Colletotrichum tofieldiae ENDFITO EN RAZ CONFIERE BENEFICIOS DE

ACONDICIONAMIENTO FSICO A LA PLANTA QUE CORRESPONDEN AL NIVEL DE

DEPENDENCIA DE FOSFATO

RESUMEN

Colletotrichum tofieldiae (Ct) es un endfito de raz fngica de Arabidopsis

Ct transfiere el fsforo macronutriente a Arabidopsis brotes
Promover el crecimiento de plantas mediadas por Ct necesita un Respuesta a la inanicin
de fosfato
Una rama del sistema inmune innato de la planta es esencial para Actividades beneficiosas
Ct

INTRODUCCION

En la naturaleza, todas, plantas asintomticas sanas viven en asociacin con una gran diversidad
de microbios, que comprenden bacterias, hongos, virus y protistas, llamadas colectivamente la
microbiota planta. Ahora es ampliamente aceptado que las plantas individuales de especies
alejadas ensamblan consorcios de bacterias taxonmicamente estructurados, que se caracterizan
por la coocurrencia de unos pocos filos de bacterias, y los parmetros ambientales tales como los
nutrientes del suelo en coche diversificacin de la microbiota bacteriana a nivel de especie o cepa.
Del mismo modo, las tcnicas de perfilado comunidad de cultura independiente y encuestas
dependiente de la cultura de tejido vegetal superficie esterilizada revelaron una enorme diversidad
de hongos de raz asociado, principalmente pertenecientes a tres filos, Ascomycota,
Basidiomycota, y Glomeromycota. Sin embargo, dado que los conjuntos fngicas asociadas a
plantas son hiperdiversos e influenciado principalmente por la biogeografa de las especies
husped, es difcil discriminar si una asociacin de hongos en particular con una planta sana es
simplemente el resultado de un encuentro estocstico o tiene un significado ecofisiolgica.

METODOLOGA

Se encuest la distribucin de Ct en el cultivo de plantas en Las Rozas ya que el hongo establece

una interaccin estable con endfitos de A. thaliana mediante PCR, tambin se analizaron las
muestras de las poblaciones silvestres de A. thaliana en Ciruelos de Coca, Poln, y Menasalbas,
que se encuentran en Espaa. Por lo tanto, Ct parece ser un endfito ampliamente distribuido
entre la planta de A. thaliana de poblaciones de Espaa. Por el contrario, no se logr
detectar Ct en tres poblaciones de Alemania y Francia, lo que sugiere una asociacin endmica
del hongo en las poblaciones de Espaa. En general, estos datos sugieren que Ct es un endfito
de raz en A. thaliana, que tambin puede infectar a los brotes sistmicamente, sin causar
sntomas de la enfermedad discernibles.

Ct Puede promover el crecimiento de plantas bajo condiciones de baja Pi Para hacer frente a los
impactos a largo plazo de colonizacin Ct sobre el crecimiento de la planta, sin necesidad de
suministrar nutrientes adicionales. Despus de 30 das, las plantas tratados en vermiculita de forma
simulada parecan atrofiados y acumulan antocianinas en sus brotes, un conocido respuesta al
estrs abitico en Arabidopsis En cambio, las plantas de co-cultivadas con Ct tena brotes ms
grandes que no se acumulan antocianinas, lo que sugiere que el hongo puede promover el
crecimiento de las plantas en este sistema de bajo contenido de nutrientes sin suelo. Las plantas
tratadas con ct producen significativamente ms silicuas lo que indica que el hongo mejora tanto
crecimiento de la planta y de la aptitud en condiciones de baja de nutrientes.

RESULTADOS

Se logr demostrar que Ct promovi el crecimiento de plantas, la hidroxiopatita proporciona la

nica fuente de Pi, lo que indica que este hongo puede disolver esta forma insoluble del P. Sin
embargo Ct no promueve el crecimiento de las plantas a suficientes concentraciones de Pi, lo que
indica que este hongo crea interacciones benficas con plantas solo a deficientes concentraciones
de Pi. Y esto le proporciona a los brotes una concentracin de P significativa en tejidos.

Ct mejora el crecimiento de las plantas mediante la mejora de la absorcin de Pi a travs de los

medios. Las hifas de los hongos capturan Pi en la tierra fuera de la rizosfera y la trasladan a la
planta. Para estudiar dicho transporte se utiliz un sistema de 2 compartimientos con trazador
radiactivo 33p fosfato. Para evitar la difusin de a travs de los medios, la planta y el P se
separaron con una barrera plstica (solo poda ser penetrada por hifas). La acumulacin de P en
brotes de Pi se analizaron en maquetas inoculadas con plantas colonizadas con Ct benfica o Ci
patgena, a los 17 das de la adicin del P en el compartimiento interno. Las maquetas inoculadas
con P sin hongo acumularon 5BQ/g en peso seco de P y las inoculadas con Ct acumularon P en
niveles altos. Sin embargo aunque en las plantas inoculadas con Ci hubo tambin alto crecimiento,
los niveles de P trasladados fueron muy bajos. Con lo que se concluy que el transporte de P
desde las hifas a los brotes es regulado estrictamente con Pi.

CT la colonizacin activa la expresin de varios A. thaliana transportadores de Pi Pht1: La

colonizacin de Ct activa la expresin de A. thaliana transportadora de Pi. Para investigar los
mecanismos de Ct para promover el crecimiento, se tomaron muestras para anlisis de ARN en
races de A. thaliana cultivadas bajo diferentes concentraciones de Pi en 4 puntos. 2 puntos tenan
baja concentracin y 2 alta concentracin. Finalmente se logr demostrar que Ct aumenta la
absorcin de P en condiciones deficientes de Pi, de forma similar como lo hacen las micorrizas.

PGP mediada por Ct bajo inanicin de Pi requiere un PSR de A. thaliana intacto: se tomaron datos
de varios genotipos diferentes para realizar 3 experimentos independientes. Cada uno incluyendo
15plantas inoculadas con Ct en 3 placas de agar. En contraste la reprogramacin transcripcional
observada en las races de A. thaliana dio respuesta al dficit de fosfato. El transcriptoma del
hongo permaneci estable con 61 genes regulados. Lo que sugiere que la concentracin de Pi
utilizada en esta investigacin (50mM) no provoco mayor respuesta del husped del fosfato en Ct.

Ct creci de forma similar en otros medios con concentraciones de 50 a 625 Mn de Pi.

Sin embargo 2 genes de los 61, codificaban fosfatasa acida y un contransportador de fosfato con lo
que se concluye que bajas concentraciones de Pi son importantes para hongos solubilizadores y
absorbentes de P.

Se prob si la colonizacin de A. thaliana races por Ct (Colletotrichum tofieldiae) estba restringido

por los componentes de la inmunidad innata.

Inoculamos Ct(Colletotrichum tofieldiae) en races de plantas inmunocomprometidos y despus se

midi la biomasa fngica de QRT-PCR a las 4 ppp. Ni la colonizacin de hongos ni Ct
(Colletotrichum tofieldiae) mediada por PGP fueron significativamente diferentes entre Col-0 de
tipo salvaje y la SID2 ein2 pad4 dde2 mutante cudruple incluso en puntos de tiempo tardos de la
infeccin, aunque esta mutante es simultneamente defectuoso en las tres principales vas de
sealizacin defensa de fitohormonas dependiente implican etileno, cido saliclico, y el cido
jasmnico. Por lo tanto, ya sea la accin combinada de estas vas de defensa no restringe Ct
colonizacin o su actividad en las races es fundamentalmente diferente de las hojas. Debido a la
relacin metablica aparente entre el sistema PSR y la biosntesis de glucosinolatos y la funcin
conocida de las vas de biosntesis de metabolitos secundarios derivados de Trp de la respuesta
inmune innata, tambin a prueba cyp79B2 cyp79B3 plantas mutantes dobles, que se agotan de
todos los metabolitos secundarios derivados de Trp, incluyendo el camalexin antimicrobianos y
glucosinolatos indlicos. Ct biomasa fngica se increment significativamente en este doble
mutante. Adems, Ct tenido un grave efecto negativo sobre el crecimiento de este mutante y
finalmente mataron las plantas, tanto en condiciones de alta y baja Pi, lo que indica que, en
ausencia de estas dos enzimas del citocromo P450 Ct se convierte en un hongo patgeno.

DISCUSIN

Debido a los lugares donde se han aislado Ct podemos inferir que se puede limitar la presencia de
este en A. thaliana, a pesar de esto se ha logrado identificar en mltiples pantas( Damm et al.,
2009 , Tao et al., 2013 ),, pero lo anterior puede deberse a una asociacin que an no se ha
determinado.

El hongo puede considerarse un patgeno puesto que tiende a colonizar de manera reproducible
en races de plantas que presentan enfermedades como se demostr en ensayos de laboratorio,
algo significativo es que en este estudio se pudo demostrar la contaminacin sistmica a travs del
cilindro central de la raz a travs de su capacidad endfita.

La capacidad promotora de crecimiento del hongo depende en gran medida de la cantidad de

fosforo que se encuentre en los suelos, encontrando ms significativos en la zona de estudio
aportando la capacidad promotora de crecimiento en A. thaliana, los estudio analizados determinan
que el hongo es capaz de utilizar la hidroxiapatita para la generacin de fosfato a la planta.
Adems se demostr los efectos combinados de la exploracin del suelo extendida de races
infectadas y solubilizacin de P-planta inaccesible po rCt podran contribuir a la actividad
beneficiosa de los hongos en los suelos naturales que contienen bajos niveles de fsforo
biodisponible.

Se determin la asociacin planta micorriza, esta actividad implica la existencia de genes

trasnsportadores de fosfato a la micorriza, estos genes son conservados en plantas
filogenticamente separadas. Los resultados son una evidencia directa de la gentica de fosforo de
inanicin-inducible con gran afinidad en al fosforo. Es concebible que el mecanismo conservado
evolutivamente para la absorcin de fosfato de hambre inducida por Pi ha sido contratado de forma
independiente para las interacciones beneficiosas con Ct en A. thaliana y hongos micorrcicos en
otras plantas con flores y que en el linaje Brassicaceae Ct compensa la prdida de la simbiosis
micorriza en suelos bajos de fosfato.

Los mutantes fueron doblemente compatibles a una colonizacin esto por las condiciones que se
predispusieron en los procesos de mutacion, a pesar de esto se encontraron algunos mutantes que
presentaron respuesta

El C. tofieldiae - A. thaliana interaccin ofrece un modelo para la diseccin de las asociaciones

micorrizales, donde el socio fngica es susceptible a la manipulacin gentica molecular,
incluyendo la interrupcin gnica dirigida, y abundantes herramientas y los recursos genticos
estn disponibles para la planta husped.