AO DEL BUEN SERVICIO AL CIUDADANO

PRACTICA DE LABORATORIO N1

FACULTAD : CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA

ESPECIALIDAD : FARMACIA Y BIOQUIMICA

ALUMNO : TITO GUTIERREZ PUJAICO

PROFESOR : ENRIQUE JOSE MANUEL AGUILAR CASTILLO

EL MICROSCOPIO

Un microscopio es un dispositivo encargado de hacer visibles objetos muy pequeos. El

microscopio compuesto consta de dos lentes (o sistemas de lentes) llamados objetivo y ocular.
El objetivo es un sistema de focal pequea que forma una imagen real e invertida del objeto
(situado cerca de su foco) prxima al foco del ocular. ste se encarga de formar una imagen
virtual de la anterior ampliada y situada en un punto en el que el ojo tenga fcil acomodacin (a
25cm o ms). Dada la reducida dimensin del objeto, se hace imperioso el recolectar la mayor
cantidad de luz del mismo, utilizando sistemas de concentracin de la energa luminosa sobre
el objeto y diseando sistemas que aprovechen al mximo la luz procedente del objeto.

Gracias al microscopio se han descubierto bacterias y microorganismos, que a simple vista no

se hubieran detectado.

Partes de un microscopio compuesto

Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms de un lente. Los

microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o
cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las
imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est
conformado por tres sistemas:

El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas
las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque.
El sistema ptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que
producen el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas.
El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten
y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del
microscopio.

La parte mecnica del microscopio

La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el
carro, el tornillo macromtrico y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte
ptica y de iluminacin; adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del
objeto.

El pie: Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general
forma de Y o bien es rectangular.
La columna o brazo: llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida a la base
por su parte inferior mediante una charnela, permitidiendo la inclinacin del tubo para
mejorar la captacin de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su
porcin superior y por el extremo inferior se adapta al pie.
El tubo: tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las molestias
que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares y
en extremo inferior el revlver de objetivos. El tubo se encuentra unido a la parte
superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el
tubo se mueva mediante los tornillos.
 El tornillo micromtrico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.
El tornillo micromtrico: mediante el movimiento casi imperceptible que produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la preparacin. Lleva
acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar
sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto que
se va a observar. Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que permite el paso de
los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece
inmvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede
centrarse o producir movimientos circulares.
Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar la preparacin. Se
encuentran en la platina.
Carro mvil: es un dispositivo que consta de dos tornillos y est colocado sobre la
platina, que permite deslizar la preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia
atrs y de derecha a izquierda.
El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los
objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posicin de trabajo, lo que se nota por el ruido de un pin que lo fija.

Sistema ptico

El sistema ptico es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto

de lentes que lo componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una
imagen de la muestra que el ocular luego ampla.

El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la

cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen
formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento
van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y
otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el
tamao del objeto observado.
Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen el
aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la
preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos:
objetivos secos y objetivos de inmersin.
o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre
ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican
el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si
un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es
planacromtico, su aumento 40 y su apertura numrica 0,65, calculada para una
longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de
microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms
frecuentemente utilizados son: 6X, 10X, 20X, 45X y 60X.
o El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes.
Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite
de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la lente frontal entre en
contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se
distingue por uno o dos crculos o anillos de color negro que rodea su extremo
inferior.
Sistema de iluminacin

Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada.
Comprende los siguientes elementos:

Fuente de iluminacin: se trata generalmente de una lmpara incandescente de

tungsteno sobrevoltada. Por delante de ella se sita un condensador (una lente
convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el dimetro
de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de
observacin produciendo luces parsitas.
El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del
microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios
modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en
todas las direcciones. La cara cncava se emplea de preferencia con iluminacin
artificial, y la plana, para iluminacin natural (luz solar). Los modelos ms modernos no
poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo.
Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los
rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el
mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la
platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior
plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran abertura (los de
mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que piden que se llene con
aceite el espacio entre esa lente superior y la preparacin. La abertura numrica mxima
del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se lograr
aprovechar todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente
sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajndose para su uso con
objetivos de poca potencia.
Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura
para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el
contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la
resolucin del sistema ptico.
 5.- REALICE UN ESQUEMA DEL MICROSCOPIO COMPUESTO Y SEALE SUS PARTES

Partes del microscopio

o Ocular (1)

o Revlver (2)

o Objetivos (3)
Brazo(11)

o Tornillos macromtrico y
micromtrico (4 y 5)

o Diafragma (6)

Fuente de luz (7)

o Condensador (8)
o Platina (9)

Base (10)
MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO

El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran daarlo.
Mientras no est en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo con una
bolsa plstica o campana de vidrio.

Las partes mecnicas deben limpiarse con un pao suave; en algunos casos, ste se puede
humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc.
Que hayan cado sobre las citadas partes.

La limpieza de las partes pticas requiere precauciones especiales. Para ello debe emplearse
papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material de laboratorio. Nunca deben
tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos; las huellas digitales
perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso eliminarlas.

Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con ter y
luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite de cedro que queda
sobre la lente frontal del objetivo de inmersin debe quitarse inmediatamente despus de
finalizada la observacin. Para ello se puede pasar el papel "limpialentes" impregnado con una
gota de xilol. Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la
platina y bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posicin ms baja, para evitar
que tropiece con alguno de los objetivos. Gurdese en lugares secos, para evitar que la
humedad favorezca la formacin de hongos. Ciertos cidos y otras sustancias qumicas que
producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina
completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya
debera estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
3. Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparacin
pudindose daar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora s, a travs de los oculares, ir separando lentamente el objetivo
Acercar al mximo la lente del objetivo a la preparacin, empleando el tornillo
macromtrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a travs del de la
preparacin con el macromtrico y, cuando se observe algo ntida la muestra,
girar el micromtrico hasta obtener un enfoque fino.
Pasar al siguiente objetivo. La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micromtrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar
de objetivo se perdi por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operacin desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a
muy poca distancia de la preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de
percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan las precauciones anteriores y
mancharlo con aceite de inmersin si se observa una preparacin que ya se enfoc
con el objetivo de inmersin.
Empleo del objetivo de inmersin:
. Bajar totalmente la platina.
 . Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habr que echar el aceite.
a. Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a medio camino entre
ste y el de x40.
b. Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el crculo de luz.
c. Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del objetivo de
inmersin.
d. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente
toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y
se adosara a la lente.
e. Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersin y la preparacin es mnima, aun menor que con el de
40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
f. Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la preparacin, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se manchara de
aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y
repetir la operacin desde el paso 3.
g. Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la platina y se
coloca el objetivo de menor aumento girando el revlver. En este momento ya
se puede retirar la preparacin de la platina. Nunca se debe retirar con el
objetivo de inmersin en posicin de observacin.
h. Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un papel especial para
ptica. Comprobar tambin que el objetivo 40x est perfectamente limpio.

PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posicin de
observacin, asegurarse de que la parte mecnica de la platina no sobresale del borde
de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y daen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada,
se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de ptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se est utilizando el microscopio.
5. Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pauelos especiales para ptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasar el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo
de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden daar las
lentes y su sujecin.
 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macromtrico, micromtrico,
platina, revlver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revlver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparacin para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrndolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se est observando a
travs del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algn lquido,
secarlo con un pao. Si se mancha de aceite, limpiarla con un pao humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesin prctica y,
al acabar el curso, encargar a un tcnico un ajuste y revisin general de los mismos.

Cmara de recuento:

1) Qu es una cmara de recuento y dnde se utiliza?

La cmara de recuento es un aprato de precisin hecho de vidrio ptico especial. Se utiliza
para contar clulas u otras partculas en suspensiones bajo el microscopio. Las cmaras de
recuento se utilizan principalmente para el anlisis de sangre (recuento de leucocitos,
eritrocitos, trombocitos) y recuento de clulas en el liquor. Adems las cmaras de recuento
sirven para contar bacterias, esperma y esporas de hongo.

2) El principio de construccin:
Todas las cmaras de recuento
muestran el mismo principio de
construccin.
Dentro de una rectangular placa de
vidrio ptico especial del tamao de
un portaobjetos se
encuentran en el tercio medio cuatro ranuras longitudinales, que son paralelos a los laterales
cortos.
Las dos grandes superficies laterales no estn tratadas y sirven para la rotulacin.
El soporte central y los dos soportes exteriores estn planamente esmerilados y pulidos. La
superficie del soporte central es un poquito ms baja que la de los dos soportes exteriores.
Los retculos de recuento estn grabadas en el soporte central (fondo de la cmara).
Cuando se coloca un cubre-
objetos sobre los
soportes exteriores,
se crea un espacio capilar
entre la cara inferior del cubreobjetos
y el soporte
central de la cmara de recuento.
3) Modelo e identificacin de las cmaras de recuento:

Modelo:

Modelo simple - soporte central sin divisin Modelo doble - soporte central dividido
(un retculo de recuento) (dos retculos de recuento)

Adems, se diferencia:
El modelo normal: el retculo de recuento est grabado directamente en el vidrio.

El modelo de lneas claras: primero se recubre el fondo de la cmara con metal y

luego el retculo de recuento est grabado en esta capa de metal.

Identificacin:

En las dos superficies laterales, no tratadas, estn indicadas las siguientes informaciones:
El sistema del retculo
El nombre y la marca registrada de Marienfeld Superior
La profundidad de la cmara en milmetros
La superficie del cuadrado ms pequeo en mm2

4) Fabricacin y explicaciones de calidad:

Las cmaras de recuento son aparatos de precisin e instrumentos in-vitro diagnosticos. Se
utilizan principalmente en laboratorios mdicos. Por eso un cmara recuento que es aplicada
o distribuida en la Union Europea tiene que ser aprobada y marcada con el simbolo CE.
Todas las cmaras de recuento vendidas por la empresa Marienfeld se fabrican de acuerdo a
los requisitos de la Ordenanza de Verificacin alemana y la norma DIN.

Fabricacin de cmaras de recuento de sangre:

La fabricacn slamente se describe brevemente. Se compone de diferentes pasos parciales,

controles intermediarios y un final control de calidad.
El campo central (el fondo de la cmara) y los dos campos exteriores son esmerilados y
pulidos. Hay que prestar especial atencin que estas superficies quedan absolutamente
planas y la profundidad exacta. Los requerimientos estn fijados en la norma DIN 12874. El
campo central est bajado segn la divisin del respectivo sistema (por ejemplo Neubauer
0,1 mm). Se fabrican varias profundidades estandar y especiales (p.ej. 0,2; 0,5; 0,01 y 0,02
mm).
Despus de estos pasos se graba la divisin (del retculo en cuestin) en el campo central y
seguido se realizan los procesos de impresin y secado al horno. Un contrl final muy rgido
que cumple con las exigencias de las normas DIN y la Oficina alemana de Contraste termina
la fabricacin.

Exigencias al control de calidad:

Las diferencias lmites segn la norma DIN 12847:

la profundidad de la cmara en la zona del retculo 2 % del valor nominal
las distancias inferiores a 0,4 mm entre las lneas del retculo 2 m
las distancias superiores a 0,4 mm entre las lneas del retculo 0,5 % del valor nominal
los ngulos de la divisin del retculo 1 grado
la anchura de las lneas de divisin no debe de ser superior a 5 m

La tolerancia de planeidad, segn DIN 7184, parte 1:

el fondo de la cmara en la zona del retculo de recuento 2 m
la superficie de apoyo 2 m
las lminas cubreobjetos 3m (segn DIN 58884)

5) Llenado de la cmara de recuento:

Posicionamiento del cubre-objeto:

Los soportes exteriores se humedecen con

agua destilada. Luego se coloca el cubre-
objeto a suave presin desde delante sobre
la cmara de recuento.
Atencin: Peligro de rotura del cubre-objeto!

La creacin de lneas de interferencia

(anillos de Newton) entre los soportes
exteriores y el cubre-objeto indica que el
cubre-objeto est colocado correctamente.

Cargar:

La pipeta bien mezclada se quita del agitador

y se tiran las primeras gotas.
Limpiar y secar la pipeta por fuera y
mantenerla inclinada hasta que se haya
formado una pequea gota en la punta.
Esta gota se sita en el punto entre el cubre-
objeto y la cmara de conteo.
Por efecto de capilaridad el espacio entre el
cubre-objeto y el fondo de la cmara se llena.
Antes de que la solucin de sangre pueda
desbordar esta parte de la cmara, se debe
retirarla. Si hay burbujas de aire o si se ha
despordado lquido a las ranuras, la cmara
tiene que ser limpiada y nuevamente cargada.

Pipetas mezcla-sangre utilizadas:

Pipeta de leucocitos
(perla blanca)

Pipeta de
eritrocitos (perla
roja)

6) Recuento de las partculas:

Tcnica de recuento:

El recuento requiere un exacto conocimiento de las lneas del

retculo de la respectiva cmara de recuento. En la ilustracin se
ve las lneas triples del sistem Neubauer mejorado.
Para que las clulas, que estn encima o cerca de las lneas de
limitacin, no se cuenten dos veces o se olvidan en el recuento,
hay que cumplir determinadas reglas (p.ej., vase la
ilustracin derecha).
Se cuentan todas las clulas que se encuentran dentro de una
definida zona de medicin.
Tambin se cuentan las clulas (marcadas en negro) que tocan o
estn encima de 2(!) lneas en un lado, p.ej. en la lnea de medida
izquierda y superior.
Esto tambin es vlido para el tipo de operacin de
recuento que debe realizarse en forma de meandro. El
recuento empieza en el ngulo superior izquierdo en
direccin de la flecha.

Comentarios acerca del recuento:

a) En todos los recuentos con cmaras, el diagrama del

condensador en el microscopio deber estar cerrado en
gran parte.

b) La diferencia de las clulas contadas entre los cuadrados grandes y los cuadrados de
grupos no deber ser superior a 10 clulas.

c) En todos los recuentos de clulas, hay que realizar dobles determinaciones. Despus
del recuento del retculo superior, se recuenta como control tambin el retculo inferior.
Hay que tener en cuenta que la cmara no est resecada. Esto se puede evitar si se
llena la cmara inferior justo poco antes del recuento y se recuente despus del tiempo
de sedimentacin.
 d) La diferencia entre las sumas de los recuentos de ambos retculos de recuento no
debe ser superior a 10 clulas. El valor intermedio de los recuentos se aplica luego en
la frmula de clculo o se multiplica con el factor correspondiente.

Superficie recontada (mm2) x profundidad de la cmara (mm) x dilucin

Ejemplo: Cmara: Neubauer improved

e) Leucocitos
1. Clulas recontadas 161 leucocitos
2. Superficie recontada 4 cuadrados ( = 4 x 1 mm2) = 4 mm2
3. Profundidad de la cmara 0,1 mm
4. Dilucin 1 : 20

161 2 = 161 x 20 = 8050

4 mm x 0.1 mm x 4 x 0.1 x 1 l 1 lof bloodper
leucocytes
1/20

f) Eritrocitos:
1. Clulas recontadas 507 eritrocitos
2. Superficie recontada 5 cuadrados ( = 5 x 0,04 mm2) = 0,2 mm2
3. Profundidad de la cmara 0,1 mm
4. Dilucin 1 : 200

6
507 = 507 x 200 = 5.07 x 10 /l l
2
0.2 mm x 0.1 mm x 1/200

1) Limpieza de las cmaras de recuento:

Inmediatamente despus del recuento realizado, se retira el cubre-objeto y se limpia la
cmara con agua o - en caso de necesidad - con un suave detergente. A continuacin,
la cmara se seca con un pao blando o se lava con acetona.

2) Breve descripcin de la cmara de recuento:

Los diferentes sistemas de cmaras de recuento se diferencian por el modelo del
retculo de recuento y la profundidad de la cmara. El retculo est compuesto de una
divisin cuadrada que slo se puede ver debajo del microscopio (aprox. 100 aumentos).
A continuacin se describe la cmara de recuento ms utilizada:
Neubauer-improved:

Cuadrado grande: 1 mm2

Cuadrado de grupo: 0,04
mm2 Cuadrado pequeo:
0,025 mm2

Esta es la cmara preferida hoy en da. La profundidad de la cmara = 0,100 mm. La

divisin del retculo de esta cmara muestra 3x3 cuadrados grandes de una superficie
de 1 mm2 cada uno.

Los 4 cuadrados en las esquinas se utilizan para el recuento de los leucocitos.

El gran cuadrado en el centro est adicionalmente dividido en 5x5 cuadrados de grupo

con una longitud lateral de 0,2 mm cada uno y una superficie de 0,04 mm 2 cada uno. A
su vez, los cuadrados de grupo estn subdivididos en 16 cuadrados pequeos de
0,0025 mm2 cada uno.

Cinco de estos cuadrados de grupo se utilizan para el recuento de eritrocitos.

Merece especial atencin el hecho de que la cmara muestre triples lneas de lmite por
todos los lados. De ellos la lnea central (!) ha de considerarse la mayor lnea de
medida. Esto es importante para decidir si las clulas que estn en la zona lmite, tienen
que ser contadas o no.
 7) Por qu las cmaras de recuento mantienen su importancia en el
laboratorio a pesar de contadores elctricos:

Para un laboratorio pequeo no vale la pena comprar caros aparatos electrnicos.

Las cmaras de recuento son imprescindibles para p.ej. el recuento de celulas de liquor
de efusiones, recuento de huevos de gusanos, bacterias o esporas del moho.
En caso de pocos trombocitos los instrumentos electrnicos son menos exactos que las
cmaras de recuento.

Posibles fuentes de errores:

la cmara de recuento no est limpia

el cubre-objeto no est correctamente puesto (no hay anillos de interferencia)
hay burbujas de aire en la cmara
la cmara est demasiado llena
el tiempo de sedimentacin es demasiado corto
el cubreobjetos no es correcto. Laminillas para la microscopa estandard son demasiado
delgadas y tuercen debido a las fuezas capilares

Contadores elctricos:

son usados en laboratorios mayores (altos gastos de inversin)

Desventaja: Los tipos de clulas solamente se diferencian por tamao. Por eso puede
haber errores a causa de partculas de polvo pelusas.
Ventaja: Por el rpido recuento y la evaluacin de muchas partculas hay menos errores
estadsticos. En procesos de recuento se tiene en cuenta el error estadstico:

Frmula: error estadstico = 1 : n

con n = 100 de clulas contadas 1:100 = 0,1 = 10 %

con n = 10.000 clulas contadas 1:10.000 = 0, 01 = 1 %

All information on this document reflects our current state of knowledge and is intended to
inform customers about our products and possible applications for them (errors and printing
errors excepted).
La serie blanca de la sangre son las clulas sanguneas encargadas de la defensa
contra la infeccin, bien como productoras de anticuerpos (los linfocitos),
bien participando en la destruccin de microorganismos (los neutrfilos, los
eosinfilos, los basfilos y los monocitos). Adems, los eosinfilos tambin
participan en las reacciones de hipersensibilidad.

La serie blanca aparece en el hemograma como el recuento total de leucocitos y la

formula leucocitaria, que expresa el valor, absoluto y porcentual, de cada uno de
los tipos de glbulos blancos presentes en sangre perifrica:

Polinucleares o granulocitos: neutrfilos,

eosinfilosy basfilos.
Mononucleares: linfocitos y monocitos
 Para poder valorar cules son las posibles causas de una alteracin de los
glbulos blancos en los anlisis de sangre, debe tenerse en cuenta el
recuento total y el anlisis del resto de las clulas sanguneas, la respuesta
a las preguntas del mdico al paciente buscando otros signos o sntomas,
as como repetir el estudio sanguneo a las 2-4 semanas para ver la
evolucin.

Las alteraciones de los glbulos blancos pueden ser de su nmero,

forma (tamao y forma) o de su funcionamiento, sobre todo los neutrfilos
y los linfocitos. Nos centraremos en lo que podemos sacar del hemograma.

ALTERACIONES NUMERICAS.

Leucocitosis: neutrofilia, linfocitosis, monocitosis, eosinofilia, basofilia.

Leucopenia: neutropenia, linfopenia, monocitemia, eosinipenia, basopenia.

ALTERACIONES MORFOLGICAS

Desviacin izquierda o mielemia (elementos jvenes) ms granulacin

txica

Linfocitos activados, clulas linfoplasmticas y linfomonocitoides.

Presencia de blastos (clulas muy inmaduras) en sangre perifrica.

Degranulacin de los neutrfilos: Sndromes mielodisplsicos y anemias

refractarias.

Neutrfilos vacuolados. Suele ser signo de infeccion.

Bastones de Auer. Aparecen en clulas blasticas.

Presencia de cuerpos de Dohle. Asociado a presencia de infeccion o

inflamacin.

Anomala de Pelger- Huet: defecto congnito de la segmentacin de los

neutrfilos.

Eosinofilos y basofilos degranulados y vacuolados. Sospechar sndrome

mieloproliferativo crnico.

LEUCOCITOSIS
La alteracin por aumento en el nmero de leucocitos, se denomina leucocitosis,
puede ser fisiolgica o patolgica
 Causas de leucocitosis

Fisiolgicas Infecciosas.
Embarazo Bacterianas
Infancia Vricas
Esfuerzo Otras:
Calor enfermedades
esporilares,
ricketsiosis,
complicacione
spticas, micosis
diseminadas.
Reactivas Neoplsicas
Dolor intenso Leucemias
Estrs agudo Leucemias
Posthemorragia mieloides
Quemaduras Sndrome
Necrosis mielodispsico
Traumatismo Enfermedades
mieloproliferativa
s
Policitemia vera
Tumores
malignos
Metstasis seas
Txicas
Frmacos
Gota
Acidosis
urmica/diabtica
Catecolaminas
Vacunas
Litio
Corticoides
Hipoxia
 Linfocitos activados, clulas linfoplasmticas y linfomonocitoides: deben
hacer sospechar en primer lugar una infeccin vrica (mononucleosis
infecciosa). Tambin pueden aparecer en reacciones de hipersensibilidad
a frmacos.
 Presencia de blastos (clulas muy inmaduras) en sangre perifrica. Su
aparicin obliga a descartar enfermedades hematooncolgicas (leucemias).

Bastones de Auer. Aparecen en clulas blasticas mieloides.

ARTEFACTOS PLAQUETARIOS

AGREGACIN

Consiste en la formacin de acmulos de plaquetas. Los agregados de

trombocitos suelen verse, preferentemente, en los bordes de las
extensiones sanguneas. Este fenmeno puede dar lugar a un resultado,
errneamente bajo en el recuento de plaquetas. Suele deberse a la
presencia, en la sangre perifrica, de aglutininas dirigidas contra los
trombocitos. Para diferenciar este fenmeno de una verdadera
plaquetopenia, se realiza la prueba de la triple extraccin. Esta consiste en
dividir la sangre problema en tres alcuotas y anticoagular la primera de
estas partes con EDTA, la segunda con citrato y la tercera con heparina.
Tras ello, realiza una extensin con cada una de las sangres y se comparan
los resultados obtenidos. De forma que, por ejemplo, si la agregacin
plaquetaria se debe a aglutininas dependientes del EDTA, solo se vern
acmulos de trombocitos en la extensin practicada con la sangre
anticoagulada con EDTA.

SATELITISMO

Consiste en la adhesin de plaquetas a los neutrfilos. Puede dar lugar a la

observacin de neutrfilos rodeados por un gran nmero de trombocitos.
Las causas de este fenmeno son desconocidas. No indica patologa.