ESTUDIO FITOQUMICO COMPARATIVO DE

Oenothera rosea y Oenothera multicaulis (Yawar Chonq'a)

RESUMEN. El estudio de los componentes fenlicos de la Oenothera rosca y multicaulis pretende aportar a las
investigaciones realizadas respecto a estas especies, que validen cientficamente sus propiedades
farmaclgicas.
El fin de esta investigacin implica el estudio de los componentes fenlicos a travs del trata miento del
extracto hidroalcohlico con acetato de ello. Las pruebas fitoqumicas desarrolladas permiten determinar que
los componentes mayoritarios presentes en arribas especies son los flavonoides.
El monitoreo de la cromatografa de columna se ha realizado con la cromatografa de capa fina utilizando
como eluyentes AcOEt, HCO2H; AcO2H, H2O revelado con FeCl3al 1%; se observan manchas en la
cromatoplaca de color verde para Oenothera multicaulis y azul para Oenotirerar osca.
El mtodo espectroscpico ultravioleta visible con reactivos de desplazamiento para elucidar la estructura del
flavonvide aislado por cromatografia (flaccin 12) reporta para Oenothera rosea la presencia de un flavonoide
glicosidico denominado QUERCETRINA, rnientras que Oenothera multicaulis no reporta resultados
cuantitativos por espectroscopia.
Finalmente los resultados determinan que los compuestos fenlicos en lo que respecta a flavonclides no son
parecidos en arribas especies.

1. INTRODUCCIN
Las posibilidades de encontrar nuevos medicamentos que alivien las diferentes enfermedades, han hecho que
las plantas constituyan uno de los recursos teraputicos de mayor uso.
La gran diversidad de especies con variados principios activos, permiten hoy en da afianzar ms las
investigaciones con valor cientfico, teniendo el antecedente etnobotnico.
Muchos de estos estudios estn dedicados al aislamiento de principios activos que tienen uso teraputico
como es a partir de la corteza de Taxiis brevifolia especie de lugares como Washington (USA), Oregon (USA),
cuyo principio activo fue denominado Taxus alcaloide especfico para curar el cncer. El estudio de los
componentes fenlicos de la Oenothera rosca y multicaulis pretende aportar a las investigaciones que se han
podido realizar respecto a estas especies, que validen cientficamente sus propiedades farmacolgicas,
teniendo como antecedente que ambas especies son utilizadas en la medicina tradicional con el nombre de
Yawar Chonq'a. Esta investigacin adems permitir determinar a travs de los anlisis si ambas especies
tienen los mismos metabolitos secundarios e indirectamente los rmsmos efectos teraputicos.
II. ESTUDIO BOTANICO.
2.1. Oenothera rosea.
Hierba perenne, erecta o ascendente, de 10-15 cm de alto, ramificada en la base, ms o menos estrigulosa.
Hojas oblongoovadas o elpticas, atenuadas en la base sobre el peciolo, enteras o sinuado -denticuladas. Flores
dispuestas en la axila de las hojas formando grupos racemiformes. Hiparito estriguloso. Ptalos rosados o
lilacinos, anchamente obovados, de 5-10 mm de longitud. Ampliamente distribuidos en Per y Bolivia.1
TAXONOMIA
REYNO : Vegetal
DIVISIN. Magnoliophyta
CLASE: Magnollopsida (dicotiledneas)
SUB-CLASE: Rosidae ORDEN: Myrtales
FAMILIA: Onagraceac GENERO: Oenothera
ESPECIE: Oenothera rosca
NOMBRE VULGAR: "Yawar Ch'onqa"
2.2. Oenothera multicaulis
Hierba anual o perenne, cespitoso (periachoso), tallo ascendente tendido a veces ms leosos hacia la base.
Hojas en roseta oblanceoladas de 1-5 cm de largo y 5-25 mm de ancho, angosta a la base, peciolos acanalados,
largos la pubescencia suave, hojas enteras o sub enteras, como tambin son mas o menos ovaladas y ssiles al
tallo. Flores solitarias, ssiles, axilares, amarillas. Semillas numerosas parduscas de 1-5 mm de longitud y
0,6mm de dimetro. Esta especie fue determinada por Ruiz & Pavn
TAXONOMIA
REYNO: Vegetal
DIVISION: Magnollophyta
CLASE: Magnoliopsida (dicotiledneas)
SUB-CLASE: Rosidae
ORDEN: Myrtales
FAMILIA: Onagraceae
GNERO: Oenothera
ESPECIE: Oenothera multicaulis
NOMBRE VULGAR: "SAYA SAYA"
III. ASPECTOS ETNOBOTANICOS
Oenothera rosea y Oenothera multicaulis dentro de la medicina tradicional y de acuerdo a la informacin
bibliogrfica e informacin directa de personas que utilizan estas especies en el tratamiento de diferentes
enfermedades, cumplen un papel importante que se atribuye a los efectos teraputicos.
Las hojas molidas se usan para heridas as como tambin en emplastos. El mate de estas especies evita
infecciones que pueden ser causadas por accidentes, las races bajo la forma de ponche sirven para la tos.
Para torceduras se utiliza parches de yawar ch'onqa, tara, turpay, layo.
En clculos biliares se toma el jugo de chicha de jora con yawar ch'onqa, maycha, hierba de cncer Y llantn.
El mate de yawar ch'onqa, matico organo, turpay, hierbabuena sirve para cortar la hemorragia durante el
parto.
IV. COMPUESTOS FENLICOS
Los compuestos fenlicos se refieren a un grupo de sustancias que poseen en comn un anillo aromtico con
uno o ms sustituyentes hidroxilos, y que se encuentran frecuentemente como glicsidos, combinados con
unidades de azcar. Son relativamente polares y tienden a ser solubles en agua, pudiendo ser detectados por
el intenso color verde, prpura, azul o negro que producen cuando se les agrega una solucin actiosa o
alcohlica al 1% de cloruro frrico. Dada la naturaleza aromtica de estos compuestos fenlicos ellos muestran
intensa absorcin en la regin UV del espectro, siendo ste mtodo espectral especialmente importante para
su identificacin y anlisis cuantitativo.
Dentro de los compuestos fenlicos ms importantes se encuentran los flavonoides
4.1. FLAVONOIDES
Se encuentran ampliamente distribuidos como constituyentes naturales, conocidos algunas veces como
antoxantinas. Se conocen como 10 clases de flavonoides, todos contienen 15 tomos de carbono en su ncleo
bsico y estn arreglados bajo un sistema C6- C3 C6, en el cual dos anillos aromticos llamados A y B estn
unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir es
llamado anillo C. Cada uno de los flavonoides suele encontrarse bajo la forma de glicsidos con una a tres
unidades de azcar, siendo los azcares ms comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa.
La estructura general de los flavonoldes son:

En muchos casos debido a la complejidad de la mezcla es ms frecuente el estudio de estos compuestos en

forma de agliconas en extractos de plantas previamente hidrolizados. Se hallan presentes en todas las partes
de las plantas, algunas clases se encuentran ms ampliamente distribuidas que otras, siendo ms comunes las
flavonas y flavonoles, y ms restringidas en su ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y auronas.
Como caractersticas generales de estos compuestos se debe sealar su solubilidad en agua y en etanol, Su
carcter fenlico y su intensa absorcin en la regin U.V y Visible del espectro debido a la presencia de
sistemas arornticos conjugados (4) (5)
ACCIN FARMACOLGICA
Es variada y extensa, bien conocidas son sus actividades como la fragilidad capilar (bioflavonoides del gnero
Citrus: rutina y derivados), dilatadores de las coronaras (proantocianidinas de Crataegus, Amica y Gingko),
espasmoltica (glicsidos de apigenina), antihepatotxica (silimarina de Silibum), colertica, estrgena y
diurtica. Se destaca asimismo la actividad antimicrobiana de flavonoides prenilados y otros fenoles y la accin
fungitxica de isoflavonas como las de algunas especies de Lupinus (5)

V. MTODOS DE ANALISIS
5.1 ANLISIS FITOQUIMICO.
Se ha realizado la marcha fitoqumica que corresponde a las siguientes pruebas: prueba del cloniro ferrico
(fenoles), prueba de la gelatina (taninos), prueba de dragendorff y mayer (alcaloides), prueba de shinoda
(flavonoldes), prueba de seliwanoff (azucares), prueba con (x-naftol (quinonas), prueba de la espuma
(saponinas), prueba de lieberman burchard (triterpenoides y esteroides), prueba de baljet (lactonas).
5.2 CROMATOGRAFIA.
Las tcnicas cromatogrficas son procedimientos fisicoqumicos que permiten separar los componentes de
una mezcla mediante el desplazamiento diferenciado de cada uno de ellos sobre una superficie estacionaria
por accin de un sistema de solventes.
Las tcnicas cromatograficas utilizadas son: cromatografia en capa fina (ccf, fic), cromatografa flash,
cromatografia de columna.
5.3 ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA.
La tcnica espectroscopica aplicada corresponde al U.V con reactivos de desplazamiento: MeOH, AICI3, AICI3 +
HO, AcO Na. El mtodo espectroscpico pennitir elucidar la estructura del metabolito secundario procedente
del aislamiento por cromatografia a travs de la deteccin de la posicin de los grupos OH en la estructura del
metabolito.

VI. PARTE EXPERIMENTAL

6.1. POBLACIN DE MUESTRA
Lugar de Recoleccin - Oenothera rosea: Urubamba (3,700 m.s.n.m.)
Lugar de Recoleccin Oenothera multicaulis: C'orao (3..900 m.s.n,m.)
Estadio y Epoca de Recoleccin: Floracin ( Enero a Marzo99)
Cantidad de muestra : 1 Kg, Muestreo: Aleatorio-simple
6.2 OBTENCIN DE EXTRACTOS.
Una vez secas las especies vegetales, seleccionar la parte area y someterla a molienda:
- Parte area seca molida de Oenothera rosea: 250 g
- Parte area seca molida de Oenothera multicaulis: 250 g
Los extractos obtenidos corresponden a soluciones hidroalcohlicas. Los extractos concentrados a
temperatura moderada se tratan con acetato de etilo con la finalidad de aislar los flavonoides solubles en este
solvente conforme a la siguiente marcha:

DIAGRAMA DE FLUJO DE EXTRACCIN

6.2 ENSAYOS PRELMNARES.
Los ensayos preliminares como solubilidad y la marcha fitoqumica que son anlisis cualitativos permiten
determinar la presencia de metabolitos y la cantidad de stos en forma muy cualitativa. Los resultados de
estos ensayos se aprecian en los cuadros 1, 2, y 3 correspondiente a solubilidad, pruebas fitoqumicas
(extracto hidroalcohlico), pruebas fitoqumicas (extracto de acetato de etilo) respectivamente.
Analizando los resultados de la prueba fitoqumica para fenoles y flavonoides del extracto hidroalcoholico y el
de acetato, de etilo se puede observar que existe una diferencia respecto a la cantidad de metabolitos en
estudio; que se encuentran en menor proporcin en el extracto de acetato de etilo respecto al hidroalcoholico
procedentes de ambas especies en estudio. Sin embargo con estas pruebas no se puede an deslindar si los
componentes fenlicos son los mismos o diferentes en ambas especies. Aspecto que se investiga a travs del
aislamiento de los flavonoldes de ambas especies por mtodos cromatogrficos y su caractenzacin por
espectroscopa ultra violeta (UV).

6.4 CROMATOLOGRAFA DE CAPA FINA MUESTRA:

Extracto crudo de acetato de etilio de Oenothera rosea.
Extracto crudo de acetato de etilio de Oenothera multicaulis.
EXCLUYENTES:

SORPORTE: Cromatoplacas de almina con flujorescencia UV

REVELADORES:

La cromatografa de Capa fina de los extractos crudos reporta mejores resultados utilizando como solvente:
CHCI: MeOH (9:1) para ambas especies. Este resultado conlleva a utilizar la cromatografia lquida al vaco

6.5 CROMATOGRAFA LIQUIDO AL VACIO

A) MUESTRA: Extracto Oenothera rosea
ELUYENTE: CHI3: MeOH (ascendente; descendente)
SOPORTE: SILICA GEL G 60

B) MUESTRA: Extracto Oenothera multicaulitis

EXCLUYENTE: CHCI3 : MeOH (ascendente descendente)
SOPORTE : SILICA GEL G 60

Posterior a la cromatografia lquida al vaco de ambas especies, los resultados se monitorean por
cromatografia de capa fina con la finalidad de evaluar la calidad de aislamiento de flavonoides. Ello determina
que las fracciones ms representativas de cada una de estas especies son:
Oenothera rosca : Fracciones 8, 7, 12, 13
Oenothera multicaulis: Fracciones 8, 7, 11, 12
Los cristales de las fracciones mencionadas se solubilizan en metanol y se recuperan de acetato de etilo. Los
resultados de la cromatografia revelan que las fracciones 12 de ambas especies reportan mejor resolucin.

6.6 ESPECTROSCOPIA U V CON REACTIVOS DE DESPLAZAMIENTO

Se ha hecho uso del equipo modelo PERKIN ELMER 12UV-VISIBLE de banda automtica.
El mtodo empleado para tomar los espectros es el de MABRY ao 70
FRACCIN : 12 Oenothera rosea
FRACCION : 12 Oenothera multicaulis (impura sin resultados)
REACTIVOS DE DESPLAZAMIENTO: MeOH, NaOMe, AICI3, Al Cl3/HCI, cONa, AcONa/H3BO3.

VII. DISCUSIN DE RESULTADOS

1. La cromatografia en capa fina con diferentes eluyentes de los extractos crudos de oenothera rosea y
multicaulis presenta mayor resolucin usando CHOl3 : MeOH (9:1)
Revelado al UV, NH3 y FeCl3.
2. De la cromatografia lquida al vaco las fracciones son corridas en cromatoplacas de capa fina, con la
finalidad de poder determinar la calidad de fraccionamiento.
3. De las fracciones se elige 7, 8, 12 y 13 de Oenothera rosca y, 7, 8, 12 de Oenothera multicaulis que
presentan bandas con mayor separacin, y las que son sometidas a purificacin a pesar que en ellas se
observan presencia de cristales amarillos y en algunos de ellos tendiendo a naranja, de tal forma que la
cromatografa reporte resultados ms selectivos.
4. Se han utilizado para las fracciones mencionadas la mezcla de eluyentes:
AcOEt: HCO 2 H: AcO2H: H2O
CHCl3 : MeOH
El primero de los cuales en la proporcin (3 : 0,33: 0,33 : 0,71) es el que reporta mejor resolucin utilizando
como revelador FeCI3 al 1%.
5. Analizando los resultados de la cromatografa en capa fina de ambas especies, la fraccin 12 presenta 1 sola
mancha; resultado que es importante para poder considerar el recorrido en espectro UV.
Los Rf que reporta esta fraccin para ambas especies son :
Rf 0,96 (Oenothera rosea)
Rf 0,80 (Oenothera multicaulis)
6. El espectro UV de la Oenothera multicaulis reporta resultados no cuantitativos, los que no se pueden
interpretar en razn a que la muestra era impura a pesar de realizar recristalizaciones, mientras que para la
Oenothera rosea los lmx son:
7. En el cuadro delmx se ha comparado con los que se reportan en bibliografa para compuestos fenlicos
siendo la que corresponde a quercetrina la que reporta los lmx semejantes al compuesto en estudio.
CONCLUSIONES
1. La cromatografia lquida al vaco ha permitido fraccionar un grupo de compuestos fenlicos de ambas
especies.
2. El motiltoreo del fraccionamiento con cromatografia de capa fina determin que la fraccin 12 de las
especies en estudio son las ms puras puesto que reportan una sola mancha (verde petrleo para Oenothera
multicaulis y, azul para Oenothera rosea).
3. El resultado de los espectros UV de Oenothera rosea indica que uno de los compuestos fenlicos aislados es
un flavonoide glicosdico denominado Querectrina
4. Finalmente, de los resultados de la cromatografia de capa fina, se puede afirmar que los compuestos
fenlicos no son parecidos en ambas especies, por lo menos en lo que respecta a flavonoides.