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Este documento proporciona información sobre la biología del hepatocito. Brevemente describe:
1) La histología hepática, incluyendo las columnas de hepatocitos y las células de Kupffer.
2) Las principales funciones metabólicas de los hepatocitos, como el metabolismo de carbohidratos, lípidos, proteínas y más.
3) El aislamiento de hepatocitos primarios y su uso en investigación básica, terapia celular y pruebas de fármacos.
Este documento proporciona información sobre la biología del hepatocito. Brevemente describe:
1) La histología hepática, incluyendo las columnas de hepatocitos y las células de Kupffer.
2) Las principales funciones metabólicas de los hepatocitos, como el metabolismo de carbohidratos, lípidos, proteínas y más.
3) El aislamiento de hepatocitos primarios y su uso en investigación básica, terapia celular y pruebas de fármacos.
Este documento proporciona información sobre la biología del hepatocito. Brevemente describe:
1) La histología hepática, incluyendo las columnas de hepatocitos y las células de Kupffer.
2) Las principales funciones metabólicas de los hepatocitos, como el metabolismo de carbohidratos, lípidos, proteínas y más.
3) El aislamiento de hepatocitos primarios y su uso en investigación básica, terapia celular y pruebas de fármacos.
mlmartinez@cicbiogune.es Group Leader Liver Disease Laboratory CICbioGUNE Technological Park of Bizkaia BIOLOGA DEL HEPATOCITO GENERALIDADES DEL HIGADO ORGANIZACION DEL HIGADO HISTOLOGIA HEPTICA HISTOLOGIA HEPATICA Se presentan dos componentes:
Estroma. Constituido por tejido conectivo que sirve de soporte.
Esta dado por la capsula de Glisson que se introduce a nivel de hilio y se ramifica hasta alcanzar el espacio porta.
Parenquima. Constituido por clulas epiteliales especializada, los
hepatocitos, que son clulas poligonales dispuestas en cordones de una a dos clulas tejido llamadas columnas de hepatocitos.
Entre las columnas y cordones hay capilares sinusoidales cuya
pared esta recubierta por endotelio y macrofagos (clulas de Kuppfer)
Entre el capilar y la columna se encuentra el Espacio de Disse
(espacio perisinusoidal) que es el sitio de intercambio entre la sangre y el hepatocito y donde se encuentran las clulas de ito o estelares que almacenan Vitamina A Clulas de Kupffer
-Ncleo grande y plido
-Citoplasma abundante -Origen mdula sea -Macrfagos anclados al Espacio de Disse -Su funcin principal es metabolizar Hemates viejos, digerir hemoglobina, secretar protenas y digerir bacterias EL HEPATOCITO FUNCIONES del HEPATOCITO FUNCIONES
METABOLICAS
DEL
HGADO METABOLISMO
DE
CARBOHIDRATOS METABOLISMO
DE
HIDRATOS
DE
CARBONO METABOLISMO
DE
LIPIDOS METABOLISMO
DE
PROTENAS ALMACENAMIENTO
DE
VITAMINAS
Y
MINERALES ACTIVACIN
DE
LA
VITAMINA
D EXCRECCIN
DE
BILIRRUBINA PROCESAMIENTO
DE
FARMACOS
Y
HORMONAS EMPLEO
DE
HEPATOCITOS EN
EXPERIMENTACION
BASICA
Y
CLNICA
Aislamiento
de
Hepatocitos
primarios
de
ratn
y
de
rata
como
modelo
de
experimentacin
animal
en
investigacin
bsica
Trasplante
celular
heptico.
Aproximacin
Clnica
Testado
de
Drogas
e
Hgados
Artificiales.
Aproximacin
Industrial
y
Clnica TERAPIA
CELULAR.
APROXIMACIN
CLNICA El
trasplante
celular
heptico
(TCH)
se
basa
en
el
empleo
de
clulas
hepticas
adultas,
hepatocitos
humanos,
viables
y
metablicamente
funcionales
provenientes
de
rganos
desechados
para
trasplante
convencional.
El
TCH
consta
de
3
pasos:
el
aislamiento
del
hepatocito
del
hgado
no
vlido
para
trasplante
heptico,
la
preparacin
de
las
suspensiones
celulares
y,
finalmente,
su
implante
en
el
receptor.
La
obtencin
de
los
hepatocitos
se
realiza
mediante
digestin
heptica
con
colagenasa
a
37C.
Tras
el
aislamiento,
las
clulas
pueden
congelarse
o
administrarse
en
fresco.
La
criopreservacin
permite
realizar
el
procedimiento
de
forma
programada.
Los
aspectos
clave
del
implante
celular
son
la
va
de
infusin,
el
nmero
de
clulas
por
infundir,
el
nmero
de
infusiones
y
la
viabilidad
celular.
La
implantacin
es
mediante
catter
para
infusin
en
la
vena
porta
o
la
arteria
esplnica. AISLAMIENTO
DEL
HEPATOCITO .
La
perfusin
enzimtica
se
realiza
previa
canulacin
de
la
arteria
heptica
y
la
vena
porta
del
tejido
heptico
desechado.
Se
perfunde
primero
un
lbulo
y
luego
el
otro
.La
digestin
enzimtica
consta
de
2
etapas:
una
primera
etapa
de
perfusin
no
recirculante:Krebs-Ringer
exenta
de
calcio,
pero
que
contiene
EGTA
y;
una
segunda
etapa
de
perfusin
recirculante:
solucin
salina
sin
EGTA
y
contiene
5mmol
de
Cl2Ca
y
el
0,05%
de
colagenasa
para
conseguir
la
digestin
completa
del
parnquima
heptico.
Se
procede
a
la
disgregacin
mecnica
del
tejido
heptico
para
obtener
una
suspensin
de
hepatocitos.
Esta
suspensin
celular
se
lava
varias
veces,
se
centrifuga,
y
se
desecha
el
sobrenadante
y
se
resuspende
el
sedimento
celular.
Finalmente,
se
determina
la
viabilidad
mediante
el
colorante
azul
de
tripn,
PREPARACIN
DE
LA
SUSPENSIN
CELULAR
Los
hepatocitos
aislados
se
resuspendenen
el
medio
de
infusin
adecuado
para
trasplantarse
en
fresco
o
en
el
medio
de
congelacin
si
se
crioconservan
para
utilizarse.
Se
remiten
muestras
para
estudio
microbiolgico
a
fin
de
descartar
cualquier
contaminacin
en
el
proceso
de
obtencin
celular,
con
adicin
de
antibiticos
de
forma
profilctica PREPARACIN
DE
LA
SUSPENSIN
CELULAR
El trasplante celular requiere la infusin de los hepatocitos humanos en
suspensin en un perodo que oscila entre minutos y horas
La composicin del medio se basa en un buffer de protenas plasmticas con
agentes anticoagulantes y glucosa. La adicin de N-acetil-cistena ha demostrado que disminuye el estrs oxidativo y disminuye la apoptosis CONTROL
DE
LA
CALIDAD
CELULAR
Control
de
calidad
funcional
de
los
hepatocitos
que
se
realiza
mediante
la
determinacin
de
la
actividad
de
5
isoenzimas
del
citocromo
P450
(CYP1A2,
CYP2A6,
CYP3A4,
CYP2C9
y
CYP2E1)
y
enzimas
de
conjugacin
de
fase
ii
(UGT
y
SULT).
.
Se
determina
su
capacidad
ureognica
mediante
la
medicin
de
la
conversin
de
amonio
en
urea. TESTADO
DE
DROGAS
E
HGADOS
ARTIFICIALES
Takanori
Takebe (Nature
2013)
describen
por
primera
vez
la
formacin
de
un
tejido
humano
heptico
a
partir
de
cultivos
de
clulas
madre
potenciales
inducidas
(iPS) TESTADO
DE
DROGAS
E
HGADOS
ARTIFICIALES
Estan
disponibles
los
primeros
hgados
artificiales
construidos
con
ayuda
de
una
impresora
3D.
El
rgano
artificial
no
cuenta
con
el
tamao
de
un
hgado
normal,
sino
que
nicamente
mide
unos
pocos
milmetros,
pero
su
funcin
no
es
servir
para
trasplantes,
sino
ayudar
a
la
investigacin
mdica
determinando
el
impacto
de
la
toxicidad
de
drogas
y
emplendose
como
modelo
de
dao
heptico. TESTADO
DE
DROGAS
E
HGADOS
ARTIFICALES
La descelularizacin consiste en eliminar todas las clulas de un rgano
(por ejemplo un hgado), preservando los componentes de la matriz extracelular y los vasos sanguneos para, posteriormente, repoblar la estructura con clulas del paciente que va a recibir el trasplante.