CINTICA DOS PROCESSOS

FERMENTATIVOS
 INTRODUO
Formao de produto metablito pode ser
relacionada a consumo de nutriente;
Alm do mais, formao de produto no pode
ocorrer sem a presena de clulas;
Assim, esperado que crescimento e formao de
produto esto intimamente relacionados
utilizao de nutrientes que dependendo dos
controles metablitos regulatrios;
A formao de produto ser ligada a crescimento
e/ou concentrao celular.
 INTRODUO
A relao cintica entre crescimento e formao de
produto depende do papel do produto no
metabolismo celular. As duas cinticas mais comuns
so aquelas que descrevem a sntese do produto
durante o crescimento e aps o crescimento ter
cessado. Um exemplo menos comum aplica ao caso
onde o crescimento inicialmente ocorre sem
formao de produto, mas aps algum perodo de
tempo o produto comea a aparecer enquanto o
crescimento continua.
 No grfico (a), a formao de produto associado ao
crescimento celular
No grfico (b), temos formao de produto associado ao
crescimento, de uma forma mais ou menos confusa, chamada
de formao de produto parcialmente associada ao
crescimento

X X X
[ ] [ ] [ ]

P P P

(a) t (b) t (c) t

No grfico (c), temos formao de produto no associada ao

crescimento.
 Velocidade de Formao de Produto
A velocidade de formao de produto a
derivada de P em cada ponto dP/dt;
Da mesma forma que dX/dt e dS/dt no
usado, dP/dt (velocidade de formao de
protuto) pode ser transformada em
Velocidade Especfica de Formao de
Produto (p) que definido como:

1 dP
p=
X dt
 1 1
/max /max

p/pmax
Os grficos
p/pmax mostram:
(d) formao de
(d) t (e)
t produto associada ao
crescimento;
1
(e) formao de
p/pmax
/max produto parcialmente
associada ao
crescimento e
(f) formao de
(f) produto no associada
t
ao crescimento.
 FATORES DE CONVERSO
Crescimento e formao de produto por microrganismos so
processos de bioconverso nos quais os nutrientes qumicos
alimentados fermentao so convertidos a massa celular
e metablitos;
Cada uma dessas converses pode ser quantificada por um
coeficiente de rendimentos, expresso como massa de
clula ou produto formado por unidade de massa de
nutriente consumido, Yx/s e Yp/s, para clula e produto,
respectivamente;
Assim, o coeficiente de rendimento representa a eficincia
de converso.
Nos processos cujo produto a clula (ex. obteno de
levedura de panificao) o grfico representativo da
fermentao mostrado abaixo
 FATORES DE CONVERSO
[]
s

P
X

tempo
onde maximizado o crescimento celular e minimizado a formao de
subprodutos.
O coeficiente de rendimento de clula por nutriente torna-se
Yx/s = X/S
 Nos processos cujo objetivo a formao de um produto e no a
clula (ex. obteno de etanol, antibiticos);
O grfico representativo da fermentao mostrado abaixo

[] s
P

P s
tempo

onde maximizado a formao de produtos e minimizado o crescimento celular;

O coeficiente de rendimento do produto por nutriente ser:
Yp/s = P/S
A maneira usual de calcular rendimentos medir a massa celular ou produto
produzido e substrato consumido sob um perodo de tempo e calcular Yx/s e Yp/s.
Obs.: Quando no meio h mais de um substrato de carbono, considera-se o
substrato limitante do crescimento.
 INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTES NA
VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO

Durante a maioria das fermentaes descontnuas

tpicas, a velocidade especfica de crescimento
constante e independente da concentrao de nutrientes
que est variando. Todavia, velocidade de crescimento,
como uma velocidade de reao qumica, uma funo
da concentrao de compostos qumicos. Os compostos
qumicos nesse caso so os nutrientes essenciais para o
crescimento;
A forma da relao entre velocidade de crescimento e
concentrao de nutriente foi observada em 1949 por
Monod,
O modelo de Monod tem a forma:
S
= m.
Ks + S
 INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTES NA
VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO

S
= m.
Ks + S

= vel. especfica de crescimento;

max = vel. espec. de crescimento mximo;
S = concentrao de nutriente;
KS = constante de saturao e igual a S
quando = 0,5.max
 INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTES NA
VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO
A equao de Monod representa uma simplificao de vrias situaes
reais:

*No prev fase LAG (x=0)

x=0 S >>> Ks.
*No prev fase estacionria (embora S no seja nulo, S 0; x=0.
*No prev nem um tipo de inibio.
*No se aplica a cultivos com limitao de outros nutrientes (apenas S
limitante).

Representao da equao de Monod. Ex: para m = 0,14 h-1 e Ks = 0,60 mg/L (curva
B), Ks = 0,030 mg/L (curva A).
 INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTES NA
VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO
A curva apresentada pela x em funo do tempo (condies
experimentais), apresenta um trecho mximo e constante (AB), aps a
fase LAG curta.

Variao da (x) e do tempo de gerao (tg), no cultivo descontnuo.

-Outros Modelos Matemticos:

Estes modelos, como o de Monod, tmbm no levam em conta o

fenmeno da inibio (pelo substrato ou pelo produto).
 O fenmeno de inibio do crescimento celular (figura abaixo) somente
se aplica para valores de S relativamente baixos,menores ou iguais a
Ks.
Ks

Cintica de inibio pelo substrato (curva A) e sem inibio (---).

S K i ,s
x = m. *
K s + S K i,s + S Ks= Constante de saturao definida na Equao
de Monod;
Ki,s=Constante de inibio pelo substrato
 Com o objetivo de explicar a reduo da velocidade especfica de
crescimento provocada pelos altos valores iniciais de substrato, uma
modificao foi proposta para a Equao de Monod:

S K i ,s
x = m. *
K s + S K i,s + S

Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod;

Ki,s=Constante de inibio pelo substrato;

max
x =
Ki,s = Ks, quando: 2 , porm para um valor de S, que provoque a inibio,

sendo assim superior ao correspondente S da equao de Monod.

 Quanto a inibio pelo produto, um equacionamento semelhante foi
proposto por JERUSALIMSKY & NERONOVA

S K i,P
x = m. *
K s + S K i,P + S

Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod;

Ki,p=Constante de inibio pelo produto;

 MODELO DE MONOD

S
= m.
Ks + S
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Modelo de Monod
Em 1942, Jaques Monod props uma relao
matemtica para descrever o efeito do crescimento
limitante em funo da taxa especfica de
crescimento.
O crescimento da biomassa dependente da
disponibilidade do nutriente.
Quando estamos em condies de limitao do
nutriente a x reduz-se at cessar completamente o
crescimento, em condies de exausto do nutriente.
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Modelo de Monod

where

m taxa especfica de crescimento mxima

Ks constante de saturao ou de Monod
S concentrao do substrato limitante .
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Modelo de Monod
V max[S ]
V=
Km + [ S ]
A taxa especfica de crescimento mxima a taxa mxima de crescimento
obtida para condies no limitantes.

A constante de Monod (Ks) a concentrao do nutriente limitante para a qual

a taxa de crescimento metade da taxa de crescimento mxima;
Representa a afinidade do organismo para o nutriente.
Os valores de m e Ks dependem do organismo do nutriente limitante do meio
de fermentao e de fatores como temperatura e pH
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

A linearizao do modelo de MONOD:

1 ks
max

1
max
1
S
1 ks 1 1
= * +
max S max
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Coeficiente de Rendimento

Rendimento define-se como a quantidade de produto

obtida para determinado substrato.

Por exemplo, se 0.6 g de cido ctrico produzido a

partir de 1 g de glicose , ento o rendimento de
cido citrico de glicose 0.6 g/g.
O rendimento pode variar consideravelmente
durante a fermentao. Por isto, o rendimento
mdio frequentemente expresso como eficincia
da produo.
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Coeficiente de Rendimento

Diferentes tipos de coeficientes de

Rendimento de Biomassa (Yxs)

Rendimento do produto (Yps).

O rendimento biomassa a biomassa

(mdia) produzida por unidade de massa de
substrato consumido

X0 and S0 so as concentraes iniciais de

biomassa e de substrato .
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Coeficiente de Rendimento
O rendimento do produto :

Po and So so as concentraes iniciais.

 EXEMPLO DE APLICAO
Mode Cintico:
Velocidade Especfica de Crescimento: (1)

dx/dt: variao entre a concentrao final (X)

e inicial (Xo ) de biomassa em funo da variao de tempo
(g.L-1.h-1);
max: mxima velocidade especfica de crescimento (h-1);
X: concentrao de biomassa celular no instante t (g.L-1);
S: Concentrao de glicose no instante t (g.L-1);;
Ks Constante de saturao de glicose do modelo de Monod
(g.L-1);
Aerao: 0,25 ou 1 L/min
 EXEMPLO DE APLICAO
Velocidade de consumo de glicose sem formao de produto:
(2)

em que: ds/dt a variao da concentrao inicial (So)

e final (S) de glicose em funo do tempo (g.L-1.h-1).
Yx/s: fator de converso de glicose em biomassa (g.g -1)
 EXEMPLO DE APLICAO
Yx/s = rx/rs

( x0 x f )
Yx / s =
(S0 S )
X = X0 + Yx/s (So S)
ento da equao 2, vem:
(k s + S ) max
(4) ds =
S ( X o + Yx / s ( S o S ) Yx / s
 EXEMPLO DE APLICAO
Integrando a equao 4, tem-se:

Z = bU d (equao da reta)
S
ln
So
z=
t
 Os parmetros
Ks e
max
So estimados a partir de dados
experimentais:
 Valores de max e Ks
Parmetros KLa inicial (15 h-1) KLa Inicial (27 h-1)
S0 (g/L) 22,19 20,36
KLa (h-1) 15,0 27,0
Xo (g/L) 0,10 0,19
Yx/s (g/g) 0,355 0,344
max (h-1) 0,041 0,033
Ks (g/L) 13,03 6,15
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO

Exerccio:

4) Os dados obtidos de uma fermentao descontnua esto ilustrados na tabela

abaixo. Determine:
a) A forma linear do modelo matemtico de Monod, demonstrando graficamente
os coeficientes linear e angular.
b) Os parmetros cinticos Ks e m.

T (h) X (g/L) S (g/L)

0,00 15,50 74,00
0,52 22,50 61,00
0,86 28,60 49,00
1,18 35,30 37,00
1,43 41,10 26,00
1,74 48,20 11,00
2,06 53,00 3,00
______________________________________CINTICA DE FERMENTAO
CURVA DE CRESCIMENTO E PRODUTO
SUBSTRATO e PRODUTO
CONCENTRAO DE

80

60
Seqncia1
40
Seqncia2
20

0
0 1 2 3
TEMPO (h)

T (h) X (g/L) S (g/L) dx/dt

0,00 15,50 74,00 12,24
0,52 22,50 61,00 15,90
0,86 28,60 49,00 19,63
1,18 35,30 37,00 22,29
1,43 41,10 26,00 23,92
1,74 48,20 11,00 20,20
2,06 53,00 3,00 9,12
Le Duy & Zajic
 MODELO DE LINVEWEABER-BURK
O modelo de Monod tem a forma: = . S
m
Ks + S

Lineweaver-Burk, inverteu a Equao de Monod

linearizando a equao, e assim facilitou as
determinaes das constantes de Monod:

1 KS 1 1
= * +
max S max
A linearizao do modelo de MONOD:

1 ks
max

1
max
1
S
1 ks 1 1
= * +
max S max
Alguns valores para Ks no modelo de Monod para
crescimento

Nutriente KS (mg/L) Microrganismo

Glicose 1,0 Enterobacter
aerogenes
Glicose 2,0-4,0 Escherichia coli
Glicose 25,0 Sacharomyces
cerevisiae

Observaes:
a)Os valores de Ks so muito pequenos em relao concentrao do
nutriente nas fermentaes industriais.
) max, quando S> 10 KS
c)para S< 10 KS, uma forte funo da concentrao de nutriente.
d)Durante a fase exponencial constante .
EVOLUO DE CALOR DURANTE A FERMENTAO
A evoluo de calor durante a fermentao est intimamente
relacionada utilizao da fonte de carbono e energia.
a) Quando a fonte de carbono est sendo ativamente
incorporada massa celular via crescimento, tipicamente
cerca de 40-50% da entalpia disponvel conservada na
biomassa e o restante, perdido como calor (50-60%);
b) Quando a fonte de carbono est sendo metabolizada para
manuteno celular, toda a entalpia associada com
combusto desprendida como calor. ;
c) Se um produto est sendo formado, ento o calor
envolvido por unidade de fonte de carbono metabolizada est
entre os dois extremos;
O interesse na evoluo do calor est na necessidade de
remov-lo durante o processo de fermentao e da utilidade
do calor como indicador da viabilidade metablica.
 INFLUNCIA DO AMBIENTE NO CRESCIMENTO
CELULAR
A habilidade de um microrganismo crescer e
sintetizar produtos em um dado ambiente
determinado pelo microrganismo (m.o);
O desenvolvimento bem sucedido de
processos de fermentao dependente,
primeiro da obteno de boas linhagens por
isolamento e mutao, segundo, dos
parmetros ambientais no crescimento celular
e formao de produto, principalmente
temperatura e pH.
 Efeito da Temperatura no Crescimento Celular
Crescimento microbiano e formao de produto so
resultados de uma complexa srie de reaes qumicas.
Como elas, eles so influenciados pela temperatura da
seguinte forma:
tipos de curvas crescimento-temperatura
 Efeito da Temperatura no Crescimento Celular
A maioria dos m.os crescem num intervalo de temperatura
entre 20 e 40 oC;
pode ser dado pela equao de Arrhenius:
= Ae-Ea/RT
= Ae-Ea/RT
A e A = constante (h-1)
Ea e Ea = energia de ativao (cal/mol)
Morte R = 1,98 cal/mol K
Crescimento
T = temperatura (K)
max = velocidade especfica de morte (h-1).
= velocidade especfica de crescimento (h-1

(1/T)

A velocidade de crescimento cresce rapidamente quando a

temperatura aumenta at a temperatura tima, mas a partir
dessa, o crescimento cai tambm rapidamente;
A maioria dos m.o. apresenta o seguinte comportamento:
 Efeito da Temperatura no Crescimento Celular
A energia de ativao para crescimento varia de 15-
20kcal/mol e para morte de 60-70kcal/mol;
Assim a velocidade especfica de morte muito mais sensvel
temperatura que a de crescimento.
A temperatura tambm pode afetar outros aspectos
importantes do crescimento microbiano como Yx/s;
Na produo de biomassa o importante atingir a mxima
converso de substrato massa celular;
Assim o coeficiente de rendimento Yx/s celular de principal
interesse;
Esse coeficiente de rendimento mostrado na figura a seguir
para crescimento de bactrias em metanol, em funo da
temperatura.
Efeito da Temperatura no Crescimento Celular

Yx/s

45 50 55 60 65
T(oC)
Efeito do pH no Crescimento Celular
Escherichia coli

max (bactria)

5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 pH

Bactrias pH 4
8
Leveduras pH
36
Fungos pH 3
7
 Efeito do pH no Crescimento Celular
Como consequncia o pH deve ser controlado nos seus
valores timos para melhorar a performance do processo;
Durante a fermentao, o pH tem uma tendncia a mudar por
vrias razes;
Quando a fonte de N um sal de amnio NH4+ o m.o.
incorpora da forma R-NH3+ liberando H+, portanto o pH
diminui;
Quando a fonte de N NO3-, o m.o. remove H+ do meio para
reduzir o NO3- a R-NH3+ logo o pH aumenta.
Outra razo para variao do pH ocorre quando cidos
orgnicos so produzidos (cido ltico, pirvico, actico e
etc.).
Atravs da medida do cido ou lcali adicionado para
neutralizar a mudana de pH, possvel obter informaes
sobre crescimento (X) e formao de produto (P).
 Efeito do pH no Crescimento Celular
A Figura abaixo mostra a relao entre a massa de NH4OH
adicionado ao cultivo para controle de pH e a concentrao
celular.
O microrganismo utilizado foi E. coli BL21(DE3)pLysS para
produo da protena recombinante Troponina C

X (g/L)
X = 0,68 +
0,85(NH4OH)
E. coli
BL21(DE3)pLysS

NH4OH (g)
Efeito do pH no Crescimento Celular