Tema 26. Metabolismo del grupo amino de los aminocidos.

Enzimas clave del metabolismo de aminocidos. Transaminasas y vitamina B6.

Glutaminasa. Glutamato dehidrogenasa. Glutamina sintetasa. Ciclo de la glucosa-
alanina. Toxicidad del amonio en animales Eliminacin del grupo amino. Estrategias.
Ciclo de la urea. Relacin con el ciclo de los cidos tricarboxlicos. Regulacin del
ciclo de la urea. Patologas relacionadas con defectos enzimticos en el ciclo de la
urea.

BIOQUMICA-1 de Medicina
Departamento de Biologa Molecular
Javier Len

Tema 26
1

Toxicidad del amonaco

1. El amonaco es una base fuerte y podra producir un cambio de pH

NH4+ NH3 + H+ pK = 9,3

A pH fisiolgico (7,4) la concentracin de NH4+ es casi 100 veces la del NH3, que es la forma neutra,
permeable a membranas.

Formas de excrecin
de amonio en
animales terrestres Urea Acido rico
Mamferos Reptiles
tiburomes Aves

Friedrich Whler (1800-1882)

Tema 26
2
 Catabolismo de aminocidos
Protena
intracelular

DEGRADACION SNTESIS DE PROTENAS (TRADUCCIN)

DE PROTEINAS

Protena de la Aminocidos
DIGESTION
dieta

NH4+
Esqueletos carbonados
Biosntesis de AA, nucletidos y
otras aminas biolgicas
-cetocidos
Carbamil-fosfato

Acetil-CoA
Asp

CICLO CICLO
DE LA DE
UREA Fumarato KREB
Cuerpos
S
cetnicos

Oxalacetato
Urea co2
(producto de GLUCONEO-
excrecin del GNESIS
nitrgeno)
Glucosa

Tema 26
3

1. El amonio (-> NH3) es txico, sobre todo para el tejido nervioso

2. El amonio se convierte en urea en el hgado

El amonio se ha de transportar al hgado en una forma distinta de NH4+

AA Glu Gln y Ala SANGRE Gln y Ala NH4+ Urea

TEJIDOS HIGADO

Enzimas clave del metabolismo del grupo amino

Transaminasas o aminotransferasas: pueden transferir grupos aminos entre aminocidos

Glutaminasa: genera NH4+ y glutamato a partir de Gln.

Glutamato dehidrogenasa: produce NH4+ y -CG a partir de Glu en una reaccin de

desaminacin oxidativa

Glutamina sintetasa: incorpora NH4+ en Glutamato

ENZIMAS DEL CICLO DE LA UREA:

Carbamil-fosfato sintetasa: condensa CO2 y NH4+ para dar carbamil-fosfato (primer enzima del
ciclo de la urea)

Otras cuatro enzimas del ciclo de la urea

Tema 26
4
 De dnde viene el nitrgeno que entra en el ciclo de la urea?
Uno de los dos nitrgenos de la urea viene del NH4+ libre y el otro del NH2 del
aspartato

1. Reacciones de transaminacin por transaminasas

NH3+
R-CH + -Cetoglutrato (-CG) -ceto-AA + Glu
COO-

Glu + OAA -CG + Asp

GOT / AST

2. Reaccin de la glutamato dehidrogenasa (deaminacin oxidativa)

Glu + NAD+ -CG + NADH+ + NH4+

3. Reaccin de la glutaminasa
Gln + H2O Glu + NH4+

Tema 26
5

Reacciones de transaminacin: aminotransferasas, transaminasas

Aminotransferasa
NH3+ O o transaminasas O NH3+

H CCOO- + CCOO- CCOO- + HCCOO-

R1 R2 R1 R2
CH2OH
H O C H2 OH

N H+ C H3

Piridoxina (Vit B6)

H O NH2
C CH2
-2O
3P
O C H2 OH -2O
3P
O C H2 OH

N H+ C H3 N H+ C H3

Fosfato de Piridoxal (PLP) Fosfato de Piridoxamina (PMP)

Grupo prosttico de las transaminasas, unido covalentemente

a una Lys del centro activo

Tema 26
6
 Mecanismo enzimtico de las aminotransferasas es del tipo ping-pong

H2O
R1
+
ENZ-PLP-C O ENZ-PLP-C N C COO-
H H

Aminocido 1 -Cetocido 1
ENZ-PMP-C NH2

-Cetoglutarato
Glutamato
CH2-CH2-COO-
+
ENZ-PLP-C O ENZ-PMP-C- N CCOO-
H H
H O
C NH2
CH2
-2O
3P
OCH2 OH
-2O O C H2
3P
OH

NH+ CH3
NH+ C H3

Fosfato de Piridoxal (PLP) Fosfato de Piridoxamina (PMP)

Tema 26
7

Hay dos transaminasas que informan de la salud

del hgado y del corazn

GPT / ALT
Ala + -cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Ms especfica de dao heptico

GOT / AST
Asp + -cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato

GOT: Glutamato-Oxalacetato Transaminasa = AST: Aspartato Transaminasa

Valores normales en sangre: 2-40 mU /ml. Puede llegar a 1000 en casos de hepatitis viral,
cirrosis, isquemia cardiaca, hepatotoxicidad

Tema 26
8
 Regulacin alostrica
ADP GTP

+ -
COO COO
+H
NAD(P)+ NAD(P)H + H+
3N - CH -O
C
+ H2O + NH4+
CH2 CH2
CH2 Glutamato Dehidrogenasa CH2
COO (GDH) COO
Glutamato (Matriz mitocondrial, - Cetoglutarato
hgado, reversible,
puede usar NAD+ o NADP+)

Suma de las reacciones de aminotransferasas y GDH:

Aminocido + NAD+ -cetocido + NH4 (mit)+ NADH + H+

UREA

H2O NH4+

COO COO
+ +
H3N CH H3N CH

CH2 CH2 Glutamato

Glutamina
CH2 CH2
Glutaminasa
C (Matriz mitocondrial, COO
H2N O hgado)

Tema 26
9

Glutamina Sintetasa

ATP ADP NH4+ Pi

COO COO
COO
+
+ +H H3N CH
H3N CH 3N- CH

CH2 CH2
CH2
CH2 CH2
CH2
C C
COO
P O O H2N O

Glutamato - Glutamil fosfato Glutamina

Gln sintetasa y GluDH presentes 12 subs x 50 kDa.

en todos los organismos
Gln Sintetasa: citoslica
GDH: mitocondrial

Biochemistry. 5 ed. Berg, J., Tymoczko, J. Stryer,

L. Ed. W.H. Freeman. 2003.
Tema 26
10
 Regulacin alostrica de la Gln Sintetasa

Glutamato
Gly
NH4 +
ATP

- Gln Sintetasa - Ala

ADP + Pi

Glutamina
AMP CTP

Qu enzima?

Carbamil-fosfato

Nucletidos de pirimidina

Tema 26
11

Regulacin de la Gln Sintetasa por modificacin covalente

UMP- PD
Niveles altos de AT -Cetoglutarato
Gln inhiben su
sntesis
Glutamato
Gln + PD
CG - AT NH4+
PPi ATP
+ ATP

Glutamina Glutamina activa

AMP- sintetasa sintetasa
inactiva
Tyr 397 de la Gln Sintetasa
ADP + Pi
Glutamina
AT Adenil-transferasa activa
PD
AT Adenil-transferasa inactiva
Biochemistry. 5 ed. Berg, J.,
Tymoczko, J. Stryer, L.
Ed. W.H. Freeman. 2003
PD Protena reguladora activada Uridil
transferasa
UMP- PD Protena reguladora desactivada
Tema 26
12
 Reacciones de desaminacin

1. Aminotransferasas (suelen usar -CG y son especficas para el AA)

NH3+
R-CH + -CG -ceto-AA + Glu
COO-

2. Glutamato dehidrogenasa (deaminacin oxidativa)

Glu + NAD+ -CG + NADH+ + NH4+

3. Glutaminasa
Gln + H2O Glu + NH4+

4. Desaminacin directa (Ser-dehidratasa y Thr dehidratasa)

Ser Piruvato + NH4+

Thr -cetobutirato + NH4+

5. Aminoacido oxidasa

AA + O2 + H2O -cetoAA + H2O2 + NH4+

Tema 26
13

Transporte de N al hgado
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina MAYORIA
Transa- Gln Sintetasa DE
minasas -cetocido ADP+ Pi+ H2O
TEJIDOS

NH4+ Gln Sintetasa

Glutaminasa CICLO UREA

Glutamato Glutamina DE LA
a
inas

UREA
NH4+
t am

+
NH4 -Cetoglutarato
G lu

Glutamato
Glutamato DH
(INTEST.) HIGADO
Glutamina
Piruvato Alanina Asp
Transaminasa
Transa-
minasas OAA
+
Bacterias GLUCOSA Glutamato
AA
SANGRE

GLUCOSA Piruvato Alanina

Transaminasas

Glutamina Glutamato -cetoglutarato

MUSCULO
PROTEINAS
Transaminasas
Cetocido Aminocido
Tema 26
14
 Transaminasas com marcadores de dao heptico
-Cetoglutarato NH4+ + ATP
AA Glutamato Glutamina MAYORIA
Transa- Gln Sintetasa DE
minasas -cetocido ADP+ Pi+ H2O
TEJIDOS

NH4+ Gln Sintetasa

Glutaminas CICLO URE

Glutamato Glutamina DE LA
A
a
a
inas
UREA
NH4+
t am

+
NH4 -Cetoglutarato
G lu

Glutamato
Glutamato DH
(INT.) HIGADO
Glutamina
Piruvato Alanina Asp
Transaminasa
Transa-
minasas OAA
+
Bacterias GLUCOSA Glutamato
AA

GPT / ALT
Ala + -cetoglutarato Piruvato + Glutamato
GPT: Glutamato-Piruvato Transaminasa = ALT: Alanina Transaminasa
Ms especfica de dao heptico

GOT / AST
Asp + -cetoglutarato Oxalacetato + Glutamato
Tema 26
15

Ciclo de la glucosa-alanina

Asp
-Cetoglutarato
CICLO
Transaminasa DE LA
UREA
NH4+

Glutamato -Cetoglutarato
Glutamato DH
UREA
Transaminasa
Piruvato ALANINA
HIGADO
Gluconeognesis
GLUCOSA

SANGRE

GLUCOSA Piruvato ALANINA

Glucolisis
Transaminasa

Glutamato - cetoglutarato

MUSCULO PROTEINAS
Transaminasa
Cetocido Aminocido

Tema 26
16
 Posibles causas de la toxicidad del amonio
Concentracin de amonio en sangre: 30-60 uM. Supone el 2-3% del nitrogno excretado en orina (85%
es urea, 30 g/24 h; el resto creatininia y cido rico)
A concentraciones mayores de amonio (>0.2 mM): visin borrosa, prdida de conciencia, letargia,
lesiones cerebrales, coma.
El mal funcionamiento del ciclo de la urea por deficiencia en alguna de sus enzimas o por patologa
heptica (por ej cirrosis alcohlica) produce hiperamonemia.

POSIBLES CAUSAS:
1) Bajan los niveles de -cetoglutarato al empujar la reaccin de la GluDH hacia la formacin de Glu y la
de la Gln sintetasa hacia formacin de Gln (ambas enzimas abundantes en tejido nervioso)
baja la actividad del ciclo de Krebs baja la produccin de ATP en la neurona

2) Baja la relacin NADH/NAD+ baja la produccin de ATP

NH4+ NH4+ + NADH+ + H+

Glutamina Glutamato - Cetoglutarato
Gln Sintetasa Glutamato DH

NAD+

3) Bajan los niveles de glutamato al empujar la reaccin de la Gln Sintetasa hacia la formacin de Gln
Baja la concentracin del neurotransmisores glutamato y su derivado gamma-aminobutirato (GABA)

Tema 26
17

Ciclo de la Urea (1)

(ciclo de la ornitina, ciclo de Krebs-Henseleit)

Carbamil fostato sintetasa I (CPSI, mitocondrial)

por qu se necesitan dos ATPs si slo hay un fosfato en el carbamil-fosfato?
O

O- HO C O P P O-
HO C + ATP
O O O-
ADP
Bicarbonato Carbonil-fosfato (o carboxifosfato)

NH4+

Pi + H+
HO C NH2
O
Carbamato

ATP
ADP
P O C NH2
O

Carbamil- fosfato

Tema 26
18
 Ciclo de la Urea (2)

O
P O C NH2
O
Carbamil-P HN C NH2
H3N+ CH2
CH2
Ornitina CH2
Entrada a la mitocondria CH2 Transcarbamilasa
CH2
CH2
H2N CH COO-
H2N CH COO-
Orn Pi Citrulina
Ornitina

osol
a al cit
Salid
COO-

CH2
Aspartato -OOC

CH CH2
+H COO-
3N
O CH

HN C NH2 NH COO-
CH2 Arginino-succinato HN C NH2+
CH2 sintetasa CH2

CH2 CH2

H2N CH COO- CH2

Citrulina ATP AMP + PPi H2N CH COO-

Arginin-succinato
2 Pi
Tema 26
19

Ciclo de la Urea (3)

-OOC
-OOC
CH
CH2
Fumarato
HC
COO-
CH
NH COO- NH2
HN C NH2+
HN C NH2+
CH2 Arginino-Succinato
CH2
CH2 Liasa CH2
CH2
CH2
H2N CH COO-
H2N CH COO-

Arginin-succinato Arginina
H2O

a
in as
g
+ NH3 Ar
CH2
NH2
CH2
+ O C NH2
CH2
H2N CH COO- UREA
Ornitina
Excreccin (no podemos metabolizarla)

Urea es el 85-90% del nitrgeno en orina.

El resto: amonio (2-3%), cido rico y creatinina
Tema 26
20
 Balance del ciclo de la urea

Carbamil-fosfato
HCO3- Sintetasa I
Carbamil-P
+
Urea NH4+ 2ATP
Ornitina Ornitina
Arginasa

Arginina Ornitina
Fumarato Arg-succinato transcarbamilasa
liasa
Arginin-Succinato

Arg-succinato sintetasa ATP

Citrulina Citrulina
Aspartato
Citosol Mitocondria

BALANCE (sin tener en cuenta el fumarato)

NH4+ + HCO3- + Asp + 3ATP4- + H2O

urea + fumarato + 2ADP3- + 2Pi + PPi + AMP2- + 5H+

2 Pi + H2O se gastan 4 ATPs

en total por urea
Tema 26
21

Relaciones entre el ciclo de la urea y el ciclo de los cidos tricarboxlicos (1)

AMINOACIDOS MITO-
CONDRIA

+
Aspartato
NH4
CO2
-cetoglutarato

Glutamato
Carbamil-P
Citrulina Aspartato
3
Oxalacetato

Oxalacetato
Arginin-
Ornitina UREA Succinato
2
NADH

Malato Malato

Arginina Fumarato 1
UREA H2O

1 Fumarasa: isozimas citoslica y mitocondrial

2 Malato dehidrogenasa: isozimas citoslica y mitocondrial

Malato + NAD+ OAA + NADH + H+ ; NADH 2,5 ATPs

BALANCE GLOBAL DE LA SINTESIS DE UREA = 4 - 2.5 = 1,5 ATP
3 GOT/AST aminotransferase

Tema 26
22
 Relaciones entre el ciclo de la urea y el ciclo de los cidos tricarboxlicos (2)

-ceto-Glu
Aspartato Aspartato Citrato
3
3 Glu
Acetil-CoA
Oxalacetato Oxalacetato Isocitrato
CICLO 2
NADH
UREA 2 NADH
CO2
Malato Malato
CICLO a-Cetoglutarato
1 1
H2O H2O
KREBS
Fumarato Fumarato
CO2
Succinil-CoA

Succinato

1 Fumarasa: isozimas citoslica y mitocondrial

2 Malato dehidrogenasa: isozimas citoslica y mitocondrial
3 GOT/AST aminotransferase

Lanzadera Aspartato-Malato
Ciclo de Krebs -TCA

Tema 26
23

Regulacin del ciclo de la urea

Induccin de enzimas por dieta rica en protena

Regulacin alostrica de la CPSI

AcetilCoA Arginina
COO-
O
CH2
CH3 C
SCoA

+ CH3 C
O

HN
CH2

CH COO-
COO- N- Acetil-Glutamato
Sintasa N- Acetil- Glutamato
CH2

CH2
HS-CoA
H2N CH COO-

Glutamato

+ O
CPS-I
HCO3- + NH4+ H2N C O P Urea
Carbamil-fosfato
2ATP 2ADP
+ Pi

Tema 26
24
 El ciclo de la urea est compartimentalizado en la clula y en el hgado

Carbamil-fosfato
HCO3- Sintetasa I
Carbamil-P
+
Urea NH4+ 2ATP
Ornitina Ornitina
Arginasa
Arginina Ornitina
Fumarato Arg-succinato transcarbamilasa
liasa
Arginin-Succinato
Arg-succinato sintetasa ATP

Citrulina Citrulina
Aspartato
Citosol Mitocondria

Glutamina
SANGRE portal sintetasa
(del intestino)

Glutaminasa
Ciclo urea
SANGRE
(al resto de tejidos)

Tema 26
25

Enfermedades metablicas del ciclo de la urea

Nombre Dficit enzimtico Otras caractersticas

1) Deficiencia en CPS CPS I Glicina en plasma aumentada

(Hiperamonemia I)
2) Deficiencia en OTC Orn Transcarbamilasa Glutaminia en plasma aumentada
(Hiperamonemia tipo II) (OTC) Ligada al X. Retraso mental
3) Citrulinemia Arginino succinato Gln y Citrulina aumentadas en plasma
sintetasa Citrulina en orina aumentada. Rara

4) Arginino succinato aciduria Arginino succinato liasa Arginin- succinato en plasma y orina. Rara

5) Argininemia Arginasa Arginina elevada en plasma

Carbamil-fosfato
HCO3- Sintetasa I
Carbamil-P
+
Urea NH4+
2ATP
Ornitina Ornitina
Arginasa
Arginina Ornitina
Fumarato Arg-succinato transcarbamilasa
liasa
Arginin-Succinato
Arg-succinato ATP
sintetasa Citrulina Citrulina
Aspartato
Citosol Mitocondria

Tema 26
26
 Terapias bioqumicas de defectos en el ciclo de la Urea

Las deficiencias en CPSI y deficiencia en OTC son tratables

con fenilacetato
O
C NH2
CH2 O

CH2 C NH2
H2N CH COO- CH2
O
Glutamina O
COO- CoA CH2
S
NH CH COO-

Fenil acetato Fenilacetil CoA Fenilacetilglutamina

CoA-SH

ORINA

Tema 26
27