Anlisis de Alimentos Minerales en Alimentos

Laboratorio 07

DETERMINACIN DE HIERRO
(A.O.A.C. 1998.method 944.02)
I. OBJETIVO

- Cuantificar la cantidad de hierro en harinas, pan, etc.

II. FUNDAMENTO

La ortofenantrolina reacciona con el Fe2+, originando un complejo de color rojo

caracterstico (ferrona) que absorbe notablemente en las regiones del espectro visible de
alrededor de 505 nm. El Fe3+ no presenta absorcin a esa longitud de onda y debe ser
reducido a Fe2+ mediante un agente reductor apropiado, como la hidroxilamina, (en
forma de clorato para incrementar su solubilidad) (Boumans et al., 1997).

Un mtodo excelente y muy sensible para la determinacin del hierro se basa en la

formacin de un complejo rojo-naranja de hierro (II) con o-fenantrolina. La o-
fenantrolina es una base dbil; en disolucin cida, la principal especie es el in
fenantrolina PhH +.

Reduccin de Fe3+ a Fe2+

La reduccin cuantitativa de Fe3+ a Fe2+ ocurre en pocos minutos en un medio cido

(pH 3-4) de acuerdo a la siguiente ecuacin:

4Fe3 2NH2OH 4Fe2 N 2O 4H H 2O

Hidroxilamina

Complejacin

Despus de la reduccin del Fe3+ a Fe2+, se da la formacin de un complejo con la

adicin de ortofenantrolina. En un medio acido la ortofenantrolina se encuentra en su
forma protonada como ion 1,1 0-fenantrolin (FenH+). La reaccin de complejacin
puede ser descrita por la siguiente ecuacin: (La estructura qumica del complejo se
muestra en la Figura 1)

Fe 2 3FenH 4Fe(Fen)3 3H
3

O-fenaltrolina color rojo caracterstico

(ferrona)

Figura 1: Estructura qumica de la ferrona. Consiste en 3 molculas de OP

(ortofenantrolina) alrededor de un tomo central de Fe. Los tomos de
carbono de la ferrona estn representados con sombras grises. Los tomos
de N estn representados en blanco.

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III. MATERIALES Y METODOS

2.1 Materiales

- Fiola de 1 L (1)
- Fiola de 500 mL (1)
- Fiola de 100 mL (10)
- Fiola de 25 mL (10)
- Pipeta de 1 mL, 5 mL, 10 mL (1 c/u)
- Crisoles de porcelana (10)
- Probeta de 10 mL
- Bombilla de extraccin (1)
- Vaso de 150 ml (10)
- Luna de reloj

2.2 Equipos

- Espectrofotmetro
- Balanza analtica
- Muffla
- Bao mara
- Cocinilla de calentamiento
- Cabina de extraccin

2.3 Reactivos

a) Solucin de o-fenantrolina.- Disolver 0,1 g de o- fenantrolina en 80 ml de agua a

80C, enfriar y enrazar a 100 mL en una fiola de 100 mL. Guardar en frasco
oscuro en refrigeracin por una semana como mximo.

b) Solucin estndar de hierro.

Disolver 3,512 g de Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O en agua, adicionar 2 gotas de HCl
concentrado, y enrazar a 500 mL en una fiola de 500 mL. Diluir 10 mL de esta
solucin a 1 Litro.
Calculations:
Formula: Fe.(NH4)2.(SO4)2.6H2O
Molar Mass: 392.118 g/mol
Percent composition (by mass):
Element count Atom Mass %(by mass)
Fe 1 55.84 14.24%

c) Solucin de clorhidrato de hidroxilamina (H2NOH.HCl).- disolver 10 g de

(H2NOH.HCl) en agua en una fiola de 100 mL.

d) Solucin buffer acetato.- Disolver 8,3 g de NaC2H3O2 anhidro (previamente secado

a 100C) en agua, adicionar 12 mL de cido actico y diluir a 100 mL con agua.

e) Solucin de acetato de sodio. 2M.- Disolver 272 g de NaC2H3O2.3H2O en agua y

llevar a 1 Litro en una fiola.

f) Solucin buffer, pH 3,5.- Disolver 6,4 mL de solucin 2M de NaC2H3O2, y 93,6

mL de 2M de HC2H3O2 (120 g/L) a 1 litro con agua.

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2.4 Preparacin de curva estandar

Construccin De curva estndar con 10 puntos ms cero.

1. Preparar soluciones conteniendo: 0, 2, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 45 mL

respectivamente a partir de la solucin standar final (Figura 2).

2. Agregar 2 mL de HCl y llevar a 100 mL con agua en una fiola de 100 mL a cada
solucin.
3. Tomar 10 mL de cada uno de las soluciones en fiolas de 25 mL, agregar 1 mL de
H2NOH.HCl, dejar reposar por 5 minutos y luego adicionar 5 mL de buffer acetato,
1 mL de O- fenantrolina y luego enrazar a 25 mL con agua.

4. Leer la Absorvancia a 510 nm.

5. Construir la curva patrn (Abs vs mg de Fe/ 25 mL)

6. Hacer la regresin lineal por los puntos pasando por el origen y hallar la ecuacin
matemtica

A partir de 3512 mg de Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O = 500.13 mg Fe

Fe= 55.84 Fe(NH4)2.6H2O 392.118
X Fe(NH4)2.6H2O 3.512
X= 0.5001303
Fe mg Solucion
500 500
10 10
10 1000
mL
mL 2 5 10 15 20 25 30 40 45
mg 0.02 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.45
mL 10 10 10 10 10 10 10 10 10
mg/10 mL 0.002 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025 0.030 0.040 0.045
mL mg/25 25 25 25 25 25 25 25 25 25
mL Abs 0.002 0.005 0.010 0.015 0.020 0.025 0.030 0.040 0.045
0.023 0.042 0.081 0.138 0.185 0.229 0.278 0.40 0.46

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2.5 Determinacin de Fe en muestra

1. Pesar 5 g de muestra en crisoles de porcelana o platino.

2. Llevar a incineracin en mufla a 600C hasta color blanco plomizo (2 horas o ms).

3. Enfriar y retirar el crisol de la mufla.

4. Adicionar 2 mL HCl concentrado, permitir que el cido cubra la porcin de la
ceniza

5. Evaporar hasta secar en bao mara, tapando en una de luna de reloj.

6. Disolver el residuo por adicin de 1 mL de HCl, 3 mL de agua medida precisa,

disolver con una varilla de vidrio y calentar 5 minutos.

7. Transferir lavando la luna de reloj a una fiola de 100 mL y diluir el residuo a 100
mL con agua. (si es necesario disolver las partculas visibles en el residuo de la
solucin).

8. Luego filtrar el residuo si es necesario la solucin a travs de papel filtro y descartar

los primeros 15 20 mL del filtrado.

9. Pipetear 10 mL de la alcuota en una fiola de 25 mL.

10. Adicionar 1 mL de solucin clorhidrato de hidroxilamina H2NOH.HCl(d),

reposar por 5 minutos

11. Adicionar 5 mL de solucin buffer (f) y 1 mL de O- fenantrolina (a) y diluir hasta

el volumen de 25 mL enrazndolo con agua.

12. Leer la absorvancia en un espectrofotmetro a 510 nm.

13. Determinar la concentracin de hierro en el grfico en la ecuacin de regresin

lineal obtenida en el grfico.
14. Calcular Fe en la harina como mg/ 100g.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

V. CONCLUSIONES

VI. BIBLIOGRAFA

MTODOS OF ANALYSIS OF THE AOAC. 1998.13 th ed. Washington, D.C. the

Association

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5 g de muestra

Encinera a 600C

Ceniza fra

5 mL HCl

Evaporar en B.M. hasta secar

2 mL de HCl

Calentar 5 minutos sobre bao de vapor

tapando en una de luna de reloj

Trasnferir a una fiola de 100 mL

Enrazar con agua

100 mL

Filtrar y eliminar los 10 - 15ml

primeros filtrados

Filtrado

Pipetear 10 mL de la alcuota en
una fiola de 25 mL 25 mL

Adicionar 1 mL de solucin H2NOH.HCl,

reposar por 5 minutos

Adicionar 5 mL de solucin buffer (f) y 1

mL de O- fenantrolina (a)

Enrazar con agua hasta 25 mL

Leer la absorvancia en un
espectrofotmetro a 510 nm.

Figura 1: Flujo para cuantificacin de hierro en la muestra

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2 gotas de HCl,
3,512 g de Fe(NH4)2(SO4)2. 6H2O

Fe = 0,50155 g
500 mL

Enrazar a 500 mL con

agua

Tomar 10 mL
agua

1 Litro

2 mL 5 mL 10 mL 15 mL 20 mL 25 mL 30 mL 35 mL 40 mL 45 mL
+ 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl + 2 mL HCl

Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua Agua

100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

10mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL 10 mL
+ 1 mL + 1 mL
H2NOH.HCl + 1 mL + 1 mL + 1 mL + 1 mL + 1 mL + 1 mL + 1 mL + 1 mL
H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl H2NOH.HCl

25 mL
25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL 25 mL

Reposar 5 minutos

Adicionar a cada uno 5 mL de buffer acetato

Adicionar 1 mL de O- fenantrolina

Enrazar a 25 mL con agua

Leer la ABS a 510 nm

Figura 2: Diagrama para la construccin de la curva standart con Hierro del

Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O

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Ejercicio resuelto: se desea determinar la cantidad de hierro en una muestra de papapan

fortificado, para ello se peso 5 g de pan y se llev a incineracin hasta obtener ceniza, esta
ceniza es tratada de acuerdo a la metodologa estudiada y obtenindose una Lectura de
Abs. =0,435. De acuerdo a las especificaciones el pan deber temer 5 mg de hierro por 75
g de pan, se cumple o no con las especificaciones dadas?.

Solucin:

La funcin de la curva patrn de abs. En funcin de la concentracin de fe (mg/25 ml

alcuota) es:

Abs. = 9,763 X(mg Fe/ 25 ml alcuota )

0,435
X 0,045 mg Fe/25 mL alicuota
9,763

Calculo de hierro en los 10 mL de solucin

Haciendo balance de masa para hierro entre 10 mL de solucin

mg 0,045 mg

Calculo de hierro en los 100 mL

0,045 mg 10 mL
X 100 mL 5 g muestra

X = 0,45 mg

Calculo para los 75 g de pan

0,45 mg 5 g muestra
Y ..75 g muestra

Y = 6,75 mg

X = 6.75 mg Fe / 75 g de pan

Conclusin

Resultado obtenido en el laboratorio fue de 6,75 mg Fe/75g de pan, que es superior al

lmite de 5 mg/75 g de papapan fortificado, el contenido de hierro se encuentra dentro del
rango establecido, el cual cumple con los requisitos establecidos.

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LAB. N 07
TEMA: DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE HIERRO EN ALIMENTOS
CURSO: ANALISIS DE ALIMENTO
GRUPOS: MARTES, JUEVES Y VIERNES FECHA: 01 al 5 de noviembre del 2011

MATERIALES cantidad
Fiola de 1000 mL 1
Fiola de 500 mL 1
Fiola de 100 mL 10
Fiola de 25 mL 10
Pipeta de 1 mL 2
Pipeta de 5 mL 2
pipeta de 10 mL 2
vaso de 150 mL 3
soporte para embudo 1
Embudo de vidrio 2
Luna de reloj 3
vagueta 1
papel tisue
bombilla de succion 1

REACTIVOS
Fe.(NH4)2.(SO4)2.6H2O
acido clorhidrico
O- Fenantrolina
Clorhidrato de hidroxilamina (H2NOH.HCl)
Acetato de sodio (NaC2H3O2)
acido acetico
EQUIPOS A USAR
Balanza
Espectrofotometro

Ing. Alberto HUAMANI HUAMANI

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