MICROBIOLOGIA

FACULTAD DE INGENIERAS Y ARQUITECTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL

CURSO: MICROBIOLOGIA

TEMA: INFORME MUESTRAS MICROBIOLOGICAS OJO DE

CHARACATO

REALIZADO POR:
EDWARD QUISPE CRUZ

DOCENTE: DIANA DIAZ

CICLO: 6

SECCIN: 4

AREQUIPA - PERU
2017
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INTRODUCCIN
Los manantiales del ojo de CHARACATO son aguas subterrneas que
debido a la orografa del terreno emergen a la superficie, generalmente en
laderas o llanuras, al encontrar las corrientes capas impermeables en los
suelos por los que discurren. El agua que se encuentra en la naturaleza no
es pura, a travs de su paso por el suelo se carga de minerales que le
darn sus caractersticas peculiares, pero tambin puede recoger materia
orgnica, gases o microorganismos. Tradicionalmente la poblacin asocia
el agua de manantial con buena calidad, confiando que el proceso de
depuracin natural, al filtrarse por distintas capas freticas, elimine las
sustancias no deseadas. Las fuentes constituyen para muchas personas
una alternativa a la red pblica de abastecimiento, ante alteraciones en el
suministro, excursiones, paseos, o porque tradicionalmente se le asocien
unas propiedades especficas.

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MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGICO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento
y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos. La diversidad metablica de estos es
tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo
un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera
refirindonos a las bacterias con exclusividad.

1. CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

AGAR: Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a
los medios de cultivo. En el agar bacteriolgico el
componente dominante es un polisacrido que se obtiene de
ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de
que a excepcin de algunos microorganismos marinos, no es
utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua
alrededor de los 100C y se gelifica alrededor de los 40C,
dependiendo de su grado de pureza.
2. TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS GENERALES. Son aquellos que permiten el
crecimiento de una gran variedad de microorganismos.
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO. Son aquellos que favorecen
el crecimiento de u determinado tipo de microorganismo sin
llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los dems.
MEDIOS SELECTIVOS. Son aquellos que permiten el
crecimiento de un tipo de microorganismos determinado,
inhibiendo el desarrollo de los dems.
MEDIOS DIFERENCIALES. Son aquellos en los que se pone de
manifiesto propiedades que un determinado tipo de
microorganismos posee.
3. OBJETIVOS
Reconocer los requerimientos nutricionales que necesitan
los microorganismos para su desarrollo.
Preparar un medio de cultivo microbiolgico.

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Conocer algunos medios de cultivo cuyo uso es frecuente en

microbiologa.

4. MATERIALES
Medios de cultivo: Agar sabouraud
Placas Petri
Tubos de ensayo
Pipetas de 5ml y 10ml
Probetas de 100ml
Matraces de 100ml
Mecheros
Agua destilada
Papel crack
Pabilo
Lapicero indeleble
Algodn
Alcohol 70
Guantes
Gasa
Baguetas
5. PROCEDIMIENTO
Preparacin ara el agar sabouraud
Lo primero que se hace es lavar los materiales
cuidadosamente se y tratar de desinfectar los
materials y espacio e el que se va hacer el cultivo
siempre cuidando el medio de cultivo tratar de que
tenga poco contacto con el espacio .

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Pesar 13g el agar sabouraud

Suspender los 6.5g de el agar en 100ml de agua

destilada

13g----------200ml
X ----------100ml
X =6.5ml
Entonces para 100ml de agua son 6.5ml de Agar
Saboraud

Agitar y calentar hasta ebullicin

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Flamea la boca del matraz

Verter el preparado en las placas Petri tapar

rescatndolos en una tabla para que el Agar saboraud
se solidifique formando un plano inclinado simpre
cuidando y no exponiendo al espacio ya que se puede
contaminar

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Dejar enfriar hasta que se solidifique y rotular el

medio que esta listo para sembrar

Si no se usa el medio inmediatamente sellar los

recipientes y guardar a 4C en refrigerador

MUESTRAS PARA LA SIEMBRA MICROORGANISMOS DE CHARACATO

AGUA EL OJO DEL MILAGRO(CHARACATO)

Sumergirse en un manantial es una experiencia
que la puedes contar una y mil veces. El
contacto con la naturaleza debe sensibilizarnos

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en el cuidado de la misma. Bello y acogedor

paisaje lleno de historia. La vida est lleno de
acontecimiento y hechos que nos hace recordar
los pasajes ms bonitos de nuestra vida.
El ojo del milagro en el Distrito de Characato es
una divisin de la Provincia de Arequipa,
ubicada en el (Departamento de Arequipa,
Per). Dista a 10 km. De la ciudad de Arequipa.
Tradicionalmente, a los arequipeos se les ha
llamado characatos por ser este uno de los
distritos ms tradicionales de la provincia.

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AGUA ESTANCADA (CHARACATO)

El agua puede quedar atrapada en la superficie
del suelo porque est saturado o porque es
impermeable y no hay suficiente desnivel para
que escurra. Si existe un cantidad importante de
materia orgnica y nutriente, los
microorganismos crecern hasta que se acabe
todo el oxgeno (disuelto en el agua) que
necesitan para respirar.

Cuando esto ocurre, suelen predominar en el

agua los microorganismos que pueden vivir sin
oxgeno y utilizan otras sustancias para respirar.
El agua estancada tiene entonces ese tpico olor
a "podrido", debido a sustancias como sulfuros,
metano e hidrgeno, que son producidas por los
microorganismos al respirar. Este fenmeno es
muy importante en los humedales. Si bien la
cantidad de agua en estos sistemas es pequea,
se produce en ellos gases que se dispersan a
travs de la atmsfera, como el metano y el
xido nitroso, que tienen un papel muy
importante en el aumento del efecto
invernadero.

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SIEMBRA, RECUENTRO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS

Mtodos Generales:

1) Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido,

como el caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo
con el uso del asa cargada con el material bacteriolgico, se agita, con
movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensin

2) Siembra por estras en superficie: Se siembra el material en la

superficie del agar inclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por
toda la superficie con el asa bacteriolgica, previamente esterilizada y
cargada con el material a sembrar, haciendo estras no muy amplias, pero
tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profunda de la
superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca
del tubo.
Medio de cultivo: agar base inclinado
Instrumento: asa bacteriolgica

3) Siembra por estra por agotamiento:

Siembra por estra por agotamiento: Con ste procedimiento se

puede conseguir una buena separacin de las colonias y aislarlas
fcilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja
de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se
toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la
superficie del medio formando estras. Esto puede realizarse de
varias formas:

a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se contina con las estras.

Cuando se quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o
tres placas de Petri, para lo cual se repite la operacin sin tomar con el asa
nuevo material.

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b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez

depositado el material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del
reloj, se hace una estra luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante
sin cargar nuevamente el asa; en el ltimo cuadrante aparecern las
colonias aisladas

c- El inculo se extiende sobre una pequea zona de la placa, prxima al

borde, se esteriliza el asa y se traza otra estra a partir del depsito y as
sucesivamente.
Medio de cultivo: solido en placa de Petri
Instrumento. Asa
Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o puncin: Con una aguja se toma el material que se

quiere sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semislido.
Introducir la aguja hasta el fondo, formando un canal de puncin, trayecto
por el cual la retiraremos luego. Este mtodo se utiliza para estudiar la
movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semislido
Instrumento: aguja bacteriolgica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estras en superficie): el TSI (Triple

Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y
un indicador que es el rojo fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estras en superficie, como ya
conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirn en superficie y
profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y

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segn lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarn indicando

su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:

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IDENTIFICACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS

La identificacin de una bacteria sospechosa de ser la causa de una
infeccin es uno de los instrumentos principales del diagnstico y
tratamiento de las enfermedades infecciosas. Diferenciar un
microorganismo patgeno per se, potencialmente patgeno o
contaminante, y deducir sus posibles mecanismos de resistencia, facilita el
tratamiento de la enfermedad infecciosa con la mayor eficiencia posible.
Tambin permite realizar un seguimiento y control de las infecciones
hospitalarias, detectar un posible brote infeccioso y establecer una poltica
de antibiticos coherente y apropiada en concordancia con el centro
hospitalario o el rea asistencial, lo que traer consigo una disminucin de
las infecciones nosocomiales y/o comunitarias, y una menor generacin
de resistencias en los microorganismos. Para poder ser clnicamente til,
la identificacin de un microorganismo debe ser lo ms rpida posible. La
economa y la prctica dictan el uso de un nmero mnimo de pruebas
diagnsticas. Por necesidad, la identificacin en Microbiologa Clnica
representar siempre un compromiso entre la exactitud y precisin, por
una parte, y la rapidez y la economa por otra. Cmo se logra este
compromiso es lo que determina la calidad diagnstica en Microbiologa.

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PROCEDIMIENTO IDENTIFICACIN

Se valoran entre otros parmetros:

1) morfologa y aspecto de las colonias (masa constituida por
bacterias que es visible a simple viste en la superficie de los medios
slidos).

2) capacidad de crecer a una determinada temperatura

3) crecimiento en medios selectivos y diferenciales

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4) presencia de hemlisis que en los medios con sangre da lugar a la

aparicin de un halo alrededor de la colonia. Puede ser transparente
(hemlisis total o -hemlisis), verdoso (hemlisis parcial o -hemlisis o
no aparecer (no hemolticas o hemlisis)

5) movilidad

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3.- deteccin de productos estructurales: antgenos (reacciones antgeno-

anticuerpo), cidos nucleicos (hibridacin, PCR, etc)

3.1. Deteccin de antgenos se vern con ms detalle al estudiar las

reacciones antgeno-anticuerpo

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3.2. tcnicas genticas de deteccin de cidos nucleicos: hibridacin,

Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR), etc.

RESULTADOS DE LA IDENTIFICACIN

AGAR S4 TSA I AS TSA II AGAR

EMB EMO
EDAD 95 hrs. 95 hrs. 95 hrs 95 hrs 95 hrs 95 hrs
TAMAO 1 mm 1mm 1 mm 1 mm 1 mm 1 mm
COlOR Purpura- Verde Crema Marrn marrn Violeta
mostaza oscuro oscuro claro
CONSISTENCI No - - - - No
A viscosa viscosa

LUZ Refringe opaca Refringen Refringen Refringen Refringen

TRANSMITIDA nte te te te te
BORDE Entera- Aserrada- Aserrada ondulada entera entera
ondulada entera
ESTRUCTURA con Con Con Sin Sin Sin
INTERNA ncleo ncleo ncleo ncleo ncleo ncleo
ELEVACION plana umbrana cratiform elevada convexa Convexa
da e
SUPERFICIE lisa concntri - radiada radiada lisa
ca
HEMOLISIS - - - -
PRUEBA No - Positivo - positivo -
CATALASA

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TECNICAS DE COLORACION BACTERIANA

Introduccin: El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que
resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es
la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms
simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos
pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para
revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como
flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc.

Objetivos:

Preparar muestras con bacterias para su coloracin

Conocer los principales mtodos de coloracin

Adiestrarse en la tcnica de coloracin con azul de metileno

Adiestrarse en la tcnica de coloracin gram

Reconocer mediante microscopio los principales grupos y estructuras

bacterianas

Parte experimental:

Poner sobre un portaobjetos una gota de agua y una pequea alcuota

De un cultivo bacteriano con el asa de siembra estril.
Hacer el frotis, formando una pelcula homognea sobre el portaobjetos
con el Asa de siembra. Dejar secar.
Fijar la preparacin, pasando a travs de la llama del mechero el
portaobjetos.

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Resultado:

Cmo se ven las bacterias tras realizar una tincin de Gram?

A travs de la tincin de Gram pueden valorarse la afinidad tintorial,
forma y agrupaciones de las bacterias.
-Afinidad tintorial. Permite dividir a las bacterias en 1)
grampositivas (violetas) que retienen el colorante principal tras la
decoloracin con alcohol o alcohol-acetona y 2) gramnegativas (rojas) que
pierden el colorante principal tras la decoloracin por lo que es necesario
aplicar un colorante de contraste para visualizarlas. Esta diferencia de
coloracin est basada en la diferencia estructural de la pared. En las
grampositivas el colorante se fija fuertemente al peptidoglicano que lo
"retiene" e impide que "salga" con el decolorante. En las gramnegativas el
colorante es retenido con menos fuerza al ser ms delgada la capa de
peptidoglicano. Adems la mayor cantidad de lpidos presentes hace que
el colorante se elimine al solubiliarse los lpidos en el alcohol.

- Pueden tener diferentes formas:

- esfricas: cocos (Streptococcus spp., Staphylococcus spp., etc)
- cilndricas: bacilos (enterobacterias, Pseudomonasspp., etc...)
- espiroquetas: Treponema pallidum, Borrelia burgdorferi
- Pueden aparecer aisladas o asociarse en parejas [diplococcos: (Neisseria
gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae)], cadenas (estreptococcos),
tetradas, sarcinas, racimos (estafilococos), "letras chinas"
(corinebacterias), etc

- Tamao: las bacterias se miden en metros (1metro = 10-3 mm) y, en

general y como ejemplo, las bacterias esfricas tienen un dimetro de
1m y las bacterias alargadas 1.5-8 m de longitud, aunque este
parmetro vara en funcin de los diferentes gneros bacterianos.

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Cocos grampositivos

Bacilos grampositivos Bacilos gramnegativos

Tcnica de coloracin azul metileno

Cubrir con una pelcula de colorante (cristal violeta o safranina) durante

5 minutos.

Lavar el exceso de colorante con agua.

Dejar secar al aire.

Aadir una gota de aceite de inmersin.

Observar con objetivo de inmersin (100 x).

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Resultado: Mejora el contraste en la imagen vista al microscopio

COLORACION DE GRAM

La reaccin de Gram es un mtodo emprico de tincin, fcil de aplicar y

que distingue a las bacterias en dos grupos respecto de la composicin
qumica de su pared celular.

Principales componentes de las paredes celulares de bacterias Gram

positivas y negativas.

Cubrir el frontis con cristal violeta dejar actuar 1 min

Lavar con agua de cao

Cubrir con lugol 1-2min

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Lavar con agua de cao

Decolorar con el decolorante hasta q no aparezca mas color azul

Lavar con agua de cao

Cubrir con safranina 1min

Lavar con agua de cao

Dejar que seque al ambiente

Resultado: se puede identificar las gram positivas color azul violceo y

gram negativas color rojizo

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Resultado final

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Conclusiones
El agua constituye un elemento esencial, ya que es indispensable para la
vida, por lo que es necesario llevar un seguimiento de la calidad. Con este
anlisis se ha querido determinar la calidad de un agua tomado de un
manantial del ojo de Characato .

Conociendo los organismos microscpicos que viven en el agua es posible

determinar su calidad y sus posibles usos.

Como resultado hemos obtenido una gran contaminacin microbiolgica

del agua, donde no debera aparecer ningn tipo de contaminacin puesto
que se trata de un agua que en tiempos pasados se ha utilizado para
consumo humano, aunque actualmente se conoca la no potabilidad de la
misma.

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