Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Tricoblastoma en el Conejo
Enlaces de autor abrir panel de
superposicinM.K. Kok *Cmaras JK *N. Ushio *A. Watamori Y. Miwa H. Nakayama *K. Uchida *
Mostrar ms
Resumen
El tricoblastoma es el tumor de piel ms comn en el conejo. El objetivo
del presente estudio fue caracterizar las caractersticas histolgicas e
inmunohistoqumicas del tricoblastoma en 27 conejos. Los lugares ms
comunes de la aparicin de tumores fueron el cuello (6/30, 20%), cabeza
(5/30, 16,7%), flanco (4/30, 13,3%) y miembro posterior (4/30,
13,3%). Histolgicamente, el tricoblastoma de conejo se clasific en tipos
de cinta (10/30, 33.3%), trabecular (8/30, 26.7%) y mixtos (12/30,
40%). El tejido tumoral mostr una estrecha interaccin con
el estroma circundante, donde la agregacin fibroblstica prominente ,
conocida como mesenquimal papilar(24/30, 80%). El estroma peritumoral
de todos los casos se ti con azul de Alcian (a pH 2,5 con tincin ms
dbil a pH 1,0). Inmunohistoqumica, las clulas en empalizada de tipo
basal perifricas del tumor fueron positivas para citoqueratina (CK) 14,
mientras que las clulas internas eran tpicamente positivo para CK17,
que difiere de la perfil inmunohistoqumico de la epidermis de conejo y el
pelo del folculo . El presente estudio sugiere que la tricognesis
embrionaria incontrolada est implicada en el desarrollo de tricoblastoma
en el conejo.
Palabras claves
inmunohistoqumica
cuerpos mesenquimales papilares
Conejo
tricoblastoma
Introduccin
Los conejos ( Oryctolagus cuniculus ) han ido ganando popularidad como animal
domstico en todo el mundo ( von Bomhard et al. , 2007; Schepers et al. , 2009, Fisher,
2010; Rooney et al. , 2014 ). von Bomhard et al. (2007) proporcionaron un estudio
retrospectivo amplio, en el que se identific el tricoblastoma como el tumor cutneo ms
comn en conejos, representando el 19,3% de todos los tumores y las lesiones
tumorales. La incidencia de tumores del folculo piloso (en particular el tricoblastoma) es
mayor en los animales de compaa, como los perros, gatos y conejos, que en el hombre,
donde el carcinoma basocelular es predominante (Abramo et al. , 1999; Rubin et al. ,
2005; Bath - Hextall y col. , 2007; von Bomhard et al. , 2007 ).
Materiales y mtodos
Muestras
Se examinaron 30 muestras tumorales de piel fijadas con formalina de 27 conejos resecadas
quirrgicamente . La historia clnica de estos animales se presenta en la Tabla 1 . Tres
conejos desarrollaron tricoblastoma en dos ocasiones, cada vez involucrando diferentes
regiones del cuerpo. Estos seis tumores se evaluaron independientemente ( Tabla
1 ). Basndose en el examen microscpico, 29 muestras fueron diagnosticadas como
tricoblastoma y una como tricoblastoma maligno ( Tabla 1 ). Se realizaron exmenes
radiogrficos y ultrasonogrficos y no se detect ninguna metstasis de las clulas
tumorales en ningn caso de tricoblastoma.
Tabla 1 . Informacin clnica y clasificacin histolgica
*
Tricoblastoma ocurri dos veces en tres conejos (casos 2 y 19, 11 y 12, y 14 y 26, cada uno derivan
del mismo animal).
Histopatologa
Las muestras de tejido se fijaron en una solucin de formalina tamponada con fosfato al
10%, procesada rutinariamente y embebida en parafina . Las secciones (4 m) se tieron
con hematoxilina y eosina (HE), cido peridico-Schiff (PAS), tricrmico de Masson y azul
de Alcian (pH 1,0 y 2,5). El tricromo de Masson y las manchas azules de Alcian se
utilizaron para evaluar las propiedades histoqumicas del estroma tumoral . La tincin PAS
se us para detectar el glucgeno citoplasmtico en las clulas tumorales. Los tumores se
clasificaron de acuerdo con la Clasificacin Histolgica Internacional de Tumores de
Animales Domsticos de la OMS y su reciente actualizacin (Goldschmidt et al. , 1998;
Goldschmidt y Goldschmidt, 2017).
Inmunohistoqumica
Las secciones desparafinadas se sometieron a recuperacin de antgeno y las reacciones no
especficas se bloquearon sumergiendo las secciones en H $ $ O $ $ al 3% en metanol a
temperatura ambiente durante 5 min seguido de incubacin en leche desnatada al 8% a 37
C durante 30 min. Las secciones se incubaron con uno de los anticuerpos primarios ( Tabla
2 ) a 4C durante la noche y luego se lavaron tres veces con solucin salina tamponada con
Tris (TBS). Las secciones se incubaron despus con Dako EnVision + System peroxidasa
de rbano picante (HRP) marcado con polmero anti-ratn (Dako, Tokio, Japn) a 37 C
durante 40 min. Despus de lavar tres veces con TBS, las secciones se sometieron a
tratamiento con cromgeno con 0,05% de 3,3'-diaminobencidina y 0,03% de H 2 O 2en
tampn Tris-HCl, y se contrasta con la hematoxilina de Mayer. Para los controles
negativos, las secciones se incubaron con TBS en lugar de anticuerpos primarios, mientras
que el panel de anticuerpos en el presente estudio se utilizaron como controles de reactivos
irrelevantes para verificar la especificidad de cada anticuerpo ( Ramos-Vara y Miller,
2014 ).
Tanteo
La intensidad de la coloracin azul de Alcian (pH 2,5) en el estroma tumoral y en la
expresin de vimentina en los cuerpos mesenquimatosos papilares (PMBs) se clasific
como: -, negativa; +, dbilmente positivo; ++, moderadamente positivo; y +++, fuertemente
positivo. El estroma tumoral en todos los casos mostr una tincin positiva dbil con
tincin azul de Alcian a pH 1,0 y la puntuacin no era aplicable. La intensidad de la tincin
PAS y el marcado inmunohistoqumico distintos de la vimentina se clasificaron como: -,
0%; +, 1 - 10%; ++, 11-50%; +++, 51-75%; y ++++, 76-100% de clulas tumorales
positivas. La puntuacin inmunohistoqumica se realiz por consenso de dos Japanese
College of Veterinary Pathologistspatlogo certificado por la junta (KU, JKC) y
MKK. Cualquier desacuerdo fue revisado en conjunto para alcanzar una puntuacin de
consenso.
Resultados
Ocurrencia de Tumor
La informacin clnica se muestra en la Tabla 1 . Los 27 conejos fueron 14 machos y 13
hembras de 3 a 12 aos (mediana de 7 aos). Se observ una ocurrencia mltiple de
tricoblastoma en tres conejos en diferentes momentos y en diferentes reas del cuerpo. Las
razas incluyeron oreja de Holanda (6/27; 22.2%), enano de Holanda (4/27; 14.8%), mini
Rex (2/27; 7.4%) y jersey wooly (1/27; 3.7%). Ms de la mitad eran raza mixta o la raza no
se conoca (14/27, 51.9%). Los tumores surgieron en el cuello (6/30, 20%), cabeza (5/30,
16.7%), flanco (4/30, 13.3%), miembro posterior (4/30, 13.3%), tronco dorsal (3 / 30,
10%), hombro (2/30, 6,7%), regin inguinal (2/30, 6,7%), abdomen (1/30, 3,3%), / 30,
3,3%) o base de la cola (1/30, 3,3%).
Bulbo - - + + + - - - -
Celda matriz - - - - - - - - -
Papila drmica + - - - - - - - +
Glndula sebcea
Borrar celdas - - + - + - - - -
Clulas basales - - + + + + - - -
AB, azul de Alcian (pH 2,5); CK, citoqueratina; PAS, cido peridico-Schiff.
*
El revestimiento drmico de las regiones suprabulbar e istmo fue moderadamente positivo para el
azul de Alcian a pH 2,5 y dbilmente positivo a pH 1,0.
Positivo en la capa basal de la epidermis y la vaina externa de la raz del folculo piloso. Adems, la
expresin tambin se observ en la capa suprabasal de la epidermis hiperplsica y las clulas
corticales por encima del bulbo piloso angeno.
Positivo en pocas clulas de la vaina de la raz externa del istmo y regin suprabulbar.
1. Descargar imagen de alta resolucin (557KB)
2. Descargar imagen en tamao completo
En los folculos pilosos, CK AE1 / AE3 se expres en todas las capas, a excepcin de la
matriz del cabello y las clulas de la papila drmica. CK5 / 6 se expres en la vaina de la
raz externa del folculo piloso ( Figura 1 G). CK14 se expres en la vaina externa de la raz
y, ocasionalmente, en las clulas corticales que surgen de la matriz capilar del bulbo piloso
angeno ( Fig. 1 H). CK17 se expres en la vaina de la raz externa del folculo piloso ( Fig.
1 I). CK19 se expres con poca frecuencia en la vaina externa de la raz del folculo piloso
( Figura 1 J). La vimentina fue expresada por las clulas de la papila drmica dentro del
bulbo piloso ( Fig. 1 K).
En las glndulas sebceas , las clulas basales expresaron CK AE1 / AE3, CK5 / 6, CK14 y
CK17, mientras que las clulas claras diferenciadas expresaron CK AE1 / AE3 y CK14. En
el presente estudio, la expresin de CK18 no se detect en la epidermis y sus anexos.
*
Tricoblastoma ocurri dos veces en tres conejos (casos 2 y 19; 11 y 12 y 14 y 26).
Presencia de PMBs en el estroma peritumoral: -, ausente; +, presente.
Las clulas tumorales fueron negativas para el azul Alcian (pH 1,0 y 2,5), mientras que el estroma
tumoral mostr tincin positiva. Puntuacin cualitativa del estroma tumoral para el azul de Alcian a
pH 2,5: -, negativo; +, dbil positivo; ++, positivo moderado; +++, positivo fuerte. A pH 1,0, el
estroma tumoral de todos los casos mostr tincin positiva dbil.
Porcentaje de clulas tumorales positivas: -, negativo; +, 1 - 10%; ++, 11-50%; +++, 51-75%; ++++,
76 - 100%.
Las clulas tumorales fueron negativas para la expresin de vimentina mientras que el estroma
tumoral y PMBs mostraron expresin positiva. El etiquetado positivo de vimentina en PMBs se
evalu cualitativamente y categorizado como: -, negativo; +, dbil positivo; ++, positivo
moderado; +++, positivo fuerte.
1. Descargar imagen de alta resolucin (2MB)
2. Descargar imagen en tamao completo
Fig. 2 . Caractersticas histolgicas del tricoblastoma de conejo. (A) Tipo de cinta. Las
clulas tumorales estn dispuestas en finas ramificaciones con la presencia de PMBs
(flechas) en el estroma . L. Barra, 100 \ mu m. (B) Tipo trabecular. Las clulas tumorales
estn dispuestas en un patrn lobular y se observan PMBs prominentes (flechas) en la
periferia de los lbulos. L. Barra, 100 \ mu m. (C) Tipo trabecular. Mayor aumento de un
PMB que consiste en clulas con citoplasma escaso y prominente ncleo de forma
oval(flecha) en la periferia del lbulo tumoral. L. Barra, 25 \ mu m. (D) Tricoblastoma
maligno. El tejido tumoral (abajo) es contiguo con la epidermis superpuesta. L. Barra, 100
\ mu m. (E) Tipo mixto. Trabecular (izquierda) y ribbon (derecha). Las clulas de tipo basal
del tipo de cinta exhiben grnulos PAS-positivos. Bar, 50 \ mu m. (F) Tipo trabecular. El
parnquima tumoral est rodeado por el estroma positivo al azul de Alcian (pH 2,5). Barra,
100 \ mu m.
Discusin
Los tricoblastomas de conejo en el presente estudio se localizaron principalmente en el
cuello, cabeza, flanco y tronco dorsal. No se observ ninguna predisposicin a la raza o
sexo. Se observ una presencia mltiple de tricoblastoma en tres conejos, lo que sugiere la
predisposicin de los conejos al desarrollo de este tumor.
En el presente estudio, se observ una tincin PAS dbil a moderada de las clulas
tumorales en 18 (60%) de 30 tricoblastomas, lo que sugiere una diferenciacin ocasional de
las clulas tumorales con las de la vaina externa de la raz. Adems, tanto
el estromaperitumoral como el revestimiento drmico de los segmentos de folculos
pilosos normales mostraron una intensidad de azul Alcian ms intensa a pH 2,5 en
comparacin con pH 1,0, lo que sugiere que el cido hialurnico puede ser la
principal mucina cida en estas estructuras. Los hallazgos histoqumicos destacan un
posible origen del tricoblastoma de las regiones suprabulbar e istmo del folculo piloso en
conejos.
Expresiones de gratitud
Los autores agradecen a la Sra. S. Kato su valiosa asistencia tcnica. Esta investigacin no
recibi ninguna subvencin especfica de las agencias de financiamiento en los sectores
pblico, comercial o sin fines de lucro.