DETERMINACIN CUANTITATIVA DE COMPUESTOS EN FARMACOS POR

ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS USANDO SEGUNDA DERIVADA.

Mazabuel Solarte Gicela, Calvache Muoz Jean Pierre
Programa de qumica. Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educacin.
Universidad del Cauca.

Fecha de la prctica: 17/03/2017 Fecha de entrega: 02/04/2017

RESUMEN

El objetivo de este trabajo fue el desarrollo de un procedimiento analtico mediante espectrofotometra UV-Vis
para la determinacin y cuantificacin simultnea de cafena (CAF) y cido acetilsaliclico (AAS) en frmacos, estos
compuestos se combinan a menudo en las formulaciones farmacuticas de mltiples frmacos para mejorar el
valor farmacolgico de estas preparaciones. Debido a que los componentes muestran un importante grado de
solapamiento espectral, la cuantificacin se llev a cabo mediante el mtodo de la segunda derivada,
proporcionando estimaciones de concentracin muy cercanas a las reportadas por la casa farmacutica (Bayer), se
encontr que la cantidad en mg de CAF y AAS por tableta en el caso de la cafiaspirina corresponde a (52,143
3,023 y 530,955 5,564) respectivamente, mientras que para la aspirina forte los valores son (73,389 3,142 y
693,616 5,802) respectivamente.

Palabras clave: cafena, cido acetilsaliclico, espectrofotometra UV-Vis, mtodo de segunda derivada.

ABSTRACT

The objective of this work was the development of an analytical procedure using UV-Vis spectrophotometry for the
simultaneous determination and quantification of caffeine (CAF) and acetylsalicylic acid (ASA) in drugs, these
compounds are often combined in pharmaceutical formulations of multiple drugs to improve the pharmacological
value of these preparations. Because the components show a significant degree of spectral overlap, quantification
was carried out using the second derivative method, providing estimates of concentration very close to those
reported by the pharmaceutical company (Bayer), it was found that the amount in Mg of CAF and ASA per tablet in
the case of cafiaspirin correspond to (52,143 3,023 and 530,955 5,564) respectively, whereas for strong aspirin
the values are (73,389 3,142 and 693,616 5,802) respectively.

Key words: caffeine, acetylsalicylic acid, UV-Vis spectrophotometry, second derivative method.

1. INTRODUCCIN

La aspirina (tambin conocido como cido acetilsaliclico, AAS) es un analgsico eficaz e importante y agente
antipirtico. Esto compuesto se combina a menudo con la cafena (CAF) en las formulaciones farmacuticas de
mltiples frmacos para mejorar el valor farmacolgico de estas preparaciones. Debido a la utilizacin teraputica
de esta combinacin de frmacos, resulta altamente necesario desarrollar un mtodo rpido, simple y fiable para la
supervisin simultnea de sus cantidades en formulaciones farmacuticas.

Varios mtodos analticos han sido utilizados para la determinacin de AAS y CAF tales como
espectrofotometra [1] , espectrofluorimetra [2] , cromatografa [3] y la espectroscopia Raman [4]. un mtodo
analtico que ofrece precisin es la espectroscopia UV-Vis.

En esta ltima dcada han aparecido numerosos trabajos que demuestran las grandes posibilidades de esta
tcnica, pudiendo ser utilizada en todos aquellos casos en que el tratamiento cuantitativo de los espectros de orden
cero es difcil o incluso imposible, as como para la deteccin y localizacin de caractersticas espectrales de
componentes mal resueltos de espectros complejos y para la reduccin de interferencias debidas a la absorcin de
fondo [5]
La espectrofotometra de derivadas se ha utilizado no solamente para espectros ultravioleta-visible, sino tambin
en espectrofotometra infrarroja [6] absorcin atmica y fotometra de llama [7] y en espectrofluorimetra
convencional y sincrnica [8]. Como indicio del aumento de popularidad de la espectrofotometra de derivadas, se
puede sealar que la revista Analytical Chemistry ha introducido a partir de 1984, en sus nmeros dedicados a
revisar las publicaciones sobre espectrofotometra de absorcin UV-visible, un apartado dedicado a
espectrofotometra de derivada [9] Por otra parte, han sido numerosas las revisiones bibliogrficas aparecidas
sobre el tema. [10]

2. SECCIN EXPERIMENTAL
2.1 Reactivos

Cafena (C8H10N4O2, 99,9%). cido acetilsaliclico (C9H8O4, 99,9%). Etanol (CH3CHOH, 96%). Agua destilada.
Frmacos (cafiaspirina, aspirina forte)
2.2 Equipos

Espectrofotmetro UV-Vis (gnesis)

2.3 Metodologa

2.3.1 Preparacin de las curvas de calibracin de patrones de cafena y cido acetilsaliclico.

Se realizan los clculos necesarios para preparar una solucin madre de 50 ppm en un baln aforado de 50 mL
del estndar correspondiente teniendo en cuenta la pureza del reactivo; recuerde que si el reactivo no se
disuelve puede utilizar etanol para disolver el slido.
Posteriormente se toma alcuotas de esta solucin y se llevan a balones aforados de 10 mL para preparar
soluciones de 2,5; 5,0; 7,5; 10; 13,0; 15,0; y 17,0 ppm. Transferir estas soluciones a recipientes recolectores
para su posterior anlisis.
NOTA: Para las concentraciones de cada patrn se debe tener en cuenta la concentracin de cada frmaco, y
realizar as una curva de calibracin adecuada.
2.3.2 Preparacin de las soluciones de muestra problema
Inicie pesando una tableta de cada una las muestras a analizar (cafiaspirina y aspirina forte). Anote el peso.
Proceda a macerar las muestras en el caso que lo requieran para obtener un polvo que sea ms fcil de diluir.
Disuelva el peso de las muestras aproximadamente en 5 mL de agua, disuelva y posteriormente afore a 10 mL,
nuevamente en caso de notar que no hay una dilucin completa del analito proceda a agregar etanol hasta su
disolucin.
Previamente realice los clculos para los volmenes que debe tomar para preparar diluciones consecutivas con
factores de dilucin de 15, 20 y 25 en un volumen final de 10 mL. Preparar las soluciones correspondientes y
transferirlas a recipientes recolectores y rotularlos.
2.3.3 Determinacin de los valores de absorbancia para las muestras de productos comerciales
Calcular los valores de la Absorbancia por espectrofotometra UV-Vis realizando un barrido desde 220 nm
hasta 310 mn para los productos comerciales asignados y observar la absorbancia a la longitud de onda
mxima de los analitos que la componen. Calcular las absorbancias de sus diluciones a fin de establecer
parmetros de calidad.
 3. DATOS Y RESULTADOS
Graficas 1, 2, 3. Resultados obtenidos para patrn de cafena.

Curva patrn de cafena

1.2

0.8 2,5 ppm

Absorbancia
0.6 7,5 ppm
13 ppm
0.4
15 ppm
0.2
17 ppm
0
220 270
Longitud de onda (nm)

Primera derivada
0.06

0.04

0.02
2,5 ppm
0
A/

7,5 ppm
240 260 280 300 320
-0.02 13 ppmm
15 ppm
-0.04
17 ppm
-0.06

-0.08
/2

0.006
Segunda derivada

0.004

0.002
2,5 ppm
A/

0
240 260 280 300 7,5 ppm
-0.002 13 ppm

-0.004 15 ppm
17 ppm
-0.006

-0.008
/2
Graficas 4, 5, 6. Resultados obtenidos para patrn de cido acetil saliclico.

1 Curva patrn de cido acetisalicilico

0.9
0.8
0.7

Absorbancia
0.6 50 ppm
0.5 90 ppm
0.4 120 ppm
0.3 150 ppm
0.2 180 ppm
0.1 200 ppm
0
240 260 280 300 320
Longitud de onda (nm)

0.03
Primera derivada
0.02

0.01

0
260 270 280 290 300 310 50 ppm
A/

-0.01
90 ppm
-0.02 120 ppm
-0.03 150 ppm
180 ppm
-0.04 200 ppm
-0.05

-0.06
/2

0.006
Segunda derivada

0.004

0.002
50 ppm
A/

0 90 ppm
260 280 300 320 120 ppm
-0.002 150 ppm
180 ppm
-0.004 200 ppm

-0.006
/2
Graficas 7, 8, 9,10. Resultados obtenidos para las muestras (cafiaspirina- aspirina forte).
Cafiaspirina:

Primera derivada
0.03
0.02
0.01
0

A/
-0.01 250 270 290 310

-0.02
-0.03
-0.04
-0.05
/2

0.005
Segunda derivada cafiaspirina
0.004
0.003
0.002
0.001
A/

0
-0.001 250 270 290 310
-0.002
-0.003
-0.004
-0.005
/2

Aspirina forte:

0.03
Primera derivada
0.02
0.01
0
A/

250 270 290 310

-0.01
-0.02
-0.03
-0.04
-0.05
/2
 Segunda derivada aspirina forte
0.006

0.004

0.002

A/
0
250 270 290 310
-0.002

-0.004

-0.006
/2

Con los datos obtenidos de la segunda derivada para cada muestra se encuentra el valor de absorbancia a la
respectiva longitud de onda de la cafena y cido acetilsaliclico, que se representan a continuacin:

Tabla 1. Resultados obtenidos a partir de la segunda derivada de cada muestra.

Muestra Cafena (276,5 nm) cido acetilsaliclico (278,5 nm)
Cafiaspirina -0,00430 -0,00416
Aspirina forte -0,00466 -0,00418

Posteriormente se grafica con los datos obtenidos de la segunda derivada de cada patrn, para hallar la
respectiva ecuacin de grafica que servir para encontrar la concentracin de cada compuesto en las muestras
problemas:
Grafico 11,12. Resultados obtenidos a partir de la segunda derivada para las curvas de estndares.

Curva de acido acetilsalicilico Curva de cafeina

0 0
0 100 200 300
-0.001 -0.001 0 5 10 15 20
-0.002
Absorbancia
Absorbancia

-0.002 y = -3E-05x + 0.0003

R = 0.9691 -0.003
-0.003
-0.004
-0.004 -0.005
y = -0.0003x + 8E-05
-0.005 -0.006
R = 0.9568
-0.007
-0.006 concentracin (ppm)
concentracin (ppm)

Comenzando con la cafiaspirina, se toman los datos de la tabla 1 y se halla la concentracin de cada
compuesto:
= 3 105 + 0,0003 (1)
= 0,0003 + 8 105 (2)
Donde y= -0,0043 en (1) corresponde a la absorbancia obtenida para la cafena, por tanto se despeja de la
ecuacin:
0,0043 0,0003
= = ,
3 105

De la misma forma se realiza el clculo para la concentracin de cido acetilsaliclico:

 0,00416 0,0003
= = ,
3 105
Seguidamente se realiza el mismo procedimiento para aspirina forte, obteniendo los siguientes resultados:
= ,
= ,
Para hallar la concentracin real de cada componente en la pastilla inicial, se tiene en cuenta que la
concentracin anteriormente hallada corresponde a los 10 mL de solucin preparada a partir de una solucin
madre de 50 mL de cada pastilla.
En la tabla que se presenta a continuacin se expresan los valores de peso en gramos de cada una de las
pastillas experimentalmente y lo reportado por la farmacutica (Bayer).

Tabla 2. Resultados obtenidos para cada muestra comparados con los datos tericos.

Muestra Peso (g) Concentracin de CAF Concentracin de AAS Concentracin Concentracin

(tableta por (mg/tableta) (mg/tableta) terica de CAF terica de AAS
unidad) (mg/tableta) (mg/tableta)
Cafiaspirina 0,6530 52,1433,023 530,9555,564 50 500
Aspirina forte 0,8551 73,3893,142 693,6165,802 65 650

Teniendo en cuenta el contenido de cafena y de cido acetilsaliclico reportado por la farmacutica

correspondiente, se halla el porcentaje de error en esta determinacin experimental, de tal forma que:
Cafiaspirina:
cido acetilsaliclico
530,955 500
% = 100% = 6,191 %
500
Cafena
52,143 50
% = 100% = 4,286 %
50
Aspirina forte:
cido acetilsaliclico
693,616 650
% = 100% = 6,710 %
650
Cafena
73,389 65
% = 100% = 12,906 %
65

4. DISCUSIN DE RESULTADOS

Para empezar a analizar es importante resaltar que la diferenciacin de los espectros de absorcin tienen unas
ventajas importantes para la espectroscopia de ultravioleta-visible ya que permite obtener informacin tanto
cualitativa como cuantitativa de espectros con bandas no resueltas como es el caso de la determinacin de Cafena
y cido acetil saliclico en muestras de frmacos comerciales (Cafiaspirina y Aspirina Forte de Bayer).

Al realizar una comparacin de los resultados obtenidos por el mtodo de las derivadas se tiene que una banda de
absorcin de un espectro de orden cero, permite la identificacin de la sustancia analizada slo a travs de la
posicin del mximo de absorcin como nico punto de referencia, este mximo en bandas de absorcin anchas,
solo puede ser fijado de una manera aproximada. Ese punto de referencia nico que posee un pico de absorcin
normal, contrasta con los tres puntos de referencia de un espectro de primera derivada (mximo, mnimo y corte
con abscisas) o bien, con los cinco puntos de referencia de un espectro de segunda derivada.
Los resultados obtenidos son el producto de la eleccin de uno de los mtodos para la obtencin o medicin de la
seal analtica en los espectros derivados los cuales son a) el mtodo de la tangente b) Medida de la separacin
entre picos y c) Medida de la altura hasta la lnea base, para esta determinacin result conveniente el uso del
mtodo c), el cual se mide la separacin entre el mximo y la lnea de cero.

Al observar los espectros obtenidos se deduce que el ruido aumenta conforme lo haga el orden de la derivada. Esto
se traduce a una disminucin de la relacin seal /ruido, la cual se podra considerar como una pequea
desventaja del mtodo, pero por otro lado se tiene tambin ventajas tales como que la primera derivada del
espectro es muy til para determinar la posicin exacta de los mximos de absorcin del espectro normal, el cual
est determinado exactamente por el corte con el eje de abscisas, otra ventaja importante de analizar es que se
presenta mejor resolucin de los espectros ya que suele ser ms conveniente emplear la segunda derivada ya que
los mximos y mnimos del espectro normal y los de la segunda derivada aparecen casi a las mismas longitudes de
onda y la estructura fina del espectro se pone mejor de manifiesto que en la primera derivada. La ventaja y
aplicacin ms importante es la determinacin cuantitativa de mezclas en este caso para los analitos ya
mencionados ya que la utilizacin de la derivada de un espectro permite, bajo ciertas condiciones, hacer
determinaciones cuantitativas con errores pequeos [6], como se muestra en la tabla 2.

Los valores de concentracin obtenidos para la cafiaspirina fueron de (52,143 3,023 y 530,955 5,564) para la
CAF y AAS respectivamente, mientras que para la aspirina forte fueron de (73,389 3,142 y 693,616 5,802) para
la CAF y AAS respectivamente, estos valores difieren en un porcentaje de error pequeo (tal como se observa en
los resultados anteriormente expuestos) al compararlo con la concentracin reportada por la farmacutica Bayer
para cada analito en cada tableta como se registra en la tabla 2, lo cual lleva a la conclusin que este mtodo es muy
til para la determinacin de mezclas de analitos los cuales presentan absorcin a longitudes de onda cercanas
como es el caso de la cafena y el cido acetilsaliclico.

1. CONCLUSIONES.

Se logr comprender el fundamento terico y practico del uso de la espectrofotometra de segunda derivada para
la cuantificacin de mezclas de analitos los cuales absorben a longitudes de onda cercanas como es el caso de la
cafena y el cido acetilsaliclico, logrando realizar dicha determinacin con valores de concentracin cercanos a los
reportados por Bayer con porcentajes de error bajos, lo cual hace muy til el uso de este mtodo. Esta tcnica
permite incrementar considerablemente dos aspectos bsicos en cualquier tcnica analtica: la sensibilidad y la
selectividad; simplificando con ello notablemente la metodologa analtica para muchos problemas, pues permite
su resolucin de forma directa, esto es, sin tener que efectuar separaciones.

2. BIBLIOGRAFIA

[1] Y. Yamauchi, A. Nakamura, I. Kohno. Simple and rapid UV spectrophotometry of caffeine in tea coupled with
sample pre-treatment using a cartridge column filled with polyvinylpolypyrrolidone (PVPP). Chem Pharm Bull, 56
(2008), pp. 185188

[2] J.C.L. Alves, R.J. Poppi. Simultaneous determination of acetylsalicylic acid, paracetamol and caffeine using solid-
phase molecular fluorescence and parallel factor analysis. Anal Chim Acta, 642 (2009), pp. 212216

[3] D. Emre, N. zaltn. Simultaneous determination of paracetamol, caffeine and propyphenazone in ternary
mixtures by micellar electrokinetic capillary chromatography. J Chromatogr B, 847 (2007), pp. 126132

[4] J. Cuzick, F. Otto, J.A. Baron. Aspirin and non-steroidal anti-inflammatory drugs for cancer prevention: an
international consensus statement. Lancet Oncol, 10 (2009), pp. 50150

[5] O'Haver, T.C. y Creen, C.L., Ztern. Lab., 5/6, 11 (1975); O'Haver, T.C. y Green, C.L., AnaL Chem., 48,312 (1976);
Fell, A.F., Smith, C., AnaL Proc., 19,28 (1982).
[6] McWilliam, I.C., Anal Chem., 41,674 (1969); McWilliam, LC. y Overland, J., AppL Opt., 6,457 (1967)

[7] Snelleman, W., Rains T.C., Yee, RW., Cook, H.D. y Meins, O., AnaL Chem., 42,394 (1970); Fowler, W.K., Knapp,
D.O. y Winefordner, J.D., AnaL Chem., 46, 601 (1974).

[8] Green, C.L. y O'Haver, T.C., AnaL Chem., 46,2191 (1974); O'Haver, T.C., en Whery, E.L. (ed.), Modern
Ffuorescense Spectroscopy, 1,6581, Plenum Press New York (1976); John, P. y Soutar, l., AnaL Chem., 48,520
(1976); Capitn, F., Navaln, A., Manzano, E., Capitn-Vallvey, L.F. y Vilchez, J.L., Fresenius, J. AnaL Chem., en
prensa (1992).

[9] Hargis, L.G. y Howell, J.A., ibid, 56, 225 R (1984); Idem., ibid., 58, 108 R (1986); Idem., ibid., 60, 291 (1988)

[10 ][Frans, S.D. y Harris, J.M., AnaL Chem., 57,2680 (1985)]

[11] Introduccion a la espectrometria de Derivadas P.L. Lpez-de-Alba y L. Lpez-Martnez, Educacion Quimica

Volumen 1. Guanajuato Mexico (1993). 160-165.