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GUA DE LABORATORIOS
INFECTOLOGA GENERAL
No haga bromas, ni permita que sus compaeros las hagan, con cultivos
bacterianos o material contaminado.
Recuerde!!
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FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE TECNOLOGIA MDICA
LABORATORIO N 1
Aglutinacin
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En estas reacciones un anticuerpo puede unirse a la vez a dos antgenos,
asimismo cada antgeno puede unirse a varios anticuerpos y formar un entramado
de complejos antgeno-anticuerpo
Neutralizacin
Si el antgeno es una sustancia txica, la unin con el anticuerpo provoca su
neutralizacin, de modo que no puede ejercer su efecto txico.
Precipitacin
En este caso el antgeno se encuentra disuelto, y al unirse los anticuerpos a los
antgenos se forman unos macro complejos moleculares, formndose como una red
tridimensional que debido a su tamao precipita.
Opsonizacin
El anticuerpo puede recubrir al antgeno para que sea reconocido por los
fagocitos, esta reaccin se llama opsonizacin, y es como si los antgenos fueran
ms "atractivos" para ser fagocitados.
Grupo A
La sangre tiene el antgeno A en los glbulos rojos, y el anticuerpo anti-B en el
plasma.
Grupo B
La sangre tiene el antgeno B en los glbulos rojos, y el anticuerpo anti-A en el
plasma.
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Grupo AB
La sangre tiene ambos antgenos A y B en los glbulos rojos, pero no tiene ni el
anticuerpo anti-A ni el anti-B en el plasma.
Grupo 0
La sangre no tiene ni antgenos A ni B en los glbulos rojos, pero s tiene el
anticuerpo anti-A y el anti-B en el plasma.
Existe, adems, otro antgeno que tambin puede presentar problemas en las
transfusiones, se trata del factor Rh., que puede encontrarse en la sangre en cuyo
caso es Rh +, o no, y pertenecer a los que tienen el Rh-. Hay igualmente rechazo, si
se realiza una transfusin de sangre con Rh+ a un receptor Rh-.
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podemos utilizar estas protenas presentes en el suero de pacientes como
antgenos que puedan ser reconocidos por anticuerpos.
Por ejemplo:
Para determinar la elevacin o presencia de la protena C reactiva (PCR) en
el suero de los pacientes, pondremos en contacto una gota de suero de ste y
aadiremos una gota de reactivo que contenga una molcula especfica anti-
protena C reactiva. El suero del paciente contiene el antgeno y el reactivo los
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TRABAJO DE LABORATORIO
Materiales
6. Visualice la reaccin e
interprete los resultados. 7
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INTERPRETACIN
CONTRAPRUEBA
Aglutinacin positiva
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INFORME:
Nombre ___________________________________________________________
LABORATORIO N 2
1. METODOS FISICOS
Llameado: Se realiza por exposicin directa a la llama por lo menos por unos 10
segundos.
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Calor seco: Se realiza por la accin de aire caliente circulante en Hornos Pasteur.
La esterilizacin se produce en todo material vivo debido al aumento exagerado de
los procesos oxidativos.
Para jeringas, agujas y material de vidrio que se desee dejar exento de
pirgenos se utiliza una temperatura de 200 C durante 30 a 60 minutos.
Para material de vidrio como tubos de ensayo, placas petri, frascos para toma
de muestras, se utiliza una temperatura de 180 C por 60 minutos.
Calor hmedo: Se realiza por la accin de vapor saturado a baja presin. Tiene un
mayor poder de penetracin que el calor seco y produce la muerte de los
microorganismos por la coagulacin de las protenas del protoplasma.
Se realiza en equipos denominados "Autoclave". Se utiliza principalmente para la
esterilizacin de medios de cultivo a temperaturas entre 105 a 120 C.
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2. METODOS QUMICOS
Antispticos: Son sustancias de accin menos txica para los tejidos y pueden
utilizarse para desinfectar tejido humano. Ejemplo: Povidona yodada, Agua
oxigenada, Alcohol.
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TRABAJO DE LABORATORIO
Materiales:
PROCEDIMIENTO N 1
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2. Luego de preparar cada tubo realice una siembra de la suspensin en una placa
de Agar Mac Conkey. No olvide marcar la placa con el nmero de la suspensin
respectiva.
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1 3
4 6
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Sembrar cada
solucin en un Estra
espacio de la placa
Sembrar en forma de
estra
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Sin crecimiento
Escaso
Moderado
Abundante
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PROCEDIMIENTO N 2
SECCION DE LA
PLACA CRECIMIENTO BACTERIANO
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LABORATORIO N 3
MORFOLOGA BACTERIANA
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TINCION DE GRAM
Esta tincin fue desarrollada por Christian Gram en 1884. A pesar del tiempo
transcurrido la tincin apenas se ha modificado y es uno de los primeros pasos que
se realiza para cualquier identificacin bacteriana, permitiendo con esto la
orientacin adecuada de un diagnstico clnico.
GRAM NEGATIVA
Se caracterizan por presentar una membrana
interna rodeada por una pared celular delgada
de peptidoglucano. Hacia el lado externo
tienen una membrana que recubre la pared
celular. Entre la membrana interna y externa
se encuentra el espacio periplsmico que
contiene enzimas importantes para la
nutricin. La membrana externa presenta una
estructura llamada lipopolisacrido (LPS) El
LPS est formado por tres regiones: el
polisacrido O (antgeno O), una estructura
polisacrida central (KDO) y el lpido A
(endotoxina).
GRAM POSITIVA
La pared externa de la envoltura celular de
una bacteria Gram positiva tiene como base
qumica fundamental el peptidoglucano, que
es un polmero de N-acetil-2-D-glucosamina,
con n-acetilmurmico. Esta molcula se
polimeriza gran cantidad de veces, de modo
que se forma una malla especial, llamada
sculo de murena. Dicho compuesto es de
vital importancia para conservar la forma y
17 darle rigidez a la clula bacteriana
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Los dos grupos bacterianos que distingue esta tcnica difieren en el color con el
que finalmente aparecen.
Las bacterias Gram (+) se teirn de azul por el cristal violeta y no perdern esta
coloracin en los pasos sucesivos.
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Afinidad Tintorial
Morfologa
Agrupacin
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TRABAJO DE LABORATORIO
Materiales
1. Preparacin bacteriana:
En un portaobjeto
colocar una gota de
agua o caldo estril y a
partir de una placa de
cultivo se toma una
colonia con el asa y
posteriormente se
realiza una disolucin
de las bacterias
extradas del cultivo
con el agua.
La preparacin se
seca a temperatura
ambiente o al calor de
un mechero teniendo la
precaucin de no
exponerla demasiado
al fuego directo, ya que
esto perjudica la
evaluacin de la forma
y tincin de las
bacterias. Una vez
seca la lmina se tie.
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4. Tincin
2. Lave el exceso de
colorante con agua
8. Secar la preparacin y
RESULTADOS Y OBSERVACIONES: observar al microscopio
con aceite de inmersin.
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Resultados e interpretacin:
1. Visualice al microscopio la
morfologa de las bacterias (40x),
fijndose sobre todo en el color de
la preparacin para clasificarlas en
Gram + o Gram -.
OBSERVACIN MICROSCPICA
Su observacin:_____________________________________________________
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LABORATORIO N 4
Segn su estado
Segn su composicin:
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B.- Medios mejorados: Contienen sustancias enriquecedoras como sangre, suero,
etc.
METODOS DE SIEMBRA
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Las siembras se pueden realizar directamente desde una muestra clnica que
contenga un microorganismo, desde otro cultivo bacteriano o desde un inculo.
Estra de crecimiento
Asa
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Se puede realizar:
tomando un inculo a partir de una suspensin de bacterias o para sembrar
muestras biolgicas lquidas (orinas, lquido cefalorraqudeo, etc.)
Para formar una estra de crecimiento a partir de un inculo realizado con
trula.
Para realizar traspaso de bacterias de un medio a otro, tomando
directamente una porcin de una colonia.
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TRABAJO DE LABORATORIO
Materiales
Placas de Agar Mac Conkey y Agar Sangre Cultivos bacterianos
Tubos con caldo nutritivo Asa
Trulas estriles para toma de muestra Portaobjetos
Procedimiento N 1
Procedimiento N 2: Siembra
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2. Siembre la muestra en las mitades restantes de las placas de agar sangre y
Mac Conkey e incube durante 24 horas a 37 C.
LABORATORIO N 5
Staphylococcus
CATALASA
COAGULASA
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Esta prueba es til para identificar una especie de Staphylococcus en especial, el
Staphylococcus aureus. La sntesis de esta enzima permite la coagulacin del
plasma y una prueba positiva identifica con certeza a la especie mencionada.
SUSCEPTIBILIDAD A LA NOBOVIOCINA
Streptococcus
OPTOQUINA
Permite diferenciar Streptococcus pneumoniae hemoltico de otras especies
hemolticas. Slo el S.pneumoniae es sensible a la optoquina.
BACITRACINA
Permite diferenciar Streptococcus hemoltico del grupo A (S. pyogenes) del resto
de S. hemoltico que no son sensibles a la bacitracina.
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HIPURATO DE SODIO
Los microorganismos que poseen la enzima hipuricasa hidrolizan el hipurato sdico
formando benzoato sdico y glicina. La Ninhidrina es capaz de reaccionar con
productos de esta reaccin lo que permite observan un color morado. Esta prueba
permite identificar al S.agalactiae
Streptococcus
hemoltico hemoltico
Optoquin Bacitracina
+ - + -
+ -
S.agalactiae otros
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TRABAJO DE LABORATORIO
___________________________________________________________________
Materiales
Estudio de Staphylococcus
Prueba de la catalasa
Prueba de la coagulasa
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6. La prueba es negativa cuando existe crecimiento alrededor del sensidisco y se
dice que es resistente.
7. La prueba es positiva cuando se observa un halo de inhibicin alrededor del
disco de ms de 21 mm y se dice que es sensible.
Estudio de Streptococcus
Prueba de la Bacitracina
Prueba de Bacitracina
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LABORATORIO N 6
ESTUDIO DE ENTEROBACTERIAS
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Proteus mirabilis
Shigella sonnei
Salmonella typhi
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MIO: Este medio es semislido, a diferencia de los anteriores que son slidos.
Permite el estudio de indol a partir de triptfano, por ser semislido permite ver la
movilidad de la bacteria, ya que cuando es as el medio se vuelve muy turbio,
porque la bacteria puede crecer en todo el medio. Tambin permite observar la
descarboxilacin de la ornitina que se evidencia por un color violceo en el medio.
El indol se visualiza agregando un reactivo que provocar la formacin de un anillo
color rojo.
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POSIBLES INTERPRETACION
RESULTADOS
Turbidez Movilidad positiva (+)
Transparencia Movilidad Negativa (-)
Indol Positivo Anillo rojo en superficie al agregar reactivo de Kovacs
Indol Negativo No se forma anillo rojo al agregar el reactivo de Kovacs
Morado en Ornitina positiva (+)
profundidad Ornitina negativa (-)
Amarillo en todo el
medio
CITRATO
POSIBLES INTERPRETACION
RESULTADOS
Azul intenso en Citrato positivo (+): utilizacin de citrato como fuente de
superficie carbono
Verde en superficie Citrato negativo (-)
UREA
METODOS DE SIEMBRA:
MEDIO SIEMBRA
TSI En profundidad y en superficie ( 1 picadura)
LIA En profundidad y en superficie ( 3 picaduras)
MIO En profundidad
Citrato Simmons En superficie
Urea En superficie
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PICADURA:
Siembra en superficie
Pinchar el medio
con asa en aguja
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TRABAJO DE LABORATORIO
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Materiales
TCNICA DE SIEMBRA
LABORATORIO N 7
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ANTIBIOGRAMA
Antibiograma
Por ejemplo:
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Tetraciclina (30g ) Sensible: 19 mm y Resistente 14 mm.
Halo de inhibicin
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TRABAJO DE LABORATORIO
Materiales
Placas de Agar Mueller Hinton Tubos de Caldo tripticasa
TRABAJO DE LABORATORIO
___________________________________________________________________
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Materiales
Procedimiento
1. Usted recibe una placa de cultivo a partir de la cual deber preparar un inculo
2. Realice una siembra con trula en una placa de agar Mueller Hinton,
deslizndola en a lo menos tres direcciones, cubriendo de esta manera toda la
superficie de la placa. Cuando introduzca en la suspensin bacteriana al
momento de sembrar, tenga la precaucin de eliminar el exceso de lquido en
las paredes del tubo.
3. Luego de realizar el procedimiento anterior, deje secar la placa cerrada por unos
minutos.
4. Deposite uno a uno los discos sobre la superficie del agar, teniendo la
precaucin de esterilizar la pinza en la llama entre un disco y otro.
5. Luego de realizar esta siembra incube en estufa a 37C durante 24 horas, tras
las cuales debe evaluar el crecimiento bacteriano y medir los halos de inhibicin.
LABORATORIO N 8
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PARASITOS
PARASITISMO
PARSITO
Es todo organismo del reino animal o vegetal que vive a expensas de otro,
de acuerdo a esta afirmacin podemos decir que existen varios grados de
parasitismo segn la dependencia
CICLO DIRECTO
HUSPED
INFECTADO
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Huevos
Quistes
AMBIENTE Ooquistes
FECALISMO FECALISMO
HUSPED
SUSCEPTIBLE
CICLO INDIRECTO
HUSPED
HUSPED DEFINITIVO
SUSCEPTIBLE
Parsito
CARNIVORISMO Adulto
AMBIENTE Huevos
METACESTODOS Quistes
larvas Ooquistes
FECALISMO
TEJIDOS HUSPED
INTERMEDIARIO
larvas
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En los ciclos evolutivos indirectos o heteroxnicos, los parsitos necesitan
pasar por dos o ms huspedes de distinta especie para alcanzar su pleno
desarrollo. El husped infectado elimina al medio ambiente las formas infectantes,
por fecalismo llegan al husped intermediario, en ste se desarrolla un estado larval
o metacestodo en los tejidos y llega al husped susceptible a travs del
carnivorismo
HUSPED
CLASIFICACION MORFOLGICA
Flagelados
Rizpodos
PROTOZOOS Ciliados
Apicomplexa
Nematodos
Trematodos
METAZOOS Arcnidos
ARTROPODOS
Crustceos
Insectos
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CLASIFICACIN TOPOGRAFICA
SEGN LOCALIZACIN
1. PROTOZOOS
Los protozoos estn constituidos por una sola clula que est formada por
ncleo citoplasma, la cual debe atender todas las necesidades vitales del individuo
como movilidad, secrecin, excrecin, nutricin y reproduccin.
Su tamao vara entre 7 y 120 micrones y durante su vida presentan dos
formas evolutivas:
Entamoeba histolytica
Entamoeba coli
Endolimax nana
Giardia lamblia
Trypanosoma cruzi
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CICLOS EVOLUTIVOS
Entamoeba histolytica
Trofozoto
Quiste
Giardia lamblia
Trofozoto
Quiste
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Entamoeba coli
Trofozoto
Quiste
Trofozoto
Quiste
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Trypanosoma cruzi
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2. NEMATODOS
Ascaris lumbricoides
Enterobius vermicularis
Trichuris trichiura
Ascaris lumbricoides
Huevo
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Enterobius vermicularis
HUEVO
Trichuris trichiura
HUEVO
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3. CESTODOS
Taenia solium
Taenia saginata
Diphyllobothrium latum
Dypilidium caninum
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Ciclo evolutivo Taenia
spp.
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Taenia sp
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4. TREMATODOS
Fasciola hepatica
Fasciola hepatica
Ciclo evolutivo
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5. ARTRPODOS
Arcnidos Araas
Escorpiones
Garrapatas
caros
Crustceos Cyclops
Diaptomus
Cangrejos
Loxosceles laeta
Latrodectus mactans
Sarcoptes scabiei
Pediculus humanus variedad capitis
Phthirus pubis
Pulex irritans
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Araas
___________________________________________________________________
Pulgas
___________________________________________________________________
Piojos
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Sarcoptes scabiei
Ciclo Evolutivo
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TRABAJO DE LABORATORIO
1. PROTOZOOS:
Tamao Tamao
Forma Forma
N de ncleos N de ncleos
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2. NEMATODOS:
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3. CESTODOS:
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LABORATORIO N 9
PARASITOS
4. TREMATODOS
1.- Examine la morfologa del parsito adulto y realice un dibujo, observe la ventosa
peribucal y acetbulo
Fasciola hepatica
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5. ARTROPODOS
1.- Examine la morfologa del parsito adulto y realice una comparacin entre
ambos arcnidos. Si es necesario aydese con una lupa
Tamao
Color
N de
patas
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Tamao
Forma
Caractersticas de las
Patas
5.- Observe al microscopio al parsito adulto y los huevos o liendres del Pediculus
humanus, realice un dibujo
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