Romero y poleo vs Microorganismos

Pereyra Noelia; Darrigran Milagros

Carrera: Biologa 4 ao

Espacio curricular: Metodologa de la investigacin

Prof.: Griot, Karen

ISFDyT S.U.E.T.R.A
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NDICE

1. Resumen.....2

2. Introduccin...2

2.1. Marco terico...3

2.2. Antecedentes....6

3. Metodologa....6

3.1. Materiales7

3.2. Procedimiento......8

4. Resultados........................10

4.1. Gua de observacin Romero....11

4.2. Gua de observacin Poleo16

5. Conclusin....22

6. Bibliografa...22

1. RESUMEN

Mediante el presente trabajo se pretendi comprobar la efectividad de las infusiones de

romero (Rosmarinus officinalis) y de poleo (Mentha pulegium) empleados como inhibidores del

crecimiento de microorganismos. Se logr verificar el potencial inhibitorio de dichas infusiones

mediante el cultivo de microorganismos no identificados en una gelatina nutritiva.

2. INTRODUCCIN

La realizacin de este trabajo tiene como fundamental iniciativa la curiosidad, que surgi a

partir de nuestra experiencia cotidiana. El uso medicinal de Romero y Poleo, nuestros objetos de
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estudio, es una prctica comn en nuestras vidas y nos interes otorgarle rigor cientfico a nuestros

hbitos.

Con este proyecto pretendemos demostrar la capacidad inhibitoria del crecimiento

microbiano del romero y el poleo, para incentivar el uso de estas hierbas en el mbito domstico o

personal.

Las plantas han sido utilizadas durante miles de aos en muchas partes del mundo por sus

propiedades nutritivas y medicinales; y aunque su empleo con fines teraputicos estuvo durante

muchos aos asociado a ritos mgicos y religiosos, habra que resaltar que esta utilizacin se basa en

el conocimiento de la planta. El origen de la utilizacin de las esencias y aromas es tan antiguo como

la agricultura. Comenz por una recogida indiferente de plantas, pasando a una recoleccin selectiva

de unas sobre otras, hasta llegar a domesticar las ms tiles hasta su extensin a cultivo (Purca Pea,

2013). ltimamente las plantas medicinales han adquirido gran importancia en terapias alternativas o

complementarias en varias regiones del mundo. Las plantas con accin medicinal o funcional tienen

la caracterstica comn de poseer un elevado contenido en sustancias o principios activos, con

propiedades qumicas, bioqumicas u organolpticas muy especficas, que permiten su utilizacin

con fines teraputicos (plantas medicinales), aromticos (plantas aromticas o esencias) y dietticos

o gastronmicos (plantas empleadas como condimentos) (vila Sosa et.al, 2011). Adems se ha

estudiado el efecto en la salud de los posibles compuestos bioactivos presentes en las plantas y es

posible asegurar que existe ms informacin sobre sus propiedades funcionales, medicinales y/o

toxicolgicas (Purca Pea, 2013).

2.1. MARCO TERICO

El poleo o Mentha pulegium L. pertenece a la familia de las Labiadas. Es una planta herbcea,

anual o vivaz, ascendente, muy ramificada y de hasta 60 cm de altura. Hojas pequeas,

ovalanceoladas y opuestas. Sus flores presentan un color lila, rosado o blanco, dispuestas a lo largo
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del tallo. Se le conocen propiedades como antiespasmdico, antisptico, carminativo, estomacal y

parasiticida (Muoz Centeno, Alonso Beato & Santos Bobillo, 1998)

El romero o Rosmarinus officinalis L. es, tambin de la familia de las Labiadas. Es un arbusto

perenne que puede alcanzar los 2m de altura. Tiene hojas lineares de color verde, muy ramificadas y

aromticas. Las flores presentan tonos azules-violetas plido y son bilabiadas. En zonas clidas

puede florecer durante todo el ao. Tiene efectos estimulantes y tnicos. Ayuda en la recuperacin

de las enfermedades del aparato digestivo, enfermedades respiratorias y afecciones del hgado.

Favorece la digestin, evita la hinchazn, flatulencias y acidez de estmago. Tiene propiedades

antispticas, antibiticas, antiespasmdicas, antioxidantes, diurticas, astringentes, emenagogas y

oftlmicas. Se recomienda en estados de cansancio o en los que se realicen grandes esfuerzos

intelectuales (Purca Pea, 2013)

La composicin qumica del Poleo incluye fundamentalmente cetonas, destacando entre ellas

la pulegona (85-96%). Otras cetonas presentes en menor concentracin son: 1-mentona, d-

isomentona, piperitona, piperitenona, isopiperitenona. Adems, han sido identificados alcoholes;

steres, como el acetato de mentilo, e hidrocarburos. Influyendo en la proporcin de cada

componente el estado de desarrollo de la planta, as como los factores climticos y ecolgicos.

Tambin contiene flavonoides (diosmsido y hespersido) (Muoz Centeno, et.al., 1998).

En el romero se han reportado diversos compuestos qumicos los cuales han sido agrupados

de manera general en cidos fenlicos, flavonoides, aceite esencial, cidos triterpnicos y alcoholes

triterpnico. Adems diferentes trabajos de investigacin afirman que dependiendo del lugar

geogrfico donde crezcan las plantas bajo condiciones de tipo de suelo, clima y altura sobre el nivel

del mar generan diferentes cambios en cantidad y tipos de molculas bioactivas presentes (Purca

Pea, 2013)
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A continuacin se detallan las funciones de algunos de los compuestos nombrados:

Terpenoides. Diterpenos, Triterpenos. Son aquellos que tienen elementos adicionales,

usualmente oxigeno; se especula que involucra la ruptura de la membrana celular por los

compuestos lipoflicos.

Fenolicos y polifenoles se cree que estn relacionado con la toxicidad contra los

microorganismos, efectivo contra virus, bacterias y hongos; se cree que produce una

inhibicin enzimtica o una interaccin no especifica con las protenas.

Flavonas, flavonoides y flavonol. Son sintetizados por las plantas en respuesta a infecciones

microbianas, forman un complejo con las protenas solubles y extracelulares y el complejo de

la pared de la clula bacteriana, impidiendo el desarrollo de las clulas bacterianas.

Alcaloides. Constituyen un grupo heterogneo de bases nitrogenadas, tiene efecto

antimicrobiano, viral: se le atribuye a su capacidad de intercalarse con el DNA.

Taninos son compuestos polifenlicos, desempean en las plantas accin defensiva frente a

insectos, son antidiarrico, antimicrobiana, inhibidora enzimtica, estn relacionadas con la

capacidad de inactivar adhesinas microbianas, enzimas, protenas trasportadoras en la clula,

formar complejos con la pared celular, etc.

Romero
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Poleo

2.2. ANTECEDENTES

Herriz (2009) menciona que el aceite de Mentha pulegium L. posee un efecto antifngico

frente a ciertas especies.

Hernndez Lauzardo, Bautista Baos y Velzquez del Valle (2007) seala que Mentha

pulegium L. caus inhibicin en el crecimiento de fitopatgenos.

Maguna, Romero, Garro y Okulik (2006) demostraron la actividad antibacteriana (bactericida

e inhibitorias del crecimiento) de terpenoides, en Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y

Escherichia coli.

Purca Pea (2013) demostr la efectividad antibacteriana in vitro de los extractos de

Rosmarinus Officinalis comparada con la clorhexidina, un antibitico usual en las prcticas

odontolgicas.

En el romero (Rosmarinus officinalis) la mayor parte de la evidencia de los usos medicinales

provienen de la experiencia clnica ms que de estudios cientficos. Sin embargo, recientes estudios

de laboratorio han mostrado que el romero disminuye el crecimiento de algunas bacterias tales como
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Escherichia coli y Staphylococcus aureus que estn relacionadas con el proceso de descomposicin

de los alimentos (Ardila Q., 2009)

3. METODOLOGA

Se realizaron pruebas en gelatina nutritiva, un medio de cultivo general, utilizando el

mtodo de la licuefaccin de la gelatina (Bustamante, 2015). Las pruebas fueron divididas en dos

etapas, por un lado se prob el poleo y por otro el romero. En cada etapa se tomaron en cuenta

cuatro muestras, dos gelatinas nutritivas contaminadas con un agregado de infusin de poleo o

romero segn el caso, y dos muestras testigo, una compuesta solo por gelatina nutritiva y la restante

sembrada con contaminantes sin ningn otro agregado. Se realizaron siembras en superficie (UTN,

2009) utilizando las manos, previamente contaminadas con la suciedad domstica. Todas las

muestras fueron conservadas en la heladera, cerradas hermticamente.

3.1 MATERIALES

Cuatro frascos.
14g de gelatina sin sabor.
600ml de agua.
Medio cubo de caldo sabor gallina Knorr.
10g de hojas y tallos de romero/poleo limpios.
Cacerola grande.
Jarro.
Jeringa/gotero.
Repasador.
Pinzas.
Alcohol al 70% en atomizador.
Filtro/colador.
Medidor de volumen.
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3.2. PROCEDIMIENTO

1. Se esterilizaron todos los instrumentos (jeringa, frascos, tapas, repasador, colador, etc.). As
como tambin se desinfectaron las manos con alcohol al 70%v/v.

2. Se prepararon los 14g de gelatina sin sabor en 400 ml de caldo, segn las instrucciones del
fabricante.
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3. Se verti la gelatina en partes iguales en los frascos. Se guardaron los recipientes tapados en
la heladera.

4. Se prepararon 200ml de infusin de romero, con el agua hirviendo por dos minutos y dejando
que se enfre tapada.

5. Con las manos sucias, luego de haber hecho contacto con varios elementos de la casa
(mascotas, suelo, patio, bao, manija de la heladera, picaportes, etc.) se realiz la siembra en
la superficie de la gelatina de tres de las cuatro muestras, tocndola suavemente con los dedos.
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6. A la superficie contaminada de dos muestras se les coloc la infusin de romero/poleo a

temperatura ambiente.

7. Se taparon los tres frascos y los cuatro fueron guardados en heladera.

Nota: se incluye solo una etapa de las pruebas para facilitar la comprensin.

4. RESULTADOS

Se realiz un anlisis cualitativo de los resultados, utilizando un mtodo comparativo,

similar al utilizado por Garcs y Saravia (2008). Se registraron los datos mediante una gua de

observacin. Los resultados de la experiencia fueron positivos ya que se logr determinar, de una

manera sencilla, el poder inhibitorio del crecimiento en el Romero y el Poleo. En el caso de las

muestras con la infusin de Rosmarinus officinalis retardaron un tercio su crecimiento

microbiolgico con respecto a la muestra solo contaminada. Por otro lado la infusin de Mentha
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pulegium, ocasion que los cultivos tardaran el doble de tiempo en mostrar la proliferacin de

microorganismos, en comparacin con la muestra sin el preparado.

GUAS DE OBSERVACIN

4.1. ROMERO

Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sembrada en superficie con suciedad domstica.

Cantidad preparada: 100ml

Tipo de medio de cultivo: General

Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24 hs

Aspecto del medio de cultivo: Se observan pequeas perturbaciones en la superficie de la gelatina.

Estado fsico: La gelatina se encuentra en estado slido.

Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 48 hs

Aspecto del medio de cultivo: Se aprecian mayores depresiones en la superficie de la gelatina,

adems que aument el brillo.

Estado fsico: Se observan dos fases, una slida y otra lquida, esta ltima en mayor cantidad que en
la primera observacin.
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Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72hs

Aspecto del medio de cultivo: Los agujeros en la gelatina han aumentado considerablemente su
tamao, llegando al fondo del recipiente. El brillo tambin aument.

Estado fsico: La fase liquida aument, pasando a representar la mayor parte del volumen de la
muestra.

Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sembrada en superficie con suciedad domstica, con un
agregado en la superficie de una infusin de romero (n1)

Cantidad preparada: 100ml

Tipo de medio de cultivo: General

Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:
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Tiempo de almacenamiento: 24 hs

Aspecto del medio de cultivo: No se perciben cambios de ningn tipo.

Estado fsico: Se observa el estado slido de la gelatina y el estado lquido del remanente de la
infusin de romero.

Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 48hs

Aspecto del medio de cultivo: Siguen sin observarse cambios en la superficie de la gelatina.

Estado fsico: Sin cambios desde la primera observacin.

Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72hs

Aspecto del medio de cultivo: Se observan, a contraluz, pequeas perturbaciones en la superficie de

la muestra.

Estado fsico: No se observan cambios

Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sembrada en superficie con suciedad domstica, con un
agregado de infusin de romero tambin en la superficie (n2)

Cantidad preparada: 100ml

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Tipo de medio de cultivo: General

Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24hs

Aspecto del medio de cultivo: No se observan cambios desde el momento de preparacin de la

muestra.

Estado fsico: Dos fases, una solida de la gelatina y otra en estado lquido, compuesta por la infusin

de romero.

Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 48hs.

Aspecto del medio de cultivo: Contina sin cambios.

Estado fsico: Contina sin cambios.

Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72hs.

Aspecto del medio de cultivo: Se observan pequeas imperfecciones en la superficie de la muestra.

Estado fsico: No se perciben cambios desde la ltima observacin.

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Medio de cultivo: Gelatina nutritiva (testigo).

Cantidad preparada: 100ml

Tipo de medio de cultivo: General

Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24 hs

Aspecto del medio de cultivo: El color de la muestra es heterogneo y su superficie es uniforme.

Estado fsico: Slido.

Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 48hs

Aspecto del medio de cultivo: No se observan cambios.

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Estado fsico: Slido.

Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72hs

Aspecto del medio de cultivo: No se perciben cambios.

Estado fsico: Slido.

4.2. POLEO

Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sembrada en superficie con suciedad domstica (testigo)
Cantidad preparada: 100ml
Tipo de medio de cultivo: General
Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24hs

Aspecto del medio de cultivo: La gelatina se encuentra con algunos grnulos de caldo, adems de
pequeas partculas de suciedad observables a la vista. No se observan perturbaciones en la
superficie.

Estado fsico: Slido.

Observacin N2:
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Tiempo de almacenamiento: 48hs

Aspecto del medio de cultivo: Se observan algunos agujeros tanto en el centro de la muestra como en
lo que est en contacto con la pared del recipiente. Puede apreciarse un aroma intenso y desagradable

Estado fsico: La gelatina presenta una fase slida y una fase lquida.

Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72hs

Aspecto del medio de cultivo: Los orificios en la gelatina se hacen cada vez ms grandes y se
observa que los bordes se han deteriorado. El aroma se intensific notablemente.

Estado fsico: Mayoritariamente se observa una fase en estado lquido, con otra, de menor volumen,
compuesta por gelatina en estado slido.

Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sembrada en superficie con suciedad domstica, con un
agregado de la infusin de poleo (n1).
Cantidad preparada: 100ml
Tipo de medio de cultivo: General
Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)
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Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24hs

Aspecto del medio de cultivo: La gelatina nutritiva se encuentra con grnulos provenientes del caldo
utilizado dndole un color particular. La infusin de poleo agregada se puede observar fcilmente, se
ve de un color rojizo oscuro. Adems pueden observarse algunas partculas de tierra diminutas
producto de la siembra realizada.

Estado fsico: Se encuentra en estado slido la gelatina nutritiva, mientras que el remanente de la
infusin de poleo se encuentra en estado lquido, haciendo que se diferencien dos fases.

Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 48hs

Aspecto del medio de cultivo: Se observan unas manchas blancas en el fondo del recipiente

Estado fsico: No se observan cambios desde la primera observacin.

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Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72 hs.

Aspecto del medio de cultivo: Puede verse como en el fondo del recipiente, las manchas aumentaron
su tamao. Adems se observan deterioros en el borde de la gelatina contra la pared del recipiente.

Estado fsico: Pueden observarse las dos fases, una lquida compuesta por la infusin de poleo y
otra slida formada por la gelatina.

Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sembrada en superficie con suciedad domstica, con un
agregado de extracto acuoso de poleo (n2)

Cantidad preparada: 100ml

Tipo de medio de cultivo: General

Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24hs

Aspecto del medio de cultivo: Se observan grnulos del caldo utilizado y partculas de suciedad, que
le otorgan a la gelatina un color particular. Por otro lado, el lquido extrado del poleo se puede
observar de un color rojizo oscuro.

Estado fsico: La gelatina nutritiva se encuentra en estado slido, mientras que el remanente de la
infusin de poleo, en estado lquido, hace que se diferencien dos fases de la misma mezcla.
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Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 48hs

Aspecto del medio de cultivo: No se observan cambios en el aspecto del cultivo, salvo unas pequeas
manchas en el fondo.

Estado fsico: An pueden diferenciarse las dos sustancias, sin cambios aparentes en su estado fsico
original.

Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72hs.

Aspecto del medio de cultivo: Puede verse como en el fondo del envase, comienzan a aparecer
pequeas aureolas blancas y un pequeo orificio.

Estado fsico: Pueden observarse las dos fases, una lquida, del extracto de poleo y otra slida, de la
gelatina.
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Medio de cultivo: Gelatina nutritiva sin contaminantes (testigo).

Cantidad preparada: 100ml

Tipo de medio de cultivo: General

Condiciones de almacenamiento: En heladera (8C-15C)

Observacin N1:

Tiempo de almacenamiento: 24 hs

Aspecto del medio de cultivo: La gelatina se ve uniforme, con algunos grnulos del caldo utilizado
para realizar el cultivo.

Estado fsico: Slido.

Observacin N2:

Tiempo de almacenamiento: 2 das

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Aspecto del medio de cultivo: La muestra contina sin cambios.

Estado fsico: Slido.

Observacin N3:

Tiempo de almacenamiento: 72 hs

Aspecto del medio de cultivo: La gelatina no ha presentado variaciones observables.

Estado fsico: Slido.

CONCLUSIN

Las sustancias presentes en la infusin de Romero (Rosmarinus officinalis) y en la infusin

de Poleo (Mentha pulegium) retrasan significativamente la proliferacin los microorganismos

presentes en el mbito domstico. Esto podra darnos la pauta de que un uso cotidiano de estos

preparados sera muy beneficioso para la salud y la sanidad del hogar. Su preparacin sencilla y su

eficacia es un incentivo para su implementacin.

BIBLIOGRAFA

vila-Sosa, R., Navarro-Cruz, A. R., Vera-Lpez, o., Dvila-Marquez, R. M., Melgoza-Palma, N., &

R. (2011). Romero (Rosmarinus officinalis L.) una revisin de sus usos no culinarios.

Revista Ciencia y Mar, 43, 23-36.

Bustamante, G., & Alvarad, P. (2015). Efecto del sobrenadante del cultivo de Lactobacillus sp. sobre

el crecimiento de Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Salmonella enteritidis. Revista

REBIOLEST, 3(1), 33-41.

Garcs, A. & Saravia, K. (2008) Preparacin de medios de cultivo. Laboratorio de microbiologa.

23

Hernndez Lauzardo, A. N., Bautista Baos, S., & Velzquez del Valle, M. G. (2007). Prospectiva

de extractos vegetales para controlar enfermedades postcosecha hortofrutcolas. Revista

Fitotecnia Mexicana, 30(2).

Herriz, E. M. (2009). 21. Poleo. Quaderns de la Fundaci Dr. Antoni Esteve, (18), 79-80.

Historia de las plantas en el mundo antiguo; Santiago Seguria Munguia; Javier Torres Ripa.

Maguna, F. P., Romero, A. M., Garro, O. A., & Okulik, N. B. (2006). Actividad Antimicrobiana de

un grupo de Terpenoides. Comunicaciones Cientficas y Tecnolgicas en Internet.

Argentina: Facultad de Agroindustrias.

Martha I. Ardila Q., Andrs F. Vargas A., Jorge E. Prez C. & Luis F. Meja G. (2009). ENSAYO

PRELIMINAR DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE EXTRACTOS DE Allium

sativum, Coriandrum sativum, Eugenia Caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus

officinalis Y Thymus vulgaris FRENTE A Clostridium perfringen. Biosalud, volumen 8.

Muoz Centeno, L. M., Beato, A., Teresa, M., Bobillo, S., & Teresa, M. (1998). Plantas Medicinales

Espaolas. Mentha Pulegium L. (Labiatae) (Poleo, Poleo-menta)

Pea, P., & Pitgoras, T. (2013). Efectividad antibacteriana" in vitro" del extracto etanlico de

Rosmarinus officinalis (romero) sobre flora salival.

UTN, Facultad Regional de Rosario (2009). Trabajo Prctico n3: Siembra y recuento de

microorganismos.