FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS

PROGRAMA DE BIOLOGIA

PRCTICAS DE LABORATORIO
BIOLOGA GENERAL
6
SEPARACIN DE PIGMENTOS VEGETALES POR CROMATOGRAFIA SOBRE
PAPEL

1. INTRODUCCIN

La cromatografa es la distribucin de una sustancia o partcula en dos fases, bien

por cristalizacin (lquido-slido), destilacin (lquido-vapor) o sublimacin (slido-
vapor). La cromatografa en papel se basa en el reparto. La distribucin de
molculas en dos fases. Estas dos fases seran:
Fase mvil: una capa de solvente orgnico que asciende por capilaridad por
el papel y sobre la capa hidratada sin mezclarse con ella.
Fase estacionaria: la capa hidratada.
Ya que el movimiento se restringe al solvente orgnico, es el tiempo que
permanezcan en esta fase el que determinar la distancia recorrida; a ms tiempo,
ms distancia. Esto suele significar que el compuesto que ms distancia recorre
es ms apolar ya que permanece ms tiempo en el solvente afn.
Pueden llegar a separar sustancias con diferente K (constante de reparto), y con
diferentes grupos funcionales. Experimentalmente en ocasiones no podemos
separar compuestos con diferentes grupos funcionales.

Tipos de cromatografa en papel

Descendente: Se trata de una caja saturada de vapor de agua, atravesada por una
cajetn semicilndrico lleno con el solvente orgnico. En l se deposita el papel con
la banda de muestra justo al salir el papel del cajetn. Para sujetar el papel
introducimos una varilla a lo largo de la caja. El solvente comenzar ascendiendo
por el papel por capilaridad y continuar bajando al salir de la cajetilla, pasando
por la zona de muestra y arrastrndola, consiguindose as la separacin.
Ascendente: El solvente se encuentra en la parte inferior de la cubeta y asciende
por el papel haciendo que se separe la muestra. La resolucin de la cromatografa
en papel descendente es mayor.

2. OBJETIVOS

- Extraer los pigmentos fotosintticos e identificarlos de acuerdo con las

caractersticas mostradas en el papel.
- Manejar una de las tcnicas sencillas de cromatografa para aislar pigmentos
foliares.

3. MATERIALES

- Biolgicos: hojas de espinaca.

- Equipos: Balanza, hornilla elctrica.
- Reactivos: alcohol etlico al 96%, ter de petrleo, benceno.
- Vidriera: matraz, embudo, un tubo graduado fondo plano, con tapn de
corcho, capilares.
- Material: mortero con mano, gradilla.
- Otros: papel de filtro Whatman # 1, una tachuela, tijeras.

4. METODOLOGA

Triture 10 g. de hojas de espinaca con 50 cm 3 de alcohol al 96%. Caliente

suavemente en una hornilla. Cuando las hojas se decoloren y el alcohol adquiera
un color verde intenso, deje enfriar y filtre el extracto a travs de papel filtro,
utilizando el embudo y un matraz donde se deposite el filtrado.
Recorte una tira de papel filtro como se indica en la figura 1. Coloque con el
capilar una gota del extracto alcohlico y deje secar. Repita el procedimiento por lo
menos dos veces ms. Llene el fondo del tubo con una solucin de 9 partes de
ter de petrleo y una parte de benceno (aprox. 3 a 1 ml). Introduzca la tira de
papel cargada con el extracto, teniendo en cuenta de evitar que el solvente
alcance el extracto. Sostenga la tira con la tachuela, tape el tubo y observe.
Identifique las bandas o zonas en el papel. Qu tipo de pigmentos cree que est
observando? Analice y discuta.

Fig. 1. Montaje del cromatgrafo Tapn con tachuela

Papel Whatman

Muestra de clorofila

Solvente

5. CUESTIONARIO

1. A qu se debe que los pigmentos se separan unos de otros?

2. Por qu cree que se utiliza el benceno y el ter de petrleo en esta
experiencia?
3. Anexe la tira de papel, e identifique las zonas presentes en ella.
4. Qu es y que clases de cromatografa existen?
5. Qu son pigmentos fotosintticos, cul es su funcin? Enumere los pigmentos
ms importantes en las plantas.

6. BIBLIOGRAFA
- ROVALO, M. & ROJAS, M. 1993. Fisiologa Vegetal Experimental. Prcticas de
Laboratorio. Ed. Limusa. Mxico.
- ROJAS, M. 1982. Fisiologa Vegetal Aplicada. Interamericana. McGraw-Hill.
Mxico.
- SALISBURY, F., & ROSS, C. 1998. Fisiologa Vegetal. Ed. Iberoamericana.
Mxico.
- http//:www.arrakis.es/~rfluengo/cromatografa.html