Determinacin de la respiracin por el mtodo manomtrico

I. Introduccin
Respirmetro manomtrico o de Warburg: El oxgeno utilizado se mide con respecto al
tiempo anotando la disminucin de presin en el recipiente donde se est realizando la
respirometras, que tiene volumen constante, es hermtico y se ha de mantener a una
temperatura constante. En el recipiente se introduce la muestra a analizar dejando una
cmara de aire y adems, se ha de colocar un vaso con una solucin de hidrxido
potsico (o sdico)
Para que absorba el anhdrido carbnico producido de tal forma que la disminucin de
la presin sea una medida del oxgeno consumido. Este es otro ejemplo de Respirmetro
GSS, en el que la medida de la concentracin de oxgeno se realiza de manera indirecta
y tanto la muestra lquida como el gas permanecen de manera esttica en el interior del
recipiente, sin que exista renovacin alguna de ambos durante la determinacin
respiromtricas.
En el mtodo manomtrico, se mide el vaco creado por el consumo de oxgeno causado
por la muestra. Para esto, se requiere absorber el CO2 formado de alguna manera. De
lo contrario no habra cambio de presin en las botellas ya que el volumen de CO2
producido podra ser igual o casi igual al volumen de oxgeno consumido.

II. Objetivo
Medir el consumo de oxgeno en uva (velocidad de respiracin) duarte la respiracin
de fruta (uva) empleando el mtodo manomtrico.
III. MARCO TORICO
Respirmetro. Un Respirmetro es un instrumento que consiste en un pequeo
reactor biolgico que sirve para medir velocidades de respiracin aerobia. El
Respirmetro determina la cantidad de oxgeno consumida por unidad de tiempo y
de volumen. Algunos autores consideran al Respirmetro como un sensor, ya que
consiste en una unidad fsica con una entrada de muestra obtenida despus de un
procedimiento interno. Por otra parte, y debido a su condicin de reactor
biolgico, los resultados son extremadamente dependientes de las condiciones de
trabajo, por tanto, puede existir una variabilidad en la salida. Esta variabilidad
cuestiona el hecho de que se considere al Respirmetro un reactor y obliga a que
los resultados de las respirometras se acompaen de las condiciones de operacin
tales como:
Estado de la biomasa (concentracin, pH, T, DQO, Edad, etc)

Tipo de sustrato utilizado.

 Temporalidad de la medida de oxgeno (puntual, continuo)

3.1. Tipos de Respirmetro

3.1.1. Respirmetro manomtrico o de Warburg: El oxgeno utilizado se mide con
respecto al tiempo anotando la disminucin de presin en el recipiente donde se
est realizando la respirometras, que tiene volumen constante, es hermtico y se
ha de mantener a una temperatura constante. En el recipiente se introduce la
muestra a analizar dejando una cmara de aire y adems, se ha de colocar un vaso
con una solucin de hidrxido potsico (o sdico) para que absorba el anhdrido
carbnico producido de tal forma que la disminucin de la presin sea una medida
del oxgeno consumido. En el que la medida de la concentracin de oxgeno se
realiza de manera indirecta y tanto la muestra lquida como el gas permanecen de
manera esttica en el interior del recipiente, sin que exista renovacin alguna de
ambos durante la determinacin respiromtrico.
3.1.2. Respirmetro volumtrico: De forma anloga al Respirmetro de Wargurg,
el oxgeno consumido se mide en funcin de la disminucin de volumen que
se produzca en el recipiente adecuado que mantenga la presin y la
temperatura constantes. Tambin se trata, al igual que el de Warburg, de un
Respirmetro GSS en que slo cambia la tecnologa empleada para medir la
concentracin de oxgeno.
3.1.3. Respirmetro electroltico: Est formado por el recipiente donde se lleva a
cabo la respiracin dotada en su interior de un absorbedor de CO2
(recipiente con sosa), una clula electroltica y un manmetro, todos
interconectados. A medida que los microorganismos consumen el oxgeno
para la oxidacin de la materia orgnica, se produce una disminucin de
presin en el sistema, que es registrada por el manmetro. ste, a su vez, a
travs de un sistema de control, activar la clula electroltica en funcin de
dicha disminucin de presin, tratando as de mantener la presin constante.
La cantidad de oxgeno liberado en la electrlisis es proporcional a la cantidad
de energa elctrica que ha sido necesaria suministrar.
3.1.4. Respirmetro continuo: continuo o discontinuo hace alusin al modo de
aporte del gas. Es un Respirmetro continuo, el aire circula de manera
continua en el recipiente donde se lleva a cabo la determinacin. Se mide
caudal y concentracin de oxgeno en el aire a la entrada y a la salida de
forma permanente, para as poder determinar por diferencia el consumo
instantneo de oxgeno. A partir de la curva de consumos instantneos de
oxgeno frente a tiempo se podrn obtener por derivacin las velocidades
instantneas de consumo de oxgeno. Se trata claramente de un
Respirmetro GFS, donde la medida se realiza en fase gas, existe un flujo
continuo de gas y el medio lquido permanece esttico en el interior del
reactor biolgico donde se lleva a cabo la determinacin respiromtrico.
3.1.5. Respirmetro discontinuo (Batch): El aporte de oxgeno depende de dos valores de
consigna, un mximo y un mnimo de concentracin de oxgeno dentro del
recipiente donde se lleva a cabo la respirometras. Se inyecta aire hasta alcanzar el
valor mximo de concentracin de oxgeno establecido. Una vez alcanzado se deja
inyectar oxgeno y se espera a que los microorganismos lo consuman, hasta llegar,
 esta vez a la consigna mnima y se volver a airear. Se mide el tiempo que se
emplean en consumir el oxgeno, con lo que se obtiene la velocidad instantnea de
consumo de oxgeno. Este proceso se repite cclicamente. En cada ciclo este
Respirmetro funciona como un GSS.
3.1.6. Respirmetro de Bartha: La evolucin de CO2 es usada como un indicador
de la actividad microbiana y descomposicin relativa del contaminante. A tal
fin se utilizan equipos segn lo descripto por Pramer y Bartha (1965) . Estos
equipos estn constituidos por un Erlenmeyer, el cual tiene adosado un tubo
lateral. El erlenmeyer contiene el suelo que est siendo evaluado, y el tubo
lateral NaOH 0,097 N donde es retenido el CO2 liberado por el metabolismo
de los microorganismos presentes. Ambos recipientes deben permanecer
cerrados mediante tapones de goma. El tapn correspondiente al
Erlenmeyer, est atravesado con una jeringa para inyeccin de agua , y un
filtro de aire que permite el libre intercambio gaseoso reteniendo el CO2 del
aire que ingresa en el sistema. El tapn el tubo lateral, est atravesado
tambin, por una jeringa para inyeccin de NaOH.

IV. Materiales
1 matraz Erlenmeyer de 250mil
Un frsco pequeo de vidrio
Un tapon para el matraz
Una pipeta regla de plstico
Vaselina
Holo
Material biolgico
185 g de uva
Sustancias:
Azul demetileno al 1%
Solucin de K(OH) al 20%
V. Procedimiento
Pesamos la uva 185 g
En un matraz erlrneyerm de capacidad de 2050 ml y en el fondo del matraz
colocamos una base de papel hmedo y sobre de esa v+base colocamos las
fruta en este caso colocamos la uva.
Luego en un frasco muy pequeo introducimos la solucin de hidrxido de
potasio teniendo mucho cuidado que no se derramar.
Despus de introducir la uva y el hidrxido de potasio, y con un tapn tapamos
bien y con vaselina sellamos hasta que no hubiera ningn orifico por donde
 ingrese el aire. gota de azul de metileno en el externo del tubo de vidrio en
forma de L. luego esperamos y observamos el desplazamiento dela gota de azul
de metileno.
Con la pipeta Pasteur colocamos con mucho cuidado una gota de azul de
metileno en el extremo del tubo en forma de L. despus observamos el
desplazamiento de la gota del colorante a travs del tubo y luego medir el
desplazamiento.
VI. Resultados

VII. Cuestionario
1. cul es el fundamento del experimento para medir la respiracin mediante
el manmetro? (control y experimento)
Evaluar la cantidad de oxigeno consumido en un determinado tiempo absorbido
por el hidrxido de potasio
2. qu funcin cumple el K (OH)?
Hidrxido potsico es el que tiene la capacidad de absorber el anhdrido carbnico (CO2)
producido de tal forma que la disminucin de la presin sea una medida del oxgeno
consumido

3. Por qu crees que es necesario que estn muertas las frutas que colocaste
en el Respirmetro control?

4. cmo puedes saber que realmente que el oxgeno consumido alter la

presin dentro del manmetro?
Se sabe que dentro del manmetro la traspiracin es menor y por el cual la presin
atmosfrica es afectada, es decir que a mayor presin atmosfrica es menos la
menos traspiracin porque al consumirse el oxgeno la presin aumente en gran
cantidad.

5. Qu es el cociente respiratorio y cmo vara con el tipo de sustrato?

COCIENTE RESPIRATORIO (CR). S como sustratos respiratorios se oxidan por completo,
sacarosa, fructosa, glucosa o almidn, el volumen de O2 absorbido es igual al volumen de
CO2 liberado, el cociente respiratorio es uno. Las semillas de cereales y de muchas
legumbres tienen valores cercanos a uno, cuando se oxidan grasas y aceites durante la
respiracin, a menudo el cociente respiratorio es 0.70. Por ejemplo cuando se oxida el
tripalmitato de glicerol:

2 C51H 98O6 + 145 O2 102 CO2 + 98 H2O

El CR es: 102/145 = 0.70

Si se oxida un sustrato ms rico en oxgeno, el CR es mayor de 1, por ejemplo: la oxidacin

de cido mlico:

C4H 6O5 + 3 O2 4 CO2 + 3 H2O

 El CR es: 4/3 = 1,33

El cociente respiratorio de protenas es cercano a 1,0. Conociendo los valores del cociente
respiratorio, se puede obtener informacin del tipo de sustrato que es usado en la
respiracin.

6. cmo se mide la intensidad respiratoria?

La intensidad respiratoria de un fruto depende de su grado de desarrollo y se mide como
la cantidad de CO2 en miligramos que desprende un Kilogramo de fruta en una hora. A lo
largo del .crecimiento se produce, en primer lugar, un incremento de la respiracin, que va
disminuyendo lentamente hasta el estado de maduracin. En general, la velocidad de
respiracin, medida por la produccin de dixido de carbono o por el consumo de oxgeno,
es una buena medida de la velocidad de metabolismo y sirve para predecir el
almacenamiento de frutas y verduras.

7. cmo usaras este mtodo para estudiar la variacin de la tasa respiratoria

en una fruta climatrica y en una no climatrica?
Se usara este mtodo para determinar la variacin de la tasa respiratoria sabiendo
que en las frutas no climatricas la tasa respiratoria es inversamente proporcional
y mientras que en las frutas climatricas la taza respiratoria es directamente
proporcional

VIII. Conclusiones
file:///E:/FISIOLGIA%20POSCOSECHA/intensidad%20respiratoria.pdf
http://www.forest.ula.ve/~rubenhg/respiracion/#cociente respiratorio
http://www.fao.org/docrep/x5055s/x5055s02.htm