Ultrafiltracin y Microfiltracin

1) Se realiza una UF de una muestra de protenas provenientes de una recuperacin por extraccin con dos fases
acuosas utilizando un sistema PEG/fosfatos. La muestra proteica obtenida de este paso de purificacin
(A280nm 0,45 (dilucin 1/100); vol. 55 ml) se lleva a 500 ml con BP 30 mM pH 7 y se somete a dos pasos de
UF, cuyos resultados se detallan en la tabla a continuacin.
Conc. Prot. Volumen
Fraccin Dilucin A280nm
(mg/ml) (ml)

Retentato 1/100 0,318 70

Ciclo 1
Permeato 1/2 0,287 430

Retentato 1/200 0,120 98

Ciclo 2
Permeato 1/4 0,270 290
a. Realice un esquema grfico de todo el proceso.
b. Calcular:
I. Concentracin de protenas en cada fraccin
II. % recuperacin de cada paso y global.
III. Masa de protena recuperada
c. Detallar que otros mtodos de cuantificacin podra utilizar para corroborar los datos obtenidos
d. Cuales pueden ser las fuentes de error a ser consideradas en el anlisis de los resultados?
2) Se realiza un tratamiento por UF para realizar el desalado de una muestra proteica proveniente de una
purificacin por cromatografa de pseudoafinidad. Dicha muestra se encuentra en BP 30 mM y 1 M en NaCl
y se diluye previamente en BP antes de procesar.
La UF se realiza con un flujo de circulacin de 105 ml/min y un flujo de filtrado de 15 ml/min utilizando un
cartucho con membrana de 10 kDa de 50 ml de volumen muerto. La presin transmembrana durante el
proceso se mantuvo en 5 psi.
La concentracin de sales en la solucin proteica se midi por conductimetra y los resultados se muestran a
continuacin:

Fraccin Volumen (ml) Conc. NaCl (M) Conc. NaCl (g/l)

Muestra inicial 500

Retentato 1 100 0,1

Retentato 2 400 0,02

a. Cul es el mnimo volumen que podra obtenerse en este proceso
b. Teniendo en cuenta que el paso de limpieza y acondicionamiento del equipo involucra el
pasaje de 500 ml de agua, 100 ml de NaOH 0,1 M, 200 ml de agua y 100 ml de buffer de
trabajo a flujo de 120 ml/min, estimar el tiempo total del proceso
c. Calcular el % de desalado obtenido
d. Si se quiere obtener una solucin de protena con 5mM en NaCl cuntos pasajes son
necesarios aplicar para esta muestra y cual sera el tiempo del proceso.