Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional l de
Tubo No. Testig PROBLEMAS
Ciencias Biolgicas o
1 2 3 4 5 6
Objetivos. Sacarosa 0.50 0.10 0.20 0.30 0.50 0.80 1.0
Determinar la constante de Michaelis-Menten mediante 0.2 M (ml)
la grafica de Michaelis-Menten y Lineweaver-Burk Inhibidor en 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
regulador
Determinar el tipo de inhibicin producido por una de
acetatospH
sustancia (anilina) sobre la actividad de la invertasa.
4.7 (ml)
Agua (ml) 0.5 0.9 0.8 0.7 0.5 0.2 0
Preincubaci 5 minutos a temperatura ambiente
n
. Enzima (100 0 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Tubo No. Testig PROBLEMAS microgramo
o s / ml)
1 2 3 4 5 6 Incubacin 5 minutos a temperatura ambiente
Inactivacin 0.5 ml 0.5 ml 3,5- DNS
Sacarosa 0.50 0.10 0.20 0.30 0.50 0.80 1.0
3,5-
0.2 M (mL)
DNS +
Regulador 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50
0.5 ml
de acetatos
enzim
0.05 M pH
a
4.7 (mL)
Desarrollo 5 minutos a 92 C
Agua (mL) 0.50 0.90 0.80 0.70 0.50 0.20 0
de color
Preincubaci 5 minutos a temperatura ambiente
Dilucin Colocar en bao de hielo y diluir con 2 ml de
n
agua destilada
Enzima 0 0.5 0..5 0.5 0.5 0.5 0.5 Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
(100
Absorbenci 0 0.04 0.05 0.030 0.04 0.05 0.00
microgram
a 6 7 5 1 3
os / ml)
Azcar 0 0.12 0.25 0.062 0.12 0.33 0.06
Incubacin 5 minutos a temperatura ambiente reductor 5
Inactivaci 0.5 mL 0.5 mL 3,5- DNS (M)
n 3,5-DNS + Velocidad 0 0.01 0.02 0.006 0.01 0.03 0.00
0.5 mL (UI) 2 5 2 2 3 6
enzima Concentraci 0 0.01 0.02 0.03 0.05 0.08 0.1
Desarrollo 5 minutos a 92 (en bao maria) n de
de color sustrato
Dilucin Colocar en bao de hielo y diluir con 2 ml de (moles/L=M
agua destilada )
Leer en un espectrofotmetro a 540 nm
Entre mayor cantidad de sustrato, mayor ser
Absorbenci 0 0.009 0 0.13 0.47 0.57 0.18
a 4 3 0 1 la actividad enzimtica hasta un punto
Azcar 0 0.06 0.25 0.9 6.5 8.5 3 determinado.
reductor
(M)
Velocidad 0 0.006 0.02 0.09 0.65 0.85 0.3
Se obtuvo que la reaccin que se llevo a cabo
(UI) 5 es una inhibicin no competitiva, por lo tanto la
Concentrac 0 0.01 0.02 0.03 0.05 0.08 0.1
anilina es un inhibidor no competitivo, ya que
in de
sustrato se una a la enzima en puntos distintos al sitio
(moles/L= activo.
M)

Bibliografa

Voet, D; Voet, J.G; Pratt, W.C;

Conclusiones
Gismondi, M.I; Fundamentos de
 bioqumica, Medica Panamericana;
Espaa; pp. 508-509(2007)
Lehninger, A.L. Principios de
Bioqumica, Ediciones Omega, Espaa,
pp. 290-291