Sei sulla pagina 1di 12

Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use.

Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

Rev Lab Clin. 2011;4(1):314

Revista del Laboratorio Clnico

www.elsevier.es/LabClin

ORIGINAL

Estudio comparativo de la morfologa de sangre perifrica


analizada mediante el microscopio y el CellaVision DM96
en enfermedades hematolgicas y no hematolgicas
Anna Merino a, , Rosa Brugus a , Rosario Garca b , Marta Kinder b ,
Ferrn Torres c y Gins Escolar d

a
Laboratori Core, Servei dHemoterpia-Hemostsia, CDB, Hospital Clnic de Barcelona, IDIBAPS, Barcelona, Espana
b
Laboratori Core, CDB, Hospital Clnic de Barcelona, Barcelona, Espana
c
UASP, Hospital Clnic de Barcelona, IDIBAPS, Barcelona, Espana
d
Servei dHemoterpia-Hemostsia, Hospital Clnic de Barcelona, IDIBAPS, Barcelona, Espana

Recibido el 12 de julio de 2010; aceptado el 23 de octubre de 2010


Disponible en Internet el 20 de febrero de 2011

PALABRAS CLAVE Resumen


Morfologa de sangre Introduccin: La revisin de la citologa de sangre perifrica es un punto de partida impres-
perifrica; cindible para el diagnstico de la mayora de las enfermedades hematolgicas, e incluso no
CellaVision DM96 hematolgicas.
Objetivo: Evaluar la concordancia entre los resultados obtenidos al realizar el recuento diferen-
cial leucocitario mediante el sistema de anlisis digital CellaVision DM96 (DM96) y el microscopio
ptico convencional.
Material y mtodos: Se analizaron 234 extensiones de sangre perifrica, de pacientes del Hos-
pital Clnic de Barcelona con cifras de leucocitos entre 1,12 y 282 109 /L. 177 preparaciones
correspondieron a pacientes con enfermedades hematolgicas. Se compararon los porcentajes
de neutrfilos, bandas, eosinfilos, basfilos, linfocitos, monocitos, clulas linfoides reactivas,
metamielocitos, mielocitos, promielocitos, blastos, clulas plasmticas y eritroblastos PRE y
POST obtenidos con el DM96 y al microscopio.
Resultados: La correlacin de los resultados del DM96 PRE con respecto al microscopio fue exce-
lente para neutrfilos, linfocitos, monocitos, y blastos (r > 0,87 < 0,94 y p < 0,0001) y aceptable
para bandas, eosinfilos, basfilos y clulas plasmticas (r > 0,74 < 0,81 y p < 0,0001). Despus
de la reclasificacin celular, los coeficientes de concordancia fueron excelentes (> 0,7) para
promielocitos y mielocitos, intermedios para clulas linfoides reactivas y eritroblastos (> 0,5
y < 0,7), y bajos (< 0,5) para los metamielocitos. No se observaron falsos negativos en la detec-
cin de blastos por el DM96 (97 casos). Con excepcin de las clulas linfoides reactivas y blastos
linfoides, el equipo no preclasific otras clulas linfoides atpicas, que debieron ser identificadas
por el citlogo.

Autor para correspondencia.


Correo electrnico: amerino@clinic.ub.es (A. Merino).

1888-4008/$ see front matter 2010 AEBM, AEFA y SEQC. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados.
doi:10.1016/j.labcli.2010.10.002
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

4 A. Merino et al

Conclusiones: El anlisis morfolgico de sangre perifrica mediante el equipo CellaVision DM96


muestra una buena concordancia con respecto al microscopio, y representa un avance tecno-
lgico para el laboratorio de Hematologa con un nmero elevado de muestras. Tiene ventajas
adicionales, tales como mejorar las condiciones ergonmicas, mayor rapidez, asegurar la tra-
zabilidad y facilitar la docencia.
2010 AEBM, AEFA y SEQC. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados.

KEYWORDS Comparative study of peripheral blood morphology in manual microscopy and the
Peripheral blood CellaVision DM96 in hematological and non-hematological diseases
morphology;
Abstract
CellaVision DM96
Introduction: Differential leukocyte counts of peripheral blood cells are an important diagnos-
tic tool.
Objective: We evaluated the CellaVision DM96 (CellaVision AB, Lund, Sweden), an automated
system for digital peripheral blood cell analysis.
Material and methods: We analysed 234 blood films in which leukocyte values were from 1.12
to 282 109 /L. A total of 177 blood films were from patients with hematological diseases.
Results: Correlation coefficients between results obtained from the CellaVision DM96 pre-
classification and by conventional direct microscopy were excellent for segmented neutrophils,
lymphocytes, monocytes and blasts (r > 0.87 < 0.94 and P < .0001) and good for band neutrophils,
eosinophils, basophils and plasma cells (r > 0.74 < 0.81 and P < .0001). After the reclassifica-
tion of the cells, very good concordance coefficients were observed for promyelocytes and
myelocytes (> 0.7), intermediate for reactive lymphocytes and erythroblasts (>0.5 and < 0.7)
and low (<0.5) for metamyelocytes. Whatever the pathology and the number of blasts on the
films, all 97 patients were positive for blast detection on the DM96. Pathological cells such
as prolymphocytes, large granular lymphocytes, hairy cells, Szary cells and other atypical
lymphocytes were reclassified by the user.
Conclusions: Advantages of the CellaVision DM96 over direct microscopy include, requires less
time than manual differentiation, is a good tool for educational purposes, improve the tracea-
bility of the results, and can have an important role in a modern Hematology Laboratory.
2010 AEBM, AEFA y SEQC. Published by Elsevier Espaa, S.L. All rights reserved.

Introduccin Por otra parte, es de inters resaltar la estrecha cola-


boracin durante los ltimos anos entre matemticos,
La sangre perifrica (SP) es un fluido orgnico fcilmente ingenieros y citlogos, fruto de la cual ha sido la puesta
accesible, por lo que su estudio representa el eslabn ana- a punto de tcnicas automatizadas para el procesado de
ltico inicial en el diagnstico de muchas enfermedades13 . imgenes de las clulas sanguneas normales46 . A partir de
Aunque con el desarrollo de los sofisticados autoanalizadores una tcnica automatizada de procesamiento de imgenes
hematolgicos basados en la citometra de flujo la propor- mediante una red neuronal artificial, y aplicada a la diferen-
cin de muestras sanguneas que requieren un recuento ciacin de los leucocitos de SP, se ha desarrollado el equipo
diferencial manual oscila en torno a un 15%, el examen minu- CellaVisionTM DM96 (DM96) o sistema automatizado de anli-
cioso de los elementos formes de la sangre constituye, en la sis de imagen (CellaVision AB, Lun, Suecia), que realiza una
actualidad, una herramienta fundamental en el diagnstico. preclasificacin de las clulas nucleadas de SP, as como una
El anlisis de la citologa de SP es crucial para el diagnstico valoracin morfolgica automatizada de la serie roja.
de determinadas infecciones (mononucleosis infecciosa), El presente trabajo tiene como objetivos evaluar la
parasitosis (paludismo), as como para el diagnstico dife- correlacin y concordancia entre los resultados obtenidos
rencial de anemias y trombocitopenias, y para la identifica- al realizar la frmula o recuento diferencial leucocitario
cin y caracterizacin de diferentes hemopatas malignas. (RDL) de SP mediante el sistema de anlisis digital DM96
La solicitud de un examen citolgico de SP puede obede- y el microscopio ptico convencional, as como analizar las
cer a la observacin de determinados signos de alarma en posibles ventajas o inconvenientes de su utilizacin en la
el hemograma. Constituyen signos de alarma en el hemo- prctica asistencial diaria del laboratorio de Hematologa.
grama el hallazgo de leucocitosis junto a plaquetopenia
y/o anemia (posible enfermedad hematolgica), leucocito- Material y mtodos
sis y trombocitosis (probable sndrome mieloproliferativo
crnico) o leucopenia aislada (descartar una leucemia aguda Se analizaron 234 extensiones de SP, correspondientes a
o un sndrome mielodisplsico). La positividad de determi- pacientes del Hospital Clnic de Barcelona (130 hombres y
nadas alarmas de los autoanalizadores hematolgicos por 104 mujeres entre 16 y 90 anos), tenidas con May Grnwald
clulas atpicas o blastos obligan, asimismo, a la realizacin Giemsa (MGG) y con cifras de leucocitos entre 1,12 y
de la revisin morfolgica del frotis. 282 109 /L.
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

Estudio comparativo de la morfologa de sangre perifrica 5

Tabla 1 Distribucin de los diagnsticos hematolgicos en Tabla 2 Distribucin de los diagnsticos no hematolgicos
177 pacientes. en 57 pacientes.
Diagnsticos hematolgicos N Otros diagnsticos N
Gammapata monoclonal de significado incierto 2 Amiloidosis 2
Mieloma mltiple 21 Anemia en estudio 5
Leucemia linftica crnica 23 Malaria 2
Tricoleucemia 3 Neoplasia 9
Linfoma del manto 1 VIH 5
Linfoma de Hodgkin 2 Linfocitosis 1
Leucemia prolinfoctica T 2 Hepatitis 3
Sndrome de Szary 6 Cirrosis heptica 3
Otras neoplasias linfoides 23 Colitis ulcerosa 1
Leucemia aguda 33 Pancreatitis 2
Leucemia mieloide crnica 11 Ancylostoma duodenal 1
Mielofibrosis 2 Quiste hidatdico 1
Sndrome mielodisplsico 18 Coledocolitiasis 1
Leucemia mielomonoctica crnica 6 Shock sptico 1
Leucemia aguda en remisin 19 Sarcoidosis 1
Policitemia vera 1 Cardiopata 2
Prpura trombopnica idioptica 1 Fiebre origen desconocido 2
Hemoglobinuria paroxstica nocturna 2 Trasplante heptico 1
Drepanocitosis 1 Trasplante pncreas 1
Total 177 Trasplante renal 1
N equivale al nmero de casos. Infeccin post ciruga 1
Enfermedad de Wilson 1
Artroplastia de cadera 1
Wernicke-Korsakoff 1
Porfiria eritropoytica congnita 1
Del total de preparaciones, 177 correspondieron a Desconocido 7
pacientes con las siguientes enfermedades hematolgicas: Total 57
neoplasias linfoides: 83, leucemias agudas (LA): 52 (19 de
ellas en remisin), sndromes mieloproliferativos crnicos N equivale al nmero de casos.
(SMPC): 20, sndromes mielodisplsicos (SMD): 18, hemoglo-
binuria paroxstica nocturna: 2, drepanocitosis: 1 y prpura permitieron asimismo realizar la valoracin de la morfologa
trombopnica idioptica: 1 (tabla 1). Cincuenta y siete pre- eritrocitaria y de las plaquetas.
paraciones correspondieron a pacientes con enfermedades En el presente estudio se compararon los porcenta-
no hematolgicas procedentes de diferentes salas y consul- jes de neutrfilos, bandas, eosinfilos, basfilos, linfocitos,
tas externas del hospital (tabla 2). Las muestras de sangre monocitos, clulas linfoides reactivas (CLR), metamieloci-
recogidas en EDTA-K3 se analizaron en el equipo Advia 2120 tos, mielocitos, promielocitos, blastos, clulas plasmticas
(Siemens Healthcare Diagnostics SL), y aquellas que presen- y eritroblastos PRE y POST obtenidos mediante el DM96 y
taron criterios para la realizacin del anlisis del frotis o al microscopio. Asimismo se valor la preclasificacin por
RDL fueron procesadas en el extensor tenidor Cell-Dyn SMS el DM96 de las plaquetas gigantes, agregacin plaquetaria y
(Abbott Cientfica SA). smudge cells (incluye las sombras nucleares de Gumprecht
Se efectu la frmula leucocitaria a 100 elementos utili- y las clulas rotas), as como la deteccin de alteraciones
zando el microscopio y el DM96. Este equipo consta de una morfolgicas eritrocitarias.
unidad para escanear las extensiones de SP previamente El anlisis estadstico de los resultados se realiz uti-
tenidas con MGG mediante un microscopio motorizado lizando regresin lineal y los test de concordancia de
(BX50W1, Olympus Europe, Hamburgo, Alemania) con tres Bland-Altman y Lin710 .
objetivos ( 10, 50 y 100), una cmara y un software
(CellaVisionTM , Lund, Suecia) para la adquisicin y clasifica-
cin de las clulas. El DM96 admite al mismo tiempo hasta Resultados
8 soportes con 12 frotis cada uno. De forma automtica el
equipo deposita aceite de inmersin sobre las extensiones, En primer lugar es preciso senalar que fue muy importante la
y lee el cdigo de barras identificativo de cada una de ellas. obtencin de preparaciones adecuadas, tanto por el grosor
El DM96 localiza la monocapa de hemates, realiza fotogra- como por la tincin, para que la observacin de los elemen-
fas de los leucocitos que en ella encuentra con el objetivo tos sanguneos se realizara en las condiciones ms idneas
de 100 aumentos, y presenta las imgenes en pantalla reali- mediante el microscopio y con el DM96.
zando una preclasificacin de los mismos (PRE). El citlogo Las imgenes digitales obtenidas fueron de muy buena
experto verific la preclasificacin sugerida por el analiza- calidad, y permitieron la deteccin de las diferentes
dor y, de una manera fcil y rpida, la modific cuando fue anomalas observadas al microscopio en las tres series hema-
necesario (reclasificacin o POST). Las imgenes del equipo topoyticas, tales como signos displsicos, inclusiones o
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

6 A. Merino et al

Tabla 3 Coeficientes de correlacin de Pearson (CorPearson), y de concordancia de Lin (Concord Lin) entre los valores de la
preclasificacin de los subtipos celulares de sangre perifrica realizada por el CellaVision DM96 (DM96PRE) y de la reclasificacin
realizada por el facultativo (DM96POST) en relacin a los obtenidos al microscopio.

MICRO-DM MICRO-DM MICRO-DM MICRO-DM MICRO-DM MICRO-DM


96PRE 96POST 96PRE 96POST 96PRE 96POST
Subtipo celular CorPearson CorPearson Concord Lin Concord Lin IC 95%* IC 95%*
Neutrfilos 0,93 0,942 0,92 0,942 0,910-0,946 0,925-0,955
Bandas 0,75 0,851 0,748 0,84 0,684-0,800 0,799-0,874
Eosinfilos 0,796 0,908 0,729 0,907 0,674-0,777 0,882-0,928
Basfilos 0,742 0,779 0,729 0,773 0,663-0,784 0,716-0,820
Linfocitos 0,922 0,941 0,92 0,939 0,898-0,938 0,922-0,953
Monocitos 0,872 0,902 0,868 0,898 0,832-0,896 0,871-0,920
Metamielocitos 0,591 0,487 0,393 0,378 0,323-0,458 0,293-0,457
Mielocitos 0,661 0,836 0,637 0,833 0,557-0,706 0,789-0,869
Promielocitos 0,444 0,818 0,388 0,778 0,289-0,480 0,729-0,819
Blastos 0,94 0,988 0,898 0,988 0,876-0,915 0,984-0,991
Plasmticas 0,81 0,942 0,711 0,884 0,660-0,755 0,863-0,902
CLR 0,452 0,531 0,363 0,514 0,273-0,447 0,417-0,599
Eritroblastos 0,377 0,613 0,292 0,598 0,198-0,381 0,512-0,673
En negrita se resaltan los valores DM96POST con una alta concordancia (> 0,71).
IC: intervalo de confianza; *IC Lin < 0,5: concordancia baja; *IC Lin 0,50001-0,7: concordancia intermedia; *IC Lin 0,70001-1: concordancia
alta.

parsitos. El tiempo medio para la lectura de cada una de nes con recuentos de blastos en SP mediante microscopio.
las preparaciones fue de alrededor de 90 segundos, llegando Sin embargo, en los casos de LA linfoides los porcentajes de
a ser de hasta tres minutos para aquellas extensiones con blastos obtenidos mediante el microscopio ptico conven-
recuentos leucocitarios cercanos a 1 109 /L. Los RDL fueron cional fueron siempre superiores a los del DM96, debido a
patolgicos en 120 casos y normales en 114. que algunos de estos elementos blsticos fueron preclasifi-
cados por el analizador como linfocitos.
DM96 PRE y POST
DM96 en sndromes mieloproliferativos y
La correlacin de los resultados del DM96 PRE con respecto mielodisplsicos
al microscopio fue excelente para neutrfilos (r = 0,93), lin-
focitos (r = 0,922), monocitos (r = 0,872) y blastos (r = 0,94) Como se ha senalado anteriormente, con excepcin de los
(p < 0,0001), y aceptable para bandas, eosinfilos, basfi- metamielocitos, los porcentajes de serie blanca inmadura
los y clulas plasmticas (r > 0,74 < 0,81 y p < 0,0001). Los preclasificados por el DM96 mostraron una buena concordan-
coeficientes de concordancia fueron superiores a 0,7 (alta cia respecto a los obtenidos al microscopio. As, en los SMPC
concordancia), aunque el intervalo de confianza fue inferior la presencia de mielemia fue detectada en todos los casos
(entre 0,6 y 0,8) para bandas, eosinfilos, basfilos y clulas por el DM96, que tambin preclasific a los elementos bls-
plasmticas. ticos cuando se hallaron presentes en el frotis. Asimismo, el
Los coeficientes de Pearson y de concordancia de Lin fue- DM96 detect la existencia de plaquetas gigantes o de agre-
ron ms altos, es decir, mejores, al comparar los valores gados plaquetarios cuando se visualizaron al microscopio. En
del recuento diferencial leucocitario DM96 POST respecto las imgenes digitales correspondientes a los pacientes con
al microscopio, que al comparar la preclasificacin o DM96 SMD se pudo objetivar la presencia de signos displsicos en
PRE en todas las subpoblaciones leucocitarias mencionadas la serie blanca (desgranulacin de los neutrfilos, cuerpos
(figuras 1 a 16). de Dhle o seudo Pelger), serie roja (eritroblastos binuclea-
Con respecto a los porcentajes del DM96 POST del resto dos, puentes internucleares o intercitoplasmticos) y serie
de los subtipos leucocitarios analizados, los coeficientes de megacarioctica (plaquetas gigantes, con seudoncleo, des-
concordancia fueron excelentes (> 0,7) para promielocitos granuladas, micromegacariocitos). Los basfilos parcial o
y mielocitos, intermedios para clulas linfoides reactivas y completamente desgranulados tambin fueron bien precla-
eritroblastos (> 0,5 y < 0,7), y bajos (< 0,5) para metamielo- sificados como basfilos por el analizador.
citos (tabla 3).
DM96 en sndromes linfoproliferativos crnicos
DM96 en leucemias agudas
Con excepcin de las CLR, las clulas plasmticas normales o
No se observaron falsos negativos en la deteccin de blastos atpicas y los blastos linfoides, el DM96 no preclasifica otras
por el DM96 (97 casos). Es decir, que el DM96 preclasific un clulas linfoides atpicas. El citlogo clasific en todos los
determinado porcentaje de blastos en todas las preparacio- casos las imgenes correspondientes a prolinfocitos, cen-
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

Estudio comparativo de la morfologa de sangre perifrica 7

r = 0,93

y = 1x + 0
100

Neutr_DM96pre 80

60

40

20

0 20 40 60 80 100

Neutr_micro

Figura 1 Correlacin entre los porcentajes de neutrfilos segmentados (Neutr) obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE) en
relacin con los contados en el microscopio (micro).

trocitos, centroblastos, clulas de Szary, tricoleucocitos, DM96 y alteraciones de la morfologa eritrocitaria


u otros linfocitos vellosos, linfocitos binucleados, linfocitos
grandes granulares y linfocitos atpicos. El analizador rea- El analizador solo fue capaz de mostrar cuatro grados de
liz una perfecta preclasificacin de las sombras nucleares alarmas para determinadas alteraciones de la morfologa
de Gumprecht, lo que permiti su rpida cuantificacin. eritrocitaria, tales como anisocitosis, poiquilocitosis, micro-
citosis, macrocitosis o policromasia. Por el contrario, el
resto de las anomalas fueron informadas por el citlogo
DM96 e inclusiones leucocitarias
utilizando las imgenes del equipo, siendo posible tanto el
desplazamiento por una zona seleccionada de la extensin
Las imgenes digitales del DM96 permitieron de una forma
como la variacin de los aumentos. A resaltar la facilidad
rpida orientar el diagnstico de una crioglobulinemia (ml-
con la que se apreci la presencia de hemates en pilas
tiples inclusiones globulosas en el interior de los neutrfilos,
de moneda, o de formas eritrocitarias anmalas, como por
linfocitos y monocitos), as como detectar eritrofagocitosis
ejemplo los drepanocitos.
en monocitos o neutrfilos, y visualizar las astillas caracte-
En los casos de infecciones por parsitos intraeritrocita-
rsticas de la LA promieloctica, o de granulacin primaria o
rios del tipo Plasmodium vivax (P. vivax), los gametocitos
bastones de Auer en blastos mieloides.

r = 0,942

y = 1x + 0
100

80
Neutr_DM96post

60

40

20

0 20 40 60 80 100

Neutr_micro

Figura 2 Correlacin entre los porcentajes de neutrfilos segmentados (Neutr) obtenidos por la reclasificacin realizada por el
facultativo (DM96POST) en relacin con los contados en el microscopio (micro).
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

8 A. Merino et al

r = 0,748
y = 1x + 0
50

40
Bandas_pre
30

20

10

0 10 20 30 40 50

Bandas_micro

Figura 3 Correlacin entre los porcentajes de bandas obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE) en relacin con los contados
en el microscopio (micro).

fueron clasificados como plaquetas gigantes o macrotrom- Discusin


bocitos. Las imgenes del DM96 mostraron con claridad los
hemates parasitados por P. vivax o falciparum. Las inclu- La correcta interpretacin de las alteraciones morfolgicas
siones eritrocitarias, tales como cuerpos de Howell-Jolly, de las tres series hematopoyticas de SP es crucial para el
cuerpos de Pappenheimer o cristales de porfirinas, fueron diagnstico de enfermedades hematolgicas y no hemato-
fcilmente identificadas mediante las imgenes proporcio- lgicas. En la actualidad, adems del anlisis citolgico de
nadas por el equipo. las clulas sanguneas, se dispone de otras metodologas,
tales como la citometra de flujo o las tcnicas de biolo-
ga molecular y citogentica, que son fundamentales para
DM96 y alteraciones de la morfologa plaquetaria la clasificacin diagnstica definitiva de las enfermedades
hematolgicas. Sin embargo, la aplicacin de los mtodos
mencionados tiene siempre como punto de partida la SP. La
El DM96 mostr y preclasific las imgenes de los agregados
automatizacin en el laboratorio es una meta por conseguir
plaquetarios, as como de los macrotrombocitos y plaquetas
para todas aquellas tcnicas que puedan beneficiarse de los
gigantes, por lo que fue posible la deteccin de anomalas
avances tecnolgicos que lo permitan.
morfolgicas en esta serie.

r = 0,851
y = 1x + 0
50

40
Bandas_post

30

20

10

0 10 20 30 40 50

Bandas_micro

Figura 4 Correlacin entre los porcentajes de bandas obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo (DM96POST) en
relacin con los contados en el microscopio (micro).
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

Estudio comparativo de la morfologa de sangre perifrica 9

r = 0,796
y = 0,8x + 0
40

esosinofilos_pre 30

20

10

0 10 20 30 40 50

esosinofilos_micro

Figura 5 Correlacin entre los porcentajes de eosinfilos obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE) en relacin con los contados
en el microscopio (micro).
r = 0,908
y = 1,2x + 0
60

50
esosinofilos_post

40

30

20

10

0 10 20 30 40 50

esosinofilos_micro

Figura 6 Correlacin entre los porcentajes de eosinfilos obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo (DM96POST)
en relacin con los contados en el microscopio (micro).
r = 0,742
y = 1x + 0
20

15
basofilos_pre

10

0 5 10 15 20

basofilos_micro

Figura 7 Correlacin entre los porcentajes de basfilos obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE) en relacin con los contados
en el microscopio (micro).
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

10 A. Merino et al

r = 0,779
y = 1x + 0
20

15
basofilos_pre

10

0 5 10 15 20

basofilos_micro

Figura 8 Correlacin entre los porcentajes de basfilos obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo (DM96POST)
en relacin con los contados en el microscopio (micro).
r = 0,922
y = 1x + 0
100

80
linfocitos_DM96pre

60

40

20

0 20 40 60 80 100

linfocitos_micro

Figura 9 Correlacin entre los porcentajes de linfocitos obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE) en relacin con los contados
en el microscopio (micro).
r = 0,941
y = 1x + 0
100

80
linfocitos_DM96post

60

40

20

0 20 40 60 80 100

linfocitos_micro

Figura 10 Correlacin entre los porcentajes de linfocitos obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo (DM96POST)
en relacin con los contados en el microscopio (micro).
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

Estudio comparativo de la morfologa de sangre perifrica 11

r = 0,872
y = 1x + 0
80

monocitos_DM96pre 60

40

20

0 20 40 60 80

monocitos_micro

Figura 11 Correlacin entre los porcentajes de monocitos obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE) en relacin con los contados
en el microscopio (micro).

El DM96 es un nuevo equipo para el anlisis automati- autores1316 , demuestran una muy buena concordancia de
zado de imgenes digitales de SP. Para ello, el analizador las diferentes subpoblaciones leucocitarias normales de SP
escanea previamente los frotis, identifica los diferentes sub- preclasificadas por el analizador, en relacin con las obteni-
tipos de leucocitos, preclasifica las clulas mediante una red das mediante el microscopio ptico convencional.
neuronal artificial (basada en caractersticas morfolgicas En la publicacin realizada por Cornet E et al15 , los
de alrededor de 37.000 clulas), y las muestra en panta- monocitos preclasificados por el DM96 presentaron una peor
lla para que el facultativo las confirme o reclasifique. Para correlacin con respecto al microscopio, lo que podra
realizar la preclasificacin de una clula determinada, el deberse a la distribucin heterognea de estos elementos en
equipo DM96 previamente la analiza utilizando un algoritmo las preparaciones. Segn nuestros resultados las subpobla-
de segmentacin11 , y teniendo en cuenta cientos de clcu- ciones normales de SP que muestran un menor coeficiente e
los a partir de ms de 100 aspectos morfolgicos tales como intervalo de confianza en la concordancia entre ambos mto-
coloracin, tamano, forma y textura de las clulas entre dos son las bandas, los eosinfilos y los basfilos. En el caso
otros12 . de los eosinfilos, es crucial una correcta tincin, ya que si la
En el presente trabajo se analizan las posibles ven- caracterstica coloracin anaranjada de los grnulos no es lo
tajas y limitaciones de la utilizacin del DM96 para la suficientemente intensa, sern preclasificados como neutr-
cuantificacin diferencial de las clulas de SP, y nues- filos por el DM96. Es conocida la dificultad en la reproduccin
tros resultados, de acuerdo con los obtenidos por otros de los contajes de bandas por diferentes observadores17 y,

r = 0,902
y = 1x + 0
80
monocitos_DM96post

60

40

20

0 20 40 60 80

monocitos_micro

Figura 12 Correlacin entre los porcentajes de monocitos obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo (DM96POST)
en relacin con los contados en el microscopio (micro).
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

12 A. Merino et al

r = 0,81
y = 0,6x + 0

12

10

plasmticas_pre
8
Escala
250
6 200
150
100
4
50
0
2

0 5 10 15 20

plasmticas_micro

Figura 13 Correlacin entre los porcentajes de clulas plasmticas obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE), en relacin con
los contados en el microscopio (micro).

debido a ello, no es de extranar que el intervalo de con- diagnstico del paciente (LA, SMPC o SMD). No obstante,
fianza de la concordancia entre ambos mtodos no sea tan algunos de los blastos linfoides fueron preclasificados como
alto para este subtipo celular. linfocitos.
Con respecto a los granulocitos ms inmaduros, la con- Aunque el DM96 no es capaz de clasificar la mayora de
cordancia fue mayor para los promielocitos y mielocitos que las clulas linfoides atpicas, facilita la tarea al citlogo en
para los metamielocitos, debido a que un porcentaje consi- su identificacin, ya que este puede observar en la panta-
derable de estos fueron clasificados como bandas. La menor lla los elementos patolgicos agrupados, a diferencia de lo
concordancia para los eritroblastos se relacion con el hecho que ocurre cuando se realiza el recuento al microscopio,
de que algunas clulas en apoptosis, o bien determinados con un menor nmero de clulas patolgicas por campo.
artefactos, fueron clasificados por el analizador en este sub- El equipo permite tambin realizar con facilidad el segui-
tipo celular. miento de la presencia y caractersticas morfolgicas de las
Un aspecto importante que resaltar es que el DM96 clulas patolgicas en un paciente determinado, as como el
fue capaz de detectar blastos en todos los frotis de SP archivo de clulas anormales tpicas de determinadas pato-
que los presentaron al microscopio, independientemente logas. Ello facilita la docencia del personal en formacin
de su mayor o menor nmero en el recuento, o del del laboratorio de Hematologa.

r = 0,942
y = 0,6x + 0

12

10
plasmticas_post

8
Escala
250
6 200
150
4 100
50
0
2

0 5 10 15 20

plasmticas_micro

Figura 14 Correlacin entre los porcentajes de clulas plasmticas obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo
(DM96POST) en relacin con los contados en el microscopio (micro).
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

Estudio comparativo de la morfologa de sangre perifrica 13

r = 0,94
y = 1x + 0
100

80
blastos_DM96pre

60

40

20

0 20 40 60 80 100

blastos_micro

Figura 15 Correlacin entre los porcentajes de blastos obtenidos en el CellaVision DM96 (DM96PRE), en relacin con los contados
en el microscopio (micro).

r = 0,988
y = 1x + 0
100

80
blastos_DM96post

60

40

20

0 20 40 60 80 100

blastos_micro

Figura 16 Correlacin entre los porcentajes de blastos obtenidos por la reclasificacin realizada por el facultativo (DM96POST)
en relacin con los contados en el microscopio (micro).

Asimismo, el analizador realiza el recuento porcentual ergonmicas de los usuarios con respecto al microscopio
de las sombras nucleares de Gumprecht, caractersticas de ptico.
la leucemia linftica crnica (LLC). Una reciente publica- Algunas de las limitaciones del archivo de las extensio-
cin destaca el valor pronstico, como valor independiente, nes de SP, tales como el espacio necesario, o el deterioro de
del porcentaje de sombras nucleares de SP en la predic- su calidad, desaparecen con el empleo del DM96. Posibilita
cin de la supervivencia de los pacientes con LLC18 . El la revisin de las clulas informadas independientemente
inters de la determinacin de este parmetro es su fcil del tiempo transcurrido desde su anlisis, asegurando la
cuantificacin frente a otros factores de riesgo, tales como trazabilidad de los resultados de la muestra desde su extrac-
el estado mutacional de la cadena pesada de las inmu- cin hasta su informe, y disminuyendo determinados errores
noglobulinas, expresin de CD38 y Zap 70, y anomalas preanalticos.
citogenticas19 . Se concluye que el anlisis de sangre perifrica automa-
Por otra parte, la utilizacin del DM96 en el recuento tizado mediante el equipo CellaVision DM96 muestra una
diferencial de las clulas sanguneas mejora el flujo de tra- buena correlacin y concordancia en relacin con el mtodo
bajo en el laboratorio, ya que reduce el tiempo necesario tradicional con el microscopio, requiere la validacin de los
para su realizacin, especialmente en los frotis sangu- resultados por un facultativo experto y representa un avance
neos de pacientes con leucopenia, y mejora las condiciones tecnolgico de gran inters para los laboratorios clnicos
Document downloaded from http://www.elsevier.es, day 12/07/2017. This copy is for personal use. Any transmission of this document by any media or format is strictly prohibited.

14 A. Merino et al

con un nmero elevado de muestras, ya que aporta nume- 10. Carrasco JL, Jover Ll. Mtodos estadsticos para evaluar la con-
rosos beneficios tanto asistenciales como de trazabilidad, cordancia. Med Clin (Barc). 2004;122 Suppl 1:28-34.
docentes, y tambin econmicos. 11. Jhne B, Haussecker H, Geisser P, editores. Handbook of
Computer Vision and Applications. San Diego, CA, EE. UU.:
Academic Press; 1999.
Conflicto de intereses 12. Castleman KR. Digital Image Processing. New Jersey, USA: Pren-
tice Hall; 1996.
Los autores declaran no tener ningn conflicto de intereses. 13. Kratz A, Bengtsson HI, Cassey JE, Keefe JM, Beatrice GH, Grzy-
bek H, et al. Performance evaluation of the CellaVision DM96
system. Am J Clin Pathol. 2005;124:77081.
Bibliografa 14. Ceelie H, Dinkelaar RB, Van Gelder W. Examination of perip-
heral blood films using automated microscopy; evaluation
1. Merino A. Manual de citologa de sangre perifrica. Madrid: of Diffmaster Octavia and Cellavision DM96. J Clin Pathol.
Accin Mdica; 2005. 2006;60:729.
2. Woessner S, Florensa L. La citologa ptica en el diagnstico 15. Cornet E, Perol JP, Troussard X. Performance evaluation and
hematolgico. FEHH. Madrid: Accin Mdica; 2006. relevance of the CellaVision DM96 system in routine analysis
3. Bain BJ. Diagnosis from the Blood Smear. N Engl J Med. and in patients with malignant hematological diseases. Int J
2005;353:498507. LabHematol. 2007;30:53642.
4. Angulo J, Flandrin G. Automated detection of working area of 16. Briggs C, Longhair I, Slavik M, Thwaite K, Mills R, Thava-
peripheral blood smears using mathematical morphology. Anal raja V, et al. Can automate blood film analysis replace the
Cell Pathol. 2003;25:3749. manual differential? An evaluation of the CellaVision DM96
5. Shitong W, Min W. A new detection algorithm (NDA) based on automated image analysis system. Int J Lab Hematol. 2007;31:
fuzzy cellular neural networks for white blood cell detection. 4860.
IEEE Trans Inf Technol Biomed. 2006;10:510. 17. Vives Corrons JL, Jou JM, Aymerich M, Rozman M, Villamor N,
6. Sadeghian F, Seman Z, Ramli AR, Abdul Kahar BH, Saripan MI. Aguilar JL, et al. Evaluation of the Coulter MAXM, Differential
A framework for white blood cell segmentation in microsco- leukocyte count and left shift alarm. Sangre. 1997;42:317.
pic blood images using digital image processing. Biol Proced 18. Nowakowski GS, Hoyer JD, Shanafelt TD, Zent CS, Call TG,
Online. 2009;11:196205. Bone ND, et al. Percentage of smudge cells on routine blood
7. Lin L. A concordance correlation coefficient to evaluate repro- smear predicts survival in chronic lymphocytic leukaemia. J
ductibility. Biometrics. 1989;45:25568. Clin Oncol. 2009;27:18449.
8. Lin L. Assay validation using the concordance correlation coef- 19. Shanafelt TD, Geyer SM, Kay NE. Prognosis at diagnosis: Inte-
ficient. Biometrics. 1992;48:599604. grating molecular biologic insights into clinical practice for
9. Altman DG, Bland JM. Measurement in medicine: the analysis patients with LLC. Blood. 2004;103:10024.
of method comparison studies. Statistician. 1983;32:30717.