UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA
Facultad de Industrias Alimentarias- Dpto. Ingeniera de Alimentos y Productos Agropecuarios

Pruebas Biolgicas

CURSO: ALIMENTACIN Y NUTRICIN HUMANA

GRUPO DE PRCTICA: C*
PROFESORA: REPO CARRASCO

ALUMNOS:
AQUINO SEVILLANO, ANDREA
ARIAS POMALIMA, ANDREA
FACHIN MASUOKA, AKIRA
LOVERA FERNANDEZ, JOSEPH
PACHECO FERRER, CLAUDIA

LIMA-PER

2016
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I. MTODO DE LA DIGESTIBILIDAD

1.1. Digestibilidad

La digestibilidad es una forma de medir el aprovechamiento de un alimento, es

decir, la facilidad con que es convertido en el aparato digestivo en sustancias
tiles para la nutricin. Comprende dos procesos, la digestin que corresponde
a la hidrlisis de las molculas complejas de los alimentos, y la absorcin de
pequeas molculas (aminocidos, cidos grasos) en el intestino. (Manrquez,
2003).

La digestibilidad constituye un indicador de la calidad de la materia prima que a

veces vara notablemente, de una especie a otra; a priori se deberan esperar
valores muy distintos en las especies carnvoras, herbvoras u omnvoras. Si se
estudia en una especie dada, la influencia de la edad del animal, su estado
fisiolgico, e incluso la salinidad y la temperatura, a menudo se encuentran
diferencias, insignificantes. Por ejemplo, aunque el tiempo de trnsito del bolo
digestivo sea mucho ms breve en los animales pequeos que en los grandes,
la digestibilidad es la misma en los dos casos. La temperatura acelera el
trnsito sin afectar la utilizacin de las protenas. (Manrquez, 2003).

. Esta constancia se explica por dos condiciones:

a) Los dos procesos (hidrlisis y absorcin) son rpidos.

b) Casi nunca llegan a ser limitantes ya que los potenciales de hidrlisis y
de absorcin sobrepasan siempre las necesidades del animal.

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1.2. Digestibilidad de la protena

La digestibilidad es uno de los indicadores ms utilizados para determinar la

calidad de las protenas debido a que no todas son digeridas, absorbidas y
utilizadas en la misma medida. Las diferencias de digestibilidad pueden
deberse a factores inherentes a la naturaleza de las protenas alimentarias, a la
presencia de componentes no proteicos con influencia en la digestin (fibra de
la dieta, taninos, fitatos), a la presencia de factores antifisiolgicos o a las
condiciones de elaboracin, que pueden interferir en los procesos enzimticos
de liberacin de los aminocidos. La digestibilidad proteica se puede
determinar por varios mtodos entre ellos la digestibilidad in vivo ya sea
aparente o verdadera, directa o indirecta, y la digestibilidad in vitro utilizando
enzimas. (Malca, 2004).

1.2.1. Digestibilidad in vivo en ratas

La digestibilidad in vivo en ratas es un mtodo ampliamente utilizado para

determinar la calidad de los alimentos de uso humano. Teniendo en cuenta que
la rata posee una fisiologa digestiva similar a la de los caninos, se aplica
tambin en alimentos para perros. Sin embargo, la determinacin de la
digestibilidad en ratas presenta algunos inconvenientes como son: el tiempo de
su ejecucin (9 das), el alto costo, la mayor cantidad de alimento empleado y
el manejo de animales. (Malca, 2004)

Por otro lado Mrquez et al (2010) mencionan que hoy en da para la

medicina experimental, la rata y el ratn son modelos que ofrecen muchas
ventajas con respecto a otros, stas son: al tratarse de un mamfero, una gran
parte de sus procesos bioqumicos son similares al hombre, tienen un tiempo
generacional muy corto, son muy prolficos y se adaptan fcilmente a la vida en
los bioterios, lo que permite controlar las variables ambientales en las
experimentaciones. Comparte con el hombre el privilegio de ser la especie de
mamfero mejor estudiada desde el punto de vista gentico. Existen varios
mtodos para evaluar la calidad proteica de los alimentos y estn relacionados
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con la eficiencia con la que son usados para la sntesis y mantenimiento de la

protena tisular. Los mtodos biolgicos se fundamentan en el crecimiento de
ratas destetadas. La aplicacin de los valores de los ensayos biolgicos en
ratas, con respecto a la nutricin proteica es mayormente de tipo cualitativo

En la UNALM, exactamente en el bioterio, se realizan pruebas biolgicas in

vivo utilizando datos de la retencin del nitrgeno o balance de nitrgeno como
variable dependiente en la medicin de la calidad de protena, las cuales son:
valor biolgico, digestibilidad aparente y verdadera; desarrollndose en jaulas
metablicas.

- Digestibilidad de Nitrgeno Aparente ( DNap)

Se obtuvo de la relacin del nitrgeno del alimento consumido menos el

nitrgeno de heces con respecto al nitrgeno consumido, expresado en
porcentaje. Se asume que del total del nitrgeno de la dieta, lo que no se
absorbe en la digestin por el organismo se queda en las heces. Para
determinar el valor de digestibilidad de nitrgeno aparente en una dieta se
requiere calcular el contenido de nitrgeno del alimento; el alimento total
consumido, el nitrgeno en heces y el peso total de heces empleando la
siguiente expresin:

DN apa = (% Alimento consumido % de nitrgeno en heces / % de

nitrgeno en alimento consumido) * 100

Por otro lado Jimnez et al (1992), calculan el balance de nitrgeno y

digestibilidad aparente de la siguiente manera:

Balance de nitrgeno = N ingerido - (N fecal + urinario)

Digestibilidad Aparente = (N ingerido - N fecal) x 100 / N ingerido

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- Digestibilidad verdadera ( Dv)

Es el clculo real de la digestibilidad, ya que desestima el nitrgeno excretado

en las heces pero que no proviene de la dieta sino de enzimas digestivas o
descamacin intestinal. (Jimnez et al, 1992)

Dv= (NI- (NFT- NEF) / NI) * 100

Donde:

NI: nitrgeno ingerido

NFT: nitrgeno fecal total

NEF: nitrgeno endgeno fecal

II. MTODO PER

El mtodo PER (Relacin de Eficiencia Proteica). Segn Lpez, et al (2006). Es

la relacin entre el peso ganado de un animal por cada unidad de protena
dada en el alimento. Un alimento con mejor calidad de protena tendra mayor
tasa de eficiencia que otro con protena de menor calidad, es por esto que esta
prueba se realiza en todos los productos alimenticios que jueguen un papel
importante en el desarrollo de un individuo . Este mtodo es fcil de realizar,
pero los resultados no son proporcionales, debido a que tiene una duracin de
28 das, asumiendo que toda la protena consumida fue utilizada para el
crecimiento del animal; sin embargo en la realidad, parte de esta protena es
usada en mantener el balance de nitrgeno cero. Segn Silva et al (2003). En
esta prueba se comparan los resultados con una dieta basada en el consumo
de casena, esto debido a que la casena es considera una protena ideal, los
valores de las dems dietas son corregidas en funcin de esta y mientras ms
cercanas estn se las considera de mejor calidad. Para esto la alimentacin se

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formula con un 10% de protena, al ser varias formulaciones, la cantidad puede

ser variada.

La metodologa seguida segn Lpez, et al (2006) es:

- Las ratas son pesadas y distribuidas homogneamente de acuerdo al

mtodo de la culebra japonesa, eso quiere decir ubicadas una al lado
de la otra en peso ascendente.
- las ratas fueron alimentadas con una dieta de entre 375 a 400 kcal, con
un contenido de 10% de protena y agua a su disposicin, debido a que
con su ausencia no se alimentan.
- Las ratas se encuentran en jaulas individuales, en un ambiente
controlado a 24C y humedad relativa de 48, adems de 12 horas de luz
y 12 horas de oscuridad.
- Se debe controlar tanto la alimentacin como sus desperdicios, para
tener una cuantificacin final ms cercana a la realidad.
- La prueba tiene una duracin de 28 das.
- El peso se toma semanalmente.
- Finalizado los 28 das se realiza el clculo respectivo, teniendo en
cuenta la cantidad de alimento consumido y el peso ganado.

=

Dnde:
- P = Incremento de peso (en gramos)
- AI = Alimento ingerido total (en gramos)
- F = % de protena en la dieta/ 100
- PER exp.= Valor PER obtenido en el bioensayo.

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- PER Casena ref.= Valor de la casena de referencia = 2.5

- PER Casena exp. = Valor PER de la casena obtenido en el bioensayo.

III. MTODO NPU

La determinacin de NPU es una tcnica que se aplica en ratas consistente en

valorar la cantidad de protena fijada en su crecimiento durante diez das. la
estimacin de la protena fijada se realiza siguiendo la ecuacin de Bender y
Miller (1953), no por la dosificacin del nitrgeno sobre la canal de las ratas,
sino por la cantidad de agua fijada segn trabajos de dichos autores.

La medicin de la calidad de la protena tambin se determina mediante el

clculo de la cantidad de la misma que realmente utiliza un organismo. La
Utilizacin Neta de Protena (Net Protein Utilization, NPU) es el mtodo usado
ms frecuentemente para este fin. Se lleva a cabo mediante el balance de
nitrgeno (N), que est definido como la diferencia observada entre el nitrgeno
ingerido y el excretado.

El segundo es calculado como la suma de nitrgeno contenido en orina y

heces, y en prdidas a travs de diferentes vas, como piel y sudor. La
medicin del balance de nitrgeno es difcil, ya que representa una diferencia
pequea en trminos de cantidad de N consumido y excretado. Las diversas
prdidas de N son particularmente difciles de medir, y a menudo se asume que
son del orden de 5 - 8 mg / kg de peso por da.

Caloway y col. en 1971 midieron las prdidas de N en adultos sedentarios, y

encontraron un promedio de prdida de 9 mg / kg / da. En adultos sanos el
balance es de cero. Es negativo cuando existe ayuno y en algunas formas de
desnutricin proteico-energtica. Durante el crecimiento, la gestacin, y en
adultos que estn aadiendo masa muscular o recuperndose de alguna lesin
o enfermedad, el balance debe ser siempre positivo.

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El valor de NPU se calcul con la siguiente frmula:

NPU = (N muestra N conocido)/Ingesta de N

Donde:

N Muestra = Contenido de N corporal con la protena a probar

N Conocido = Contenido de N corporal con dieta libre N

El N corporal se hall multiplicando el contenido de N (%) por el peso de la

carcasa (g). La ingesta de N se halla multiplicando el contenido de N (%) por el
consumo de alimento (g). (Silva et al., 2003)

IV. MTODO NPR

Segn la Universidad de Sonora (s.f.) NPR o Razn Neta de Protenas fue

creado para solucionar ciertos problemas con el PER. Se fundamente en que
existe una relacin lineal para el incremento de peso del animal en funcin de
la calidad de la protena consumida. Este mtodo emplea adems del grupo de
animales alimentados con la dieta experimental, otro grupo de animales
alimentados con una dieta libre de nitrgeno (cero por ciento de protenas). El
grupo con dieta libre de nitrgeno se incluye para la correccin de incremento
de peso ya que no toda la protena se consume, se destina al crecimiento,
parte de ella se va a utilizar para mantener el balance cero (balance de
nitrgeno corporal). Una vez cubierta esta necesidad de nitrgeno, el resto de
nitrgeno proveniente de la protena dietara se utiliza para crecimiento.

Falcn et al (2006) indica que el NPR es un bioensayo de dos puntos, pues se

mide la respuesta a dos niveles de protena (10 por ciento de la protena
prueba y cero por ciento de una dieta libre de protena). En este sentido el NPR
sera mtodo mejor, al tomar en cuenta la protena de mantenimiento. As
mismo el NPR emplea cuatro individuos (2 machos y 2 hembras) por grupo
experimental y la diferencia en peso entre los grupos experimentales no debe
ser mayor de 1 g. Sin embargo en el Bioterio de la UNALM se utiliza 6 ratas por
grupo experimental siendo del grupo de ratas problema y ratas aproteicas,

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durando el experimento 15 das como lo realizado por Curi (2006) con 12 ratas
en total, todas machos.

Segn Universidad de Sonora (s.f.) el bioensayo es relativamente simple y fcil

de realizar. Los resultados obtenidos son proporcionales, permitiendo realizar
comparacin entre muestras basndose en su calidad proteica. Es
relativamente corto pues tiene una duracin de 14 das. Al incluir un grupo de
animales alimentados con un dieta libre de protenas, se introduce un ajuste
para corregir por la protena de la dieta empleada para mantener el balance
cero. Sin embargo este bioensayo aparentemente da resultados relativamente
elevados para protenas deficientes en lisina.

En el Bioterio se debe registrar la ganancia de peso de la protena problema as

como cuanto pierde de protenas. Para ello se registr el peso de cada rata a
diario, as como la comida residuo del comedero y la comida que cae en la
base de las jaulas como indica Curi (2006), hallando el NPR con la siguiente
formula

NPR = +
( )

V. CUESTIONARIO

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VI. CONCLUSIONES

- En el bioterio de la UNALM, se realizan pruebas biolgicas en relacin al

balance de nitrgeno tales como la digestibilidad verdadera y aparente.
- Las pruebas de digestibilidad en el bioterio de la UNALM, se desarrollan
en jaulas metablicas
- La relacin de eficiencia proteica indica la cantidad de protena usada
por el individuo para su crecimiento.

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- La relacin de eficiencia proteica puede bridar una visin aparente

debido a que no cuantifica la cantidad de protena empleada para
mantener el balance de nitrgeno.
- En el Bioterio de la UNALM se sigue la metodologa adecuada para
hallar en NPR.
- El NPR indica el incremento de peso del animal de prueba segn la dieta
problema y la dieta aproteica.

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