados, como acetona e lcoois. Os solventes promovem reduo da densidade do meio lquido, favorecendo a sedimentao do precipitado. Precipitao por temperatura: diminuio da temperatura causa a diminuio da solubilidade e a precipitao favorecida. Um aumento na temperatura pode desnaturar as protenas. Precipitao isoeltrica: pH no qual a carga total da protena nula e a solubilidade em gua pode ser mnima. Ultrafiltrao: utilizao de membranas com poros muito pequenos facilitando a filtrao de macromolculas. Extrao em sistemas de duas fases aquosas: Molculas de interesse e impurezas so separadas em virtude de suas diferentes solubilidades nas fases lquidas. utilizado um par de fases imiscveis (geralmente uma fase aquosa e um solvente) e desejvel que a molcula que se deseja separar seja solvel no solvente de menor densidade e fique na parte de cima do recipiente. 31-O que uma tcnica de alta resoluo e como ela pode ser empregada? Tcnicas de alta resoluo so teis na separao de molculas com caractersticas semelhantes. Cromatografia: Os solutos de um meio lquido so retidos em um leito de material poroso e so posteriormente removidos por ao de uma fase lquida mvel, eluente. Gel filtrao: Molculas maiores no penetram nos poros da fase estacionria, eluindo rapidamente, enquanto as molculas menores sim, retardando sua sada da coluna. Troca inica: separao baseia-se na afinidade dos componentes da amostra com stios inicos de uma matriz slida. A fase estacionria, carregada eletricamente, tem a capacidade de reter solutos da fase mvel que apresentam cargas de sinais opostos. Cromatografia de interao hidrofbica: as molculas proteicas so adsorvidas em um suporte hidrofbico e depois eludas. 32-Quais so os tratamentos finais geralmente empregados? Liofilizao: remoo de solvente (gua) por sublimao; Cristalizao: Processo de agregao de cristais de molculas presentes em solues homogneas supersaturadas. 33- O que e por que a imobilizao celular importante?