UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZN

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL INGENIERA AGROINDUSTRIAL

CURSO: ANALISIS POR INSTRUMENTACIN

Ayala Torres Jerry; Espinoza Coz Sol; Julca Retis Lizbeth; Satalaya Onofre Mnica

PRCTICA 05: CUANTIFICACIN DE POLIFENOLES TOTALES, MEDIANTE EL MTODO FOLIN -

CIOCALTEU

I. INTRODUCCIN

Los compuestos fenlicos constituyen una de las principales clases de metabolitos secundarios de los
vegetales, donde desempean diversas funciones fisiolgicas. Se trata de compuestos que intervienen
en el crecimiento y reproduccin de las plantas, as como en procesos defensivos contra agentes
patgenos, depredadores o radiacin ultravioleta. Tradicionalmente se han considerado como
sustancias antinutritivas debido al efecto adverso de uno de sus componentes principales, los taninos,
en la digestibilidad de protenas. Sin embargo, actualmente existe gran inters en estos compuestos
debido a la gran variedad de actividades biolgicas que presentan, considerndose uno de los
compuestos fitoqumicos alimentarios ms importantes por su contribucin al mantenimiento de la
salud humana. La actividad biolgica de los polifenoles est relacionada con su carcter antioxidante,
el cual es debido a su habilidad para quedar metales, inhibir la actividad de la enzima lipooxigenasa y
actuar como atrapadores de radicales libres.La cantidad de compuestos polifenlicos y tipos presentes
en un alimento vara en funcin de la especie vegetal, variedad y parte del vegetal considerada (fruto,
semillas, brotes, hojas), horas de exposicin solar, grado de madurez, condiciones de cultivo,
procesado, condiciones de almacenamiento, etc. (Kaur, C. y Kapoor, H. C.; 2001).

Se lleva a cabo una evaluacin de polifenoles de la hoja de coca, por medio de la reaccin Folin-
Ciocalteau, mediante la cual se ferment la muestra de 2.0 g en 250 ml de agua hervida por 4 minutos
con una posterior decantacin y centrifugacin. Luego de agregarle el reactivo de Folin - Ciocalteau y
carbonato de sodio, las muestras fueron incubadas a 20C por 2 horas con agitacin. Los fenoles
totales fueron calculados mediante una lectura de absorbancia a 750 nm, como equivalentes al cido
glico (GAE). Se utiliz un composito de todas las muestras a modo de muestra de control de calidad.
Se encontr cantidades significativas de polifenoles: 3.8 g/100 g basados en peso seco y 66 mg por
racin de infusin Resulta difcil interpretar la informacin sobre los polifenoles, ya que no todos los
tipos de fenoles tienen el mismo efecto sobre la absorcin del hierro. (Brune M, Rossander L, Hallberg
L.; 1989)

Decimos que el anlisis de fenoles totales se realiza por espectrofotometra, basndose en una
reaccin colorimtrica de xidoreduccin. A 50 L de extracto se le agregaron 2 mL de agua
destilada, 250 L de reactivo Folin-Ciocalteu. Como resultado la gran mayora de estas plantas, hojas,
frutos contienen una gran cantidad de polifenoles. Sobre todo cuando se le saca directo de la siembra
misma. Se obtuvo: (Curifuta et al. 2012)

Contenido de compuestos
fenlicos y flavonoides en
extractos naturales
II. MATERIALES Y MTODOS absorbancia en el
espectrofotmetro a 700 nm.
Equipos e instrumentos:
Espectrofotmetro Uv Vis, balanza III. RESULTADOS Y DISCUSIONES
analtica, agitador magntico, vasos de
precipitacin, fiolas, micropipetas, tips
(1000 y 200 L), embudos, papel filtro,
tubos de ensayo, gradilla, cubetas de Concentracin Abs.
poliestireno para espectrofotmetro (1 R1 R2 R3 Diferencia
(ug/mL) (700nm)
mL). blanco 0.074 0.074
50 0.152 0.143 0.143 0.146 0.072
Reactivos: 100 0.173 0.169 0.163 0.168 0.094
cido Glico (PM: 170,1) 200 0.272 0.272 0.261 0.268 0.194
Solucin Fenol de Ciocalteau (FOLIN) 400 0.476 0.474 0.474 0.475 0.401
Carbonato de Sodio (NaCO3) 600 0.668 0.655 0.668 0.664 0.590
800 0.895 0.890 0.879 0.888 0.814
a. Preparacin de los extractos 1.2001000 1.136 1.152 1.149 1.146 1.072
acuosos. Pesar 1 g de muestra y
1.000
colocar en 100 mL de H2O destilada 3.1. RESULTADOS:
ABSORBANCIA

caliente a temperatura de ebullicin, 0.800

TABLA 1
agitar durante 5 minutos, filtrar y 0.600
almacenar en refrigeracin. Tabla de concentracin y absorbancia de las
b. Curva de calibracin 0.400
y = la
diluciones para obtener 0.001x
curva.
1. Preparar las siguientes soluciones 0.200 R = 0.9962
stocks:
Solucin de Carbonato de Sodio 0.000

(NaCO3) al 20% con agua 0 500 1000 1500

CONCENTRACION
desionizada.
Solucin de (+) Catequin 1 mM
o solucin de cido Glico 12
mM.
2. Agregar a cada tubo 1.58 mL de
agua destilada desionizada (H2O
dd) y 20 L de muestra, control
(H2O dd) o estndares. Mezclar
ligeramente.
3. Luego agregar 100 L de solucin
de Fenol de Folin Ciocalteau.
Mezclar nuevamente.
4. Incubar 1 minuto a temperatura
ambiente. Figura 1: Absorbancia y concentracin de las
5. Para neutralizar la reaccin
diluciones
agregar 300 L de NaCO3 al
20%.
TABLA 2
6. Incubar por 1 hora a temperatura
ambiente, tiempo en el que hay Tabla de concentracin de polifenoles y factor de
una completa reaccin.
7. Para determinar la cantidad de dilucin.
compuestos fenlicos producidos
durante la reaccin, agregar 1 mL
de muestra, control o estndar en
una cubeta de poliestireno (1 cm x
1 cm x 4,5 cm) y leer la
Desviacin estndar = 17.56
Conc.
Abs
Formula del factor de dilucin: Muestra diferencia polifenoles FD (5)
(700nm)
(ug/mL)
1ml de muestra (infusin de coca) + 4ml de agua control 0.074
. 4+1 R1 0.494 0.42 420 2100
= = =5
. 1 R2 0.490 0.416 416 2080
3.2. DISCUSIONES: R3 0.497 0.423 423 2115
Segn el autor Brune M, Rossander
L, Hallberg L. la hoja de coca tiene 2098.3
una cantidad significativa de Leer la gua de prctica antes de
polifenoles. Como resultado nos realizar la prctica.
dice que obtuvieron 3,8 g/100 g, a Antes de hacer las diluciones conocer
comparacin de nuestra prctica que es lo que se adicionara primero.
realizada obtuvimos un promedio Manejar bien los reactivos y los
de 419,6 g/mL de polifenoles, la materiales para tener una buena
diferencia entre la alta prctica.
concentracin del autor y la baja
concentracin de polifenoles que VI. REFERENCIA
obtuvimos vari porque tal vez no Kaur, C. y Kapoor, H. C. (2001).
utilizamos la suficiente cantidad de Antioxidants in fruits and
hoja de coca, no fue sacada al vegetables-The millennium's health.
instante de la misma plantacin, o International Journal of Food Science
la reaccin no fue la adecuada. and Technology, vol. 36, n. 7, pp.
Segn Curifuta et al. la mayor 703725,
cantidad de polifenoles se Brune M, Rossander L, Hallberg L.
concentra en los extractos de stos, Iron absorption and phenolic
y a diferencia que en la prctica compounds: Importance of different
realizada se obtuvo baja phenolic structures. Eur J Clin Nutr
concentracin de polifenoles, esto 1989; 43: 547-57.
mismo se debe a que la hoja de CURIFUTA, M.; VIDAL, J.;
coca estuvo seca o tenamos en SNCHEZ-VENEGAS, J.;
poca cantidad. Podemos decir que CONTRERAS, A.; SALAZAR, L.;
es mejor evaluar los polifenoles ALVEAR, M. 2012. The in vitro
cuando la planta est poco tiempo antifungal evaluation of a
extrada del campo. commercial extract of Chilean
propolis against six fungi of
IV. CONCLUSIONES agricultural importance. Cien. Inv.
Agr. 39(2), 347359.
Concluimos que al hacer la dilucin de la
muestra (zumo de la hoja de coca) de 1/1 nos
dimos cuenta que el resultado no era optimo y
no se encontraba en el rango adecuado, por
ende tuvimos que realizar 3 dilucin de 1/5 y
1/10 y como resultado tuvimos que la dilucin
de 1/5 es ptima y se encuentra en el rango
permitido para obtener mejores resultados,
donde el factor de dilucin es de 2098.3.

En este objeto de aprendizaje se ha descrito el

fundamento y el procedimiento experimental
del anlisis de compuestos polifenlicos
empleando el mtodo espectrofotomtrico de
Folin-Ciucalteu. Con ayuda de un ejemplo se
ha determinado la concentracin de estos
compuestos.

V. RECOMENDACIONES