METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

CARBOHIDRATOS (MONOSACARIDOS, DISACARIDOS Y

POLISACARIDOS)

1. RESUMEN

Las propiedades bioqumicas y las reacciones caractersticas de las diferentes

biomolculas dependen de los distintos grupos funcionales que las constituyen. En
esta prctica se analiz una de las principales macromolculas (Carbohidratos) y se
realizaron algunas reacciones qumicas especficas que permiti la identificacin de
dicho grupo.

2. INTRODUCCION

Los carbohidratos tambin llamados azcares, osas o sacridos, son

polihidrxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos polimricos que por
hidrlisis producen polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas. Segn el nmero de
unidades de azcares sencillos que posean se clasifican en:

MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS

cuando contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando contienen el grupo
cetona. Los monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares
y pueden tener entre tres y hasta siete tomos de carbono.

DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre s

por enlaces glucosdicos.

OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos

tambin por enlaces glucosdicos.

POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de unidades

de azcar sencillo ligadas entre s. De acuerdo con lo anterior, adems de
reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es
necesario diferenciar si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si
es fcilmente oxidable o no, es decir si es un AZCAR REDUCTOR o no lo es,
si es de cinco tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono
(hexosa), si es disacrido o polisacrido.

Una secuencia que permite hacer el reconocimiento y diferenciacin de

carbohidratos se esquematiza en:

Ensayo de Molish: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de

carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se hidrolizan con
 cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se convierten en
derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con a-
naftol formando un color prpura violeta.

Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de

carbohidratos reductores. Al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict
contiene ion cprico en medio alcalino que se reduce hasta xido cuproso en
presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre.

Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y

disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta
xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los
disacridos.

Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y
yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la
formacin de una coloracin azul-violeta intensa y el glicgeno y las
dextrinas por formacin de coloracin roja.

Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la

conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensacin
con resorcinol formando as complejos coloreados.

Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el

cual forma complejos de coloracin slo con las pentosas.

A travs de esta prctica se logro la identificacin por mtodos colorimtricos

cuantitativos de carbohidratos: monosacridos, disacridos y polisacridos.

3. MATERIALES Y METODOS

12 tubos de ensayo
Pipeta de 10 o 5 ml
Pipeta de 1 ml
 Estufa para bao de Maria
microscopio

Reactivos:
Molish
Barfoed
Bial
Seliwanoff
Fenilhidrazina
H2SO4

Mediante los siguientes procedimientos se analiz un carbohidrato (sustancia

problema), continuando con el estudio de Hidrlisis cida de disacridos
respectivamente (Maltosa y Sacarosa).

3.1. Anlisis para monosacridos, disacridos y polisacridos.

Sustancia Prueba Volumen Procedimiento

problema
ml
1 Molish 2 gotas Se llevo a bao de Mara por 10 minutos, y se
observaron resultados
1 Barfoed 2.5 ml Se mezclo y se llevo a bao de Mara, una vez
apareci el precipitado rojo, se sacaron del calor
y se anotaron los resultados
1 Bial 1.5 ml Se llevo a bao de Mara durante 3 min y se
observaron los resultados.
1 Seliwanoff 2 ml Se llevo a bao de Mara por 10 minutos, y se
observo la coloracin que indicaba la presencia de
pentosa
2 Fenilhidrazi 0.5 ml Se llevo a bao de Mara durante 10 min y
na posteriormente se enfri el tubo en agua y se dejo
reposar durante 5 min, para identificar bien los
cristales se examinaron con ayuda de un
microscopio

3.2. Hidrlisis cida de disacridos.

tubo solucin disacrido HCl H2O Neutraliza
(ml) 1N (ml) cin
(ml) 0.5 ml de
Se Hirvieron benedict y
simultnea se llevo a
mente a bao de
bao de Mara por 2
Mara + min
1 Maltosa 1 1 0 7 gotas de
2 Sacarosa 1 1 0 NaOH 1N
3 Maltosa 1 0 1 7 gotas de
4 Sacarosa 1 0 1 agua

Se observ y se registr los resultados obtenidos.

4. RESULTADOS Y DISCUCIONES

4.1. Anlisis para monosacridos, disacridos y polisacridos.

Identificacin de carbohidrato
Prueba Cambios Resultado
Molish Anillo violeta carbohidrato
Barfoed Precipitado rojo antes de los Monosacridos
6 minutos
Bial No cambio su color naranja Hexosa
Seliwanof Leve coloracin Glucosa o galactosa
fenilhidrazina Cristales en forma de palma GLUCOSA
Tabla1

Se realiz la prueba con el reactivo de Molish y se observo una reaccin con la

solucin problema. Por lo tanto se infiri que este reactivo sirve para la
identificacin general de carbohidratos (hidrlisis de polisacridos y disacridos con
el cido sulfrico hasta monosacridos).

Seguidamente se aplic el reactivo de Barfoed a la solucin problema y se obtuvo

que la solucin en estudio correspondi a un Monosacrido, puesto que no tardo
ms de 6 minutos en presentarse un precipitado rojo; esto se debe a la rapidez con
que el cido cprico es reducido a oxido cuproso. (Mayor rapidez de oxidacin en
presencia de monosacridos que en presencia de disacridos).
Despus de esto, se mezclo la solucin problema con el reactivo de Bial y no se
percibi ningn cambio de coloracin, lo cual indico que la solucin problema era
una hexosa. (Este reactivo slo toma coloracin en presencia de pentosas).

Cuando se realiz la prueba con Seliwanoff, se determin solo una leve coloracin
en la solucin, lo cual evidenci la ausencia de grupos cetonicos, por lo que se poda
tratar de Glucosa o Galactosa (solucin problema).

Para finalizar se realiz la mezcla de solucin problema con el reactivo de

fenilhidrazina y se logr demostrar que nos encontrbamos en presencia de un
azcar reductor GLUCOSA.

4.2. Hidrlisis cida de disacridos.

Hidrolisis acida de carbohidratos

Disolucin de disacrido Cambio observado
Maltosa (HCl-NaOH) Rojo ladrillo
Sacarosa (HCl-NaOH) Naranja ladrillo
Maltosa (Agua) Naranja zanahoria
Sacarosa (Agua) No cambio color (verde claro)

Tabla2

El fundamento de esta reaccin radic en que en un medio alcalino (NaOH),

el in cprico (otorgado por el sulfato cprico) fue capaz de reducirse por efecto del
grupo aldehdo del azcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observ como
un precipitado rojo ladrillo correspondiente al xido cuproso (Cu2O).

El medio alcalino facilit que el azcar se tornara a su forma lineal, puesto que el
azcar en solucin forma un anillo piransico. Una vez que el azcar se encontr
linealmente, su grupo aldehdo pudo reaccionar con el ion cprico en solucin.

En este ensayo se observo que la Maltosa fue capaz de dar positivo. Esto ocurri
por las condiciones en que se realiz la prueba: en un medio alcalino caliente este
disacrido se tautomeriza a glucosa (que es capaz de reducir al ion cprico).

La sacarosa (enlace (1 2) O), es un disacrido que no posee carbonos

anomricos libres puesto que estn siendo utilizados en el enlace glucosdico, por lo
que carece de poder reductor. Sin embargo, en presencia de HCl y en caliente, la
sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una molcula de agua y se descompone en
los monosacridos que la forman, glucosa y fructosa, que s son reductores. La
prueba que se realiz demostr la hidrlisis de este disacrido dando un resultado
positivo: aparicin de un precipitado naranja ladrillo, lo cual demuestra que se
rompi el enlace O-glucosdico de esta.
5. CONCLUSIONES

1. Monosacridos como la glucosa y disacridos como la maltosa a excepcin

de la sacarosa son azucares reductores.

2. La maltosa presenta en su estructura el OH hemiacetlico por lo que es un

azcar reductor, es decir tienen su OH anomrico libre, y stos son los que
dan positivo en la prueba de Benedict.

3. La sacarosa no es un azcar reductor, pero en presencia de HCl (medio cido

caliente) esta puede hidrolizarse a sus monosacridos que la componen
(Glucosa- Fructosa) lo que da positivo en la prueba de Benedict.

4. En la reaccin con el cido sulfrico los disacridos y polisacridos se

hidrolizan logrando la identificacin de los monosacridos que los
componen.

6. PREGUNTAS

1. Cules son las aplicaciones prcticas de las pruebas estudiadas

Ayudan a la determinacin especfica de carbohidratos en general sin

importar si son monosacridos, disacridos o polisacridos (Molish). Las
dems pruebas son usadas para la determinacin especifica de azucares
segn sus grupos funcionales y el nmero determinado de sus carbonos.

2. Escriba la glucosa en forma de silla

3. Defina los siguientes trminos: carbono anomrico, centro quiral,

levorrotatorio.
 Carbono anomrico: hace referencia al carbono carbonlico que se
transforma en un nuevo centro quiral tras una ciclacin hemicetal o
hemiacetal.

Centro quiral: es un tomo unido a cuatro sustituyentes diferentes. Una

molcula que posee. Un centro quiral tiene una imagen especular no
superponible con ella, denominada enantimero.

Levo rotatorio: (levo: griego, al contrario) o levgiro Se denomina as a los

monosacridos que poseen actividad ptica y desvan el plano de la luz
polarizada hacia la izquierda, en sentido opuesto a las manecillas del reloj,
y se indica con el signo (-) o la letra l.

4. Dibuje los monosacridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa, clasifquelos

segn el nmero de tomos de carbono y la funcin principal.

Hexosas Funcin Pentosa funcin

es la fuente principal de energa de las
Glucosa clulas, mediante la degradacin
catabolica
La galactosa se convierte en glucosa en
el hgado e intestinos, de manera que
sirva de combustible metablico para Principal
Galactosa las clulas. Es sintetizada en las fuente de
glndulas mamarias para la produccin Ribosa energa
de lactosa. Adems es constituyente de para el
glucolipidos y glucoproteinas. corazn

La fructosa se convierte en glucosa en

el hgado e intestinos, de manera que
Fructosa
sirva de combustible metablico para
las clulas.
5. Efectu un enlace hemiacetalico y uno hemicetalico, escriba las diferencias
entre ambos enlaces.

El enlace hemiacetalico se forma por reaccin entre el carbonilo de un grupo

cetona con un grupo hidroxilo de un alcohol. Y el enlace hemicetalico se da
entre el carbonilo de un grupo aldehdo con un hidroxilo de un alcohol.

6. Escriba las funciones: aldehidica, cetonica, alcohlica, acida, colquelas en

orden de reactividad y explique el por qu de ese orden.
7. Explique en qu consiste la hidrlisis acida de disacridos

Disacridos: (ejemplo, la sacarosa), producen dos molculas de

monosacrido por hidrlisis. Rompimiento de enlace glucosidico.
La sacarosa (enlace (1 2) O), es un disacrido que no posee carbonos
anomricos libres puesto que estn siendo utilizados en el enlace
glucosdico, por lo que carece de poder reductor. Sin embargo, en
presencia de HCl y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora
una molcula de agua y se descompone en los monosacridos que la
forman, glucosa y fructosa, que s son reductores, lo cual demuestra que
se rompi el enlace O-glucosdico de esta.

8. Escriba y compare las formulas de la maltosa y la trealosa.

La maltosa resulta de la unin de dos glucosas de manera que el

carbono anomrico de una se une al grupo -OH en el carbono 4 de
otra, quedando la primera de ellas en configuracin a-. Por eso el
nombre sistemtico de la maltosa es a-D-glucopiranosil- (1,4)-D-
glucopiranosa. Al quedar el carbono anomrico libre en la segunda, la
maltosa tendr propiedades reductoras y formas anomricas a- y b-.

La trehalosa es un disacrido formado por dos glucosas unidas por su

carbonos anomricos respectivos. Al no quedar ningn carbono
anomrico libre, la trehalosa recibe el siguiente nombre
sistemtico: a-D-glucopiranosil -a-D-glucopiransido. Obsrvese el
sufijo sido para indicar su carcter no reductor; igualmente, al hacer
la denominacin sistemtica hay que nombrar el carcter anomrico
de ambos residuos (a- y a- en este caso)
 9. Defina los siguientes trminos: azcar reductor y azcar no reductor, cite
ejemplos.

Azucares reductores: son los monosacridos (todos las aldosas, es

decir aquellos que presentan un grupo aldehdo en su estructura
lineal, por ejemplo: glucosa, manosa, fructosa, galactosa, ribosa, etc.)
y los disacridos (no todos, ejemplos son la maltosa, lactosa y
celobiosa).
Experimentalmente se puede demostrar que son reductores
mediante un ensayo sencillo como Fehling o Tollens.

Azucares no reductores: Los azcares No Reductores son aquellos

que se unen por enlaces glucosdicos de tipo Alfa o Beta, cuando 2
monosacridos iguales o diferentes se unen forman un Disacrido, los
Disacridos por condensacin liberan una molcula de agua y son
azcares no reductores ya que el grupo Oxidrilo ( OH ) de una hexosa
se combina con el grupo Aldehdo ( CHO ) de otra hexosa liberando 1
molcula de H20, el licor de Feeling no tiene efecto sobre ellos lo cual
los determina como azcares no reductores, por ej la Sacarosa
( glucosa + fructosa ) Maltosa ( 2 unidades de alfa glucosa), Trehalosa,
etc.

10. Cul es la importancia energtica del almidn.

El almidn es la sustancia con la que las plantas almacenan su alimento en races

(yuca), tubrculos (patata), frutas y semillas (cereales). Pero, no slo es una
importante reserva para las plantas, tambin para los seres humanos tiene una alta
importancia energtica, proporciona gran parte de la energa que consumimos los
humanos por va de los alimentos. Se encuentra en las patatas, el arroz, los cereales,
las frutas, etc. En una dieta sana, la mayor parte de la energa la conseguimos a
partir del almidn y las unidades de glucosa en que se hidroliza.

11. Efectu un enlace glucosdico.

BIBLIOGRAFIA

CHANG WILLIAMS, Raymond. QUIMICA SEPTIMA EDICION. Colombia;

McGraw-Hill MAYO 2005.

HORTON ROBERT. BIOQUIMICA. Mexico; Prentice-hall Hispanoamericana,

1995.

Briceo, C.O y Rodrguez de Cceres Lilia. Qumica General. Curso

universitario De Pime, 1988.