Cintica Michaeliana

Diz-se que um enzima apresenta uma cintica Michaeliana sempre que a

variao da velocidade inicial medida (vi) pode ser ajustada a uma
expresso da forma:
k0 [E]0 [A]
v=
K m + [A]

Cintica Michaeliana no implica a aderncia a um mecanismo do tipo

Henri-Michaelis-Menten.
Cintica Michaeliana designa um comportamento fenomenolgico.

k0 tem dimenses de constante de primeira ordem (s-1) e representa-se

frequentemente como kcat

O valor de [E]0 difcil de determinar em muitas situaes, pelo que se

usa frequentemente Vmax em lugar de k0[E]0. o valor mximo de
velocidade inicial que pode ser medido (saturao) para uma
determinada quantidade de [E]0
 Diferentes mecanismos, a mesma equao

KS K K'k4
E + A

EA
EA' EA''
E + P

Ks
K m =
1 + K + KK '

k = k4 KK '
cat 1 + K + KK '

kcat [E]0 [A]

v=
KS k3
K m + [A]
EA k2
E + A
EA'
E + P2
P1
k3
K
m = K s
k2 + k3

k = k2 k3
cat k2 + k3

Os mecanismos acima, tais como muitos outros, sero impossveis de

distinguir um do outro atravs de um simples ensaio de cintica de equilbrio
ou steady-state
 O significado de Km
Definio: a constante de Michaelis, Km, a concentrao de substrato para a qual a
velocidade inicial medida igual a metade da velocidade mxima (para uma mesma
concentrao de enzima).
O Km uma medida inversa da afinidade do enzima para o seu substrato
O Km caracterstico de cada enzima e substrato, e independente da concentrao
deste ltimo
Embora Km no seja igual a Ks na maioria das condies, pode ser usado como uma
medida relativa de afinidade, j que corresponde concentrao para a qual metade dos
stios de ligao do enzima se encontram saturados em condies de steady state.
Variaes no valor de Km de um enzima (alteraes das condies do meio, mutaes,
etc), podem normalmente ser atribudos a uma alterao da capacidade do enzima de
ligar o substrato.
A expresso do Km em termos do mecanismo cintico pode ser mais ou menos
complexa, mas este tem que ter sempre dimenses de concentrao.

kcat [E]0 [A]

v=
K m + [A]
Kms de alguns enzimas e substratos
 O significado de kcat
Definio: o kcat, constante cataltica ou turnover number igual ao quociente entre a
velocidade mxima observada e a quantidade de enzima da amostra
Vmax
kcat =
[E]0
O kcat no tem que necessariamente corresponder (ou depender) a uma nica constante
cintica do mecanismo de catlise, mas pode ser visto como uma constante de primeira
ordem aparente para a dissociao do complexo enzima-substrato
O kcat tem dimenses inversas de tempo (frequncia) e pode ser visto como o nmero
de ciclos catalticos do enzima por unidade de tempo
Vmax no caracterstico de um determinado enzima, pois depende da concentrao do
mesmo na amostra
Variaes no valor de kcat de um enzima (alteraes das condies do meio, mutaes,
etc), podem normalmente ser atribudos a uma alterao da capacidade cataltica do
enzima.
A expresso do kcat em termos do mecanismo cintico pode ser mais ou menos
complexa, mas este tem que ter sempre dimenses inversas de tempo

kcat [E]0 [A]

v=
K m + [A]
kcats de alguns enzimas
 Constante de especificidade e eficincia cataltica
kcat [E]0 [A]
v=
K m + [A]

quando [A] << KM tem-se tambm [E]0[E] e a eq. de M.-M. fica

kcat
v= [E][A]
Km
e o termo kcat/Km pode ser visto como uma constante de segunda ordem
para o processo:
kcat
Km
E + A E + P

A muito baixas concentraes de substrato o passo limitante do

processo de catlise passa a ser o encontro entre enzima e substrato!

Em condies in vivo frequente ter valores de [A] entre 0.1-1 Km

 Constante de especificidade e eficincia cataltica

kcat

eficincia cataltica (M -1s-1 )
Km

k1 k2

E + A EA
E + P
k1

kcat k kk kcat
= 2 = 1 2 logo: k2 = k1
K m K m k1 + k2 Km

Quando k2 muito grande, a catlise torna-se efectivamente um

processo colisional de segunda ordem, controlado apenas por k1

constante de especificidade eficincia cataltica

representa-se usualmente como kA

 Equao de Michaelis-Menten em termos de kA

kcat [E]0 [A] kcat

v= kA =
K m + [A] Km

kcat [E]0 [A] kA [E]0 [A]

v= =
K m + [A] [A]
1+
Km

kA [E]0 [A]
v=
[A]
1+
Km

A cintica enzimtica pode ser formulada usando como quantidades

fundamentais kA e Km em vez de kcat e Km.. Muitas relaes tornam-se
mais simples quando expressas desta forma.
 Constante de especificidade e eficincia cataltica

Existe um limite superior terico para kcat/Km

O substrato tem que encontrar o centro activo por difuso. Para

molculas tpicas em soluo, a constante difusiva tem um valor da
ordem de 108-109 M-1s-1
 Constante de especificidade para alguns enzimas

Enzima Substrato Km k cat k cat/K m

Acetil colina esterase Acetilcolina 9.50E-05 1.40E+04 1.5E+08

Anidrase carbnica CO2 1.20E-02 1.00E+06 8.3E+07
Catalase H2O2 2.50E-02 1.00E+07 4.0E+08
Fumarase Fumarato 5.00E-06 8.00E+02 1.6E+08
Urease Ureia 2.50E-02 1.00E+04 4.0E+05
Crotonase Crotonil-CoA 2.00E-05 5.70E+03 2.9E+08
b-lactamase Benzilpenicilina 2.00E-05 2.00E+03 1.0E+08
Triose-P-isomerase Gliceraldeido-3-P 4.70E-04 4.30E+03 9.1E+06
Quimotripsina N-Ac-Gly Ester 4.40E-01 5.10E-02 1.2E-01
N-Ac-Val Ester 8.80E-02 1.70E-01 1.9E+00
N-Ac-Tyr Ester 6.60E-04 1.90E+02 2.9E+05

Os valores a vermelho denotam constantes de especificidade prximas do limite

difusivo do substrato.