Cadena Respiratoria

Ao de la Diversificacin Productiva y del Fortalecimiento de

la Educacin
Universidad Nacional Del Per
Facultad de Medicina Humana
Escuela profesional de Enfermera

Practica de Laboratorio #7
CADENA RESPIRATORIA

ASIGNATURA: BIOQUIMICA

DOCENTES: DRA.VIOLETA MORIN GARRIDO

DR. CARLOS HOLGUIN MAURICCI

ALUMNA: FIORELLA DIOSESFERNANDEZ

Piura - 2015

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Cadena Respiratoria

INDICE
1. Marco Terico
Cadena respiratoria
La cadena respiratoria se abastece de poder reductor
La cadena respiratoria en las clulas eucariotas ocurre en
mitocondrias
Los transportadores de cadena respiratoria tienen diferente
afinidad por los electrones
Inhibidores
Tipos de Inhibidores
Los inhibidores de la cadena respiratoria impiden el pasaje de
electrones
2. Practica de Laboratorio
Cuestionario
3. Bibliografa

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1. MARCO TEORICA
Cadena respiratoria
La misin de la cadena transportadora de
electrones es la de crear un gradiente
electroqumico que se utiliza para la
sntesis de ATP. Dicho gradiente
electroqumico se consigue mediante el
flujo de electrones entre diversas
sustancias de esta cadena que favorecen
en ltimo caso la translocacin de
protones que generan el gradiente
anteriormente mencionado. De esta
forma podemos deducir la existencia de
tres procesos totalmente dependientes:
Un flujo de electrones desde
sustancias individuales
Un uso de la energa desprendida de
ese flujo de electrones que se utiliza para la translocacin de protones
en contra de gradiente, por lo que energticamente estamos hablando
de un proceso desfavorable.
Un uso de ese gradiente electroqumico para la formacin de ATP
mediante un proceso favorable desde un punto de vista energtico.

La cadena respiratoria se abastece de poder reductor

Las clulas eucariotas y procariotas obtienen energa, principalmente bajo
forma de ATP, a partir del poder reductor (o H2) presente en las molculas
de glcidos, lpidos y aminocidos, entre otras. Como se observa en la figura
1, el aceptor final de los H2 es el O2, se trata de un ejemplo de clula aerobia.
Sin embargo, hay otros tipos de clulas en que los aceptores finales de H2
son molculas diferentes del O2, esas clulas son anaerobias y
fermentativas. Ahora vamos a centrar el estudio en clulas aerobias.
Los azcares, cidos grasos y aminocidos cuando son oxidados
(degradados) proveen de poder reductor, de manera ms o menos
directa, a la cadena respiratoria. As, se reducen cofactores como el
NAD y el FAD dando inicio a la transferencia del poder reductor (H2)
hasta el aceptor final, que en los organismos aerobios es el O2.
La variacin de energa de los electrones desde los precursores
reducidos (aminocidos, glcidos y cidos grasos) hasta el agua, es
un proceso exergnico, que impulsa la reaccin endergnica de
sntesis de ATP a partir del ADP y P.

La cadena respiratoria en las clulas eucariotas ocurre en mitocondrias

La mitocondria en un organelo presente en las clulas de vegetales,
animales y hongos, es decir en todas las eucariotas. Su nmero por
clula es variable, y est limitada por dos membranas, una externa y

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Cadena Respiratoria

otra interna. Estas membranas delimitan dos espacios: la cmara

externa o espacio intermembrana y la matriz (
En la membrana interna se localiza la cadena respiratoria, que consta
de una serie de transportadores de electrones como el NAD, CoQ,
citocromos y diversas enzimas. En las bacterias la cadena respiratoria
est asociada a la membrana celular.
La cadena respiratoria siempre est asociada a una membrana,
porque para su funcionamiento es necesario un ordenamiento
espacial bien definido de los transportadores y protenas que la
integran, como se ver ms adelante.

Los transportadores de cadena respiratoria tienen diferente afinidad

por los electrones
A travs de la cadena respiratoria se dan reacciones de xido reduccin que
se suceden desde el NAD y el FAD hasta el oxgeno Los electrones pueden
ser captados o cedidos de diferentes formas:
a. un electrn individualmente,
b. un electrn unido a un protn; como un tomo de H,
c. dos electrones unidos a dos protones; como dos tomos de H.

Inhibidores
Los Inhibidores enzimticos son molculas que se unen a enzimas y
disminuyen su actividad. Ya que el bloqueo de una enzima puede matar un
organismo patgeno o corregir un desequilibrio metablico, muchos
medicamentos actan como inhibidores enzimticos. Tambin son usados
como herbicidas y pesticidas. Sin embargo, no todas las molculas que se
unen a las enzimas son inhibidores; los activadores enzimticos se unen a
las enzimas e incrementan su actividad.

Tipos de Inhibidores
Reversibles: Unin no covalente de un inhibidor a la enzima
a. Competitiva
b. No competitiva
c. Acompetitiva
Irreversibles: Unin covalente del inhibidor al enzima

Los inhibidores de la cadena respiratoria impiden el pasaje de

electrones
Las molculas que actan como inhibidores impiden el flujo de e- entre los
transportadores, y por lo tanto la sntesis de ATP. Estas molculas pueden
actuar como venenos.
El Amital (un barbitrico) o la Rotenona (un insecticida) bloquean el
flujo de e- desde el NADH a la CoQ, mientras la Antimicina (un
antibitico) lo hace entre CoQ y Cit b, y el cianuro, la azida y el
monxido de carbono actan sobre la citocromo oxidasa.

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La aplicacin de estos inhibidores bloquea el pasaje de e- por la

cadena respiratoria. De esta forma por detrs del punto de inhibicin
los transportadores quedan reducidos.
Como consecuencia de esto no se produce ATP porque no se genera
el gradiente protnico, ni agua porque los e- no llegan a reducir al O2:
la cadena est interrumpida.

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2. PRACTICA DE LABORATORIO

FUNCIONAMIENTO DE LA CADENA RESPIRATORIA

OBJETIVO: Demostrar el funcionamiento de la cadena respiratoria a travs del

efecto de inhibidores sobre la cadena oxido-reduccin biolgica.

I. GENERALIDADES

Se ha demostrado que muchas sustancias inhiben la cadena respiratoria en

mitocondrias aisladas, clulas intactas y tejidos, produciendo en consecuencia
deficiente respiracin celular y deficiente oxidacin de los sustratos. Algunos
antibiticos como la antimicina A, la elaborada por un Streptomyces, inhiben la
cadena respiratoria en, o cerca del sitio II. Algunos barbitricos como el amital y
el seconal inhibirn la NADH2.
El cianuro, la azida sdica (NaN3) y el CO pueden inactivar en forma eficaz la
citocromooxidasa.
El estudio de estos inhibidores es importante porque permite comprender la causa
de la toxicidad de estos compuestos y tambin porque contribuyen a la realizacin
de trabajos de investigacin relacionados con la estructura y funcin de la cadena
respiratoria.
En el presente trabajo se trata de demostrar el efecto de algunos inhibidores de
la xido-reduccin empleando como fuente enzimtica el homogenizado celular
de hgado.

II. REACTIVOS

- Buffer fosfato de sodio 0.1 M, ph 7.4

- 2.6 diclorofenolindofenol 0.02%
- P-fenilondiamina 1%
- Succionato 0.1 M
- Malonato 0.1 M
- Cianuro de sodio 0.1 M
- Barbiturato de sodio 0.1 M
- Homogenizado heptico

III. PROCEDIMIENTO

A. SISTEMA DE SUCCINATO:

COMPONENTES 1 2 3 4 5 6
- Buffer fosfato de sodio 0.1 M, ph 1.5 1.2 1.0 0.5 0.5 0.5
7.4 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
- 2.6 diclorofenolindofenol 0.02% 0.2 - 0.2 0.2 0.2 0.2
- Succionato 0.1 M - - - 0.5 - -
- Malonato 0.1 M - - - - 0.5 -
- Cianuro de sodio 0.1 M - - - - - 0.5

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- Barbiturato de sodio 0.1 M - 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

- Homogenizado heptico

Mezclar: Dejar en reposo a temperatura ambiental.

Observar: Constantemente los cambios de color del indicador.
Interpretar sus resultados.

B. SISTEMA USANDO P-FENILENDIAMINA

COMPONENTES 1 2 3 4 5
- Buffer fosfato de sodio 0.1 M, ph 2.0 1.5 1.0 1.0 1.0
7.4 - - 0.5 - -
- Cianuro de sodio 0.1 M - - - 0.5 -
- Malonato 0.1 M - - - - 0.5
- Barbiturato de sodio 0.1 M 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
- P-fenilendiamina - 0.5 0.5 0.5 0.5
- Homogenizado heptico

Mezclar: Dejar en reposo a temperatura ambiental.

Observar: Constantemente los cambios de color del indicador.
Interpretar los resultados.

IV. CUESTIONARIO de interpretacin de la practica

1. Qu interpretacin le da a los tubos 1, 2, 3, 4, 5 y 6 del primer experimento?

Tubo 1: Est presente el dador de electrones (2,6 diclorofenolindofenol),
pero no est presente el homogenizado heptico, por lo cual no se
produce reaccin. Adems no se puedo observar cambio de color alguno
ya que como se dijo anteriormente no se encontraba el homogenizado
heptico (medio en el que se encontraban las mitocondrias esenciales
para el proceso) que nos brindara el sistema enzimtico necesario para
el funcionamiento de la cadena respiratoria.
Tubo 2: Est presente el dador de electrones, el homogenizado heptico,
pero no est presente el succinato, que es el sustrato, por lo cual no se
produce reaccin. Ya que la cadena respiratoria no se cumple (por la
carencia de succinato) por consiguiente no se evidencia coloracin
alguna.
Tubo 3: Est presente el dador de electrones, el sustrato, el
homogenizado heptico, por lo cual se completa la reaccin y se obtiene
que se colorea de color azul (esto nos indicara el cumplimiento total del
recorrido de la cadena respiratoria), dando por hecho que el ciclo se
completa.

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As tenemos las mitocondrias (proporcionado por el homogeneizado), el

donador de electrones (succinato), el aceptor de electrones (2,6
diclorofenolindofenol) y el sistema enzimtico
Tubo 4: Est presente el dador de electrones, el sustrato, el
homogenizado heptico, pero la presencia de un inhibidor de la cadena
respiratoria como el malonato (bloquea al inicio de la cadena respiratoria
ya que impide el paso de los electrones procedentes del succinato hacia
la flavoproteina y de esta a la coenzima Q), no permite que se lleve a cabo
el ciclo, por lo cual no se produce reaccin.
Tubo 5: Est presente el dador de electrones, el sustrato, el
homogenizado heptico, pero la presencia del inhibidor de la cadena
respiratoria, cianuro de sodio, quien bloquea al final de la cadena
respiratoria (se opone a que haya transporte de electrones a nivel de
citocromo a, de esta forma el 2,6 diclorofenolindofenol no recibe ningn
flujo de electrones), no permite que se lleve a cabo la reaccin. No hay
cambio de color
Tubo 6: Est presente el dador de electrones, el sustrato, el
homogenizado heptico, pero la presencia del inhibidor de la cadena
respiratoria, como el barbiturato de sodio, que inhibe a nivel de FAD,
impide que se lleve a cabo el ciclo, y no se produce reaccin.

2. Qu interpretacin le da a los tubos 1, 2, 3, 4 y 5 del segundo experimento?

Tubo 1: Esta presente la p fenilendiamina, que es un dador de hidrgenos,

pero no hay homogenizado heptico (no se aprecia la cadena respiratoria),
lo cual no se presenta reaccin.
Tubo 2: Est presente la p fenilendiamina, y el homogenizado heptico por
lo cual se lleva a cabo la reaccin y se colorea de color rojo. En este tubo
si se va apreciar la cadena respiratoria ya que se cuenta con los
componentes esenciales para su desarrollo.
Tubo 3: Est presente la p fenilendiamina y el homogenizado, pero est
presente el inhibidor como el cianuro de sodio (interviene a nivel del
citocromo impidiendo el flujo de electrones hacai el aceptor final que es el
oxigeno), por lo que no se lleva a cabo la reaccin.
Tubo 4: Est presente la p fenilendiamina y el homogenizado, pero est
presente el inhibidor como el malonato. Se aprecia un cambio de color en
la solucion lo que significa que hay funcionamiento normal en el transporte
de electrones a pesar de la presencia del malonato
Tubo 5: Est presente la p fenilendiamina y el homogenizado, pero est
presente el inhibidor como el barbiturato, que inhibe la cadena respiratoria,
por lo cual no se produce reaccin

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3. Cmo Ud. separara Mitocondrias puras?

Por el mtodo de centrifugacin.- utiliza una serie de pasos de centrifugacin

diferencial, con velocidades sucesivamente mayores y cada uno produce un
sedimento y un sobrenadante, que es centrifugado seguidamente.
La centrifugacin se basa en hacer girar el tubo a gran velocidad de forma que
se produzca la acumulacin en el fondo del mismo de las partculas que
tienden a hundirse por tener una densidad mayor que la del medio en que se
encuentran. As, despus de la centrifugacin la muestra, homognea, se
habr separado en dos fracciones: sobrenadante ('supernatant'), fraccin
homognea que no ha sedimentado, y el sedimento ('pellet') que ha quedado
adherida al fondo del tubo. Para lograrlo con mitocondrias se aplica una
centrifugacin diferencial.

Centrifugacin diferencial
La centrifugacin diferencial se basa en la existencia de diferentes partculas
en la suspensin que difieren en su densidad de la del medio. Si se centrifuga
en condiciones suaves (poco tiempo, poco fuerza de aceleracin)
sedimentarn las partculas mayores y/o ms densas. Cuando el
sobrenadante de la primera centrifugacin culmina, se aplica el centrifugado
de nuevo en condiciones de ms tiempo y a ms velocidad, de manera que
sedimentan las partculas siguientes y as sucesivamente. Se pueden aplicar
condiciones crecientes de severidad en la centrifugacin y obtener una
coleccin de sedimentos que corresponden sucesivamente a fracciones de
partculas de diferente tamao y/o densidad.

4. Que otros inhibidores existen de 3 ejemplos y en que sitios actan

En la inhibicin competitiva, el sustrato y el inhibidor no se pueden unir

a la misma enzima al mismo tiempo, como se muestra en la figura de la
derecha. Esto generalmente ocurre cuando el inhibidor tiene afinidad por
el sitio activo de una enzima en el que tambin se une el sustrato; el
sustrato y el inhibidor compiten para el acceso al sitio activo de la enzima.
Este tipo de inhibicin se puede superar con concentraciones
suficientemente altas del sustrato, es decir, dejando fuera de competicin
al inhibidor. Los inhibidores competitivos son a menudo similares en
estructura al sustrato verdadero (ver ejemplos expuestos ms abajo).

En la competitiva el inhibidor se puede unir a la enzima al mismo tiempo

que el sustrato. Sin embargo, la unin del inhibidor afecta la unin del
sustrato, y viceversa. Este tipo de inhibicin se puede reducir, pero no
superar al aumentar las concentraciones del sustrato. Aunque es posible
que los inhibidores de tipo mixto se unan en el sitio activo, este tipo de
inhibicin resulta generalmente de un efecto alostrico donde el inhibidor
se une a otro sitio que no es el sitio activo de la enzima. La unin del
inhibidor con el sitio alostrico cambia la conformacin (es decir,

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la estructura terciaria o la forma tridimensional) de la enzima de modo que

la afinidad del sustrato por el sitio activo se reduce.
La inhibicin mixta, es una forma de inhibicin mixta donde la unin del
inhibidor con la enzima reduce su actividad pero no afecta la unin con el
sustrato. Como resultado, el grado de inhibicin depende solamente de la
concentracin de inhibidor.

5. que son dadores y aceptores artificiales y cules y para que se usaron en

prctica especifique el sistema.
Dadores: Los donadores de electrones ms comunes son las
molculas orgnicas. Los organismos que usan molculas orgnicas
como fuente de energa son conocidos como organotrofos. Sin
embargo, existen procariotas que son capaces de utilizar fuentes
inorgnicas como fuente de energa y se les conoce por ello con el
nombre de litotrofos. Estos donadores inorgnicos incluyen
al hidrgeno, al monxido de carbono, el amonio, el nitrito, sulfuro, y
el ion ferroso. Los litotrofos se han observado creciendo en
formaciones de rocas a centenares de metros bajo la superficie de la
Tierra. El uso de donadores de electrones inorgnicos como fuente de
energa es de particular inters en el estudio de la evolucin. Este tipo
de metabolismo tuvo que ser el antececesor de los actuales modelos
de organotrofos.

Aceptores artificiales: Al igual que existen un gran nmero

de donadores de electrones, tambin existen un gran nmero de
aceptores que pueden ser de ambos tipos, es decir de origen orgnico
o inorgnico. Si el oxgeno est disponible, se usar como aceptor, ya
que genera mayor produccin energtica. En los ambientes
anaerbicos, se puede utilizar NO3-, NO2-, Fe3+, SO42-, CO2 y pequeas
molculas orgnicas como por ejemplo el fumarato.

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3. Bibliografa
http://www.fagro.edu.uy/~bioquimica/docencia/material%20nivelacion/CADENA%2
0RESPIRATORIA.pdf

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/fra
ccionamiento.htm

http://www.guiametabolica.org/ecm/defectos-sintesis-coenzima-q10/info/es-
coenzima-q10

https://respiracioncelular.wordpress.com/cadena-respiratoria/

http://www2.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/temas/tema-9_inhibicion-
enzimatica.pdf

https://es.wikipedia.org/wiki/Inhibidor_enzim%C3%A1tico#Tipos_de_inhibidores_re
versibles

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