UNIVERSIDAD POLITCNICA SALESIANA

INGENIERA EN BIOTECNOLOGA DE LOS RECURSOS NATURALES

QUMICA ANALTICA INSTRUMENTAL

Nombre: Santiago Rodrguez

Curso: 3 B

Fecha: 2015-02-12

CUESTIONARIO
1 Definir

a) Elucin: Es el procedimiento en el que la fase mvil se pasa de forma continua

a travs o a lo largo del lecho cromatogrfico y la muestra se suministra al
sistema de forma discreta, como una pequea cantidad en un tiempo breve
b) Fase mvil:Puede ser un lquido o un gas que recorre la columna cromatogrfica
transportando los componentes de la mezcla a travs de dicho sistema.
c) Fase estacionaria: Es la que recubre la columna cromatogrfica, interiormente
sin desplazarse. La fase estacionaria consiste en partculas, generalmente slidas,
pequeas y con una superficie microporosa, de forma que presenta un amplio
desarrollo superficial. Puede estar empaquetada en forma de columna o
extendida en forma de capa.
d) Constante de distribucin: se describen por ecuaciones simples que suponen la
transferencia de un analito entre las fases estacionaria y mvil
e) Tiempo de retencin: Es el tiempo transcurrido entre el instante en que se
introduce la mezcla y el instante en que se detecta la seal propia del
componente en su mxima intensidad. Los tiempos de retencin no son
reproducibles, ni siquiera en una misma columna cromatogrfica
f) Factor de capacidad: parmetro importante que se utiliza para describir las
velocidades de migracin de los analitos en columnas.
g) Factor de selectividad:
h) Altura de plato: Se utiliza como una medida de la eficiencia de la columna, este
directamente relacionado con la varianza, por ello resulta convenientemente
 medir la eficiencia de la columna en los trminos de varianza y longitud de la
columna

2. Describir el problema general de la elucin:

La implica el transporte de una especie a travs de una columna por la adicin

continuada de una columna de nueva fase mvil.

La fase mvil adicional (eluyente) hace que la fase mvil que contiene una parte de la
muestra se mueva hacia abajo por la columna, donde tiene lugar a un posterior reparto
entre la fase mvil y las porciones nuevas de la fase estacionaria.

3. Enumeras las variables que originan el ensanchamiento de banda.

1. Influencia del caudal de la fase mvil

2. Relacin entre la altura del plato y las variables de la columna
3. El trmino de la difusin longitudinal.
4. Termino del camino mltiple
5. Los coeficientes de transferencia de masa
6. Termino de la transferencia de la masa en la fase estacionaria.
7. Termino de la transferencia de la masa en la fase mvil.
8. Influencia de la velocidad de la fase mvil en los trminos de la ecuacin.

4. Cul es la diferencia entre la cromatografa gas-lquido y liquido- liquido?

En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una

columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el
resultado de las interacciones especficas entre las molculas de la muestra en ambas
fases, mvil y estacionaria

A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto

rendimiento (HPLC, de high-performance liquidchromatography) no est limitada por
la volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.

5. Cul es la diferencia entre la cromatografa liquido-lquido y liquido-solido?

La diferencia es que la cromatografa liquido-liquido las ambas fases son liquidas y,

por tanto, se trata de una cromatografa de particin. En cambio la cromatografa
liquido-slido la fase estacionaria es slida (adsorcin, cambio inica, exclusin,
afinidad).

6 Qu variables con las que probablemente son las que afectan al valor de
correspondiente a un par de analitos?

Se muestra cmo utilizar los factores de selectividad y los factores de capacidad para
calcular el poder de resolucin de una columna

7 Cmo puede modificarse el factor de capacidad de una especie?

Cuando el factor de capacidad de una especie es mucho menor que la unidad la elusin
tiene lugar tan rpidamente que es difcil determinar con la exactitud los tiempos de
retencin

Las separaciones se realizan en unas condiciones en las que os factores de capacidad

para las especies de una mezcla oscilan entre 1 y 5

8. Describir un mtodo para la determinacin del nmero de platos de una

columna

Dos trminos afines se utilizan ampliamente como medidas cuantitativas de eficiencia

de una columna cromatografa como es la altura del plato y el nmero de platos, la
eficiencia de la columna cromatografa aumenta cuanto mayor es el nmero de platos y
cuanto menor es la altura del plato. Se han encontrado enormes diferencias en el tipo de
columna y en el tipo de fases mvil y estacionaria utilizadas .las eficacias en trminos
de un numero de platos pueden variar desde pocos cientos a varios cientos de miles ;no
son infrecuentes las alturas de plato que oscilan de unas pocas decimas a una milsima
de centmetro o menos

9. Cules son los efectos de la variacin de temperatura en los cromatogramas?

Los efectos ms comunes son las interferencias que se llegan a presentar, por ejemplo si
los compuestos presentan puntos de ebullicin cercanos es posible que los picos estn
empalmados
La temperatura es una variable importante que para un trabajo preciso ha de regularse a
las dcimas de grado, la temperatura ptima de la columna depende del punto de
ebullicin de la muestra y del grado de separacin requerido. En la prctica, con una
temperatura igual o ligeramente superior al punto de ebullicin promedio de la muestra,
se obtienen tiempos de elucin razonables (2 a 30 min). Para muestras con un amplio
intervalo de ebullicin, a menudo es conveniente emplear una programacin de
temperatura, con lo que se aumenta la temperatura de la columna bien de forma
continua bien por etapas, al mismo tiempo que tiene lugar la separacin. En la Figura
3.4 se muestra la mejora de un cromatograma ocasionada por la programacin de
temperatura.

10. Por qu el mnimo en el grfico de la altura de plato versus el caudal se

encuentra a menos valores de caudal en cromatografa de lquidos que en
cromatografa de gases?
Con fases mviles gaseosas, la incidencia de la difusin longitudinal puede reducirse de
forma apreciable reduciendo la temperatura y as el coeficiente de difusin DM. Como
resultado se tienen unas alturas de plato significativamente menores a bajas
temperaturas. En cromatografa de lquidos este efecto no es perceptible debido a que la
difusin es suficientemente lenta como para que el trmino de la difusin longitudinal
tenga un efecto pequeo sobre la altura de plato.
Con fases estacionarias liquidas, el espesor de la capa de lquido adsorbido debera ser
el menor posible, debido a que CS en la ecuacin es proporcional al cuadrado de esta
variable df.

11. Que es la elucin con gradiente

Mtodo de elucin en gradiente: Se lleva a cabo variando de forma continua la
composicin de los disolventes de forma que su fuerza vaya incrementando durante el
tiempo de anlisis (Fig. 2). Normalmente se procede de esta forma, utilizando una
fuerza de fase mvil ms dbil al principio para ir incrementndola despus. Existen dos
tipos de gradientes:
Lineales (curva 5). La velocidad de cambio del disolvente fuerte es lineal en el tiempo.
Exponenciales. (Curvas 1 a 4 y 6 a 9). stos a su vez pueden ser:
- Convexos (curvas 1-4). Rpidas en alcanzar la composicin final de la fase mvil. Se
utilizan para picos superpuestos al final del cromatograma.
- Cncavos (curvas 6-9). Lentas en alcanzar la composicin final de la fase mvil. Se
utilizan para picos superpuestos al principio del cromatograma.

12. Los siguientes datos corresponden a una columna para cromatografa de

lquidos:

Longitud del relleno 24,7 cm

Caudal 0,313 mL/min
VM 1,37 mL
VS 0,164 mL

El cromatograma de una mezcla de especies A, B, C y D proporciona los siguientes

datos:

Tiempo de retencin, min Anchura de la base de pico

(W), min
No retenida 3,1 -
A 5,4 0,41
B 13,3 1,07
C 14,1 1,16
D 21,6 1,72
Calcular

(a) El nmero de platos para cada pico

2
= 16 ( )

5,4 2
= 16 ( ) = ,
0,41
13,3 2
= 16 ( ) = ,
1,07
14,1 2
= 16 ( ) = ,
1,16
21,6 2
= 16 ( ) = ,
1,72

(b) La media y la desviacin estndar de N.

(2775,49 + 24722,04 + 2363,97 + 2523,31)

=
4
(10134,81)
=
4
= ,

= ,
(c) La altura de plato de la columna.

=

24,7
= = ,
2533,70

13. Con los datos de Problema 24-12, calcular para A, B, C y D

 (a) el factor de capacidad.
( )
` =

(5,4 3,1)
` = = ,
3,1
(13,3 3,1)
` = = ,
3,1
(14,1 3,1)
` = = ,
3,1
(21,6 3,1)
` = = ,
3,1

(b) el coeficiente de distribucin.

`
=

(0,742)(1,37)
= = ,
0,164
(3,29)(1,37)
= = ,
0,164
(3,55)(1,37)
= = ,
0,164
(5,97)(1,37)
= = ,
0,164

14. Con los datos del Problema 12 para las especies B y C, calcular

(a) la resolucin.
2[( ) ( ) ]
=
+
2[14,1 13,3]
=
1,07 + 1,16
= ,

(b) el factor de selectividad.


=

29,66
=
27,48
= ,

(c) la longitud de columna necesaria para tener una resolucin de 1,5.

( )1 1
=
( )2 2

0,72 2533,70
=
1,15 2
0,72 2
2 = 2533,70 ( )
1,5
2 = 583,76

= 583,76 (9,75 103 )

= ,

(d) el tiempo necesario para separar B y C con una resolucin de 1,5.

( )1 ( )12
=
( )2 ( )22
14,1 (0,72)12
=
( )2 (1,5)22
(14,1)(1,5)2
( )2 =
(0,72)2
( )2 = ,

15. Con los datos del Problema 24-12 para las especies C y D, calcular

(a) la resolucin
2[( ) ( ) ]
=
+
 2[21,6 14,1]
=
1,16 + 1,72
= ,

(b) la longitud de columna necesaria para tener una resolucin de 1,5

( )1 1
=
( )2 2

5,21 2533,70
=
1,15 2
5,21 2
2 = 2533,70 ( )
1,5
2 = 30566,67

= 30566,67 (9,75 103 )

= ,

16. Con un cromatgrafo gas-lquido y con una columna de relleno de 40cm se

obtuvieron los siguientes datos:

Compuesto tRmin W1/2 min

Aire 1,9 ----
Metilciclohexano 10,0 0,76
Metilcilcohexeno 10,9 0,82
tolueno 13,4 1,06

Calcular:

(a) Un nmero de platos promedio a partir de los datos

= 16( )2

() =

() =173.13
 () = 176.70

() = 159.81

(b) La desviacin estndar para el promedio en (a)

=
4

() =-

() = 0,76

() = 0,75

() = 0,79

(c) Una altura de plato promedio para la columna

=

() =
() = 0,23
() = 0,23
() = 0,25
= 0,24

17. En relacin al problema 24-16, calcular la resolucin para

(a) Meticiclohexeno y metilciclohexano

2[( ) ( ) ]
=
+

=1,14

(b) Meticiclohexeno y tolueno

2[( ) ( ) ]
=
+
 =2,66

(c) Meticiclohexano y tolueno

2[( ) ( ) ]
=
+

= 3,74

18. Si Vs y VM para la columna del problema 24-16 fueron 19,6 y 62,6mL,

respectivamente, y el pico del aire no retenido apareci a los 1,9 min, calcular el

(a) Factor de capacidad para cada uno de los tres compuestos.

" =

" (Metilciclohexano) = 8.1

" (Metilciclohexeno) = 9.0

" (Tolueno) = 11.5

(b) Constante de distribucin para cada uno de los tres compuestos.

= "

() =25.87

() = 28.74

() = 36.73

(c) Factor de selectividad para metilciclohexeno y metilciclohexano.

[( ) ]
=
( ) +

= 0.63
 (d) Factor de selectividad para metilciclohexeno y tolueno.
[( ) ]
=
( ) +
= 0.90

19. Enumerar las variables que conducen a un (a) ensanchamiento de banda y (b)
una separacin de bandas

a)

Influencia del caudal de la fase mvil

Relacin entre la altura del plato y las variables de la columna
Trmino del camino mltiple
Difusin longitudinal

b)

Velocidad lineal de la fase mvil

Coeficiente de difusin en la fase mvil
Coeficiente de difusin en la fase estacionaria
Factor de capacidad
Dimetro de la partcula de relleno
Grosor del recubrimiento lquido en la fase estacionaria

20. Cual sera un pico cromatogrfico de la introduccin de la muestra a una

velocidad demasiado lenta?

No se generara pico o sera muy pequeo ya que el analito no alcanzara el detector

21. A partir de estudios de distribucin de las especies M y N se sabe que sus

coeficientes de distribucin en el sistema agua/hexano son 6,01 y 6,20 (K=
(M)agua/(H)hex.). Las dos especies se separan por elucin con agua adsorbida. La
relacin VS/VMpara el relleno resulta ser de 0,422.

a) Calcular el factor de capacidad para cada uno de los solutos.

KA= 6,01*0,422 KB= 6,20*0,422
KA= 2,536 KB= 2,616
 b) Calcular el factor de selectividad.
6,20
= = = 1,031
6,01

c) Cuntos platos se necesitarn para tener una resolucin de 1,5?

2 1 + 2
= 162( ) ( )
1
= 36 1106,098 1,910 = 76055,30

d) Qu longitud de columna se necesita si la altura de plato del relleno es 2,2x10-3

cm?
L=N*H L=76055,30*2,2X10-3 L=167321,660cm

e) Si se utiliza una velocidad lineal de flujo de 7,10 cm/min, qu tiempo se

necesitar para eluir las dos especies?
162 2 (1 + )3
= ( )
1 2
= 0,11 1106,09 6,874 = 83,63
= 0,11 1106,09 6,90 = 84,03
= 167,69

22. Repetir los clculos en el problema 24-21 asumiendo que KM = 5,81 y KN= 6,20.

a) Calcular el factor de capacidad para cada uno de los solutos.

KA= 5,81*0,422 KB= 6,20*0,422
KA= 2, 451 KB= 2,616

b) Calcular el factor de selectividad.

6,20
= = = 1,067
5,81

c) Cuntos platos se necesitarn para tener una resolucin de 1,5?

2 1 + 2
= 162( ) ( )
1
= 36 253,6 1,910 = 17437,53
 d) Qu longitud de columna se necesita si la altura de plato del relleno es 2,2x10-3
cm?
L=N*H L=17437,53*2,2X10-3 L=38,36cm

e) Si se utiliza una velocidad lineal de flujo de 7,10 cm/min, qu tiempo se

necesitar para eluir las dos especies?
162 2 (1 + )3
= ( )
1 2
= 0,11 253,6 6841 = 190,84
= 0,11 1106,09 6,90 = 84,03
= 274,87

23. Las reas del pico obtenidas por cromatografa de gases para una mezcla de
acetato de metilo, propionato de metilo, y n-butirato de metilo fueron 17.6, 44.7, y
31.1, respectivamente. Calcular el porcentaje de cada compuesto si las respectivas
respuestas de deteccin relativas fueron 0.65, 0.83 y 0,92.

rea de pico, cm2 Factor de respuesta rea x F

relativa
Acetato de metilo 17,6 0,65 11,44

Propionato de metilo 44,7 0,83 37,10

n-butirato de metilo 31,1 0,92 28,61

77,15

% acetato de metilo = (11,44/77,15) x 100 = 14,8

% propionato de metilo = (37,10/77,15) x 100 = 48,1

% n-butirato de metilo = (31,1/77,15) x 100 = 37,1

24. A continuacin se dan reas relativas para los cinco picos de la Figura 24-13a
obtenidos por cromatografa de gases. Tambin se indican las respuestas
 relativas del detector para los cinco compuestos. Calcular el porcentaje de cada
componente en la mezcla.

Compuesto rea de pico relativa Respuesta de

detector relativa
1 27,6 0,70
2 32,4 0,72
3 47,1 0,75
4 40,6 0,73
5 27,3 0,78

Compuesto reas corregidas Porcentaje

1 27,6 0,70 = 39,43
2 32,4 0,72 = 45
3 47,1 0,75 = 62,8
4 40,6 0,73 = 55,62
5 27,3 0,78 = 35
Total Total = 237,85
(39,43 237,85) x 100 = 16,6 %
(45 237,85) x 100 = 18,9 %
(62,8 237,85) x 100 = 26,4 %
(55,62 237,85) x 100 = 23,4 %
(35 237,85) x 100 = 14,7 %
100%

CUESTIONARIO
1.- En qu se diferencia la cromatografa gas-lquido y gas-slido?

Cromatografa de gas-lquido: Fase estacionaria molculas de lquido

inmovilizadas sobre la superficie de un slido inerte. Utiliza solo columnas de
relleno.

Cromatografa de gas-slido: Fase estacionaria solida Se basa en la adsorcin

de sustancias gaseosas sobre superficies slidas. Coeficientes de distribucin son
generalmente muchos mayores que en el caso de la cromatografa gas-lquido.
til para la separacin de especies que no se retienen en columnas de gas-
lquido. Se lleva a cabo tanto en columnas de relleno como en capilares.

2) qu tipo de mezclas se separan por cromatografa gas-slido?

Componentes del aire, sulfuro de hidrgeno, disulfuro de carbono, xidos de nitrgeno,
monxido de carbono, dixido de carbono, metanol, cloruro de vinilo y gases nobles.

3) Por qu la cromatografa gas-slido no se utiliza tan extensamente como la

cromatografa gas-lquido? la cromatografa gas-slido ha tenido una aplicacin
limitada debido a la retencin semipermanente de las molculas activas o polares y a la
obtencin de picos de elucin con colas (una consecuencia del carcter no lineal del
proceso de adsorcin).

4) Definir:

Volumen de retencin: es el volumen de fase mvil gastado al momento de

eluir el mximo de concentracin del soluto

Volumen de retencin corregido: que corresponden a los volmenes a la

presin promedio de la columna.

Volumen de retencin especfico: donde W es la masa de la fase estacionaria,

una cantidad determinada en el momento de preparar la columna, y Tc es la
temperatura de la columna en grados kelvin.

5) Cmo funciona un medidor de fuljo de pompas de jabn?

Con un medidor de pompas de jabn se puede medir la velocidad de flujo. En la

trayectoria del gas se forma una pelcula de jabn cuando se exprime un bulbo de
caucho que contiene una solucin de jabn, se mide el tiempo requerido para que esta
pelcula se mueva entre dos graduaciones en la bureta y se convierte a velocidad de
flujo.

6 ) Qu es la programacin de temperatura en cromatografa de gases?

La temperatura de la columna es una variable importante que para un trabajo preciso

debe regularse a las dcimas de grado, por ello la columna normalmente se introduce
dentro de un horno termostatizado. La temperatura ptima de la columna depende del
punto de ebullicin de la muestra y del grado de separacin requerido.

7) Cul es la diferencia entre un detector sensible a la concentracin y un detector

sensible a la masa? Indicar a que tipo corresponden los siguientes detectores:

a) Conductividad trmica

b) Emisin atmica

c) termoinico

d) captura de electrones

e) fotometra de llama

f) fotoionizacin.
Los detectores cuya respuesta varan poco por cambios en la velocidad de flujo de la
fase mvil sn los d9etectores sensibles a la masa. En estos detectores la sensibilidad se
define como la relacin del rea de pico a la masa inyectada en cambio en los detectores
sensibles a la concentracin la respuesta vara en funcin del flujo de la fase mvil y su
sensibilidad se define como el producto del rea del pico por el flujo de la fase mvil
dividido por la masa inyectada.

8) Describir el fundamento en el que se basan los detectores enumerados en el

problema 25-7

Fundamentos y principios bsicos

La idea de esta tcnica se basa en la volatilizacin de la muestra y su posterior inyeccin

en la cabezade una columna cromatogrfica. Para la elucin de la muestra se usa un gas
inerte como fase mvil, deesta manera la fase mvil no interacciona con las molculas
del analito, simplemente transporta el analitoa travs de la columna.Existen dos tipos de
cromatografa de gases (GC):

Cromatografa gas-slido (GSC)

La fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos se produce mediante

adsorcin. Cromatografa gas-lquido (GLC): la fase estacionaria son molculas de
lquido inmovilizadas sobrela superficie de un gas inerte. Esta es la que se usa ms
ampliamente. GSC la fase estacionaria es slida y la retencin de los analitos en ella se
produce mediante el proceso de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que
no es lineal, es el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin
limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficies semipermanente y se
obtienen picos de elucin con colas. Su nica aplicacin es la separacin de especies
gaseosas de bajo peso molecular. La GC es un sistema compuesto de gas portador,
sistema de inyeccin de muestra, columna (generalmente dentro de un horno), y
detector.

9) Cules son las principales ventajas y limitaciones de cada uno de los detectores
mencionados?

a) Conductividad trmica: las ventajas es su simplicidad, su amplio rango

dinmico lineal, su respuesta universal tanto a especies orgnicas como a
inorgnicas, y su carcter no destructivo le permite recoger los solutos tras la
deteccin. Una limitacin es su sensibilidad relativamente baja lo que hace
imposible la utilizacin con columnas capilares.

b) Emisin atmica: Permite medir la concentracin de varios elementos, es capaz

de detectar grandes radiaciones emitida desde 170 a 780 nm, al medir la
concentracin de varios elementos los picos no se pudieran ver con claridad.

c) Termoinico: permite medir compuestos determinados como el fsforo y el

nitrgeno, es ms sensible que el detector de ionizacin, es til para la
 determinacin de muchos pesticidas que contienen fsforo. La limitacin sera
que solo se puede utilizar para estos elementos y no con ms

d) captura de electrones: son muy sensibles a las molculas que contienen grupos
funcionales como aminas, alcoholes e hidrocarburos, detecta y determina los
insecticidas clorados, no altera la muestra de manera significativa la limitacin
sera que su intervalo lineal de respuesta normalmente se limita a unos dos
rdenes de magnitud, se limita a ciertos compuestos ya que su respuesta es
selectiva

e) fotometra de llama: se utiliza para el anlisis de contaminantes del aire y agua

como los pesticidas y los hidrocarburos, se trata de un detector selectivo por lo
que su no limitacin sera esa que no se puede usar para el anlisis de otros
compuestos.

f) Fotoionizacin: es entre 5 y 10 veces ms sensible que el detector de ionizacin

de llama frente a los alcanos y 35 veces ms sensibles que hidrocarburos
aromticos

10) Cul es el material de relleno en la mayora de las columnas de cromatografa

de gases empaquetadas?

Las columnas de relleno o empacadas consisten en unos tubos de vidrio, metal (inerte a
ser posible como el acero inoxidable, nquel, cobre o aluminio) o tefln, de longitud de
2 a 3 metros y un dimetro interno de unos pocos milmetros, tpicamente de 2 a 4. El
interior se rellena con un material slido, finamente dividido para tener una mxima
superficie de interaccin y recubierto con una capa de espesores entre 50 nm y 1 m.
Para que puedan introducirse en el horno, se enrollan convenientemente.

El material de relleno ideal consiste en pequeas partculas, esfricas y uniformes, con

una buena resistencia mecnica, para tener una mxima superficie donde interaccionar
la fase estacionaria y el analito. La superficie especfica mnima ha de ser de 1 m/g.
Como todos los componentes de columnas para GC, debe ser inerte a altas temperaturas
(~400 C) y humectarse uniformemente con la fase lquida estacionaria durante el
proceso de fabricacin

11.- En qu se diferencian las siguientes columnas capilares? a) Columnas FSOT

b) Columnas WCOT c) Columnas SCOT

Las diferencias que encontramos la eficacia de las columnas de SCOT es menor que la
de una columna WCOT, tambin las WCOT son de pared recubierta las cuales son
tubos capilares con la pared interna cubierta de una fina capa de fase estacionaria
mientras que las SCOT o capilares con soporte recubierto este tipo de columnas
contiene varias veces la fase estacionaria de una columna capilar de pared recubierta por
ende tiene mayor capacidad de carga y las FSOT son columnas tubulares abiertas de
slice fundida en esto se diferencias los tres tipos de columnas capilares.
12.- En qu consisten las columnas macro capilares? Para qu se utilizan?

Las columnas macro capilares tienen un dimetro interno de 530 um las cuales admiten
muestras de tamao similar a los empleados en la columna de relleno, las caractersticas
de estas columnas no son tan buenas como las columnas de menor dimetro pero son
relativamente mejores que las columnas de relleno.

13.- Cules son las ventajas de las columnas capilares de slice fundida en
comparacin con las columnas de vidrio y metlicas?

Las capilares de slice fundida se fabrican a partir de slice especialmente purificada con
un contenido de xidos metlicos. Ofrecen ventajas tales como resistencia fsica, una
reactividad mucho menor frente a los componentes de la muestra y la flexibilidad han
sustituido a las columnas de WCOT.

14.- Que propiedades debe tener una fase estacionaria liquida en cromatografa
de gases?

Las propiedades deseables para una fase liquida incluyen:

1. Baja volatilidad (el punto de ebullicin del lquido debe ser al menos 100 oC)

2. Estabilidad trmica

3. Qumicamente inerte

4. Caractersticas disolventes tales que los valores e k y de los solutos a resolver

estn dentro de un intervalo conveniente.

15.- Por qu las fases estacionarias en cromatografa de gases estn con

frecuencia enlazadas o polimerizada? Qu significados tienen estos trminos?

El enlace y entrecruzamiento tienen por objeto la preparacin de una fase estacionaria

de larga duracin.

Enlazada: El enlace implica la unin, mediante una reaccin qumica de una

capa mono molecular de la fase estacionaria a la superficie de slice de la
columna.

Entrecruzamiento: se lleva a cabo in situ despus de que la columna haya sido

recubierta con uno de los polmeros , una forma de realizar el entrecruzamiento
es incorporar un perxido al lquido original

16.- Qu efectos tienen el grosor de la pelcula de la fase estacionaria en

cromatografa de gases sobre los cromatogramas?

El grosor de la pelcula afecta principalmente a las caractersticas de retencin y a la

capacidad de la columna. Las pelculas gruesas se utilizan con analitos muy voltiles
debido a que tales pelculas retienen ms tiempo a los solutos y as proporciona un
mayor tiempo para que pueda tener lugar la separacin.

17.- Que son los ndices de retencin? Describirlos cmo se determinan.

El ndice de retencin se usa como parmetro para identificar solutos a partir de los
cromatogramas. El ndice de retencin para un soluto dado puede deducirse del
cromatograma de una mezcla del soluto con al menos dos alcanos normales (de cadena
lineal), por definicin para un alcano normal es igual a 100 veces el nmero de carbonos
del compuesto sin considerar el relleno de la columna, la temperatura u otras
condiciones cromatografcas

18.- Cmo es normalmente un cromatograma en GC/MS? y en GC/IR?

Cromatograma en GC/MS: El caudal de las columnas capilares en general es

suficientemente bajo como que para la salida de la columna pueda introducirse
directamente en la cmara de ionizacin de un espectrmetro de masa. En este
dispositivo la salida de gases fluye a travs de la boquilla de un separador de
chorro de vidrio, el cual aumenta el momento de las molculas ms pesadas del
analito

Cromatograma en GC/IR: El acoplamiento de cromatgrafosde gases con

columnas capilares con espectrmetros de infrarrojo de transformado de Fourier
proporciona un potente medio para la separacin y la identificacin de los
componentes de mezclas complejas.

19.- El mismo compuesto polar se analiza por cromatografa de gases con una
columna SE-30 (muy poco polar) y luego con una columna carbo-wax 20M (muy
polar). Cmo variara K= cs/cm entre las dos columnas?

La constante de equilibrio K se denomina constante de distribucin, donde Cs es la

concentracin molar del analito en la fase estacionaria y el Cm es la concentracin
molar en la fase mvil y va a variar en las concentraciones de las fases ya que para ser
poco polar se necesitara menos cantidad de la concentracin y as mantener el equilibro
y si es ms polar se necesitara msconcentracin de las fases para mantener el equilibrio

20.- Utilizar los datos que se dan a continuacin para calcular el ndice de
retencin del 1-hexeno

Muestra Tiempo de retencin (min)

Aire 0.571

n-penteno 2.16

n-hexeno 4.23

1-hexeno 3.15
21.- Se utiliz una columna de GLC en las siguientes condiciones:

Columna: 1.10 m x 2.0 mm empaquetada con Chromosorb P; peso de fase estacionaria

lquida aadida, 1.02 g/ml.

Presiones: entrada, 25.1 psi por encima de la atmosfrica; atmosfrica, 748torr.

Caudal de salida medido: 24,3 mL/min

Temperatura; ambiente, 21.2C; columna, 102.0C; tiempos de retencin: aire, 18.0 s;

acetato demetilo, 1.98 min; propionato de metilo, 4.16 min; n-butirato de metilo, 7.93
min; anchura de picos en su base: 0.19; 0.39 y 0.79, min respectivamente.

a) El caudal promedio en la columna

Sustituyendo en la ecuacin 27.3 Tc = 102.0+273= 375K, Fm = 25.3L/min

T=21.2 = 294.2 K

P=748 torr

F= Fm* Tc/T * (P-PH2O)/P

= 24.3* 375K/294.2K * 748-18.88/748 = 30.2 l/min

b) Los volmenes de retencin correctos para el aire y para los tres esteres

5.17
= = 748 + 25.1 = 878

8782
3 748 1 3.13
= = = 1.40
8833 2.23
2 748 1

Tm= 18.0 s/ 60s/min = 0.3 min

30.2
= =1.400.3 min =12.68

=1.401.98 min
30.2
=83.71

=1.404.16 min
30.2
=175.83

=1.407.93 min
30.2
=335.28

c) Los volmenes de retencin especficos para los tres componentes


273

=

83.71 12.68 273
()1 = = (83.71 12.68) 0.52 = 36.9 /
1.40 375
()2 = (175.88 12.68) 0.52 = 84.86 /

()3 = (335.28 12.68) 0.52 = 167.74 /

d) Las constantes de distribucin de cada uno de los esteres

=
273
36.9 1.02 375
= = 51.70
273
2 = 84.86 1.40 = 118.8

3 = 167.74 1.40 = 234.83

e) Un volumen de retencin correcto y el tiempo de retencin para el n-

hexanoato de metilo

logtR = 0.3286 * (#tomos de c) -0.7496

=0.3286*7 0.7496= 1.55

tR= 35.53 y tR = 35.53 + 0.30= 35.83min

==0.91535.8330.2=990

22.- Con los datos del problema 25.21 calcular

a) k para cada compuesto

b) los valores para cada par de compuestos adyacentes

c) el nmero de platos tericos y la altura de plato de la columna

d) la resolucin para cada par de compuestos adyacentes

2(() ())
= , = ,
+

1 2
= ( )( ), = 16 ( ) , =
4 1 +
 a)

aire, TN= 0,3

compuesto tR W k=(tR-tN)/tM

acetato de metil 1,98 0,19 5,6

propionato de metilo 4,16 0,39 13

butirato de metilo 7,93 0,79 25

b)

2,1 2,3

3,2 2

c) N=16(tR/w)2

compuesto 1 1738

compuesto 2 1820

compuesto 3 1612

promedio N 1723

longitud de
columna,cr 110

H=L/N 0,064

d)

compuesto2,1 7,5

compuesto 3,2 6,4

23.- La fase estacionaria lquida de la columna descrita en el problema 25.21 era

didecilftalato, un solvente de polaridad intermedia. Si en lugar de ste se hubiera
utilizado un solvente no polar como aceite de silicona. Los tiempos de retencin
de los tres compuestos seran mayores o menores?

Dado que los tres compuestos son relativamente polares, seran menos compatibles con
un disolvente no polar tal como un aceite de silicona que con didecilftalato. Puesto que
menos tiempo se gastara en la faseestacionaria para el aceite de silicona, trsera
ms pequeo.

24.- Los tiempos de retencin ajustados para los alcoholes etlicos, n-proplico y n-
butlico empleando una columna con relleno recubierto de aceite son 0.69, 1.51,
3.57. Predecir los tiempos de retencin para los dos miembros siguientes de la serie
homloga.

Etlico= 2c; n-proplico 3C; n-butlico= 4c

El tiempo de retencin aumenta con el nmero de carbonos, siendo el nmero en

aumento de tiempo de retencin un factor de 2.88

Los tiempos de retencin seran:

n-pentlico: 8.51

n-hexlico: 16.33

25 Cul sera en los siguientes casos el efecto sobre la altura de plato de una
columna? Justifique la respuesta.

a) Al aumentar el peso de la fase estacionaria en relacin al peso del relleno.

Aumento de Vs/Vm conduce a un aumento en el espesor de la pelcula df. Este aumento

provoca un aumento marcado en C su y por lo tanto un aumento en el H.

b) Al disminuir la velocidad de inyeccin de la muestra.

La reduccin de la tasa de inyeccin de la muestra dar lugar a la ampliacin de la

banda porque todas lasmolculas no comienzan a atravesar la columna en el mismo
instante. Reduccin de la capacidad y unaumento en los resultados de H.

c) Al aumentar la temperatura del bloque de inyeccin.

El aumento de la temperatura del puerto de inyeccin tender a disminuir H debido a la

misma velocidad deevaporacin se incrementar. Por lo tanto, la muestra se puede
poner en la columna en una banda estrechacon zona menos propagacin inicial.
d) Al aumentar el caudal.

El aumento de la velocidad de flujo puede causar aumenta o disminuye en H

dependiendo de la velocidad deflujo.

e) Al reducir el tamao de la partcula del relleno.

La reduccin del tamao de partcula aumenta la superficie y por lo tanto disminuye de

espesor de pelcula df en el trmino de la C su. Una disminucin en el tamao de las
partculas tambin hace que el trmino C mu ms pequeo. Ambos efectos conducen a
una altura plato ms pequeo

f) Al disminuir la temperatura de la columna.

Disminuyendo la temperatura disminuir las tasas de difusin Dm y Ds. El trmino

B/u se convierte mspequeo y los trminos de C su y C mu se convierten ms grandes
con la disminucin de los coeficientes de difusin. Esto puede conducir a un aumento
de H Si dominan los trminos C su y C mu o una disminucin de H si domina el
trminoB/u.

En la mayora de los casos, H aumenta a medida que la temperatura disminuye.

26.- Calcular los ndices de retencin para cada uno de los siguientes compuestos.

(1.29)
a) I= 100 [3 + (4 3) ]
1.29

I= 308.57
(2.21)
b) I= 100 [4 + (5 4) ]
2.21

I= 415.58
(4.10)
c) I= 100 [5 + (6 5) ]
4.10

I= 514.94
(7.61)
d) I= 100 [6 + (7 6) ]
7.61

I= 611.58
 (14.08)
e) I= 100 [7 + (8 7) ]
14.08

I= 708.15
(25.11)
f) I= 100 [7 + (8 7) ]
25.11

I= 705.55
(16.32)
g) I= 100 [7 + (7 4) ]
16.32

I = 722.29
(2.67)
h) I= 100 [7 + (7 4) ]
2.67

I= 747.92
(7.60)
i) I= 100 [4 + (4 3) ]
7.60

I= 411.58
(8.40)
j) I= 100 [6 + (6 4) ]
8.40

I= 622
(6.94)
k) I= 100 [6 + (6 4) ]
6.94

I= 624.24
(9.83)
l) I= 100 [3 + (4 3) ]
9.83

I= 310.97
 CUESTINARIO

1.- Nombrar los tipos de sustancias a los cuales se aplican fundamentalmente los
siguientes tipos de cromatografa.

Gas, lquido

Especies que son un poco voltiles y trmicamente estables.

Reparto entre lquidos

Especies moleculares que son permanentes o trmicamente inestables.

Reparto en fase inversa

Especies orgnicas de bajo o moderado peso molecular, no voltiles o trmicamente

inestables.

Intercambio inico

Sustancias que no son inicas.

Gel permeable

Compuestos de altos pesos moleculares que son solubles en disolventes no polares.

Filtracin sobre gel

Compuestos hidroflicos de alto peso molecular.

Gas slido

Gases de bajo peso molecular no polares.

Absorcin slido, lquido

No polares compuestos orgnicos de bajo peso molecular y especies orgnicas

particularmente ismeros.

Pares inicos

Iones orgnicos e inorgnicos pequeos

2.- Describa tres mtodos generales para mejorar la resolucin en la cromatografa
de reparto.

1) Ajuste de Ka y Kg mediante el empleo de una fase mvil de mltiples

componentes y la variacin de la revuelta de los disolventes de encontrar una
mezcla ptima.

2) Variacin en la composicin qumica del sistema solvente de manera tal que

ms grande.

3) Empleando un relleno diferente en que es mayor

3.- describa una forma de controlar el factor de capacidad de un soluto en la

cromatografa de reparto.

En cromatografa de reparto, k es variada convenientemente usando un sistema

componente solvente de dos(o ms) y variando la proporcin de los solventes.

4 Cmo se puede controlar el factor de selectividad en a) la cromatografa de

gases y b) lacromatografa de lquidos?

(a) en cromatografa de gases, es generalmente variada variando la columna

delrelleno.

(b) en LC,columna del rellenoy composicin qumica de la fase mvil pueden variar
para producir mejores valores .

5.- Al preparar un gradiente con benceno/acetona para una columna de HPLC de

almina, y al eluir la columna Es deseable aumentar o disminuir la proporcin de
benceno?

En cromatografa de adsorcin con un relleno de almina, es generalmente mejor

aumentar la polaridad de la fase mvil a medida que avanza la elucin. As la
proporcin de acetona con el benceno debe aumentarse a medida que avanza la elucin.
6.-Definir los siguientes trminos:

a) Difusor: Un difusor es un dispositivo, generalmente una superficie (por ejemplo

un revestimiento), que distribuye el sonido que incide sobre el mismo, en el
espacio y en el tiempo

b) Elucin isocrtica: En una elucin isocrtica, la composicin solvente se

mantiene constante a lo largo de la elucin.

c) Elucin con gradiente: En una gradiente elucin, se utilizan dos o ms

solventes y la composicin de la fase mvil va cambiando continuamente o en
pasos a medida que avanza la separacin.

d) Inyeccin con parada de flujo: En una inyeccin de flujo detenido, se detiene

el flujo de disolvente, se elimina un accesorio a la cabeza de la columna, y la
muestra se inyecta directamente en la cabeza de la columna. El accesorio se
sustituye a continuacin, y el bombeo se reanuda

e) Relleno pelicular: El relleno pelicular consiste de bolillas esfricas, no porosas,

de vidrio o polmero, con dimetros tpicos de 30 a 40 um. Para algunas
aplicaciones, se aplica un recubrimiento adicional, que consiste de una fase
estacionaria lquida que se mantiene adsorbida.

f) Ensanchamiento extracolumna: El ensanchamiento extracolumna se presenta

cuando el soluto se transporta a travs de tubos abiertos como los que se utilizan
en los sistemas de inyeccin, en la regin de los detectores y en los tubos que
conectan los distintos componentes del sistema.

g) Relleno de fase inversa: Un relleno de fase inversa es un relleno no polar que

se emplea en cromatografa de particin con una fase mvil relativamente polar.

h) Relleno de fase normal: En un relleno de fase normal, la fase estacionaria es

polar y la fase mvil es relativamente no polar

i) Detector de propiedades de la disolucin: Un detector de propiedad de la

solucin responde a alguna propiedad de la fase mvil (tales como la
conductividad trmica o elctrica) que se ve alterada por la presencia de analitos.

j) Detector de propiedades del soluto: Un detector de propiedad del soluto

responde a alguna propiedad de analitos, tales como la absorcin o fluorescencia

7.- Qu se entiende por intervalo de respuesta lineal de un detector?

El rango de respuesta lineal de un detector es el rango de concentracin de analito o

masa sobre el cual el detector responde linealmente. Es el mismo que el rango dinmico.
8.-Qu es la pre columna en la cromatografa de reparto?

Para aumentar la vida de la columna analtica, se coloca unapre columnaque elimina no

solo la materia en suspensin y los contaminantes de los solventes, sino tambin los
componentes de la muestra que se unen de manera irreversible a la fase estacionaria.

29.-En qu se parecen la cromatografa de reparto en fase normal y la

cromatografa de adsorcin?

La cromatografa de reparto en fase normal y la cromatografa de adsorcin son

similares en el sentido que las fases estacionarias en ambos son polares, mientras
que las fases mviles son relativamente no polares.

10.-Enumerar las caractersticas deseables para un detector de HPLC.

1. Debe tener un volumen interno mnimo con el fin de reducir el ensanchamiento

de banda y ser compatible con el flujo de lquidos.

2. Absorbancia.

3. Fluorescencia

4. Electroqumica

5. ndice de refraccin

6. Conductividad

7. Espectrometra de masas

8. IR de transformada de Fourier

9. Dispersin de la luz

10. Actividad ptica

11. Selectivo a elementos

12. Fotoionizacin.

11.- Describir algunas de las tcnicas que se utilizan para acoplar un cromatgrafo
de lquidos con un espectrmetro de masas.

Recipientes para la fase mvil y sistemas para el tratamiento de los disolventes

Un aparato moderno de HPLC se equipa con uno o ms recipientes de vidrio o de acero

inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500 mL de un disolvente. Los
recipientes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los gases disueltos -en
general oxgeno y nitrgeno- que interfieren formando burbujas en los sistemas de
deteccin.
Sistemas de bombeo

Los requisitos para un sistema de bombeo en HPLC son rigurosos e incluyen: (1) La
generacin de presiones por encima de 400 kg/cm2, (2) un flujo libre de pulsaciones, (3)
un intervalo de caudales de 0.1 a 10 mL/min, (4) el control y reproducibilidad del
caudal mejor del 0,5% relativo y (5) componentes resistentes a la corrosin (juntas de
acero inoxidable o tefln). Debe subrayarse que las altas presiones que generan las
bombas de HPLC no constituyen un riesgo de explosin, debido a que los lquidos no
son muy compresibles.

Amortiguadores de pulsos 4. Cromatografa de lquidos de alta resolucin

Muchos de los detectores utilizados en HPLC son sensibles a variaciones de flujo. Un

mtodo sencillo de amortiguacin contiene un fuelle flexible o un gas compresible en la
porcin superior cerrada de un tubo en T para absorber parte de la energa de pulsacin.
Cuando la bomba se rellena esta energa se libera para ayudar a suavizar la pulsacin de
presin.

12.- Enumerar las distintas propiedades y funciones de la fase mvil en la

cromatografa de gases y la de lquidos. Cmo influyen esas diferencias en las
caractersticas de los dos mtodos?

Fase mvil en cromatografa de gases:

Es habitual

Utiliza una fase estacionaria polar y una mvil no polar.

Utiliza disolventes polares

Fase mvil en cromatografa de lquidos:

Es un solvente lquido, el cual puede ser puro o una mezcla de solventes.

El tiempo de retencin aumenta con la adicin de disolvente polar a la fase

mvil y disminuye con la introduccin de disolventes ms hidrofbicos.

El lquido, se obliga a pasar a travs de l, por efecto de la gravedad.

En la cromatografa de gases la elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas
inerte. A diferencia de la cromatografa de lquidos, la fase mvil no interacta con las
molculas del analito; su nica funcin es la de transportar el analito a travs de la
columna.

13.-En una columna de reparto en fase normal, se encuentra que un soluto tiene un
tiempo de retencin de 29,1 min, mientras que una muestra no retenida tiene un
tiempo de retencin de 1,05 min cuando la fase mvil es un 50% en volumen de
cloroformo y un 50% en n-hexano. Calcular (a) K para el soluto y (b) una
composicin de disolventes que condujera a un valor de k por debajo de 10.

2 10(1 2 )
= . (1)
1 2
Donde P1 Y P2 son los ndices de polaridad de cloroformo y n-hexano,
respectivamente.

a) Usando la Ecuacin: = (2)

29,1 2,05
1 = = 26,7
1,05

b) Usando la Ecuacin: = + (3)

= 0,50 4,1 + 0,50 0,1 = 2,10

10
Sustituyendo en la Ec. (1): 26,7 = 10(2,1 2) /2

2 = 2 0,427 + 2,1 = 2,95

Sustituyendo P2 por PAB en la ecuacin (3) da:

2,95 = + 0,1

Donde A+ = 1,00

(2,95 0,1)
= = 0,712
4,0

As la mezcla deber ser CHCl3 el 71% y 29% n- haxano.

14.-La mezcla de disolventes del problema 26-13 no proporciona una separacin

satisfactoria de los dos solutos. Sugerir cmo se podra modificar la fase mvil
para mejorar la resolucin.

La fase mvil se podra mejorar aumentando el volumen del n- hexano, ya que de esta
manera se podr obtener una resolucin mucho ms equilibrada.

15.- Sugerir que tipo de cromatografa lquida que fuera adecuado para la
separacin de:
a) Cromatografa en fase inversa y de adsorcin.

b) Cromatografa de fase reversa

c) Cromatografa en plano bidimensional

d) Cromatografa de pares inicos

e) Cromatografa de exclusin molecular

16.- Qu es una columna supresora y que emplea?

Es una columna que reduce la elevada conductividad del eluyente colocada despus de
la columna analtica de intercambio inico.

Emplea una segunda resine de intercambio inico, que convierte eficazmente los iones
del disolvente en especies moleculares poco ionizadas.

17.- En una columna de gel de slice, se encuentra que un compuesto tiene

retencin de 28 min cuando la fase mvil es tolueno. Qu disolvente de
tetracloruro de carbono o cloroformo, sera ms probable que acortase el tiempo
de retencin? Justifique su respuesta

El cloroformo, porque se trata de una fase normal puesto que el gel de slice es polar y
el tolueno es una fase mvil no polar, la adicin de un compuesto levemente ms polar a
la fase mvil, esto har que se aumente la movilidad

18.- En una separacin de fase normal, predecir el orden de elusin de

(a) n-hexano, n-hexanol, benceno

(b) Acetato de etilo, dietilter, nitrobutano

(a) Hexano - Benceno n-Hexanol.

(b) Dietilter Acetato de etilo Nitrobutano.

19.- Para una separacin de fase inversa, predecir el orden de elusin de los solutos
del problema 18.

(a) N-Hexanol Benceno Hexano.

(b) Nitrobutano Acetato de etilo Dietilter.

20.- Estimar la constante de distribucin de los compuestos B y C en la figura 28-

27, si el volumen de retencin para el compuesto A es 5.1 ml y para el compuesto D
es de 14.2 ml.
5.1
= = K= 0.359
14.2

21.- Qu es un cromatograma de masas y como se obtiene?

Grfica de picos obtenida por la medicin de iones derivados de molculas.

22.- Dos picos cromatogrficos tienen anchuras de pico promedio de 9 s con un

caudal de 2.5 ml/min. Cul es el volumen mximo de muestras que pueden
tomarse para que la prdida de resolucin sea menor (a) 5 por 100 y (b) 20 por
100.

VR= tR * Fc

VR
F=
tR

VR
tR =
FC

2(t R )
Rs =
W

V
2( FR )
C
Rs =
W

2VR
Rs =
WFc
 WFC R s
VR =
2

9 0.04 0.05
VR1 =
2

VR1=9x10-3

9 0.04 0.2
2 =
2

VR2= 0.036