High Performance Liquid

Chromatography (HPLC)

Pn. Suryati Bt. Syafri

2009
Traducido en 2017, con ayuda de
traductor de Google por ossanroj
 Resultado de aprendizaje
Despus de estudiar este tema el estudiante
debe ser
capaz de :
Definicin de HPLC
Describir el principio de HPLC
Explicar los componentes principales de la
HPLC y su funcin
Explicar la aplicacin de HPLC
Explicar los factores afectados por la funcin
de la HPLC
Describir las ventajas y desventajas de HPLC
HPLC MACHINE
HPLC MACHINE
 What is HPLC?
Originalmente denominado Cromatografa
Lquida de Alta Presin

Ahora es ms comnmente llamado

Cromatografa Lquida de Alto Rendimiento

La HPLC es realmente la automatizacin de

la cromatografa lquida tradicional bajo
condiciones que proporcionan separaciones
mejoradas durante perodos de tiempo ms
cortos, utilizando partculas muy pequeas,
dimetros de columnas pequeas y
presiones de fluido muy elevadas.
HPLC PRINCIPLE
 Fases estacionarias
Polar (Fase "Normal"):
Slice, almina

No Polar ("Fase Reversa")

ODS Silica gel (octadecylsilyl groups)
C18, C8
 La Fase Mvil
Cromatografa normal
Hexano; Diclorometano; Isopropanol; Metanol

Aumento de la fuerza

La cromatografa de fase inversa

agua ; Metanol; Acetonitrilo; Tetrahidrofurano (THF)

Aumento de la fuerza
 Components of HPLC
1. Depsito de disolvente
2. Bombas
3. Sistema de inyeccin de muestras
4. Columnas
5. Detectores
6. Procesador de datos
7. Residuos
 Depsito de disolvente
Fase mvil
Elucin isocrtica - tcnica nica de
separacin de disolventes
Elucin en gradiente - 2 o ms
disolventes, variados durante la
separacin
Para llevar la muestra a la columna
 Bombas

Para producir una presin apropiada

para empujar el disolvente dentro de
la muestra.

Una bomba capaz de bombear

disolvente hasta una presin de 4000
psi y con caudales de hasta 10 mL /
min
 Sistema de inyeccin de
muestras
Vlvula de la muestra
Jeringa / inyector

Jeringa:
manual
Autoinyector

Un bucle de volumen fijo entre 1 - 200 L

(20 L se utiliza a menudo como estndar)
 Columns
Recta, de 15 a 150 cm de largo; 2 a 3 mm
i.d. (dimetro interno)
Embalaje - gel de slice, almina, Celite
 HPLC Detectors
UV / Vis
ndice de refraccin
Fluorescencia
La dispersin evaporativa de la luz
(ELSD)
MS (Espectroscopia de Masas)
Detector de matriz de diodos (DAD)
 Data Processing
Uso de sowtare especfico que est
conectado a la mquina de HPLC
Recibir la informacin de la mquina de
HPLC y presentarla como un grfico
El grfico describe datos cualitativos
(Tiempo de retencin) y datos cuantitativos
(rea bajo curva)
 Application of HPLC
1. Industria farmacutica
Para controlar la estabilidad del frmaco
Cantidad de determinacin de frmaco a partir de
formas de dosificacin farmacutica, ej.
determinacin del paracetamol en tabletas de
panadol
Cantidad de determinacin de frmaco a partir de
fluidos biolgicos, por ejemplo: nivel de glucosa en
sangre

2. Anlisis de la contaminacin natural

- Fenol y mercurio de agua de mar

3. Prueba forense
- Determinacin de esteroides en sangre, orina y sudor.
- Deteccin de frmacos psicotrpicos en plasma
 Application of HPLC
4. Pruebas clnicas
- Seguimiento del paciente con cirrosis heptica a
travs de la acuaporina 2 en la orina.

5. Alimentacin y fabricacin de la esencia

- anlisis de edulcorantes en el zumo de frutas
- anlisis de conservantes en salchichas.
 Los factores que influyen en el
rendimiento de la HPLC
1. Dimetro interno de la columna
- Cuanto menor sea el dimetro, mayor ser la
sensibilidad
2. Presin de la bomba
- cuanto mayor sea la presin, mayor ser la
separacin
3. Tamao de la muestra
4. La muestra de polaridad, el disolvente y la
columna
5. Temperatura
- cuanto mayor sea la temperatura, mayor
ser la separacin
 Ventajas

1. Necesita una pequea muestra con

una alta precisin y precisin
2. Muestra no destructiva durante el
funcionamiento en comparacin
con GC.
 Desventajas
Necesita una habilidad para ejecutar
los instrumentos
Disolventes que consumen
HPLC CHROMATOGRAM
Predecir el orden de elucin del primero al ltimo de los
siguientes compuestos morfinanos de una columna ODS
en una mezcla de acetonitrilo / tampn pH 8 (10: 90)
 Retention Time
El tiempo de retencin de un soluto se
toma como el tiempo transcurrido
entre el momento de inyeccin de un
soluto y el tiempo de elucin del
mximo de pico de dicho soluto.