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1. CAMPO DE APLICAO
1.1. Este procedimento se aplica aos Laboratrios Qumicos de Controle da Qualidade
2. OBJETIVO
2.1. Verificar os mtodos analticos normalizados, cuja aplicao permanea dentro do escopo para o
qual foi desenvolvido;
2.2. Validar os mtodos analticos no normalizados, desenvolvidos pelo laboratrio, modificaes de
mtodos normalizados e/ou aqueles aplicados fora dos escopos para as quais foram concebidos.
3. EQUIPE RESPONSVEL
3.1. Todos os colaboradores dos Laboratrios de Controle de Qualidade da gua, incluindo estagirios
supervisionados, que tenham recebido treinamento para este PO.
4. HIGIENE E SEGURANA
4.1. Os equipamentos de proteo individual (EPIs) necessrios para a execuo desse procedimento
devem obedecer ao preconizado para a anlise de cada parmetro, conforme descrito em seus
respectivos POs.
5. DEFINIES
5.1. Ajuste: Conjunto de operaes efetuadas em um sistema de medio de modo que ele fornea
indicaes prescritas correspondentes a determinados valores de uma grandeza a ser medida;
5.2. Branco do Mtodo: gua ultrapura ou outra matriz contendo todos os reagentes que normalmente
esto em contato com a amostra durante todas as etapas do procedimento analtico;
5.3. Comparao Interlaboratorial: Organizao, desempenho e avaliao de medies ou ensaios nos
mesmos ou em itens similares por dois ou mais laboratrios, de acordo com as condies
predeterminadas;
5.4. Curva Analtica: Expresso da relao entre sinais analticos (indicaes) e o valor medido
(grandeza) ao longo de uma determinada faixa;
5.5. Ensaio de Proficincia: Determinao do desempenho de ensaios de laboratrios por meio de
comparao interlaboratorial;
5.6. Erro de Medio: Diferena entre o valor medido de uma grandeza e um valor de referncia;
5.7. Erro Sistemtico: Componente do erro de medio que, em medies repetidas, permanece
constante ou varia de maneira previsvel;
5.8. Exatido de Medio: Grau de concordncia entre um valor medido e um valor verdadeiro de um
mensurando;
5.9. Faixa de Trabalho: Faixa de concentrao do analito na qual o mtodo pode ser aplicado;
5.10. Fator: Varivel quantitativa ou qualitativa que pode afetar o resultado com base na matriz de
experimentos;
5.11. Grandeza: Propriedade dum fenmeno, dum corpo ou de uma substncia que pode ser expressa
quantitativamente sob a forma de um nmero ou referncia (unidade de medida, procedimento de
medio, material de referncia ou uma combinao destes);
5.12. Heterocedasticidade: Ausncia de homocedasticidade, isto , as varincias dos diferentes nveis de
concentrao no so homogneas. Infere-se que o modelo matemtico dos mnimos quadrados
ordinrios (regresso linear simples) aplicado na correlao entre as medies sob diferentes nveis
de concentrao no apropriado;
analticos diferentes ou no) e medies repetidas no mesmo objeto ou em objetos similares. Trata-
se de um parmetro de validao obtido a partir de comparao interlaboratorial ou estudo
colaborativo;
5.30. Resduo: Diferena entre o sinal analtico medido e o sinal analtico previsto (aceito como
verdadeiro);
5.31. Robustez: Parmetro que mede a sensibilidade que um mtodo analtico apresenta em face de
pequenas variaes. Um mtodo diz-se robusto quando este for indiferente s variaes que por
ventura possam ocorrer durante a sua execuo;
5.32. Seletividade: Propriedade de um sistema de medio, utilizado com um procedimento de medio
especificado, segundo a qual o sistema fornece valores medidos para um ou vrios mensurandos,
tal que os valores de cada mensurando sejam independentes uns dos outros ou de outras
grandezas associadas ao fenmeno, corpo ou substncia em estudo;
5.33. Tendncia: Estimativa de um erro sistemtico;
5.34. Validao: Confirmao por exame e fornecimento de evidncia objetiva de que os requisitos
especficos para um determinado uso pretendido so atendidos (Verificao na qual os requisitos
especificados so adequados para um uso pretendido);
5.35. Veracidade: Grau de concordncia entre a mdia de um nmero infinito de valores medidos
repetidos e um valor de referncia;
5.36. Verificao: Avaliao de alguns parmetros de validao de mtodos analticos quando o mtodo
for normalizado e dentro do escopo (Fornecimento de evidncia objetiva de que um dado item
satisfaz requisitos especificados);
5.37. VMP: Valor mximo permitido.
6. PLANEJAMENTO DA VALIDAO
6.1. Os estudos para determinar os parmetros de validao devem ser realizados com pessoal
treinado, equipamentos calibrados e materiais de referncia certificados;
6.2. As etapas para a realizao de uma validao analtica so ilustradas pela Figura 1;
Verificao
Validao
7. PARMETROS DE VALIDAO
7.1. Os parmetros que precisam ser avaliados durante o processo de validao podem variar de acordo
com o tipo de ensaio, conforme mostrado no Quadro 1;
Tipo de ensaio
Componente Elementos
Parmetro Propriedades
Qualitativo (ou analito) menores e Verificao(2)
fsicas
em maior teor traos(1)
Preciso x x x x
Seletividade x x x x
Tendncia / recuperao x x x
Robustez x x x x
Sensibilidade / lineariedade / faixa de trabalho x x x x
Limite de deteco x x
Limite de quantificao x x
Quadro 1. Parmetros de validao conforme o tipo de ensaio
(1)
So considerados como de menor teor concentraes entre 0,01 a 1% e elementos traos, os elementos em concentrao abaixo de
0,01%
(2)
Referente aos mtodos analticos que permanecem dentro do escopo normalizado para o qual foram concebidos
Fonte: In-House Method Validation - A guide for Chemical Laboratories LGC / VAM, 2003
7.2. Se os dados de preciso (CVr e CRR) e exatido (expressa pela recuperao) desse mtodo no
estiverem disponveis, utilizar os critrios definidos na Tabela 2 conforme a faixa de concentrao do
analito nas amostras;
Nota 2: Os coeficientes de variao estimados de Horwitz so vlidos para qualquer mtodo e independe
da matriz ou do analito.
Nota 3: Para fraes de analito abaixo de 100 ppb, a aplicao da equao de Horwitz resulta em valores
de CVR relativamente altos e faixas de recuperao relativamente extensas. Portanto, para esses
nveis de concentrao, os referidos critrios de aceitao tambm podero estar em consonncia
com as referncias normativas para a determinao de analitos nesses nveis de concentrao
(como em cromatografia gasosa, por exemplo).
Nota 4: No caso de avaliao interlaboratorial, a reprodutibilidade do mtodo analtico no deve ser maior
que o critrio de aceitao obtido a partir da metade da concentrao mxima estabelecida pela
legislao: CV (interlaboratorial) < CV (50% do VMP).
7.3. A validao dever ser realizada na sequncia ilustrada pelo fluxograma da Figura 2;
7.4. Registrar todos os clculos e dados experimentais no relatrio de validao;
Mtodo desenvolvido
Atende
No atende
Linearidade
Atende
No atende
Seletividade
Atende
No atende
Preciso
Atende
No atende
Tendncia
Atende
No atende
Robustez
Atende
Mtodo validado
Incerteza de medio
Nota 5: Adotar apenas um procedimento para avaliao de cada um dos parmetros de validao, caso
contrrio justificar no relatrio de validao;
Nota 6: Para verificaes de mtodos analticos normalizados, adotar procedimentos de acordo com a
ordem em que so descritos neste documento, em consonncia com a viabilidade tcnica desses
mtodos.
8. PROCEDIMENTO
8.1. Linearidade
8.1.1. Preparar pelo menos 6 nveis de concentrao, preferencial e igualmente espaados, ao longo
da faixa de trabalho;
Nota 7: O branco do mtodo deve ser usado para verificar se analitos ou interferentes esto presentes no
sistema analtico, contudo no deve ser includo na curva analtica, salvo se a viabilidade tcnica
do mtodo assim determinar.
Nota 8: Se a faixa de trabalho do mtodo a ser validado for desconhecida ou se houver alterao no escopo
analtico, proceder conforme instrues do Anexo A.
8.1.2. Analisar 3 replicatas independentes para cada nvel de concentrao de acordo com o mtodo
a ser validado (PO);
Nota 9: Recomenda-se que as medies dos nveis de concentrao sejam realizadas em ordem aleatria,
desde que esta no comprometa o desempenho do sistema analtico;
8.1.3. Verificar a presena de valores discrepantes pelo teste de Grubbs (Anexo B). Esse teste
dever ser aplicado em cada nvel de concentrao, obedecendo a excluso mxima de at
22,2% de todas as medies da curva analtica;
8.1.4. Verificar a homogeneidade de varincias entre nveis de concentrao pelo teste de Cochran
(Anexo C). Se o resultado for homocedstico, proceder regresso linear com o nvel de
concentrao na abscissa e todas as respostas analticas de cada triplicata na ordenada do
grfico. Se o resultado for heterocedstico, utilizar a transformao ponderada (Anexo D);
8.1.5. Construir o grfico dos resduos, plotando o nvel de concentrao na abscissa e todos os
resduos de cada triplicata na ordenada (Equao 1). A distribuio dos valores em torno da
linha central deve ser aleatria. Tendncias nessa distribuio caracterizam a presea de erro
sistemtico ou que o modelo matemtico utilizado para a construo da curva inadequado;
e i = y i - y i (Equao 1)
8.1.6. Verificar a normalidade dos resduos atravs do teste de Ryan-Joiner (Anexo E);
8.1.7. Verificar se os resduos so admissveis atravs do teste-t unilateral (Equaes 2 e 3). Excluir
as replicatas correspondentes aos resduos se tei > ttabelado para (n-2) graus de liberdade (Anexo
F);
n
(y i - y i )2
i=1
s res = (Equao 2)
n-2
ei
t ei = (Equao 3)
s res
n
8.1.8. Verificar a independncia dos resduos atravs do teste de Durbin-Watson (Anexo G);
8.1.9. Verificar se o intervalo de confiana para o coeficiente linear (IC a) contm a origem do grfico
(Equaes 4, 5 e 6). Os erros sistemticos no so significativos se a reta de regresso linear
passar por esse intervalo;
n
x 2
i
i=1
s a = s res n
(Equao 4)
n (x - x) i
2
i=1
x i
i=1
x= (Equao 5)
n
(x - x)(y - y)
i i
i=1
r= onde -1 < r < 1 (Equao 7)
n n
(x - x) (y - y)
i
2
i
2
i=1 i=1
8.2. Seletividade
Nota 10: A limitao desse procedimento est no analito adicionado, pois ele no est necessariamente na
mesma forma que a do analito j presente na matriz. Quando adicionado em uma forma mais
facilmente detectvel, pode resultar em avaliaes superestimadas da recuperao.
Nota 11: Recomenda-se que a matriz contenha os demais parmetros com concentraes semelhantes
quelas determinadas na rotina analtica.
8.2.1.3. Analisar a matriz fortificada, em triplicata, de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.2.1.4. Estimar a recuperao (Equao 8);
c -c
Recuperao [%] 1 2 100
(Equao 8)
c3
Nota 13: A curva analtica preparada para o estudo da linearidade deve ser empregada como referncia a
esse procedimento.
8.2.2.1. Seguir todo o item 8.1, substituindo a gua ultrapura pela matriz;
8.2.2.2. Verificar se os coeficientes angulares e lineares so estatisticamente iguais (Anexo H).
Nota 14: A curva analtica preparada para o estudo da linearidade deve ser empregada como referncia a
esse procedimento.
s res
LD = 3,3 (Equao 9)
b
Onde: sres = desvio padro dos resduos de todos os nveis de concentrao (Equao 9)
b = coeficiente angular da curva analtica
Nota 15: O desvio padro do coeficiente linear (Equao 4) ou dos sinais analticos de 7 replicatas do
branco podero ser alternativamente empregados no numerador da Equao 9.
8.3.2.1. Analisar 7 replicatas do branco de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.3.2.2. Estimar o limite de deteco (Equaes 10 e 11).
(x - x)i
2
i=1
s= (Equao 10)
n -1
LD x t s (Equao 11)
8.3.3.1. Analisar 7 replicatas do padro de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.3.3.2. Calcular o coeficiente de variao (Equao 12) e compar-lo com o critrio de
aceitao predefinido (Tabela 2);
s
CV = 100 (Equao 12)
x
LD t s (Equao 13)
s res
LQ = 10 (Equao 14)
b
Onde: sres = desvio padro dos resduos de todos os nveis de concentrao (Equao 9)
b = coeficiente angular da curva analtica
8.4.1.2. Verificar se o LQ estimado atende aos critrios de aceitao para preciso e exatido
(Tabela 2) atravs da anlise de 7 replicatas preparadas a partir da concentrao
estimada.
Nota 16: O desvio padro do coeficiente linear (Equao 4) ou dos sinais analticos de 7 replicatas do
branco podero ser alternativamente empregados no numerador da Equao 14.
8.4.2.1. Analisar 7 replicatas do branco de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.4.2.2. Estimar o limite de quantificao (Equao 15);
8.4.2.3. Verificar se o LQ atende aos critrios de aceitao para preciso e exatido (Tabela 2)
atravs da anlise de 7 padres preparados com a mesma concentrao que foi
estimada para o LQ.
8.4.3.1. Analisar 7 replicatas do padro de acordo com o mtodo a ser validado (PO);
8.4.3.2. Verificar se o LQ atende aos critrios de aceitao para preciso e exatido (Tabela 2);
8.5.2.1. Analisar 7 replicatas do nvel de concentrao a ser avaliado de acordo com o mtodo a
ser validado (PO);
8.5.2.2. Estimar o erro normalizado (Equao 16);
x - x verdadeiro
EN = (Equao 16)
U2 + U2verdadeiro
8.5.2.3. Classificar como adequada a tendncia do mtodo se |EN| 1; caso contrrio, avaliar a
tendncia a partir de outro critrio.
8.5.4.1. Analisar 7 replicatas do nvel de concentrao a ser avaliado de acordo com o mtodo a
ser validado (PO);
x - x verdadeiro
ER[%] = 100 (Equao 17)
x verdadeiro
8.5.4.3. Comparar o resultado com o critrio de aceitao predefinido (Tabela 2, Nota 14);
Nota 17: A tendncia tambm pode ser expressa atravs da recuperao analtica (Equao 18) onde, na
prtica, observa-se a seguinte equivalncia: ER = RA 100.
valorObservado
RA[%] = 100 (Equao 18)
valorEsperado
Nota 18: Recomenda-se que o nvel de concentrao esteja prontamente disponvel por um padro. Caso
contrrio, preparar o nvel de concentrao desejado.
8.5.5.1. Analisar 7 replicatas do nvel de concentrao a ser avaliado de acordo com o mtodo a
ser validado (PO);
Nota 19: Recomenda-se que o nvel de concentrao esteja prontamente disponvel por um padro. Caso
contrrio, preparar o nvel de concentrao desejado.
( - x)
ti = (Equao 19)
s
n
8.6. Preciso
8.6.1.7. Classificar como satisfatria a repetibilidade se o mdulo do erro entre replicatas < r.
2 7
si =
1
n(p - 1)
(x ji - xj )
2
(Equao 21)
j=1 i=1
8.6.3. Reprodutibilidade
Onde: s 2dentro = mdia das varincias dos resultados de cada laboratrio ( s 2dentro
deve ser menor que s 2entre )
s 2entre = varincia das mdias dos resultados de cada laboratrio
2
s res1
F= 2
(Equao 26)
s res 2
2
Onde: s res1 = maior valor encontrado de varincia das replicatas
2
s res 2 = menor valor encontrado de varincia das replicatas
Nota 21: Na inexistncia de mtodos de referncia validados com os quais possam ser comparadas as
caractersticas de preciso, os valores aceitveis de repetibilidade e reprodutibilidade podem
ser calculados a partir das equaes de Horwitz (Equaes 27 e 28). A forma mais adequada
para se avaliar a aceitabilidade da preciso de um mtodo consiste no uso do valor de HorRat
(Equao 29). Assim, considera-se a reprodutibilidade do mtodo satisfatria se HorRat 2.
( )
CVR = 2 1-0,5logC (Equao 27)
CVR(exp erimental)
HorRat = (Equao 29)
CVR
Onde: CVR = coeficiente de variao estimado de Horwitz para reprodutibilidade obtida a partir de
estudo colaborativo (expresso em %)
CVr = coeficiente de variao estimado de Horwitz para repetibilidade (expresso em %)
C = concentrao (expressa em frao decimal)
HorRat = Horwitz Ratio
CVR (experimental) = coeficiente de variao do mtodo sob avaliao a partir de estudo intra ou
interlaboratorial (expresso em %)
Nota 22: Na impossibilidade de obteno do CVR (experimental), poder-se- aplicar o CVr (experimental)
ao numerador da razo de Horwitz (embora o primeiro procedimento seja o ideal),
considerando-se o mesmo denominador.
8.7. Robustez
8.7.1. Definir os fatores crticos ao mtodo analtico (por exemplo: temperatura, comprimento de
onda, etc.);
Nota 23: Dois valores sero atribudos por fator (por exemplo: temperatura A = 20C e temperatura a =
25C).
Nota 24: O nmero de experimentos ser igual ao nmero de fatores mais um (NE = NF + 1).
8.7.3. Realizar os experimentos em triplicata de acordo com o mtodo a ser validado (PO),
obedecendo s combinaes de fatores indicada pela matriz;
8.7.4. Calcular o efeito de cada fator (Equao 30);
resultados(Maisculo) resultados(Minsculo)
Dx i = - (Equao 30)
m m
8.7.5. Verificar se h diferena na variao de cada fator atravs do teste-t (Equao 31),
comparando-os com o valor unilateral para (n-1) graus de liberdade (Anexo F). Se txi < ttabelado,
ento o efeito do fator xi no significativo;
Dx i m
t xi = (Equao 31)
s 2
Nota 26: Empregar o desvio padro ponderado se o experimento contiver vrios nveis de concentrao.
9. REFERNCIAS
9.1. NBR ISO/IEC 17025 Requisitos gerais para competncia de laboratrios de ensaio e calibrao,
ABNT, 2005;
9.2. VIM Vocabulrio internacional de metrologia, 1 edio luso-brasileira, Inmetro, 2012;
9.3. RE 899 Guia para validao de mtodos analticos e bioanalticos, Anvisa, 2003;
9.4. NIE-DIMEL-064 Critrios para validao de mtodos de ensaio, Inmetro, 2005;
9.5. DOQ-CGCRE-008_04 Orientao sobre validao de mtodos analticos, Inmetro, 2011;
9.6. DOQ-CGCRE-020_05 Definies de termos utilizados nos documentos relacionados acreditao
de laboratrios, produtores de materiais de referncia e provedores de ensaios de proficincia,
Inmetro, 2011;
9.7. NIT-DICLA-57_01 Critrios para acreditao da amostragem de guas e matrizes ambientais,
Inmetro, 2010;
9.8. ISO 5725-2 Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard
measurement method, 1994;
9.9. Harmonized guidelines for single-laboratory validation of methods of analysis, IUPAC technical
report, Pure Appl. Chem., vol. 74, n. 5, pp. 835855, 2002;
9.10. Validao de mtodos de ensaios (Mery dos Santos Filho), apostila da Rede Metrolgica do
Estado de So Paulo, 2010;
9.11. Validao de mtodos analticos (Cleide Bassani Barros), apostila do Centro de Educao
Profissional, 2011;
9.12. Statistics and chemometrics for analytical chemistry, 5th edition, J. N. Miller & J. C. Miller, 2005;
9.13. Validao de metodologias para anlises fsico-qumicas (Roberto Gonalves Junqueira), IX
Simpsio internacional ABRAPA de inocuidade de alimentos, 2010;
9.14. Procedimento para validao intralaboratorial de mtodos de ensaio: Delineamento e
aplicabilidade em anlises de alimentos (Sheila Vitorino Carvalho de Souza), Tese de doutorado,
UFMG, 2007;
9.15. The fitness for purpose for analytical methods: A laboratory guide to method validation and related
topics, EuraChem, 1998;
9.16. How to meet ISO 17025 requirements for method verification: ALACC Guide, AOAC international,
2007;
9.17. Official journal of the european communities: Implementing council directive 96/23/EC concerning
the performance of analytical methods and the interpretation of results, 2002;
9.18. Technical note 17: Guidelines for the validation of quantitative and qualitative methods. NATA,
2012.
10. ANEXOS
10.1. Anexo A: Determinao da Faixa de Trabalho
10.2. Anexo B: Teste de Grubbs
10.3. Anexo C: Teste de Cochran
10.4. Anexo D: Transformao Ponderada
10.5. Anexo E: Teste de Ryan-Joiner
10.6. Anexo F: Distribuio t-Student
10.7. Anexo G: Teste de Durbin-Watson
10.8. Anexo H: Teste t-Student
10.9. Anexo I: Distribuio F-Snedecor/Fisher
10.10. Anexo J: Exemplo de Avaliao de Robustez
a. Para qualquer mtodo quantitativo, existe uma faixa de concentraes do analito ou de valores de uma
dada propriedade na qual o mtodo pode ser aplicado. Essa determinao iniciada pela escolha de
uma faixa preliminar (Etapa 1 do Quadro A.1);
b. A faixa de trabalho deve cobrir a faixa de aplicao para a qual o ensaio vai ser usado, cuja
concentrao mais esperada deve, sempre que possvel, se situar no centro dessa faixa (Etapas 2 e 3
do Quadro A.1);
c. No limite inferior, o fator limitante o valor do limite de quantificao. No limite superior, os fatores
limitantes dependem do sistema de resposta do equipamento de medio;
d. Dentro da faixa de trabalho a resposta do sinal ter uma relao linear com o analito, onde sua
extenso deve ser estabelecida durante a avaliao dessa faixa.
Etapa
Matriz Procedimento
(replicatas)
gua ultrapura com adio de concentraes variadas do Objetivo: Identificar inicialmente, por observao visual, a
analito faixa linear aproximada e os limites inferior e superior da
faixa de trabalho
Etapa 1 Obs.: Preparar diferentes concentraes de modo
(n 7) independente e no alquotas da mesma soluo me i) Colocar no eixo x as concentraes do analito e no eixo
y, suas respectivas respostas de medio
v) Ir para a etapa 3
Procedimento:
xi - x
G calculado = (Equao B.1)
s
Procedimento:
2
s mx
C calculado = 3
(Equao C.1)
s i2
i=1
2
Onde: s mx = maior valor de varincia dentre os nveis de concentrao
n
s 2
i = somatrio das varincias de todos os nveis de concentrao
i=1
d. Se Ccalculado < Ctabelado, ento haver homocedasticidade entre os nveis de concentrao; caso
contrrio, a condio ser de heterocedasticidade.
Procedimento:
w x y i i i - nx w y w
i=1
bw = n
(Equao D.4)
w i x i2 - nx 2w
i=1
Procedimento:
ei = y i - y i (Equao E.1)
3
i-
8 (Equao E.2)
qi =
1
n+
4
Onde: qi = quantil esperado
i = valor do resduo ordenado de posio i
n = nmero total de replicatas
d. Construir um grfico dos valores dos resduos versus os valores dos quantis estimados para uma
distribuio normal reduzida (quantis normais);
e. Calcular o coeficiente de correlao crtico para um nvel de confiana de 95% (Equao E.3);
f. Comparar o valor obtido com coeficiente de correlao gerado pelo grfico. Se r > rcrtico, ento h
indcio de normalidade dos resduos da regresso linear.
Procedimento:
(e - e
n
2
i i -1 )
i =1
d= (Equao G.1)
e
n
2
i
i =1
Nota G.1: Se houver autocorrelao de resduos, ento o modelo matemtico dos mnimos quadrados
ordinrios (regresso linear simples) aplicado na correlao entre as medies sob diferentes
nveis de concentrao no apropriado.
Procedimento:
2
s res1
F= 2
(Equao H.1)
s res 2
2
Onde: s res1 = maior valor encontrado de varincia residual
2
s res 2 = menor valor encontrado de varincia residual
b. Comparar o valor obtido com o F-tabelado. Se F < Ftabelado (homocedasticidade), ento proceder ao
teste t de Student, empregando as Equaes H.2, H.3, H.4 e H.5. Caso contrrio
(heterocedasticidade), proceder ao teste t de Student, empregando as Equaes H.6, H.7 e H.8;
c. Comparar o valor calculado com o t-tabelado (Anexo F). Se ta e tb< ttabelado, ento a hiptese de
efeito da matriz rejeitada (as curvas analticas preparadas com a gua ultrapura e a matriz so
estatisticamente iguais). Caso contrrio, as medies devero ser realizadas com base na curva
analtica preparada a partir da matriz.
b1 - b 2
tb = (Equao H.2)
s p2 s p2
+
S xx1 S xx 2
n
S xx = (x - x)i
2
(Equao H.3)
i=1
(n1 - 2)sres
2
1 + (n 2 - 2)s res 2
2
s p2 = (Equao H.4)
n1 + n 2 - 4
s p2 = varincia combinada
a1 - a 2
ta = (Equao H.5)
n n
s p2 x 2
1 s p2 x 2
2
i=1 i=1
+
n1S xx1 n 2 S xx 2
b1 - b 2
tb = (Equao H.6)
2 2
s res1 s res 2
+
S xx1 S xx 2
a1 - a 2
ta = (Equao H.7)
n n
2
s res1 x 2
1
2
s res 2 x 2
2
i=1 i=1
+
n1S xx1 n 2 S xx 2
2 2
s res1 s res 2
+
n1 n2
= 2 2
(Equao H.8)
2 2
s res1 s res 2
n1 n2
+
n1 - 2 n2 2
Quadro I.1. Valores para a distribuio unilateral F de Fisher-Snedecor com nvel de confiana de 95%
Dados:
a. Elaborao da matriz de experimentos para determinao do analito por cromatografia (Quadro J.1);
b. Experimentos avaliados atravs de 4 replicatas com padres em 3 nveis de concentrao (mg/kg);
c. Para cada replicata foi efetuado toda a sequncia do mtodo analtico;
d. Desvio padro ponderado = 0,167 mg/kg ( = 9 graus de liberdade);
e. Clculo do efeito dos fatores, bem como da estatstica t para cada um deles;
f. Comparao com o valor crtico (t = 1,833) e concluso.
Experimentos
Identificao dos fatores Valor dos fatores
1 2 3 4 5 6 7 8
Idade da coluna nova (A) velha (a) A A A A a a a a
Velocidade do fluxo 0,8mL/min (B) 1,2 mL/min (b) B B b b B B b b
Varivel imaginria (inerte) + (C) - (c) C c C c C c C c
Fase mvel (MeOH/gua) 90/10 v/v (D) 95/5 v/v (d) D D d d d d D D
Volume de injeo 15 L (E) 25 L (e) E e E e e E e E
Comprimento de onda do detector 320 nm (F) 330 nm (f) F f f F F f f F
Temperatura da coluna 30C (G) sem forno (g) G g g G g G G g
Resultados 5,47 5,33 5,35 5,07 4,59 4,75 4,79 5,09
Dx A =
5,47 + 5,33 + 5,35 + 5,07 - 4,59 + 4,75 + 4,79 + 5,09 = 0,50 tA =
0,50 4
= 4,23 efeito significativo
4 4 0,167 2
Dx B =
5,47 5,33 4,59 4,75 - 5,35 5,07 4,79 5,09 = -0,04 tB =
0,04 4
= 0,34 no significativo
4 4 0,167 2
Dx C =
5,47 5,35 4,59 4,79 - 5,33 5,07 4,75 5,09 = -0,01 tC =
0,01 4
= 0,08 no significativo
4 4 0,167 2
Dx D =
5,47 5,33 4,79 5,09 - 5,35 5,07 4,59 4,75 = 0,23 tD =
0,23 4
= 1,95 efeito significativo
4 4 0,167 2
Dx E =
5,47 5,35 4,75 5,09 - 5,33 5,07 4,59 4,79 = 0,22 tE =
0,22 4
= 1,86 efeito significativo
4 4 0,167 2
Dx F =
5,47 5,07 4,59 5,09 - 5,33 5,35 4,75 4,79 = 0 tF =
0,00 4
=0 no significativo
4 4 0,167 2
Dx G =
5,47 5,07 4,75 4,79 - 5,33 5,35 4,59 5,09 = -0,07 tG =
0,07 4
= 0,59 no significativo
4 4 0,167 2