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ELETROFORESES E
OUTRAS METODOLOGIAS
PONTIFCIA UNIVERSIDADE
CATLICA DE GOIS
CBB-BIOMEDICINA
Prof.Luiz Murilo Martins de Arajo
PERFIL DAS HEMOGLOBINAS
MAIS COMUNS
% ADULTO % FETO
Hb A - 2 2 96 - 98 TRAOS
Hb A2 - 2 2 AT 3.5-4.0 TRAOS
Hb F - 2 2 TRAOS 99
HEMOGLOBINAS ANORMAIS MAIS FREQENTES
Hb S - 2 2(6: GLU VAL)
Hb H - 4
Hb BARTS - 4
HEMOGLOBINAS ANORMAIS MAIS FREQENTES
Hb Lepore - Pareamento no homologo
entre os genes e (Hbrido -, sendo
a parte inicial, amino terminal semelhante
a gama e a terminal, carboxila,
semelhante a beta)
Hemoglobinas Instveis:
Hb Torino - 2(43:PHE VAL) 2
Hb Koln - 2 2(98:VAL MET)
Diversidade das Hemoglobinas
anormais
Variantes 920
Talassemia 300
Outras 150
Fonte: http\\www.globin.cse.psu.edu
OUTRAS HEMOGLOBINAS
ANORMAIS
Hb E - 2 2(26: GLU LYS)
Hb J Baltimore - 2 2(16: GLY ASP)
Hb N Baltimore - 2 2(95: LYS GLU)
Hb O Arbica - 2 2(121: GLU LYS)
Hb Porto Alegre- 2 2(9: SER CIS)
Hb K Woolwich - 2 2(132: LYS GLN)
OUTRAS HEMOGLOBINAS
INSTVEIS
DOS TALASSMICOS:
Talassemia Minor : 19/23 - 82%
Talassemia Intermedia : 4/ 23 - 18%
Ricardo P. Ducatti
LEPAH-CBB-UCG
ELETROFORESE EM PH
ALCALINO
ELETROFORESE
definido como sendo a migrao de
espcies carregadas eletricamente, que
ocorre quando as mesmas so dissolvidas
ou suspensas em um eletrlito, atravs do
qual uma corrente eltrica aplicada.
Esta tcnica de separao foi
desenvolvida pelo qumico Arne Tiselius
para o estudo de protenas em soro e por
este trabalho ele ganhou o prmio Nobel
em 1948.
SEQUNCIA BSICA DA
ELETROFORESE DE HEMOGLOBINAS
EM pH alcalino
(-) (+)
A2 G S K F A B
OA
H J I
RR
C D L
E
T
s
Bu
E D Los Angeles-Punjab
Lepore
ELETROFORESE DE Hb
BARTS E Hb H
SC AA
A2 D
LEPORE
Hb A- pI 6.8
HbS - pI 6.85
HbG - pI 6.90
HbC - pI 6.95
P.C.NAOUM, 2001
PERFS ELETROFORTICOS
A
- A : NORMAL
A
- S : Trao Falciforme (Banda A e S)
S
- S : Anemia Falciforme (Banda S)
S
- C : Falciforme/ Hb C (Banda S e C)
- Tal : Micro-Drepanocitose (Banda
S
S e aumento de A2 e F)
S - Tal : Banda S e Hb H
A - C : Hetereozigoto para Hemoglobina C
C - C : Homozigoto para Hemoglobina C
ELETROFORESE EM pH
ALCALINO, COM
HEMOLISADO COM
SAPONINA
ELETROFORESE EM PH
ACIDO
ELETROFORESE GAR-CIDO
ELETROFORESE GAR-
CIDO
ELETROFORESE COM
ISOFOCALIZAO
ELETROFORESE CAPILAR
ELETROFORESE MICROCAPILAR
ELETROFORESE CAPILAR
Tcnica que foi introduzida em 1981, por
Jorgenson e Lukacs e tem sido aceita
cada vez mais, como um importante
mtodo analtico.
Em sua forma mais simples uma
aproximao da tcnica original, descrita
por Tiselius, porm emprega-se um tubo
capilar, preenchido com um eletrlito,
conforme o prprio nome sugere.
Pode ser usada na determinao de
hidrocarbonetos aromticos, vitaminas
hidro e lipossolveis, aminocidos, ons
inorgnicos, cidos orgnicos, frmacos,
catecolaminas, substncias quirais,
protenas, peptdeos, etc.
Rapidez
Versatilidade
Baixo custo por anlise
Alto poder se separao (resoluo)
Consumo mnimo de amostras, reagentes
e solventes.
Possibilidade de automao e deteco
on-line.
DESVANTAGENS
No adequada para a determinao de
compostos volteis, no-polares e de
massa molar baixa, os quais so melhores
determinados por cromatografia gasosa.
Tambm no muito adequada para a
anlise de polmeros no inicos de
massa molar alta
No to sensvel quanto a cromatografia
lquida de alta performace
HPLC