INSTITUTO POLITCNICO

NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

Lic. En Biologa
Fisiologa General

Prctica 3. PENETRACION DE SUSTANCIAS

Equipo 3
Avils Flores Israel
Bernal Portillo Amairany
Dvila Ramrez Germn
Lozada Ruiz Aranza

Profesores
Oriana Hidalgo Alegra
Mauricio Romi Campero
Vicente Sandoval Herrera

Grupo 2OM2
Resumen:
Se preparo una suspensin de glbulos rojos a partir de una muestra de sangre de la
parte apical de la cola de una rata de laboratorio Rattus norvegicus. la cual se mezcl con
una relacin 1-1 de solucin salina isotnica (NaCl 0.9 %), se prosigui a preparar los
patrones de comparacin mezclando la suspensin de glbulos rojos con agua destilada
(donde se lleva a cabo la hemolisis) y con NaCl (0.9 %). Posteriormente Se determino la
concentracin hemolizante para diferentes sustancias, (NaCl, Sacarosa, KCl, BaCl2 y
Glucosa) y finalmente Se determino el tiempo de hemlisis para diferentes sustancias
lipoflicas (Alcohol metlico, Alcohol etlico, Alcohol proplico y Alcohol butlico)
Introduccin:
LA MEMBRANA CELULAR:
La membrana est compuesta fundamentalmente por lpidos y protenas, y en menor
cantidad por glcidos. Su composicin relativa se determin por primera vez en eritrocitos
de rata ( 40% de lpidos y 60% de protenas ). Posteriormente se comprobado que dicha
proporcin es muy similar en el resto de las clulas aunque puede variar en funcin del
tipo celular; por ejemplo, en los hepatocitos de rata la proporcin es de un 58% de lpidos
y un 42% de protenas, mientras que en las fibras nerviosas las protenas alcanzan menos
del 25%, y en msculo esqueltico de rata, el 65% del total.
Lpidos de membrana
Fosfolpidos. Son los lpidos ms abundantes en las membranas biolgicas. Presentan
una zona hidrfila, que constituye las denominadas cabezas polares (glicerina o glicerol
en los fosfoglicridos), y una zona hidrfoba (cidos grasos), que forma la cola apolar. Los
fosfo1pidos poseen, por tanto, un carcter anfiptico.
Glucolpidos. Son muy semejantes a los fosfolpidos, pero contienen oligosacridos. En
las clulas animales suelen ser derivados de esfingolpidos.
Esteroles. Derivados del colesterol y presentes en la membrana plasmtica de las clulas
eucariotas, son ms abundantes, por lo general, en las clulas animales.
Los movimientos que pueden realizar los lpidos son:
De rotacin: supone el giro de la molcula lipdica en torno a su eje mayor. Es muy
frecuente y el responsable, en gran medida, de los otros dos movimientos.
De difusin lateral: las molculas lipdicas pueden difundirse libremente de manera lateral
dentro de la bicapa. Es el movimiento ms frecuente.
Flip-flop: es el movimiento de la molcula lipdica de una monocapa a la otra gracias a
unas enzimas llamadas lipasas.
La fluidez o viscosidad es una de las caractersticas ms importantes de las membranas.
Depende de factores como la temperatura (la fluidez aumenta al incrementarse la
temperatura), la naturaleza de los lpidos (la presencia de lpidos insaturados y de cadena
corta favorece el aumento de la fluidez) y la presencia de colesterol (endurece las
membranas, reduciendo su fluidez y permeabilidad). De la fluidez dependen importantes
funciones de la membrana, como el transporte, la adhesin celular o la funcin
inmunitaria. Por ello, las membranas poseen mecanismos de adaptacin homeoviscosa
encargados de mantener la fluidez.
Las protenas asociadas a la membrana pueden cumplir un papel meramente estructural,
funciones de reconocimiento y adhesin, o bien estar implicadas en el transporte y el
metabolismo celular. Segn su grado de asociacin a la membrana se clasifican en dos
grupos: integrales y perifricas.
Integrales. Estas protenas se asocian a la membrana mediante enlaces hidrfobos. Slo
pueden separarse de la membrana si se destruye la bicapa (por ejemplo, con detergentes
neutros).
Perifricas. Son protenas unidas a la membrana por enlaces de tipo inico y se separan
de ella con facilidad.
Como se ha visto, la composicin de los lpidos y de las protenas es diferente en las dos
caras de la membrana. Por esta razn se dice que las membranas son asimtricas, es
decir, se pueden diferenciar las caras interna y externa en funcin de su composicin.
Exteriormente a la membrana algunas clulas presentan un glicocliz, compuesto por
glucoprotenas, que pueden interaccionar o estar parcialmente incluidas en la membrana
plasmtica, y por glucolpidos. Esta matriz extracelular es importante en los procesos de
reconocimiento e interaccin entre las clulas y los tejidos.
Objetivos:

Determinar la concentracin hemolizante utilizando diferentes sustancias

electrolticas y no electrolticas y como afecta la disociacin de estas sustancias
para comprender el proceso de osmosis.
Determinar el tiempo de hemolisis de los eritrocitos en diferentes alcoholes para
relacionarlos con el coeficiente de particin y su permeabilidad.
Desarrollo Experimental:
 1. Preparacin de la suspensin de glbulos rojos.

Obtuvimos sangre de la cola de una rata

Mezclamos 5 gotas de sangre en 5 ml de solucin isotnica NaCl (0.9%)

2. Preparacin de los patrones de comparacin

Aadimos 5 gotas de la suspensin a dos tubos de ensayo: 1. 2.5 mL deagua

destilada. 2. 2.5 mL de NaCl (0.9%)

Observar si hay Hemlisis

Determinacin de la concentracin hemolizante para:

NaCl, Sacarosa, KCl, BaCl2

Determinacin de los tiempos de hemlisis

Tubo 1 de ensayo: 2.5 mL de alcohol metlico, etlico, proplico y butlico.

En cada tubo colocar 5 gotas de la suspensin de glbulos rojos.

Medir tiempo para ocurrir hemolisis
Resultados:

Grfica 1. Comparacin de la [hemolizante terica] vs. La [hemolizante prtica]

400

350

300
Concentracion (mOsmoles)

250

200

150

100

50

0
NaCl (nM) BaCl2 (mM) KCl (mM) Sacarosa (mM) Glucosa (mM)
Sustancias

[Hemolizante terica] [Hemolizante prctica]

E.E.= 41.83 E.E.= 6.26

En la grfica 1 se observa el comportamiento de las diferentes sustancias y cmo se
comportan en la hemolisis con relacin a la concentracin a la cual se produjo la hemolisis
de los eritrocitos.
Grfica 2. Tiempo en que cada alcohol produjo la hemolisis.

95.00
90.00
85.00
80.00
75.00
70.00
65.00
60.00
55.00
Axis Title

50.00
45.00
40.00
35.00
30.00
25.00
20.00
15.00
10.00
5.00
0.00
METILICO (CP=0.0097) ETILICO (CP=0.0357) PROPILICO (CP=0.156) BUTILICO (CP=0.588)
1 90.00 54.00 27.00 17.00
2 8.30 9.20 10.50 15.90
3 5.50 7.77 8.61 9.75
4 10.72 14.27 13.97 7.00
5 8.60 9.10 11.00 16.10
6 47.00 50.00 14.00 15.00

Discusin:
Como se puede observar en la grfica 1, la concentracin hemolizante terica tiene una
gran diferencia a la obtenida en la prctica siendo esta ltima menor, sin embargo, el error
estndar que se observa es muy pequeo, es decir, no hay gran variacin, puesto que las
concentraciones hemolticas fueron la mismas, esta diferencia puede deberse a diferentes
factores que provoquen que la [hemoltica] practica sea ms baja que la terica, entre los
cuales se encuentran la contaminacin y los errores humanos al momento de realizar las
mediciones.
En el caso de la permeabilidad de los diferentes alcoholes, vemos en los resultados que
dos equipos tienen tiempos muy elevados en comparacin con los otros cuatro equipos.
Tomando en cuenta a los cuatro equipos vemos que hay una hemolisis muy rpida para el
alcohol metlico, incrementando en los dems alcoholes de acuerdo con su tamao
molecular, siendo un poco ms tardado el alcohol butlico el cual tiene un mayor nmero
de tomos y por lo tanto el transporte pasivo a travs de la membrana es ms tardado.
Presentan tambin un coeficiente de particin el cual es un parmetro fisicoqumico que
permite determinar de modo cuantitativo, el grado de lipofilia de una molcula,
permitiendo inferir cmo se comportar en el entorno de los fluidos biolgicos del
organismo y cmo ser su paso mediante difusin pasiva a travs de membranas
biolgicas, generalmente este va de acuerdo a el tamao molecular, en este caso de los
diferentes alcoholes que se usaron para evidenciar la permeabilidad de los eritrocitos.
Conclusiones:
Las soluciones salinas cumplen con lo esperado debido a que se lleva a cabo la
hemolisis a bajas concentraciones hemolizantes.
 La [hemolizante] obtenida en la prctica es menor que la [hemolizante terica].
Entre menor sea el valor del coeficiente de particin de los alcoholes, menor ser
el tiempo en que se lleve a cabo la hemolisis.

Bibliografa:
UNC. Facultad de Ciencias. Unidad 8. Determinacin experimental del
coeficiente de reparto de barbitricos.[Online], Accesado el 5/sep/17. Disponible:
http://168.176.60.11/cursos/ciencias/2015657/u8/pdf/marco_teorico.pdf