PREPARACIN ANATMICA DEL ENCFALO

CON FINES DE APRENDIZAJE

OBJETIVO GENERAL
Mostrar, explicar y exponer los procesos con los cuales se realizaron las coloraciones de
corte coronales y transversales de cerebros humanos.
OBJETIVOS ESPECFICOS
Realizar una exposicin dinmica con el fin de explicar la anatoma bsica del
encfalo.
Explicar de una manera clara y exacta las diferencias entre sustancia gris y
sustancia blanca y las razones de la diferenciacin de colores en los cortes.
Describir como obtuvimos la coloracin y los procesos correspondientes que
realizamos para obtener con exactitud las coloraciones presentes
INTRODUCCIN
El cerebro es un rgano de vital importancia para el ser humano, aqu radica la vida y el
futuro, la ciencia y en algunos casos la guerra y la violencia, por ello su estudio es de vital
importancia. En este caso hemos optado por centrarnos en el encfalo, y an ms
especficos en el estudio de dos de sus estructuras ms importantes las cuales son la
sustancia gris y blanca, las cuales cumplen funciones diferentes en el funcionamiento
cerebral, existen mtodos muy variados para diferenciar y estudiar estas estructuras, pero
como un mtodo de estudio que facilite el aprendizaje y cree inters la experimentacin
es la mejor manera, como todo rgano su complejidad depende de sus funciones, y este
al ser el rgano principal del hombre para muchos es muy complejo entenderlo, por ello
hemos decidido iniciar con algo bsicamente sencillo y elemental.
Este experimento consiste en presentar de una manera ms clara y acentuada las
diferencias y lmites visuales entre sustancia gris y sustancia blanca, para poder cumplir
este objetivo se prepar una prctica en cortes fresco de cerebro humano en los cuales
posterior a tratarlos con diferentes soluciones nos delimita ambas sustancias con vistosos
colores, uno el blanco amarillento comn de la sustancia blanca y el otro un azul elctrico
y vistoso de la sustancia gris, tan solo observando esta diferencia de colores a nuestra
mente llegan varias preguntas como el por qu no te tien ambas sustancias?, en qu
solucin exacta vemos el cambio?, por qu el tejido biolgico no sufre cambios drstico
ante este estimulo invasor?, mientras vamos entendiendo el procesos de la coloracin
muchas preguntas son resueltas, de esta manera no solo aprendemos sobre el encfalo y
el cerebro, aprendemos tambin a investigar y a buscar respuestas a nuevos enigmas.
 MATERIALES

SOLUCIN DE MULLIGAN
APLICACIONES.-
Tincin diferencial gris (tincin de Mulligan):
Se emplea para el estudio de la configuracin interna del sistema nervioso central (SNC).
En esta tcnica se tien los cortes o secciones del encfalo, en las cuales se destaca la
sustancia gris (corteza y ncleos) de coloracin azul permaneciendo sin teir la sustancia
blanca.
Para estabilizar la coloracin se utiliza la solucin Formol-HCl
PARA LA PRCTICA DE LA PREPARACIN ANATMICA DEL
ENCFALO.-
Proporcin
40 gr de fenol en cristales
5 gr de sulfato de cobre
1,25 ml de cido clorhdrico
1000 ml de agua destilada
Funcin
Pigmentar la sustancia gris, de tal manera que pueda diferenciarse con facilidad de la
sustancia blanca en los diferentes segmentos del tallo enceflico y encfalo. Pintndose
de color azul y blanco respectivamente las dos estructuras mencionadas anteriormente
Accin
En esta solucin el fenol actuando como mordiente en un medio cido (por el HCL)
reducir el Cu de cprico a cuproso, permitiendo la unin de este a los grupos aminos de
las protenas. La especificidad de la tincin por la sustancia gris estara dada por la mayor
concentracin proteica.
Procedimiento
Los cortes colocados en la rejilla se sumergen totalmente en la solucin de Mulligan
durante 4 minutos. Esta solucin debe estar a 70C.

SOLUCIN DE CLORURO FRRICO

ANTECEDENTES.-
El cloruro de hierro (III) o tricloruro de hierro (tradicionalmente llamado cloruro frrico).
El color de los cristales de cloruro de hierro (III) dependen del ngulo de visin: cuando
reflejan la luz los cristales tienen un color verde oscuro, pero cuando transmiten la luz su
color es rojo purpreo.
Por su carcter covalente, es soluble en disolventes orgnicos. En disolucin alcohlica
se lo conoce como tintura de hierro. Cuando se disuelve en agua, el cloruro de hierro (III)
sufre hidrlisis y libera calor en una reaccin exotrmica.
APLICACIONES.-
Industriales
Se utiliza como coagulante para:
Tratamiento de aguas residuales(efluentes cloacales y efluentes industriales)
Potabilizacin de agua (tratamiento de agua de ro para obtener agua de
consumo)
De laboratorio
El cloruro de hierro (III) se usa en el laboratorio como cido de Lewis para reacciones de
catlisis tales como cloracin y reaccin de Friedel-Crafts de compuestos aromticos. Es
menos potente que cloruro de aluminio, pero esta menor fortaleza conduce a veces a
rendimientos ms altos, como en la alquilacin de benceno:
La prueba del cloruro frrico es una prueba colorimtrica tradicional para fenoles, que
usa una disolucin al 1% de cloruro de hierro (III) que ha sido neutralizada con hidrxido
de sodio hasta que se forme una pequea precipitacin de FeO(OH).7 La mezcla se filtra
antes de ser usada. La sustancia orgnica se disuelve en agua, metanol o etanol, luego se
aade la disolucin neutra de cloruro: una coloracin transitoria o permanente
(normalmente prpura, verde o azul) indica la presencia de un fenol o enol.

En la electrnica
Una de sus ms importantes aplicaciones es en electrnica para producir placas de circuito
impreso en bajas cantidades. El cloruro frrico reacciona con el cobre dando cloruro
ferroso y cloruro cprico.
Hay dos procedimientos para esto:
Consiste en realizar un dibujo manualmente sobre una plaqueta con una cara de
cobre, mediante el uso de un rotulador permanente resistente al ataque de cidos.
El otro mtodo, con resultados de mayor calidad, se basa en el empleo de
plaquetas sensibles a la luz.
El cloruro de hierro (III) anhidro se usa a veces como reactivo deshidratante en ciertas
reacciones. Tambin se utiliza en modelos de trombosis animal. Lo usan los fabricantes
de cuchillos y espadas artesanales para teir las hojas y para dar un efecto de contraste al
metal y para ver las imperfecciones del mismo. Tambin se usa para el fotograbado de
lminas de cobre para imprimir imgenes fotogrficas al aguafuerte o por intaglio y para
grabar los cilindros de rotograbado usados en la industria de artes grficas.
PARA LA PRCTICA DE LA PREPARACIN ANATMICA DEL
ENCFALO.-
La comprensin de la organizacin estructural del encfalo es compleja como su mismo
funcionamiento. Para hacer ms comprensible la distribucin de la sustancia gris y blanca,
es importante pigmentar la sustancia gris, de tal manera que pueda diferenciarse con
facilidad de la sustancia blanca en los diferentes segmentos del tallo enceflico y encfalo,
para lo cual recurrimos a la solucin de Mulligan acompaada de otras sustancias, entre
ellas la del cloruro frrico que pintar de color azul a la sustancia gris y de blanco a la
sustancia blanca.
Se requieren 10 gr de cloruro frrico en 1000 ml de agua destilada.
Aqu el cloruro frrico, despus de los cortes pasar por la solucin de Mulligan, acta a
manera que oxida el cobre cuproso depositado, a cobre cprico, a la vez que reduce el
hierro frrico a ferroso. El cobre y el hierro se intercambian entre s, quedando depositado
el hierro en vez del cobre. (Reaccin de sustitucin).

SOLUCIN FERROCIANURO DE POTASIO

ANTECEDENTES.-
El ferrocianuro de potasio, tambin conocido como hexacianoferrato (II) de potasio o
amarillo de Prusia, es un compuesto inorgnico. El compuesto es una sal de potasio del
complejo de coordinacin ferrocianuro y generalmente se encuentra en la forma
trihidratada.
Histricamente, el compuesto se fabric a partir de fuentes de carbono nitrogenado
obtenidas orgnicamente, limaduras de hierro y carbonato de potasio. Fuentes comunes
de nitrgeno y carbono fueron chatarra de cuero, despojos o sangre seca.
Actualmente el ferrocianuro de potasio se produce industrialmente a partir de cianuro de
hidrgeno, cloruro ferroso e hidrxido de calcio, cuya combinacin da Ca2 [Fe (CN) 6]
11H2O.
El compuesto posee un peso molecular de 368,35 g/mol para la forma anhidra y 422,388
g/mol para la forma trihidratada. Posee una densidad de 1,85 g/ml y un punto de fusin
de 70 C donde comienza a descomponerse.
El compuesto es soluble en agua, pudiendo disolver 28,9 gramos de compuesto en 100
ml de este solvente. Es insoluble en dietileter, etanol y tolueno.
APLICACIONES.-
Es utilizado como componente base en la preparacin del reactivo de Drabkin, utilizado
para pruebas cuantitativas de hemoglobina en sangre.
El ferrocianuro de potasio como tal se usa como reactivo en la Tincin De Perls para el
diagnstico en orina de hemolisis intravascular crnica en anemias microcticas. Prueba
positiva cuando la muestra de orina adquiere color azul-verdoso al aadir el ferrocianuro
de potasio.
Tincin de hierro medular con Coloracin de Perls
Es una de las tcnicas citoqumicas ms antiguas, prcticamente sin cambios desde su
descripcin original. Es uno de los mejores mtodos para conocer las reservas de hierro
en la mdula sea, que se encuentran en forma de hemosiderina, lo cual es importante
para el diagnstico de una variedad de patologas hematolgicas
Tambin usado como antiaglomerante o antiapelmazante de uso alimentario en la sal y
ciertos tipos de vino. Tambin tiene un uso enolgico para eliminar el cobre y el hierro
en la elaboracin de vino. El cobre es usado como fungicidas en las uvas.
Tambin es usado para la fermentacin del cido ctrico. El ferrocianuro de potasio
tambin puede ser usado como fertilizante para las plantas.
PARA LA PRCTICA DE LA PREPARACIN ANATMICA DEL
ENCFALO.-
En el caso de los cortes, se hizo una solucin con ferrocianuro de potasio, que es una sal
del cido cianhdrico donde el cianuro ha sido parcialmente saturado por el hierro. El
ferrocianuro de potasio se transforma entonces en ferrocianuro frrico al reaccionar con
el hierro depositado en la preparacin y queda fijado en la misma. Esta sustancia da un
color azul intenso en los sitios en los cuales se ha depositado.
El ferrocianuro de potasio para este experimento fue de una concentracin de 1% en agua
destilada, es decir se us 10gr en un 1litro del agua mencionada anteriormente.

PREPARACIN DE LA PIEZA ANATMICA

TIEMPOS DE TINCIN
Solucin de Mulligan.
Se sumerge totalmente el corte en la solucin de Mulligan que se encuentra
a 70C.
La pieza tiene que tener un espesor adecuado, dado a que los cortes muy
delgados tienden a romperse.
En esta solucin cida el fenol reducir el Cobre de cprico a cuproso
permitiendo la unin de este a los grupos aminos de las protenas.
Tiempo exacto: 4 minutos

Agua corriente. Lavar delicadamente el corte del cerebro, considerando que

est totalmente sumergido en el recipiente con agua.
Tiempo exacto: 2 minutos

Cloruro frrico
Colocar el corte en la solucin de cloruro frrico, lo cual oxida al cobre
cuproso depositado, a cprico, y tambin reduce el hierro frrico a ferroso.
 Estos se intercambian entre s, quedando depositado el hierro en lugar del
cobre.

Tiempo exacto: 2 minutos

Agua corriente: Lavar con cuidado el cerebro, sumergindolo totalmente

en el agua.
Tiempo exacto: 2 minutos

Ferrocianuro de potasio:
Este ferrocianuro de potasio se transforma en ferrocianuro frrico al
reaccionar con el hierro depositado en las zonas de la sustancia gris.
En esta solucin el corte va tomando una coloracin azulada, lo cual
depende mucho estar pendiente del tiempo suficiente para que el corte se
pinte adecuadamente.

Tiempo exacto: 40-60 segundos

Agua corriente: Se deber lavar el corte de manera cautelosa, controlando

que la coloracin adquirida se vaya perfeccionando.
Tiempo exacto: 5 minutos

Cabe recalcar que el tiempo que se debe sumergir el corte de cerebro en

Ferrocianuro de Potasio, en ocasiones variar con algunos segundos. Esto
depender del acoplamiento que el corte tenga con las soluciones utilizadas.

TCNICA DE MULLIGAN

IMPORTANCIA

Utilizada para el estudio del sistema nervioso central radica en la posibilidad de

diferenciar las estructuras enceflicas en forma macroscpica, de manera que permita
apreciar su anatoma en toda su dimensin. La afinidad de la solucin de Mulligan por
las protenas de la sustancia gris permite, junto con la de otras soluciones, teir de azul
intenso (Prusian Blue) dicha sustancia y as diferenciarla de la sustancia blanca.

INFORMACIN ADICIONAL.
Vale la pena recordar la constitucin histolgica de la sustancia gris y blanca cuya
principal diferencia va a ser que en la sustancia blanca encontramos grupos celulares con
una importante cantidad de mielina mientras que en la gris no vamos a encontrarla.

Los elementos celulares que encontramos en la sustancia blanca son principalmente

cuerpos celulares mielinizados.

Mientras que en la sustancia gris encontramos:

Cuerpos de neuronas y sus somas. Es decir, los ncleos de las clulas nerviosas.
Axones no mielinizados. Los axones son prolongaciones que se extienden desde
los cuerpos neuronales y transportan seales nerviosas.
Dendritas o ramificaciones pequeas que surgen de un axn.
Botones terminales de axones, que son los extremos de stos que se conectan con
otras clulas nerviosas para intercambiar informacin.
Clulas Gliales o clulas de soporte. En concreto dos tipos: astrocitos y
oligodendrocitos. Esta clase de clulas transportan energa y nutrientes a las
neuronas, manteniendo un correcto funcionamiento de stas y sus conexiones.
Capilares sanguneos.

La sustancia gris puede contener algunos axones mielinizados. Sin embargo, comparado
con la sustancia blanca son mnimos. Por eso se observan de diferentes colores.

Como un dato interesante podemos decir que La sustancia gris ocupa aproximadamente
el 40% del cerebro humano. El 60% restante est compuesto de materia blanca. Sin
embargo, la sustancia gris consume un 94% del oxgeno cerebral.

MANTENIMIENTO DE LAS PIEZAS EN ALCOHOL

Como sabemos los tejidos frescos sufren grandes alteraciones al poco tiempo de haber
sido tomados, siendo una de las principales tareas, la de impedir el desarrollo post
mrtem de estos procesos o cambios que pueden ser putrefactivos debido a la invasin
bacteriana de los tejidos muertos y autolticos, provocados por la accin de enzimas de
las propias clulas.

Para preservar los tejidos aconsejamos que la decisin de utilizar un fijador en nuestros
tejidos depender mucho de los mtodos para seccionar y el proceso que se utilizar, de
los datos que se desea recoger en ltima instancia, el tiempo deseado de almacenamiento
la calidad, edad y caractersticas inherentes de su tejido. Por eso el alcohol etlico es muy
recomendado ya que preserva el glucgeno y la actividad de ciertas enzimas titulares, fija
en especial los pigmentos ya que en general el objetivo de toda la prctica es pigmentar
el tejido nervioso lleno de protenas y evitar que estos se descompongan. Como altera
escasamente la estructura antignica de los tejidos es un buen agente fijador para
inmunohistoqumica. Entre las ventajas del alcohol estn:

Fija y deshidratan al mismo tiempo

Posee una gran velocidad de penetracin
Precipita muy rpidamente las protenas y el glucgeno lo que unido a la anterior
propiedad aporta extraordinariamente el tiempo de fijacin es un notable agente
bactericida y por tanto un buen conservante.
Entre sus inconvenientes tenemos los siguientes:
Endurece y contrae excesivamente los tejidos.
A medida que realiza la fijacin se va diluyendo al incorporar el agua que extrae
de los tejidos por lo cual pierde actividad progresivamente

Hay 3 clases de alcohol etlico:

Alcohol desnaturalizado: tiene un 96% de riqueza, y lleva un indicador o marcador

que le confiere mal sabor y olor para evitar la fabricacin de bebidas.
Alcohol rectificado u oficinal: tiene un 96% de riqueza y no lleva indicador.
Alcohol absoluto: tiene >99.5% de riqueza y no lleva indicador.

El etanol es un fijador muy bueno, cuando se utiliza en diluido en varias proporciones

con agua. Las diluciones que incluyen menos de 50/50 ethanol/agua introducen la
posibilidad de crecimiento de patgenos en el tejido. Esto es una posibilidad incluso
almacenando por corto tiempo las muestras, si el porcentaje del etanol es bajo. Sin
embargo, esto es aceptable si el tejido debe seccionarse en un plazo de 7 das; en tal caso,
se recomienda la refrigeracin del tejido en el fijador. Las proporciones de etanol de ms
del de 75% introducen el peligro de hacer el tejido duro o de textura gomosa, lo que puede
hacer muy difcil de conseguir secciones finas a mano. Estas proporciones son aceptables
si el tejido va a seccionarse en 2 a 4 semanas

PASOS

As para sustancias inicas suelen usarse un 30 60% de alcohol, y para las no inicas
un 60 96%, siendo la ms habitual un 70%.

1. En nuestra prctica utilizamos en la conservacin de la pieza en alcohol al 100%,

como nos sugeran varios textos.
 2. Luego la pieza empez a tornarse de color amarillo, por lo que tuvimos que optar
por utilizar alcohol al 75%, lo cual ayud de mejor manera para la conservacin
del tejido cerebral, pero an exista el problema de ponerse amarillenta la pieza.
3. Por ltimo colocamos la pieza cerebral en alcohol al 50%, lo que ayud
exitosamente con la conservacin de la pieza, sin cambiar su color original.

INSTRUCCIONES PARA EL ENCAPSULADO EN RESINA

RESINA CRISTAL
Esta resina cristal tiene propiedades de alta transparencia es ideal para trabajos de
encapsulados o vaciados de piezas que pueden ser transparentes o translucidas, debido a
esto recibe su nombre pues parece un cristal una vez gelada o curada, esta resina
generalmente viene preparada y solo necesita que se le agregue su catalizador
generalmente al 1% y si se desea tambin se puede agregar un acelerador adecuado para
este tipo de resina, cuando requerimos tiempos de secado o curado ms cortos.

Tambin es adecuada para usarse con pigmentos y en este caso nos da un acabado
cristalino pero con la tonalidad deseada segn el pigmento que le
adicionemos, generalmente estos pigmentos son lquidos pero tambin pudieran ser en
pasta. Este tipo de resinas pueden llevar cargas minerales dependiendo de la apariencia
que deseemos darle a nuestra pieza terminada

PASOS PARA EL ENCAPSULADO DE LA RESINA

Coloca los moldes que estars encapsulando en una superficie plana y cubierta. Roca el
interior de los moldes con el aerosol para moldes de la misma manera en la que rociaras
aerosol anti adhesivo en un molde de pastelillos. El aerosol permitir que la resina sea
quitada fcilmente del molde cuando termine de secarse.

Mezcla la resina y el catalizador en un vaso de papel siguiendo las instrucciones del

fabricante. Un gotero puede ser necesario para agregar el catalizador. Sigue las
proporciones de la mezcla al pie de la letra, ya que si las proporciones son incorrectas, la
resina no se secar apropiadamente.
3

Utiliza un palito de madera para mezclar la resina profundamente. Contina mezclando

la resina hasta que alcance una consistencia espesa. Mezcla la resina de tal forma que
elimine tantas burbujas de aire como sea posible, ya que stas sern visibles en el
encapsulado final.

Vierte la resina despacio en el molde hasta que se llene. Para hacer un encapsulado con
ms de una capa, llena el encapsulado hasta la mitad y djalo secar hasta que ya no est
pegajoso cuando lo toques con un palito de madera. Luego mezcla otra porcin de resina
y virtela encima hasta que el molde est lleno.

Deja que la resina se seque en el molde por al menos 96 horas. Suavemente quita el
encapsulado del molde.

OBJETIVOS
~ Obtener preparaciones anatmicas del
tallo enceflico y del encfalo en donde
se pueda distinguir con claridad la
distribucin de la sustancia gris de la
sustancia blanca.
~ Rotular los ncleos de sustancia gris
coloreados con la tcnica de tincin
aplicada.
INTRODUCCIN
La comprensin de la organizacin estructural
del encfalo es compleja como su mismo
funcionamiento. Conocemos que la sustancia
gris y blanca tiene una distribucin muy
delimitada dependiendo de la regin enceflica.
Para hacer ms comprensible esta distribucin
es importante pigmentar la sustancia gris, de tal
manera que pueda diferenciarse con facilidad
de la sustancia blanca en los diferentes
segmentos del tallo enceflico y encfalo, para
lo cual recurrimos a la solucin de Mulligan que
pintar de color azul a la sustancia gris y de
blanco a la sustancia blanca.
PREPARACIN
ANATMICA DEL
ENCFALO CON
FINES DE
APRENDIZAJE
 EQUIPOS
- Estufa con temperatura controlada (en grados
centgrados)
- Vaso de precipitacin de 1 lt
- Guantes de latex.
- Pinzas de diseccin
- Estiletes.
- Recipientes amplios tipo cubetas de plstico, uno para
cada solucin
- Rejilla para montaje de cortes, construida con un marco
de cao rectangular, de aluminio forrado en plstico y
tela mosquitera de plstico montada en el marco. La
rejilla ocupar el interior de la cubeta.
CULES SON LOS
MATERIALES A METODOLOGA
UTILIZAR? Una vez obtenido el encfalo, este deber ser fijado en
Anatmicos formol al 10% durante 2 semanas como mnimo, se
Cortes coronales y transversales de
aconseja colocar el material anatmico en una funda de
encfalos humanos frescos.
plstico que deber ser suspendida en el recipiente
correspondiente.
Soluciones qumicas
Solucin de Mulligan: 40 gr de fenol en
cristales; 5 gr de sulfato de cobre; 1,25 ml Para verificar la correcta fijacin del encfalo este debe
de cido clorhdrico; 1000 ml de agua haber perdido el color rojizo de los vasos sanguneos.
destilada.
Luego de la fijacin se debe lavar el encfalo por lo
Solucin de cloruro frrico: 10 gr de menos 6 horas a chorro de agua para eliminar los restos
cloruro frrico en 1000 ml de agua destilada.
de fijador o material desprendido en el proceso.
Solucin de ferrocianuro de potasio al
1%: 10 gr de ferrocianuro de potasio en
1000 de agua destilada
FUNDAMENTACIN
Este mtodo se basa en reacciones qumicas causadas
por componentes de la solucin de Mulligan.
El primer paso consiste en sumergir la preparacin en
una solucin de Mulligan calentada a 70C. En esta
solucin el fenol actuando como mordiente en un
medio cido (por el HCL) reducir el Cu de cprico a
cuproso, permitiendo la unin de este a los grupos
aminos de las protenas. La especificidad de la tincin
por la sustancia gris estara dada por la mayor
concentracin proteica.
Los cortes impregnados con la solucin de Mulligan
se llevan a una solucin de cloruro frrico la cual
oxida el cobre cuproso depositado, a cobre cprico, a
la vez que reduce el hierro frrico a ferroso. El cobre
y el hierro se intercambia entre s, quedando
depositado el hierro en vez del cobre. (reaccin de
sustitucin).
El siguiente paso es llevar los cortes a una solucin de
ferrocianuro de potasio, que es una sal del cido
cianhdrico donde el cianuro ha sido parcialmente
saturado por el hierro. El ferrocianuro de potasio se
transforma entonces en ferrocianuro frrico al
reaccionar con el hierro depositado en la preparacin
y queda fijado en la misma. Esta sustancia da un color
azul intenso en los sitios en los cuales se ha
depositado.