La maduracin del epiddimo

de los espermatozoides en el
murcilago orejudo mexicano
( Corynorhinus Mexicanus )
Mara Isabel Cervantes ,Edith Arenas-Ros ,Len-Galvn Miguel ngel ,Lpez-Wilchis
Ricardo ,Ambriz Demetrio yRosado Adolfo
Pginas 196-204 | Recibido el 21 de abril de 2008, aceptado el 18 de mayo de 2008, publicado en lnea: 09 de
julio de 2009
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http://dx.doi.org/10.1080/19396360802334466

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Introduccin
Resultados

Discusin

materiales y mtodos

Expresiones de gratitud

Referencias

Abstracto
El almacenamiento prolongado de espermatozoides epididimarios
en murcilagos vespertilinidos y rinfilos proporciona un interesante
modelo experimental para el estudio de la maduracin epididimaria de los
espermatozoides. Examinamos la presencia de la gota citoplasmtica, y la
induccin secuencial de la capacitacin y la reaccin acrosmica en
espermatozoides obtenidos de diferentes regiones del epiddimo (caput,
corpus, cauda) a lo largo del ciclo reproductivo anual de Corynorhinus
mexicanus ( C. mexicanus ). Este es un murcilago vespertilionid que
almacena los espermatozoides en el epiddimo durante varios meses
despus de la regresin de los testculos. El nmero de espermatozoides
recuperados de las diferentes regiones del epiddimo indica que el trnsito
epididimal en C. mexicanuses rpido Se observ la persistencia de un alto
porcentaje de espermatozoides con gota citoplsmica en el epiddimo
caudal, adems de un bajo ndice de capacitacin y reaccin acrosmica en
los espermatozoides obtenidos del corpus epiddimo. Hubo un aumento
significativo en el porcentaje de espermatozoides capacitados y
acrosmicos reaccionados durante el almacenamiento de clulas
espermticas en la cauda epididimia y el porcentaje de espermatozoides
capacitados fue consistentemente y significativamente mayor ( p <0.05) en
cauda en comparacin con el cuerpo epiddimo en todas las fechas
estudiadas. El proceso de maduracin epididimal en C. mexicanus se
completa en la regin caudal de este rgano que abarca un perodo
significativo. Nuestros resultados tambin indican que en C. mexicanus , y
en otrosLos murcilagos vespertilinidos y rinolofdicos que muestran la
misma asincrona temporal en la funcin de los rganos reproductores
masculinos, las fases finales de maduracin y almacenamiento del
epiddimo son, aparentemente, independientes de la funcin testicular.
Palabras clave: reaccin acrosmica , murcilagos , capacitacin , maduracin
epididimal , almacenamiento de esperma
Introduccin

Se ha informado que en algunos murcilagos vespertilinidos y rinfilos ,

mientras que el desarrollo de testculos y la espermatognesis tienen lugar
principalmente en verano, el desarrollo de glndulas sexuales accesorias, la
expresin de la libido y la actividad reproductiva tienen lugar en el otoo
despus de que los testculos han retrocedido totalmente [Krutzsch
[ 2000].Krutzsch P. H . Anatoma, fisiologa y ciclicidad del tracto
reproductivo masculino . Biologa Reproductiva de los
Murcilagos, EG Crichton , PH Krutzsch . Prensa
acadmica , Londres 2000 ; 91 - 155 [Google Scholar] ]; Len-Galvn et
al. [2005Len-Galvn MA , Lpez-Wilchis R. , Hernndez PO , Arenas RE ,
Rosado A . Ciclo reproductivo masculino de los murcilagos orejudos
mexicanos, Corynorhinus mexicanus (chiroptera:
vespertilionidae) . Southwest Nat 2005 ; 50: 453 - 460 [Google
Scholar] ]]. Esta importante asincrona temporal entre el desarrollo y la
funcin de los rganos reproductores primarios y secundarios masculinos
debe ir acompaada de modificaciones importantes en la fisiologa
reproductiva del epiddimo. Los espermatozoides, producidos durante la
espermatognesis activa, deben almacenarse principalmente en la cauda
epiddima durante periodos que pueden extenderse durante varios meses,
aparentemente sin una funcin testicular adecuada [Racey and Entwistle
[2000].Racey PA , Entwistle C. A . Historia de vida y estrategias
reproductivas de murcilagos . Biologa reproductiva de
murcilagos, EG Crichton , PH Krutzsch . Academic
Press , Londres 2000 ; 363 - 414 [Google Scholar] ]]. Mientras que el
almacenamiento prolongado de espermatozoides puede ser solo una
consecuencia natural de la hibernacin de la hipotermia, ahora se sabe que
hay varias especies de murcilagos tropicales no hibernantes
(vespertilionidos) que muestran el almacenamiento del esperma epididimal
[Gopalakrishna y Bhatia
[1980]Gopalakrishna A. , Bhatia D . Almacenamiento de espermatozoides
en el epiddimo del murcilago Hipposideros speoris (Schneider) . Curr
Sci 1980 ; 49: 951 - 953 [Google Scholar] ]; Karim y Banerjee
[1985Karim KB , Banerjee S . Almacenamiento de espermatozoides en el
epiddimo del murcilago tropical, Rhinopoma hardwickei
hardwickei (gris) . Anat Rec 1985 ; 211: 95A [Google Scholar] ]; Singh y
Krishna [1995Singh K. , Krishna A . Efectos inhibidores de la melatonina
sobre la testosterona, pero no sobre la produccin de androstenediona
durante el invierno en el murcilago vespertilinido , Scotophilus heathi . J
Pineal Res 1995 ; 19 (3) 127 - 132 [Google Scholar] ]]. Adems, muchas de
estas especies que almacenan espermatozoides no hibernan sino que solo
muestran fases peridicas de letargo durante el perodo de hibernacin
[Avery [1985].Avery M. I . Actividad de invierno de los murcilagos
pipistrelle . J Animal Ecol 1985 ; 54 (3) 721 - 738 [Google Scholar] ]; Lpez-
Wilchis[1989]Lpez-Wilchis, R. (1989). Biologa de Plecotus mexicanus
(Chiroptera: Vepertilionidae) en el Estado de Tlaxcala. Mjico. Tesis
doctoral, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Mxico. [Google
Scholar] ].

El almacenamiento prolongado de espermatozoides del epiddimo es

interesante si tenemos en cuenta que los cambios anatmico-funcionales
conocidos como maduracin epididimal se desarrollan gradualmente a
medida que las clulas espermticas progresan desde el caput hacia las
regiones caudal del epiddimo de una manera especfica para la especie
[Yanagimachi [ 1994].Yanagimachi R . Fertilizacin de mamferos . La
fisiologa de la reproduccin, E. Knobil , JD Neill . Raven Press , Nueva
York 1994 ; 189 - 317 [Google Scholar] ]]. Estas importantes propiedades
fisiolgicas de las clulas espermticas de los mamferos necesarias para la
fertilizacin incluyen: la prdida de gotas citoplsmicas, el potencial de
moverse progresivamente [Orgebin-Crist [1987]Orgebin-Crist M.
C . Desarrollo posttesticular de espermatozoides de mamferos . Base
morfolgica de la funcin de reproduccin humana, DM de
Kretser , O. Spera . Acta Medica, Plenum Press , Nueva
York 1987 ; 115 - 174 [Google Scholar] ]; Yanagimachi
[1994Yanagimachi R . Fertilizacin de mamferos . La fisiologa de la
reproduccin, E. Knobil , JD Neill . Raven Press , Nueva
York 1994 ; 189 - 317 [Google Scholar] ]], potencial de capacitacin [de
Lamirande et al. [1997de
Lamirande E. , Jiang H. , Zini A. , Kodama H. , Gagnon C . Especies
reactivas de oxgeno y fisiologa de los espermatozoides. Rev
Reprod 1997 ; 2: 48 - 54[Crossref] , [PubMed] , [Google Scholar] ]], la
capacidad de experimentar la reaccin acrosmica [Brucker y Lipford
[ 1995]Brucker C. , Lipford G. B . La reaccin acrosmica del esperma
humano: Fisiologa y mecanismos reguladores . Una actualizacin. Hum
Reprod Update 1995 ; 1: 51 - 62 [Google Scholar] ]], e interactuar con la
zona pelcida del huevo [Bedford [1998]Bedford J. M . La fecundacin de
los mamferos ha sido mal interpretada La penetracin espermtica de la
zona pelcida euteriana es poco probable que sea un evento ltico . Biol
Reprod 1998 ; 59: 1275 - 1287 [Google Scholar] ]]. La maduracin del
epiddimo en la mayora de las especies de mamferos estudiadas hasta la
fecha, incluido el humano, depende de la secrecin de andrgenos por los
testculos y requiere aproximadamente 10-20 das [Holland et
al. [1992Holanda MK , Vreeburg JTM , Orgebin-Crist M. C . Regulacin
testicular de la secrecin de protena epididimal . J
Androl 1992 ; 13: 266 - 273 [Google Scholar] ]; Orgebin-Crist [1996Orgebin-
Crist M. C . Andrgenos y funcin epididimal . Farmacologa, Biologa y
Aplicaciones Clnicas de
Andrgenos, S.Bhasin , HL Gabelnick , JM Spieler , RS Swerdloff , C. Wang
. Wiley-Liss, Inc. , Nueva York, 1996 ; 27 - 38 [Google Scholar] ]; Moore y
Akhondi [1996]Moore HDM , Akhondi M. A . Maduracin in vitro de
espermatozoides de mamferos . J Reprod Fertil 1996 ; 1 (1) 54 - 60 [Google
Scholar] ]]. La maduracin epididimaria es necesaria para adquirir motilidad
progresiva y potencial de capacitacin, para reconocer la zona pelcida y
finalmente para experimentar la reaccin acrosmica [Cooper
[1986].Cooper, T. G . El epiddimo, la maduracin de esperma y la
fertilizacin. Springer-Verlag , Berln 1986 , p. 240. [Google Scholar] ]]. La
maduracin adecuada de los espermatozoides asegurar la fertilizacin del
ovocito. En general, la maduracin epididimal se logra durante el transporte
de los espermatozoides a travs de la porcin inicial del epiddimo, caput y
corpus, de modo que cuando los espermatozoides llegan a la cauda estn
maduros, es decir, han perdido la gota citoplsmica y deben ser totalmente
capaces de capacitarse, y la reaccin acrosomal. Esto puede evaluarse
mediante la presentacin de espermatozoides maduros aprocedimientosin
vitrobien probados[Garca-Macedo et al. [2001Garca-
Macedo R. , Rosales AM , Hernndez-Prez O. , Chavara ME , Reyes A. ,
Rosado A . Efecto de Bafilomycin A-1, un inhibidor especfico de las
ATPasas vacuolares en la capacitacin de los espermatozoides de
conejo . Andrologia 2001 ; 33: 113 - 121 [Google Scholar] ]; valos-
Rodrguez et al. [2004valos-Rodrguez A. , Ortiz-Muz AR , Ortega-
Camarillo C. , Vergara-Onofre M. , Rosado-Garca A. , Rosales A.
M . Estudio fluoromtrico de la asimetra de la fosfolpida de la membrana
de la cabeza del espermatozoide del conejo durante la capacitacin y la
reaccin acrosmica utilizando Annexin-V FITC . Arch
Androl 2004 ; 50: 273 - 285[Taylor & Francis Online] , [Google Scholar]]]. Al
llegar a la cola, el epiddimo proporciona un microambiente adecuado en el
que los espermatozoides estn protegidos durante el almacenamiento. Por
lo general, esta estancia prolongada de los espermatozoides en la cola del
epiddimo depende de la funcin endocrina testicular.

La ocurrencia de almacenamiento prolongado de espermatozoides

epididimarios ha sido reportada en el murcilago de orejas grandes
mexicano, Corynorhinus mexicanus , Allen 1916, un vespertilionido que
pertenece al grupo que solo experimenta letargo durante el perodo de
hibernacin. Su ciclo reproductivo anual implica una importante asincrona
temporal entre el desarrollo y la funcin testicular y epididimal [Lpez-
Wilchis [1989]Lpez-Wilchis, R. (1989). Biologa de Plecotus mexicanus
(Chiroptera: Vepertilionidae) en el Estado de Tlaxcala. Mjico. Tesis
doctoral, Universidad Nacional Autnoma de Mxico, Mxico. [Google
Scholar] ; Geiser y Ruf [1995]Geiser F. , Ruf T . Hibernacin versus letargo
diario en mamferos y aves: variables fisiolgicas y clasificacin de patrones
de letargo. Physiol Zool 1995 ; 68 (6) 935 - 966 [Google Scholar] ]; Len-
Galvn et al. [2005Len-Galvn MA , Lpez-
Wilchis R. , Hernndez PO , Arenas RE , Rosado A . Ciclo reproductivo
masculino de los murcilagos orejudos mexicanos, Corynorhinus
mexicanus (chiroptera: vespertilionidae) . Southwest
Nat 2005 ; 50: 453 - 460 [Google Scholar] ]]. Esto hace queC. mexicanus
seaun buen modelo para estudiar la maduracin de los espermatozoides del
epiddimo en mamferos estacionales. Presentan una asincrona temporal
entre el desarrollo y la funcin de los rganos reproductores primarios y
secundarios masculinos. Por esta razn, evaluamos el nmero, la viabilidad,
la presencia de gotas citoplsmicas, el potencial de capacitacin y la
reaccin acrosmica en los espermatozoides obtenidos de diferentes
regiones del epiddimo (caput, corpus y cauda) a lo largo del ciclo
reproductivo anual deC. mexicanus.

Resultados

La recrudescencia de Testes se observ claramente en mayo y alcanz un

peso mximo en agosto ( Fig. 1 ). Luego, los testculos experimentaron una
profunda involucin y se volvieron totalmente en regresin en noviembre
( figura 1 ). El crecimiento del rgano epididimario comenz en junio, el
tamao mximo se alcanz en septiembre y luego se produjo una involucin
gradual hasta su tamao ms pequeo en febrero. Tambin se observ una
asincrona clara entre las regiones del epiddimo y el desarrollo. El caput
alcanz su crecimiento mximo en septiembre, mientras que la regin
caudal mostr el peso mximo en octubre ( Fig. 1).) La involucin de
Epididymis caput ocurri al menos un mes antes de la regresin asociada
de la cauda. Cauda epididymis, aplastado en murcilagos no reproductores
se hincha y bulbo durante el otoo cuando estaba lleno de espermatozoides
[Len-Galvn et al. [1999]Len-Galvn MA , Lpez-
Wilchis R. , Hernndez PO , Arenas RE , Rosado A . Ciclo reproductivo
masculino de los murcilagos orejudos mexicanos, Corynorhinus
mexicanus (chiroptera: vespertilionidae) . Southwest
Nat 2005 ; 50: 453 - 460 [Google Scholar] ].

Figura 1 Cambios en la masa testicular y epididimal (caput y cauda) del

macho adulto Corynorhinus mexicanus durante el ciclo reproductivo
anual. Las barras indican la media SE y los valores entre parntesis
indican el nmero de murcilagos. Diferentes letras indican diferencias
estadsticamente significativas ( P <0.05) entre los valores en el mismo
trazo (ANOVA ms la prueba post hoc de Bonferroni aplicada a los datos del
segmento de testculo y epiddimo). Las inserciones muestran imgenes de
la regresin de los testculos macroscpicos en Corynorhinus mexicanus :
(a) testculos de murcilagos machos capturados el 18 de agosto, cuando
se observa el tamao mximo, y (b) testculos de murcilagos machos
capturados el 30 de octubre, cuando se produce una regresin
completa. Las unidades mtricas indican milmetros.
Mostrar tamao completo

La recuperacin de espermatozoides de las diferentes regiones del

epiddimo sugiere que el trnsito de espermatozoides a travs del epiddimo
en C. mexicanus es rpido [Peirce and Breed [ 2001]Peirce EJ , raza W.
G . Un estudio comparativo de la produccin de esperma en dos especies
de roedores de la zona rida australiana (Pseudomys australis, Notomys
alexis) con marcadas diferencias en el tamao de los
testculos . Reproduccin 2001 ; 121: 239 - 247 [Google Scholar] ]]. El
nmero de espermatozoides siempre fue bajo en la poblacin y en el
corpus, nunca excediendo los 30 millones (Tabla 1), mientras que en Cauda,
incluso en el momento ms temprano evaluado ya era de 77.2 millones,
alcanzando ~ 200 millones a fines de septiembre. Las clulas espermticas
casi han desaparecido en el caput epiddimo a principios de octubre, y en el
corpus a fines de este mes, manteniendo altas concentraciones en la cauda
(Tabla 1). El porcentaje de clulas espermticas con una gota citoplsmica
fue alto en el epiddimo caudal (~ 20%) en septiembre y luego disminuy de
forma constante alcanzando valores casi nulos a fines de octubre (Tabla
1yFigura 2).

Determinacin del nmero de clulas de esperma

recuperadas de regiones epididimarias en fechas
seleccionadas, y porcentaje de espermatozoides con una
gota citoplsmica
Tabla de visualizacinCSV

Figura 2 C. mexicanus spermatozoa. Con gota citoplsmica (A, flecha). (B)

Clulas espermticas que muestran un alto porcentaje con gotas
citoplsmicas en la cauda epididimis (~ 20%) en septiembre, que
disminuyen constantemente, alcanzando casi cero a fines de octubre.

Mostrar tamao completo

Los espermatozoides de C. mexicanus respondieron satisfactoriamente

cuando se sometieron a capacitacin en las condiciones utilizadas para
otras clulas espermticas de mamferos [Garca-Macedo et
al. [ 2001Garca-Macedo R. , Rosales AM , Hernndez-Prez O. , Chavara
ME , Reyes A. , Rosado A . Efecto de Bafilomycin A-1, un inhibidor
especfico de las ATPasas vacuolares en la capacitacin de los
espermatozoides de conejo . Andrologia 2001 ; 33: 113 - 121 [Google
Scholar] ]; valos-Rodrguez et al. [2004valos-Rodrguez A. , Ortiz-
Muz AR , Ortega-Camarillo C. , Vergara-Onofre M. , Rosado-Garca A. , R
osales A. M . Estudio fluoromtrico de la asimetra de la fosfolpida de la
membrana de la cabeza del espermatozoide del conejo durante la
capacitacin y la reaccin acrosmica utilizando Annexin-V FITC . Arch
Androl 2004 ; 50: 273 - 285[Taylor & Francis Online] , [Google
Acadmico] ]], es decir, la incubacin durante 6 horas a 39 C bajo un 5%
de CO2atmsfera de aire / 95%, en presencia de Ca 2,5 mM2+. Despus de
teir con clortetraciclina, los espermatozoides capacitados se distinguieron
fcilmente por la presencia de fluorescencia brillante en la regin del
acrosoma ( Fig. 3A y B , flechas). Es importante sealar que la regin del
cuello de la mayora de las clulas espermticas est brillantemente teida
por la clortetraciclina ( Fig. 3A ).

Figura 3 Capacitacin de espermatozoides de C. mexicanus . Los

espermatozoides fueron sujetos a la reaccin de capacitacin durante una 6
h de incubacin a 39 C bajo un 5% de CO 2 atmsfera de aire / 95%, en
presencia de Ca 2,5 mM 2+. La evaluacin del porcentaje de
espermatozoides capacitados se realiz mediante el mtodo de
fluorescencia de la clorotetraciclina (CTC). El porcentaje de esperma
capacitado se observ a gran aumento, utilizando un microscopio Zeiss de
epifluorescencia con un filtro 2Fl (excitacin a 405 nm, fluorescencia a 460
nm y filtros de barrera a 510 nm). (A) Se consider que la presencia de
fluorescencia brillante en la regin del acrosoma (flecha) proporcionaba
evidencia de capacitacin. La regin del cuello siempre estaba
brillantemente teida por clortetraciclina. (B) Comparacin entre los
espermatozoides del epiddimo caudal observados el 11 de septiembre y el
30 de octubre, que muestra el aumento en los porcentajes de
espermatozoides capacitados, ya que los espermatozoides residen en la
cauda epiddimo.
Mostrar tamao completo

Los espermatozoides epididimarios cauda previamente capacitados

mostraron un aumento lineal en el porcentaje de reacciones acrosmicas
inducidas por progesterona o A23187 alcanzando 32 5 y 34 4 (media
SD), respectivamente, con el tiempo durante la incubacin de 60 minutos
[Meizel y Turner [ 1993Meizel S. , Turner K. O . Iniciacin de la reaccin
acrosmica del esperma humano por Thapsigargin . J Exp
Zool 1993 ; 267: 350 - 355 [Google Scholar] ]]. No se encontraron
diferencias estadsticamente significativas en el porcentaje de
espermatozoides sometidos a la reaccin acrosmica inducida tanto con
A23187 como con progesterona. Para abreviar, solo se muestran los
resultados obtenidos usando progesterona y despus de 60 min de
incubacin despus de la capacitacin.

Los espermatozoides reaccionados con acrosoma se identificaron

fcilmente por el mtodo CBB ( Fig. 4 ). La tincin azul de la regin
acrosmica formando una cresta apical distinta, indica acrosomas intactos
de los espermatozoides sin reaccionar ( Fig. 4A ). En la mayora de los
casos, cuando el acrosoma persista, se acompaaba de una tincin de
toda la mitad anterior, regin acrosmica, de la clula espermtica [Garca-
Macedo et al. [ 2001Garca-Macedo R. , Rosales AM , Hernndez-
Prez O. , Chavara ME , Reyes A. , Rosado A . Efecto de Bafilomycin A-1,
un inhibidor especfico de las ATPasas vacuolares en la capacitacin de los
espermatozoides de conejo . Andrologia 2001 ; 33: 113 - 121 [Google
Scholar] ]]. La falta de tincin azul se interpret como caracterstica de los
espermatozoides reaccionados acrosmicamente (Fig. 4A, flecha).

Figura 4 Reaccin acrosmica de C. mexicanusesperma epididimal La

reaccin acrosmica se evalu durante una incubacin de 60 minutos, de
espermatozoides previamente capacitados, en presencia de 3,18 M de
progesterona (concentracin final). Posteriormente se extrajeron alcuotas,
se fijaron y se determin el porcentaje de espermatozoides reaccionados
acrosmicamente mediante el mtodo azul brillante de Coomasie. La
presencia y el nmero de espermatozoides teidos y no teidos se
determinaron a gran aumento. (A) La falta de tincin azul de la regin del
acrosoma (flecha) indica acrosomas reaccionados. La tincin azul de la
regin del acrosoma formando una cresta apical distinta, indica acrosomas
intactos de espermatozoides sin reaccionar. (B) Comparacin entre los
espermatozoides del epiddimo cauda observados entre el 11 de septiembre
y el 30 de octubre, que muestran el aumento en el porcentaje de
espermatozoides reaccionados con acrosoma.
Mostrar tamao completo

Cuando las clulas espermticas se obtuvieron del caput epiddimo de C.

mexicanus, el nmero de espermatozoides capacitados y acrosmicamente
reaccionados fue siempre inferior al 5%, lo que indica la presencia de un
proceso espontneo. Este porcentaje se sustrajo rutinariamente de los
resultados obtenidos cuando los procedimientos se realizaron en los
espermatozoides obtenidos de las regiones restantes del epiddimo. El bajo
porcentaje de capacitacin en clulas de esperma del corpus durante
septiembre ( Tabla 2 ), aument en octubre alcanzando su valor ms alto
(19,4%) el 30 de octubre. En la cauda epiddimo, el porcentaje de
espermatozoides capacitados aument significativamente ( p<0.05) entre el
11 de septiembre y el 23 de septiembre y luego se mantuvo estable en torno
al 30%. Esto es similar al porcentaje de capacitacin obtenido de los
espermatozoides del epiddimo del corpus y la cauda en otras especies de
mamferos [Yanagimachi [ 1994]Yanagimachi R . Fertilizacin de
mamferos . La fisiologa de la reproduccin, E. Knobil , JD Neill . Raven
Press , Nueva York 1994 ; 189 - 317 [Google Scholar] ]]. La induccin
positiva de progesterona de la reaccin acrosmica sigui un patrn similar,
aumentando en corpus desde el 11 de septiembre hasta finales de octubre,
pero permaneciendo siempre bajo, mientras que en la cauda alcanz el
observado previamente el 30 de octubre.

Porcentaje de espermatozoides reaccionados con

acrosoma y con capacidad de recuperacin recuperados
de diferentes regiones epididimarias de C. mexicanus
Tabla de visualizacinCSV

Discusin

Al pasar por el conducto epididimal, los espermatozoides deben interactuar

activamente con su entorno [Reyes-Moreno et al. [2007]Reyes Moreno, C.,
Laflamme, J., Frenette, G., Sirard, MA, Sullivan, R. (2007). Los
espermatozoides modulan la proliferacin de clulas epididimarias y la
secrecin de protenas in vitro. Mol. Reprod. Dev. Publicado en lnea: 20 de
septiembre de 2007. [Google Scholar] ]. Un resultado necesario de esta
interaccin activa es la maduracin epididimal, un proceso que hace que los
espermatozoides sean completamente capaces de someterse a todos los
procesos necesarios (motilidad progresiva, capacitacin, hiperactivacin y
reaccin acrosmica) para fertilizar el ovocito [Yanagimachi
[1994].Yanagimachi R . Fertilizacin de mamferos . La fisiologa de la
reproduccin, E. Knobil , JD Neill . Raven Press , Nueva
York 1994 ; 189 - 317 [Google Scholar] ]; de Lamirande et al. [1997de
Lamirande E. , Jiang H. , Zini A. , Kodama H. , Gagnon C . Especies
reactivas de oxgeno y fisiologa de los espermatozoides. Rev
Reprod 1997 ; 2: 48 - 54[Crossref] , [PubMed] , [Google Scholar]]]. El
tiempo promedio de trnsito del epiddimo en mamferos es de
aproximadamente 10 das. Cada una de las regiones del epiddimo se
asocia generalmente con funciones algo especializadas. Por ejemplo, la
funcin caput es principalmente reabsorbente, el corpus tiene una funcin
secretora neta y la cauda, predominantemente, una funcin de
almacenamiento. En la mayora de las especies de mamferos, la
maduracin de los espermatozoides se logra durante el progreso de los
espermatozoides a travs de las porciones iniciales del epiddimo, de modo
que cuando inician su perodo de almacenamiento en la cauda, los
espermatozoides han madurado [Orgebin-Crist [ 1987]Orgebin-Crist M.
C . Desarrollo posttesticular de espermatozoides de mamferos . Base
morfolgica de la funcin de reproduccin humana, DM de
Kretser , O. Spera . Acta Medica, Plenum Press , Nueva
York 1987 ; 115 - 174 [Google Scholar] ]; Yanagimachi
[1994Yanagimachi R . Fertilizacin de mamferos . La fisiologa de la
reproduccin, E. Knobil , JD Neill . Raven Press , Nueva
York 1994 ; 189 - 317 [Google Scholar] ]]. Las clulas de esperma se
almacenan por perodos que pueden extenderse de das a semanas
(dependiendo de la especie) hasta la eyaculacin. Por lo tanto, en la
mayora de los mamferos, la funcin principal de la cauda epididymis
parece ser la del almacenamiento de esperma, lo que garantiza la viabilidad
y la fertilidad de las clulas espermticas durante el almacenamiento.

La fisiologa del epiddimo parece comportarse de manera diferente en C.

mexicanus.Es probable que esto se repita en todos los
dems murcilagos vespertilinidos y rinfilos que muestran la misma
asincrona temporal en el desarrollo y la funcin de los rganos
reproductores masculinos. Se observa la persistencia de un alto porcentaje
de espermatozoides con una gota citoplsmica, bajo ndice de capacitacin
y reaccin acrosmica en espermatozoides obtenidos del corpus
epiddimo. Esto es seguido por un aumento significativo en el porcentaje de
espermatozoides capacitados y acrosmicamente reaccionados durante la
estancia de las clulas espermticas en la cauda epiddimo, el porcentaje
de espermatozoides capacitados es constante y significativamente mayor
( p<0.05) en cauda que en el corpus epiddimo en todas las fechas
estudiadas, y de los espermatozoides capaces de experimentar la reaccin
acrosmica durante octubre. Casi todos nuestros resultados apuntan al
hecho de que la maduracin epididimal en C. mexicanus se completa en la
regin caudal de este rgano que involucra un perodo significativo que
anteriormente se consideraba de almacenamiento.

Nuestras observaciones sugieren que los aspectos iniciales de la

maduracin del epiddimo, como la condensacin nuclear y la estabilizacin
mitocondrial [Arenas-Ros et al. [ 2007Arenas-Ros E. , Len-
Galvn MA , Mercado PE , Lpez-Wilchis R. , Cervantes DLMI , Rosado A .
Superxido dismutasa, catalasa y glutatin peroxidasa en el testculo del
murcilago de orejas grandes mexicano ( Corynorhinus mexicanus ) durante
su ciclo reproductivo anual . Comp Biochem Physiol
A 2007 ; 148: 150 - 158 [Google Scholar] ]] puede ser similar en estas
especies de murcilagos que las observadas en muchos otros
mamferos. Sin embargo, los resultados presentados aqu sugieren que los
cambios morfofisiolgicos finales de la maduracin de los espermatozoides,
incluida la prdida de gotas citoplsmicas, la capacidad para la motilidad
progresiva, la preparacin para la hiper-activacin y la fusin
espermatozoide-ovocito (capacitacin y reaccin acrosmica), pueden
iniciarse recientemente. el momento en que los espermatozoides inician su
residencia en la cauda epiddimo. Tal vez los largos perodos de
almacenamiento de esperma observados en estas especies pueden ser
indispensables para la maduracin de los espermatozoides.

La regulacin endocrina de la fisiologa epididimal tambin parece ser

diferente en Corynorhinus mexicanus . Aunque recientemente se ha
demostrado que los estrgenos pueden ser funcionalmente indispensables
para la funcin del epiddimo [McCarthy et al. [ 2006McCarthy MJ , Al-
Taras EE , perla CA , Nitta-Oda BS , Roser JF , Conley AJ , Berger T . La
supresin de estrgenos endgenos durante el desarrollo afecta la
maduracin espermtica del epiddimo porcino . Mol Reprod
Dev 2006 ; 73: 1122 - 1128[Crossref] , [Google Scholar]]], se sabe que las
funciones del epiddimo en la mayora de los mamferos, incluido el
transporte de espermatozoides del epiddimo, la maduracin de los
espermatozoides y el almacenamiento de espermatozoides, dependen en
gran medida de la secrecin de andrgenos testiculares [Holland et
al. [ 1992Holanda MK , Vreeburg JTM , Orgebin-Crist M. C . Regulacin
testicular de la secrecin de protena epididimal . J
Androl 1992 ; 13: 266 - 273 [Google Scholar] ]; Orgebin-Crist [1996Orgebin-
Crist M. C . Andrgenos y funcin epididimal . Farmacologa, Biologa y
Aplicaciones Clnicas de
Andrgenos, S.Bhasin , HL Gabelnick , JM Spieler , RS Swerdloff , C. Wang
. Wiley-Liss, Inc. , Nueva York, 1996 ; 27 - 38 [Google Scholar] ]; Moore y
Akhondi [1996]Moore HDM , Akhondi M. A . Maduracin in vitro de
espermatozoides de mamferos . J Reprod Fertil 1996 ; 1 (1) 54 - 60 [Google
Scholar] ]]. Cuando, en animales por lo dems intactos, la cauda epiddimo
est fisiolgicamente aisladain situpor ligadura de ambos extremos, los
espermatozoides almacenados degeneran en varias semanas, pero no
disminuyen notablemente en nmero [Lubicz-Nawrocki [1976].Lubicz-
Nawrocki C. M . El efecto de los metabolitos de la testosterona en el
desarrollo de la capacidad de fertilizacin de los espermatozoides en el
epiddimo de los hmsters castrados . J Exp
Zool 1976 ; 197: 89 - 95 [Google Scholar] ]; Jones [2004Jones R . La
supervivencia de los espermatozoides frente a la degradacin en el
epiddimo de los mamferos: una hipotesis . Biol
Reprod 2004 ; 71: 1405 - 1411 [Google Scholar] ]]. Sin embargo, cuando se
somete a una orquidectoma bilateral al mismo tiempo que se aisla la cauda
epididimia, los espermatozoides mueren rpidamente y prcticamente
desaparecen (> 90%) en pocos das. Este efecto de la castracin bilateral
se puede prevenir mediante la administracin de testosterona [Jones
[2004]Jones R . La supervivencia de los espermatozoides frente a la
degradacin en el epiddimo de los mamferos: una hipotesis . Biol
Reprod 2004 ; 71: 1405 - 1411 [Google Scholar] ]]. En otros machos
reproductores estacionalmente, a medida que los niveles de testosterona
disminuyen, el nmero de espermatozoides en el epiddimo disminuye y
finalmente desaparece [Millar [1972].Millar R. P . Degradacin de los
espermatozoides en el epiddimo de un mamfero de reproduccin
estacional, la roca hyrax, Procavia capensis . J Reprod
Fertil 1972 ; 30: 447 - 450 [Google Scholar] ]]. Nuestras observaciones enC.
mexicanus[Lpez-Wilchis[1989]Lpez-Wilchis, R. (1989). Biologa de
Plecotus mexicanus (Chiroptera: Vepertilionidae) en el Estado de
Tlaxcala. Mjico. Tesis doctoral, Universidad Nacional Autnoma de Mxico,
Mxico. [Google Scholar] ; Len-Galvn et al. [1999Len-
Galvn MA , Fonseca T. , Lpez-Wilchis R. , Rosado A . Almacenamiento
prolongado de espermatozoides en el tracto genital del murcilago orejudo
mexicano ( Corynorhinus mexicanus ): el papel de la peroxidatina
lipdica . Can J Zool 1999 ; 77: 7 - 12 [Google Scholar] ], [2005Len-
Galvn MA , Lpez-Wilchis R. , Hernndez PO , Arenas RE , Rosado A . Cic
lo reproductivo masculino de los murcilagos orejudos
mexicanos, Corynorhinus mexicanus (chiroptera:
vespertilionidae) . Southwest Nat 2005 ; 50: 453 - 460 [Google
Scholar] ]; Arenas-Ros et al. [2005Arenas-Ros E. , Len-
Galvn MA , Mercado PE , Rosado A . Superxido dismutasa, catalasa y
glutatin peroxidasa durante la maduracin epididimal y almacenamiento
prolongado de espermatozoides en el murcilago de orejas grandes
mexicano ( Corynorhinus mexicanus ) . Can J
Zool 2005 ; 83: 1556 - 1565 [Google Scholar] ], [2007Arenas-Ros E. , Len-
Galvn MA , Mercado PE , Lpez-Wilchis R. , Cervantes DLMI , Rosado A .
Superxido dismutasa, catalasa y glutatin peroxidasa en el testculo del
murcilago de orejas grandes mexicano ( Corynorhinus mexicanus ) durante
su ciclo reproductivo anual . Comp Biochem Physiol
A 2007 ; 148: 150 - 158 [Google Scholar] ]] nos permite garantizar que los
testculos son totalmente regresados durante el almacenamiento de
espermatozoides, pero la maduracin de los espermatozoides en el
epiddimo es completamente funcional. Los resultados presentados aqu
indican que enC. mexicanus, y seguramente en
otrosmurcilagosvespertilinidosyrinolofdicosque muestran la misma
asincrona temporal en el desarrollo y la funcin de los rganos
reproductores masculinos, las fases finales de maduracin y
almacenamiento del epiddimo son, aparentemente, independientes de los
testculos funcin. Aunque se han definido diferentes patrones de secrecin
de testosterona segn las especies de murcilagos [Martin y Bernard
[2000Martin L. , Bernard RT F . Regulacin endocrina de la reproduccin en
murcilagos: el papel de las hormonas gonadales circulantes . Biologa
Reproductiva de Murcilagos, GECrichton , PH Krutzsch . Academic
Press , Londres 2000 ; 27 - 64 [Google Scholar] ]], en general, mientras que
la actividad esteroidognica de las clulas de Leydig y la testosterona
plasmtica alta coinciden con la espermatognesis en verano, en los meses
de invierno, cuando las glndulas accesorias estn activas (o se mantienen
hipertrficas), las clulas de Leydig estn inactivos y la testosterona
plasmtica es baja [Krutzsch [2000]Krutzsch P. H . Anatoma, fisiologa y
ciclicidad del tracto reproductivo masculino . Biologa Reproductiva de los
Murcilagos, EG Crichton , PH Krutzsch . Prensa
acadmica , Londres 2000 ; 91 - 155 [Google Scholar] ]].

Esta aparente independencia fisiolgica de las funciones importantes del

epiddimo a partir de la fisiologa de los testculos, requiere una exploracin
completa de la secrecin y los niveles sanguneos de esteroides y otras
hormonas en estas especies de murcilagos. Se ha sugerido que los niveles
altos de globulina de unin a esteroides pueden jugar un papel importante
en la funcin reproductiva despus de la involucin de los
testculos. Lamentablemente, no hay mediciones adecuadas de la globulina
fijadora de esteroides en murcilagos [Martin y Bernard
[ 2000].Martin L. , Bernard RT F . Regulacin endocrina de la reproduccin
en murcilagos: el papel de las hormonas gonadales circulantes . Biologa
Reproductiva de Murcilagos, GECrichton , PH Krutzsch . Academic
Press , Londres 2000 ; 27 - 64 [Google Scholar] ]].

Adems de promover la maduracin espermtica y proporcionar un lugar

para el almacenamiento de espermatozoides, el epiddimo desempea un
papel en el transporte de espermatozoides a lo largo del conducto y protege
a los espermatozoides de sustancias nocivas durante su transporte desde la
rete testis hasta la cauda epididimal. Muchas tareas importantes
relacionadas con estos procesos parecen estar bajo control redox [Leclerc
et al. [ 1997Leclerc P. , de Lamirande E. , Gagnon C . Regulacin de la
fosforilacin de protena-tirosina y la capacitacin de espermatozoides
humanos por derivados reactivos de oxgeno . Free Radical Biol
Med 1997 ; 22 (4) 643 - 656 [Google Scholar] ]; de Lamirande et al. [1997de
Lamirande E. , Jiang H. , Zini A. , Kodama H. , Gagnon C . Especies
reactivas de oxgeno y fisiologa de los espermatozoides. Rev
Reprod 1997 ; 2: 48 - 54[Crossref] , [PubMed] , [Google Scholar] ]; Lewis y
Aitken [ 2001Lewis B. , Aitken R. J . Impacto de la maduracin epididimal
sobre los patrones de fosforilacin de tirosina exhibidos por los
espermatozoides de rata . Biol Reprod 2001 ; 64 (5) 1545 - 1556 [Google
Scholar] ]; Ford [2004Ford WC L . Regulacin de la funcin espermtica por
especies reactivas de oxgeno . Hum Reprod Update 2004 ; 10
(5) 387 - 399[Crossref] , [PubMed] , [Web of Science ] , [Google
Scholar] ]]. Recientemente hemos demostrado [Arenas-Ros et
al. [ 2007Arenas-Ros E. , Len-Galvn MA , Mercado PE , Lpez-Wilchis R.
, Cervantes DLMI , Rosado A . Superxido dismutasa, catalasa y glutatin
peroxidasa en el testculo del murcilago de orejas grandes mexicano
( Corynorhinus mexicanus ) durante su ciclo reproductivo anual . Comp
Biochem Physiol A 2007 ; 148: 150 - 158 [Google Scholar] ]] que, enC.
mexicanus,el equilibrio redox de los microambientes asociados con los
medios por los cuales los espermatozoides mamferos deben progresar
durante su trnsito a travs del epiddimo parece estar especficamente y
diferencialmente controlado con la compartimentacin de las funciones
epididimarias. Nuestros datos sobre las actividades enzimticas
relacionadas con las especies reactivas de oxgeno (ROS) (glutatin
peroxidasa, catalasa y superxido dismutasa) enfatizan la existencia de un
cuidadoso equilibrio regulado diferencialmente entre las actividades de
estas enzimas en la cauda y en el epiddimo caput que parecen estar
especficamente relacionadas a la funcin precisa de maduracin /
almacenamiento de las diferentes regiones del epiddimo.

materiales y mtodos

Clortetraciclina (CTC), azul brillante Coomassie G-250 (CBB), HEPES (N-

(2-hidroxi-etil) piperazina-N '- (cido 2-etanosulfnico)), piruvato de sodio,
Tris (tris- (hidroxilo-metilo) ) aminometano), lactato de sodio, D - (+) glucosa,
albmina de suero bovino (libre de cidos grasos) y otras sales se
compraron de Sigma Chemical Co (St. Louis, Missouri, EE. UU.); El ionforo
de calcio A23187 se adquiri en Boehringer-Mannheim (Alemania). Todos
los otros reactivos fueron al menos de grado analtico.

El macho adulto C. mexicanus fue capturado cada dos semanas desde el 11

de septiembre hasta el 30 de octubre de 2006 en Mxico (19 37'N, 98
02'O). Los murcilagos siempre fueron capturados antes o cuando salieron
de su gallinero. Los individuos fueron sexados, pesados y su estado adulto
determinado como se describi previamente [Kunz y Anthony
[ 1982]Kunz TH , Anthony EL P . Estimacin de la edad y crecimiento
postnatal en el pequeo murcilago marrn, Myotis lucifugus . J
Mammal 1982 ; 63: 23 - 32 [Google Scholar] ]; Len-Galvn et
al. [2005Len-Galvn MA , Lpez-Wilchis R. , Hernndez PO , Arenas RE ,
Rosado A . Ciclo reproductivo masculino de los murcilagos orejudos
mexicanos, Corynorhinus mexicanus (chiroptera:
vespertilionidae) . Southwest Nat 2005 ; 50: 453 - 460 [Google
Scholar] ]]. En total se examinaron 16 murcilagos adultos machos. El peso
corporal promedio fue 7.5 g (rango 7.2-8.0 g) y la longitud media del
antebrazo fue 41.8 mm (rango 41.5-43.1 mm).
Los animales para cada determinacin se capturaron el mismo da, a menos
que se requirieran dos capturas, realizadas en la misma semana. Los
animales se sacrificaron y los epiddimos se aislaron, se eliminaron la grasa
y el tejido conectivo y se pesaron en un balanza Mettler modelo AB204 (
0,01 mg). Caput, corpus y cauda segmentos de los epiddimos aislados
como se indic anteriormente [Arenas-Ros et al. [ 2005Arenas-
Ros E. , Len-Galvn MA , Mercado PE , Rosado A . Superxido
dismutasa, catalasa y glutatin peroxidasa durante la maduracin epididimal
y almacenamiento prolongado de espermatozoides en el murcilago de
orejas grandes mexicano ( Corynorhinus mexicanus ) . Can J
Zool 2005 ; 83: 1556 - 1565 [Google Scholar]]]. Brevemente, el aislamiento
de caput del corpus se llev a cabo por diseccin en el nivel en que las
paredes del epiddimo se hicieron claramente paralelas (Fig. 5, lnea
superior). La cauda epididymis se aplana en apariencia en murcilagos no
reproductores y se diferencia fcilmente de los murcilagos cuando se
hinchan y se vuelven bulbosas. En los murcilagos no reproductores, la
cauda epiddimo se aisl diseccionando en el sitio en el que los deferentes
se separaron claramente del epiddimo (Fig. 5, lnea inferior).

Figura 5 Epiddimo completamente desarrollado del macho

adulto Corynorhinus mexicanus. Se muestran las regiones de caput, corpus
y cauda. El aislamiento de caput del corpus se realiz por diseccin en el
nivel en que las paredes del epiddimo se volvieron claramente paralelas
(lnea superior). La cauda epididymis se aisl por diseccin en el sitio en el
que los deferens se separaron claramente del epiddimo (lnea inferior). Las
unidades mtricas indican milmetros.
Mostrar tamao completo

Las regiones epididimarias aisladas se eliminaron de grasa y tejido

conectivo, se enjuagaron en medio Biggers, Whitten y Whittingham (BWW)
[Biggers et al. [ 1971Biggers JD , Whitten WK , Whittingham D. G . El cultivo
de embriones de ratn in vitro . Methods of Mammalian Embryology, JC
(Ed.), Daniel . Freeman , San Francisco 1971 ; 93 - 116 [Google Scholar]]], y
pesados. Los espermatozoides de las diferentes regiones del epiddimo se
obtuvieron tal como se describi anteriormente [Ambrz et
al. [2003Ambriz D. , Contreras JL , Hernndez O. , Mercado E. , Cervantes F
., Rosado A . Estudio comparativo de los testculos, epiddimos, glndulas
sexuales accesorias y espermatozoides de tres especies de lagomorofos
( Romero l a gus diazi, Lepus californicus y Oryctolagus cuniculus) . Acta
Zool Mex (ns) 2003 ; 88: 257 - 269 [Google Scholar] ]]. Las determinaciones
del nmero de espermatozoides, la viabilidad y la presencia de gotas
citoplsmicas se llevaron a cabo utilizando procedimientos microscpicos
estndar.
La evaluacin del porcentaje de espermatozoides capacitados y la
evaluacin de la reaccin acrosomal se llevaron a cabo tal como se
describi anteriormente [Garca-Macedo et al. [ 2001Garca-
Macedo R. , Rosales AM , Hernndez-Prez O. , Chavara ME , Reyes A. ,
Rosado A . Efecto de Bafilomycin A-1, un inhibidor especfico de las
ATPasas vacuolares en la capacitacin de los espermatozoides de
conejo . Andrologia 2001 ; 33: 113 - 121 [Google Scholar] ]; valos-
Rodrguez et al. [2004valos-Rodrguez A. , Ortiz-Muz AR , Ortega-
Camarillo C. , Vergara-Onofre M. , Rosado-Garca A. , Rosales A.
M . Estudio fluoromtrico de la asimetra de la fosfolpida de la membrana
de la cabeza del espermatozoide del conejo durante la capacitacin y la
reaccin acrosmica utilizando Annexin-V FITC . Arch
Androl 2004 ; 50: 273 - 285[Taylor & Francis Online] , [Google
Scholar] ]]. La capacitacin de los espermatozoides de murcilago se realiz
incubando la suspensin de esperma durante 6 horas a 39 C en presencia
de Ca2+2,5 mM.en tubos de polipropileno de centrfuga cnico sin apretar
con capa bajo un CO 5% 2 ambiente / 95%. Despus del tiempo de
capacitacin de 6 h, se usaron 50 l de alcuotas duplicadas de las
suspensiones de espermatozoides para determinar la viabilidad y la
motilidad de los espermatozoides incubados y para evaluar el porcentaje de
espermatozoides capacitados. La evaluacin del porcentaje de esperma
capacitado fue mediante el mtodo de fluorescencia CTC como se describe
por Green et al. [[ 1994Verde CM , Cockie SM , Watson PF , Fraser L.
R . Efecto estimulante de la piroglutamilprolina amida en un tripptido
relacionado con la TRH prosttica, en la capacitacin de la esperma del
ratn y la capacidad de fertilizacin in vitro . Mol Reprod
Dev 1994 ; 38: 215 - 223 [Google Scholar] ]]. Brevemente, la suspensin de
esperma se mezcl con 10 l de solucin de paraformaldehdo al 12% en
Tris-HCl 0,5 M 0,5 M, pH 7,4 y 50 l de una solucin de CTC recin
preparada (750 mM CTC, 130 mM NaCl, 5 mM cistena, 20 mM Tris-HCl, pH
7.8). Se untaron 10 l de esta mezcla en un portaobjetos de vidrio recubierto
previamente con polilisina [Mazia et
al. [1975Mazia D. , Schatten G. , Venta W . Adherencia de clulas a
superficies recubiertas con polilisina . J Cell
Biol 1975 ; 66: 198 - 200[Crossref] , [PubMed] , [Web of Science
] , [Google Scholar] ]], cubierto con una solucin de 0,22 M del
antioxidante 1,4-diazabiciclo- (2,2,2) -octano (DABCO) en 90% de glicerol
para evitar el blanqueamiento fotogrfico [Khn et
al. [ 1997Khn FM , Mack SR , Schill WB , Zaneveld LJ D . Deteccin de la
reaccin acrosmica de los espermatozoides humanos: Comparacin entre
los mtodos que usan tincin doble, aglutinina de Pisum sativum ,
concanavalina A y microscopa electrnica de transmisin . Hum
Reprod 1997 ; 12: 714 - 721[Crossref] , [PubMed] , [Web of Science
] , [Google Scholar]]] e inmediatamente observado por epifluorescencia
utilizando un microscopio Zeiss con un filtro 2Fl (excitacin a 405 nm,
fluorescencia a 460 nm y filtros de barrera a 510 nm). Se contaron al menos
200 espermatozoides y se clasificaron segn su fluorescencia acrosmica.

La reaccin acrosmica se indujo en espermatozoides previamente

capacitados, ya sea mediante la adicin de 100 l de solucin madre diluida
A23187 a una concentracin final de 10 M del ionforo o mediante la
adicin de progesterona a una concentracin final de 3.18 M [Sabeur et
al. . [ 1996Sabeur K. , Edwards DP , Meizel S . Receptor (es) de
progesterona de membrana plasmtica de esperma humano y la reaccin
acrosmica . Biol Reprod 1996 ; 54: 993 - 1001 [Google Scholar] ]] en el
medio de capacitacin y la incubacin continu en las mismas
condiciones. Despus de 15, 30, 45 y 60 min a 37 C, de acuerdo con
nuestros resultados previos [Garca-Macedo et al. [2001Garca-
Macedo R. , Rosales AM , Hernndez-Prez O. , Chavara ME , Reyes A. ,
Rosado A . Efecto de Bafilomycin A-1, un inhibidor especfico de las
ATPasas vacuolares en la capacitacin de los espermatozoides de
conejo . Andrologia 2001 ; 33: 113 - 121 [Google Scholar] ]; valos-
Rodrguez et al. [2004valos-Rodrguez A. , Ortiz-Muz AR , Ortega-
Camarillo C. , Vergara-Onofre M. , Rosado-Garca A. , Rosales A.
M . Estudio fluoromtrico de la asimetra de la fosfolpida de la membrana
de la cabeza del espermatozoide del conejo durante la capacitacin y la
reaccin acrosmica utilizando Annexin-V FITC . Arch
Androl 2004 ; 50: 273 - 285[Taylor & Francis Online] , [Google Scholar] ]],
las muestras se eliminaron, se fijaron, y el porcentaje de espermatozoides
reaccionados con acrosoma se determin mediante tincin con CBB [Miller
et al. [ 1993Miller DJ , Gong X. , Shur B. D . Los espermatozoides requieren
bN-acetilglucosaminidasa para penetrar a travs de la zona pelcida del
huevo . Dev 1993 ; 118: 1279 - 1289 [Google Scholar] ]].

Todas las muestras de espermatozoides contadas microscpicamente

emplearon procedimientos doble ciego y fueron verificadas por dos
observadores independientes, cada uno contando al menos 100
espermatozoides en cada portaobjetos. En todos los casos, despus de la
clasificacin de al menos 200 espermatozoides por portaobjetos segn la
fluorescencia o los patrones de tincin de sus acrosomas, se calcul el
porcentaje de espermatozoides capacitados o acrosmicamente
reaccionados.

La realizacin de este trabajo, incluido el uso y manejo de animales, fue

revisado y aprobado por el Consejo Divisional de Ciencias Biolgicas y de la
Salud (Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud) de la Unidad
Iztapalapa de la Universidad Autnoma Metropolitana. Los animales fueron
atendidos de acuerdo con las Pautas de la Sociedad Estadounidense de
Mammalogistas para el uso de mamferos silvestres en la investigacin
[William et al. [ 2007William L. , Gannon R. , Sikes S . Pautas de la
American Society of Mammalogist para el uso de mamferos salvajes en la
investigacin . J de Mammalogy, 2007 ; 88 (3) 809 - 823 [Google Scholar] ]].

Anlisis estadstico

Las comparaciones entre los grupos se realizaron con ANOVA de una va

[Sokal y Rohlf [ 1995]Sokal, RR , Rohlf, F. J . Biometra ed . Freeman HL
and Co. , Nueva York 1995 , pp. 887. [Google Scholar] ]] seguido de la
prueba post hoc de Bonferroni. La homogeneidad de las variaciones fue
probada por las pruebas de Bartlett y Levene [Sokal y Rohlf
[1995]Sokal, RR , Rohlf, F. J . Biometra ed . Freeman HL and Co. , Nueva
York 1995 , pp. 887. [Google Scholar]]]. El anlisis estadstico se realiz
utilizando el paquete estadstico Stata 7.0 (Statacorp 2001, Texas). Las
diferencias se consideraron estadsticamente significativas cuandop<0,05.