OBJETIVOS

Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetas para el espectrofotmetro.
Manejar algunos de los parmetros que intervienen en el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico.
Establecer las condiciones ptimas de los parmetros probados para la aplicacin del mtodo.

INTRODUCCIN

La espectrometra es un mtodo qumico que se utiliza para cuantificar la concentracin de analitos utilizando la luz. A
los mtodos que se auxilian con la luz para llevar a cabo un anlisis cuantitativo se le conoce como mtodos
espectrofotomtricos, estos pueden tener una sub-clasificacin dependiendo de la longitud de onda que utilicen para
el anlisis entre los ms conocidos estn: espectrometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta e infrarrojo.
Para considerar a un mtodo espectrofotomtrico como cuantitativo primero debe de cumplir ciertas reglas como:

El mtodo seleccionado deber ser especfico para cuantificar un analito de nuestro inters.
Que el mtodo est libre de todas las interferencias posibles al momento de hacer la determinacin o en su
defecto tratar de controlar lo ms posible estas interferencias.
Debe de tener alta precisin y alta exactitud.
El mtodo debe tener una alta sensibilidad y adems el lmite de deteccin debe de corresponder a una
concentracin baja.

Experimentalmente para el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico, despus de optimizar las condiciones

qumicas del sistema (pH, temperatura, control de interferentes, concentracin adecuada de reactivos, solvente
apropiado, proteccin a la luz para evitar reacciones fotoqumicas, etc.) que garanticen que se tiene la especie de inters
en condiciones adecuadas para la medida, se establecen los siguientes parmetros:

Longitud de onda analtica, intervalo ptimo de concentraciones, curva de calibracin, sensibilidad del mtodo analtico
y lmite de deteccin.

RESULTADOS, CLCULOS Y PREGUNTAS

Tabla 1. Seleccin de tubos comunes para usarlos como celdas.

%T400
Tubo No.
(NiSO4) Explique qu son las superficies pticas equivalentes y el dimetro interno
1 12.4 equivalente.
2 12.6
La superficie ptica equivalente se refiere a que las celdas presenten una superficie
3 11.9
homognea, es decir que sean idnticas o similares en cualquier punto de stas.
4 12.5
Asimismo deben tener igual grosor en toda la circunferencia del tubo.
5 12.5
6 12.3 El dimetro interno equivalente es anlogo a la superficie ptica equivalente: el
7 12.5 dimetro de los tubos deber ser igual en cada tubo para que el paso de luz sea
8 12.5 constante.
9 12.4
10 12.3
Tabla 2. Curva de calibracin de Fe3+ por el mtodo del NH4SCN.

Tubo Fe3+ A ajustada por Para determinar la cantidad de in frrico

A480 yprctico-yterico
No. (g/mL) regresin lineal presente en cada tubo, se procede al siguiente
1 blanco 0 - - clculo:
2 0.07 0.018 0.020 -0.002
56 g/mol --------------- 1M (1 litro)
3 0.175 0.029 0.037 -0.008
X --------------- 0.00025 M (1 litro)
4 0.35 0.062 0.065 -0.003
X = 0.014 g/mol
5 0.7 0.116 0.120 -0.004
6 1.05 0.183 0.176 0.007 Peso molecular Fe3+ = 56 g/mol
7 2.45 0.399 0.399 0 [FeCl3] = 0.00025 M
8 3.85 0.630 0.622 0.008
9 5.25 0.847 0.844 0.003 Ahora calculamos la cantidad de Fe3+ por
10 6.65 1.071 1.067 0.004 mililitro en el tubo no. 2 por ejemplo:
11 8.05 1.300 1.290 0.010
12 9.45 1.505 1.513 -0.008 0.014 g/mol ----------- 1000 mL
13 10.85 1.726 1.735 -0.009 X ----------- 0.1 mL (mL adicionados de
FeCl3)
-6
X = 1.4x10 g = 1.4 g entre los 20 mL de la mezcla de FeCl3, H20 y NH4SCN X = 0.07 g/mL
Se realizan los mismos clculos para cada tubo.

Para calcular los valores de A

Curva de calibracin de Fe3+ ajustada por regresin lineal,
2 simplemente usamos la siguiente
y = 0.1591x + 0.0091 ecuacin:
Absorbancia (480 nm)

1.5 R = 0.9999
y = 0.1591x + 0.0091
1
Sustituyendo en x los datos de Fe3+
0.5 (g/mL) de la tabla anterior. Ejemplo
tubo 2:
0
0 2 4 6 8 10 12 y = 0.1591 (0.07) + 0.0091 = 0.020
Cantidad de Fe3+ (g/mL)

Lmite de deteccin o concentracin mnima detectable (LDD).

Para su clculo, primero se obtiene la desviacin estndar SB teniendo en cuenta que n = 12 ya que ste fue el nmero
de tubos usados. SB = 6.9x10-3

Ahora se usa la ecuacin y = yB + 3SB, en donde:

y = Medida de absorbancia producida por la concentracin mnima detectable.

yB = Medida de absorbancia del blanco u ordenada al origen = 0.0091
SB = Desviacin estndar del blanco = 6.9x10-3
Entonces se obtiene que y = yB + 3SB = 0.0091 + 3(6.9x10-3) = 0.0298

Finalmente se despeja a x de la ecuacin de la recta de regresin lineal y el resultado obtenido ser el lmite de
deteccin.
y = 0.1591x + 0.0091

= = = 0.0298 0.00910.1591 = 0.13

Tabla 3. Datos para aplicar el Mtodo de Ringbom en la determinacin de Fe3+ por el mtodo del SCN-.

Tubo No. Fe3+ (g/mL) Log [Fe3+] A480 %T Absortancia

1 blanco - - - -
2 0.07 -1.15 0.020 95.50 4.50
3 0.175 -0.76 0.037 91.83 8.17
4 0.35 -0.46 0.065 86.10 13.90
5 0.7 -0.15 0.120 75.86 24.14
6 1.05 0.02 0.176 66.68 33.32
7 2.45 0.39 0.399 39.90 60.10
8 3.85 0.59 0.622 23.88 76.12
9 5.25 0.72 0.844 14.32 85.68
10 6.65 0.82 1.067 8.57 91.43
11 8.05 0.91 1.290 5.13 94.87
12 9.45 0.98 1.513 3.07 96.93
13 10.85 1.04 1.735 1.84 98.16

Curva de Ringbom para Fe3+

120

100
Absortancia (100-%T)

Punto 2
80

60

40
Punto 1

20

0
-1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5
Log [Fe3+]
Para obtener el porcentaje de error fotomtrico es necesario calcular a la pendiente de la parte recta de la curva de
Ringbom. Para esto se escogen dos puntos sobre la recta, marcados con unas X en el grfico. Ahora interpolamos esos
dos puntos hacia los ejes de Absortancia y log [Fe3+].

Punto 1 x1 = log [Fe3+] = 0 y1 = Absortancia = 32

Punto 2 x2 = log [Fe3+] = 0.75 y2 = Absortancia = 89

Convertimos los log [Fe3+] a concentracin de ion frrico y las absortancias a absorbancias para determinar los
intervalos donde se presenta el error fotomtrico mnimo:

x1 = 1 , x2 = 5.62 Intervalo ptimo de concentraciones

y1 = 0.167 , y2 = 0.959 Intervalo ptimo de absorbancias

2 1 89 32
= 2 1 = 0.75 0 = 76
% = (2.303) 100 = (2.30376) 100 = 3.03%

Tabla 4. Estabilidad del color respecto al tiempo.

Tiempo (min) A480 Es estable el color?

0 0.561 No
30 0.515
60 0.496 Cul es el tiempo ptimo para hacer las lecturas? Explique porqu.
90 0.485 Al min 0, ya que es cuando la absorbancia obtenida se acerca ms al centro de la
120 0.476 curva de calibracin, lugar donde se presenta el error fotomtrico mnimo.

Grfica de tiempo vs absorbancia

0.57
0.56
Absorbancias (480 nm)

0.55
0.54
0.53
0.52
0.51
0.5
0.49
0.48
0.47
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo de reposo (min)
Tabla 5. Efecto de la concentracin de SCN- en la determinacin de Fe3+.

SCN- Fe3+
Tubo No. SCN-/ Fe3+ A480
(g/mL) (g/mL)
1 870.0 - - 0.046
2 87.0 4.2 20.71 0.168
3 232.0 4.2 55.24 0.359
4 870.0 4.2 207.14 0.564
5 2900.0 4.2 690.48 0.591
6 5800.0 4.2 1380.95 0.706
7 8700.0 4.2 2071.43 0.748
8 11600.0 4.2 2761.90 0.811
9 14500.0 4.2 3452.38 0.806
Para la cantidad de Fe3+ en todos los tubos:

56 g/mol --------------- 1M (1 litro) Peso molecular Fe3+ = 56 g/mol

X --------------- 0.00025 M (1 litro) [FeCl3] = 0.00025 M
X = 0.014 g/mol

0.014 g/mol ----------- 1000 mL

X ----------- 3 mL (mL adicionados de FeCl3)
-5
X = 4.2x10 g = 42 g entre 10 mL (totales) = 4.2 g/mL

Para la cantidad de SCN- en el tubo 2:

58 g/mol --------------- 1M (1 litro) Peso molecular SCN- = 58 g/mol

X --------------- 0.5 M (1 litro) [NH4SCN] = 0.5 M
X = 29 g/mol

29 g/mol ----------- 1000 mL

X ----------- 0.03 mL (mL adicionados de NH4SCN)
X = 8.7x10-4 g = 870 g
Grfica de A vs SCN-/ Fe3+ entre 10 mL (totales) = 87
g/mL
0.9
0.8
Absorbancias (480 nm)

0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000

Relacin de SCN-/ Fe3+

Tabla 6. Efecto del pH.

Tubo No. pH A480 De qu manera influye el pH en el sistema colorido?

1 Blanco
A pHs cidos se mantiene el sistema colorido. Conforme aumenta el valor de pH,
2 0 0.893
el sistema pierde la capacidad de absorcin de la radiacin y se obtienen
3 1 0.913
absorbancias muy bajas.
4 3 0.924
5 7 0.007 Cul es el pH recomendado para que se efecte la reaccin Fe3+ y el
6 7 0.004 SCN? pH = 3

Grfica de A vs pH
1.2
Absorbancias (480 nm)

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
-0.2
pH

Tabla 7. Efecto de algunos aniones en la reaccin Fe3+ - SCN-.

Anin A480 inicial A480 final

Fluoruro 0.847 0.346
Oxalato 0.823 0.069
Tartrato 0.811 0.798
Fosfato 0.810 0.701

Cul es el efecto de los diferentes aniones sobre la reaccin entre el in frrico y el tiocianato?

Disminuyen los valores de absorbancia. En orden creciente de interferencia se tienen a los aniones: oxalato, fluoruro,
fosfato y tartrato. Este ltimo presenta una interferencia muy pequea.

A qu se debe este efecto?

Los fosfatos, fluoruros y oxalatos aun en pequeas cantidades interfieren formando complejos estables con los iones
frricos.
Tabla 8. Condiciones ptimas para la determinacin de Fe3+ con NH4SCN.

Parmetro Valor ptimo

pH 3
Tiempo 0
-
Concentracin de SCN 870 g/mL
Lmites de concentracin con %Ep mnimo 1-5.62 g/mL
Aniones que interfieren (en orden
Oxalato, fluoruro, fosfato y tartrato
creciente)
Lmite de deteccin del mtodo (LDD) 0.13

DISCUSIN DE RESULTADOS

Para la seleccin de tubos, se eligieron a aqullos que presentaban caractersticas visualmente similares, como: mismo
dimetro, mismo grosor y con boquilla gruesa y pronunciada. Todas estas caractersticas nos facilitan las lecturas de
porcentaje de transmitancia, ya que si no fuera de esta manera, los valores nos variaran ms del 2% de diferencia
establecida. De igual manera, el paso de luz es constante o casi constante cuando se realiza una seleccin de tubos de la
forma antes descrita.

El lmite de deteccin, que se define como aquella concentracin que proporciona una seal instrumental
significativamente diferente de la seal del blanco, obtenido en este experimento fue de 0.13. Existe una relacin entre
el LDD y la sensibilidad. La palabra sensibilidad se utiliza como sinnimo de lmite de deteccin bajo, por lo que se puede
decir que nuestro mtodo espectrofotomtrico es sensible gracias a que se obtuvo un lmite de deteccin pequeo.

Existe un valor de porcentaje de error fotomtrico mximo, el cual es del 5%. El %Ep que obtuvimos fue del 3.03% por lo
que nos encontramos dentro del intervalo permitido de error.

CONCLUSIONES

Para un buen establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico es necesario elegir inicialmente tubos con superficies
pticas equivalentes y dimetros similares, al igual que controlar variables como pH, tiempo, concentracin de analitos y
presencia de interferencias.

Las condiciones ptimas para el buen funcionamiento del mtodo espectrofotomtrico realizado son pHs cidos (de 0 a
3), tiempo mnimo de reposo (menos del minuto), concentracin de SCN- de 870 g/mL y evitar la presencia de aniones
como fluoruros, oxalatos y fosfatos.

BIBLIOGRAFA

Torres Cartas Sagrario, Gmez Benito Carmen. Tcnicas instrumentales. Manual de Laboratorio. Editorial
Universidad Politcnica de Valencia. pp. 60-61.