UNIVERDAD DE SONORA

Divisin de ciencias biolgicas y de la salud

Licenciatura de Biologia

Laboratorio de Bioqumica I

Prctica No. 1
Reacciones Caractersticas para la Identificacin de Carbohidratos

Gpo 03

Equipo 8:
Reyna Dayhana Felix Berumen
Francisco Abraham Corrales Len
Betsi Reza Romo
Cristina Azucena Silva Apoderado

Hermosillo, Sonora. 11 Septiembre 2017

 OBJETIVOS
Realizar las reacciones de identificacin de carbohidratos: Fehling, Barfoed, Seliwanoff y de Bial.
Rx. de Fehling: identifica carbohidratos reductores en general.
Rx. de Barfoed: puede distinguir entre mono y disacridos.
Rx. de Seliwanoff: identifica carbohidratos cetohexosas.
Rx. de Bial: identifica carbohidratos aldopentosas

ANTECEDENTES
Los hidratos de carbono o carbohidratos reciben este nombre porque la formula emprica
general de muchos miembros de la familia puede escribirse Cn(H2O), es decir, carbono
hidratado (no todos los hidratos de carbono presentan esta formula). Los azucares,
almidones y la celulosa, compuestos que tiene importantes funciones estructurales y de
energa en los seres vivos, son todos los hidratos de carbono.

MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS cuando

contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando contienen el grupo cetona. Los
monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares y pueden tener entre
tres y hasta siete tomos de carbono.

DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre s por enlaces
glucosdicos.

OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos tambin por enlaces
glucosdicos.

POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de unidades de azcar
sencillo ligadas entre s.

Los carbohidratos reductores son aquellos carbohidratos (fundamentalmente

monosacridos y polisacridos), que tienen su grupo funcional aldehdo o cetona libre o
potencialmente libre. Libre si la molcula existe en forma abierta, potencialmente libre si
la molcula existe en forma cclica los carbohidratos reductores se llaman as por que
tienen la propiedad de reducir las soluciones alcalinas de cobre, que luego al calentarse
producen un precipitado de xido cuproso que es de color rojo ladrillo, perfectamente
identificado.

Todos los monosacridos, aun si existen en forma cclica son reductores. Los disacridos
que tengan hidroxilo del carbono anomrico de alguno de los monmeros libre, tambin
sern reductores, aun cuando ms lentamente, por ejemplo la Maltosa y la Lactosa, pero
aquellos que estn unidos por sus 2 carbonos anomricos, como la sacarosa, no sern
reductores, a menos que se rompa la unin y salgan libres de los monmeros. A medida
que el nmero de monmeros aumenta, las caractersticas reductoras se van haciendo
ms y ms leves. De ah que los polisacridos, a pesar de tener su ltimo monmero con
grupo funcional potencialmente libre, en la prctica nunca lo son. Pero si los polisacridos
se hidrolizan, entonces si se mostraran las caractersticas reductoras de sus monmeros
constituyentes.

PROCEDIMIENTOS
Se enlista el procedimiento tal cual se hizo en el saln:

1. Primero se obtuvo todo el material necesario para hacer cada procedimiento.

2. Se puso a hervir 200ml de agua en un vaso de precipitados, con el mechero de
bunsen.
3. Se marcaron los tubos de ensaye con el carbohidrato que iba a contener y la reaccin
que se iba a realizar en ese tubo de ensaye.
4. Se agregaron 0.5 mililitros del carbohidrato indicado en cada tubo de ensaye.
5. Se agregaron 0.5 mililitros del reactivo a utilizar, indicado en cada tubo de ensaye.
6. Se separaron los tubos de ensaye para cada reaccin.
7. Se sumergieron en el agua hirviendo los tubos con el reactivo Fehlingy se tom
tiempo y reacciones de los carbohidratos.
8. Se sumergieron en el agua hirviendo los tubos con el reactivo Barfoed y se tom
tiempo y reacciones de los carbohidratos.
9. Se sumergieron en el agua hirviendo los tubos con el reactivo Seliwanoff y se tom
tiempo y reacciones de los carbohidratos.
10. Se sumergieron en el agua hirviendo los tubos con el reactivo Bial y se tom tiempo
y reacciones de los carbohidratos.

FUNDAMENTO TEORICO DE LAS REACCIONES

Rx. de Fehling

El reactivo de Fehling, tambin conocido como Licor de Fehling, es una disolucin

descubierta por el qumico alemn Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para
la determinacin de azcares reductores.
Sirve para demostrar la presencia de glucosa, as como para detectar derivados de sta tales
como la sacarosa o la fructosa. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:
Sulfato de cobre cristalizado, 35 g y agua destilad hasta 1.000 mL.
Sal de Seignette o Tartrato mixto de potasio y sodio 150 g, solucin de hidrxido de
sodio al 40 %, 3 g y agua hasta 1.000 mL.
Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso, para evitar la precipitacin del
hidrxido de cobre.
El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de
los aldehdos. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre en medio alcalino a xido de
cobre, formando un precipitado de color rojo.
Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse
fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling
a xido de cobre rojo, se dice que es un azcar reductor.
Esta reaccin se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no
reductores como la fructosa que contiene un grupo cetona, puede enolizarse a la
forma aldehido dando lugar a un falso positivo. Al reaccionar con monosacaridos se torna
verdoso, y si lo hace con disacricos toma el color del ladrillo.
Por ebullicin se decolora el reactivo. Un cc. de reactividad corresponde a 0005 gr. de
glucosa. Sensibilidad 1:500.

Rx. de Barfoed

Esta prueba fue descrita por primera vez por el qumico dans Christen Thomsen Barfoed1
y se utiliza principalmente en botnica. La prueba es similar a la prueba de Fehling.
La Prueba de Barfoed es un ensayo qumico utilizado para detectar monosacridos. Se basa
en la reduccin de cobre (II) (En forma de acetato) a cobre (I) (En forma de xido), el cual
forma un precipitado color rojo ladrillo.1

RCOH + 2Cu+2 + 2H2O RCOOH + Cu2O + 4H+

Los disacridos tambin pueden reaccionar, pero en forma ms lenta. El grupo aldehdo del
monosacrido que se encuentra en forma de hemiacetal se oxida a su cido carboxlico
correspondiente. Muchas sustancias, entre ellas el cloruro de sodio,3 pueden interferir en
la prueba.

Rx. de Seliwanoff

La prueba de Seliwanoff es una prueba qumica que se usa para distinguir aldosas y cetosas.
Los azcares son distinguidos a travs de su funcin como cetona o aldehdo. Si el azcar
contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo aldehdo, es una aldosa.
Esta prueba est basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas
ms rpido que las aldosas.

El reactivo consiste en resorcinol y cido clorhdrico concentrado:

La hidrlisis cida de polisacridos y oligosacridos da azcares simples

Entonces la cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para producir un color
rojo. Es posible que las aldosas reaccionen produciendo un leve color rosa.

La fructosa da positiva a esta prueba. La sacarosa da negativa a esta prueba ya que la

molcula, si bien est constituida por glucosa y fructosa, en la unin alfa (1-2) se anulan las
propiedades reductoras de la glucosa y la fructosa, por lo que no da positiva, la sacarosa da
positiva cuando se le realiza una hidrolisis cida, lo que la convierte en un azcar invertido
o invertasa, donde se rompe el enlace alfa (1-2) y permite que la reaccin con esta prueba
d positivo.
Rx. de Bial

Identifica carbohidratos aldopentosas.

Al reaccionar con aldopentosa el acido clorhdrico, pierde molculas de agua, y produce la sustancia
conocida con el nombre de furfural. El furfural puede reaccionar en medio acido con el orcinol. Si
en esas condiciones se agrega una pequea cantidad de cloruro frrico, se formara un complejo de
color verde. Las cetopentosas no dan esta reaccin si no que dan un complejo de color rojo. Las
cetohexosas y las metilpentosas dan un color naranja, y al reposar producen un precipitado de color
verde oscuro. Las triosas y los acidos 5-cetoaldonicos dan positova la reaccin, asi como los acidos
uronicos, por lo que hay que tener cuidado en la mezcla de reccion no existe estos compuestos si es
que se quiere demostrar la presencia de las aldopentosas.

Esta reaccin sirve para identificar acido ribonucleico, puesto que las condiciones acidas hidrolizan
el acido nucleico y sus ribosas libres darn positiva la reaccin.

La presencia de hexosas no interfiere con la reaccin siempre que no halla calentamiento

prolongado, en cuyo caso las hexosas interferirn con la produccin de un precipitado rojo.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS
Reaccin de Fehling: Se identificaron carbohidratos reductores.

1 2 3 4 5

Figura 1. Se observa el precipitado, tubos positivos y tubo negativo.

Los tubos 1 (Glucosa), 2 (Fructosa), 4 (Lactosa) y 5 (Maltosa) resultaron positivos
aproximadamente a los 10 segundos, mostrando un precipitado caf o un rojo ladrillo
oscuro, esto significa que son carbohidratos reductores y el tubo 3 que contuvo Sacarosa
result negativo, por lo tanto no es un carbohidrato reductor.

Reaccin de Barfoed: Se identificaron los carbohidratos disacridos.

Tubo Carbohidrato Tiempo (minutos) Monosacrido Disacrido

1 Glucosa 2:10 /
2 Fructosa 2:50 /
3 Sacarosa / /
4 Lactosa 12:05 /
5 Maltosa 10:15 /
Tabla 1. Muestra a los monosacridos y disacridos, adems del tiempo en el que
presentaron precipitado.
Se observ que la glucosa y la fructosa precipitaron antes que la maltosa y lactosa, los 4
tubos resultaron positivos. El tubo 3, la sacarosa no mostr precipitado.
Reaccin de Seliwanoff: Se diferenciaron cetohexosas de pentosas.
Tubo Carbohidrato Color Tiempo (minutos) Cetohexosa
1 Xilosa Amarillo / /
2 Glucosa Amarillo / /
3 Fructosa Rojo 2:05
Tabla 2. Muestra el tiempo y color del precipitado en estos 3 carbohidratos.

Figura 2. Se observa el cambio de color que hubo entre los

carbohidratos; de amarillo xilosa y glucosa, de rojo fructosa.
La fructosa result ser una cetohexosa, mientras que la xilosa
es una pentosa.

1 2 3

Reaccin de Bial: Se diferenciaron pentosas de cetohexosas.

 Tubo Carbohidrato Color Tiempo (minutos) Pentosa
1 Xilosa Verde 7:00
2 Glucosa Amarillo / /
3 Fructosa Naranja / /
Tabla 3. Muestra el tiempo y color del precipitado en estos 3 carbohidratos.

Figura 3. Se observa el cambio de color que hubo entre

los carbohidratos; de amarillo xilosa, de naranja
fructosa y de verde xilosa.

Resulta xilosa como pentosa y fructosa como

cetohexosa.

1 2 3

DISCUSION
Al llevar a cabo cada reaccin con los diferentes carbohidratos, se pudo identificar a cada
uno de ellos observando la coloracin de los mismos al igual que el tiempo en que lo hacan.
La identificacin de azucares reductores y no reductores se comprob por el mtodo de
Fehling, resultando as la glucosa, fructosa, lactosa y maltosa positivos, ya que son
carbohidratos reductores. Estos cuentan con un grupo carbonilo en su estructura, el cual
puede funcionar como aldehdo o cetona segn su ubicacin en dicha estructura. Se llaman
azcares reductores porque poseen la capacidad de reducir otros compuestos gracias a la
alta reactividad del doble enlace del oxgeno. La sacarosa result negativa, por lo tanto, no
es un carbohidrato reductor.

El mtodo o reaccin de Barfoed fue utilizado para diferenciar entre carbohidratos

disacridos y monosacridos, donde la glucosa y la fructosa fueron unos de los primeros en
presentar precipitado, ya que son los monosacridos ms reactivos, son reductores. La
maltosa y lactosa tambin mostraron precipitado pero fue ms lento ya que son menos
reactivos. La sacarosa a pesar de ser un disacrido no cambio de color ya que no es reductor.
Esto muestra mediante el tiempo en reaccionar, cuales son disacridos o monosacridos,
en este caso la glucosa y fructosa que reaccionaron a los dos minutos son monosacridos y
la maltosa, lactosa y sacarosa que reaccionaron despus son disacridos.

En el caso de la Reaccin de Seliwanoff que es una prueba qumica usada para distinguir
aldosas y cetosas. Los azcares son distinguidos a travs de su funcin como cetona o
aldehdo. Si el azcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo
aldehdo, es una aldosa. Esta prueba est basada en el hecho de que, al calentarlas, las
cetosas son deshidratadas ms rpido que las aldosas (Seliwanoff, T. 1887). En la prctica
se diferenciaron cetohexosas de pentosas mediante la coloracin, donde el tubo 3 que
contuvo fructosa result positivo mostrando una coloracin rojiza, por lo tanto, es una
cetohexosa. Mientras que la xilosa y la glucosa mantuvieron un color amarillento.

El ultimo mtodo el reactivo de Bial que es para diferenciar pentosas de cetohexosas

contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual forma complejos de coloracin slo con las
pentosas. De otro lado una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos,
y determinar el grado de pureza de los mismos, particularmente monosacrios es la
rotacin ptica ocasionada por la presencia de centros asimtricos o quirales en la
estructura molecular, los cuales desvan el plano de luz polarizada (Lozano J, 1954). En este
caso, la coloracin fue verde y efectivamente para la xilosa que es una pentosa.

CONCLUSIN
Se logr comprender y practicar el uso de las diferentes reacciones de identificacin de
carbohidratos: Fehling, Barfoed, Seliwanoff y de Bia. En la reaccin de Fehling se logr
distinguir entre azcares no reductores y azcares reductores, en la reaccin de Barfoed se
pudo diferenciar entre monosacridos y disacridos mientras que la reaccin de Seliwanoff
sirvi de herramienta para la identificacin de cetohexosas y la reaccin de Bial, identifica
aldopentosas. Al contrastar estos resultados con la teora, se observ que los resultados
obtenidos son los correctos y esperables.

CUESTIONARIO
1.-Cul es la diferencia entre el reactivo de Fehling y el de Barfoed, en cuanto a composicin y en
cuanto a su capacidad de reconocer carbohidratos? El reactivo de Fehling es una disolucin que
contiene CuSO4 y tartrato sdico potsico que se utiliza para la identificacin de azcares
reductores mientras que el reactivo de Barfoed es una solucin de acetato de cobre y cido actico
la cual sirve para identificar monosacridos y disacridos de manera ms lenta.

2.- En la reaccin de Fehling, qu pasara sin calentamiento? El tiempo en reaccionar sera mucho
mayor, el rendimiento de la reaccin disminuira.

3.- Se podra usar la prueba de Seliwanoff para distinguir sacarosa de fructosa? Por qu si o por
qu no? S, a pesar de que ambas sustancias dan positivo a la prueba de Seliwanoff, la sacarosa lo
hace de manera ms lenta ya que es un disacrido y debe hidrolizarse para liberar la fructosa que
contiene.

4.- Tengo tres frascos, uno con glucosa, otro con manosa y otro con fructosa. A los tres les aado
hidrxido de sodio 0.05 N. Qu obtengo como producto en cada uno de los tres tubos y por qu?
La glucosa, la manosa y la fructosa se interconvierten en solucin en presencia de una base
mediante reacciones de tautomerizacin. Esta transformacin se denomina transposicin de Lobry
de Bruyn-Alberda van Ekenstein. En cada frasco se espera encontrar una mezcla de los 3
monosacridos e intermediarios enodioles.

5.- En un frasco tengo glucosa y en otro manosa y los quise tratar con lcali 0.01N, pero me
equivoqu de frasco y lo que aad fue cido clorhdrico 0.01 N. Qu sucedera en cada frasco? Al
aadir HCL diluido a las aldohexosas forman productos anhdridos con la prdida de una molcula
de agua, encontraramos en el frasco 1 glucosa anhdrida y en el frasco 2 manosa anhdrida.

6.- En el laboratorio haba un frasco rotulado lactosa + fructosa, y otro rotulada glucosa + ribosa,
pero al hacerse la limpieza del laboratorio se cayeron las etiquetas y ahora no se sabe cul es cual.
Qu se puede hacer para etiquetarlos correctamente? Tomar una muestra representativa de
ambos frascos y someterlos al reactivo de Barfoed, aquel que de positivo ser la glucosa+ribosa. Se
tomar una muestra de ambas y se sometern a la prueba de Seliwanoff, aquel que resulte positivo
ser la mezcla lactosa-fructosa.

REFERENCIA
Theodor Seliwanoff, Berichte der deutschen chemischen Gesellschaft, 1887, 20 (1), 181
182.

Hart H., Craine L. y Hart. D. Qumica Orgnica. McGraw Hill. Novena edicin. Espaa. 1997.
McMurry, J. Qumica Orgnica. Quinta edicin, Thomson editores, Mxico, 2001.

ANNIMO (1988): Fehling (Germn). Enciclopedia Universal Ilustrada Europeo-Americana,

23, 560. Madrid, Espasa-Calpe.
BARFOED, C. FRESENIUS, ZEITSCHRIFT F. (1873) Sobre la deteccin de glucosa, adems
de dextrina y cuerpos relacionados. Diario de Fresenius de la qumica analtica. C. W.
Kreidel's Verlag 1873

John McMurry.2008. Qumica Organica. Sptima edicin. Cengage Learning Editores, S.A.
de C.V., Mxico, D.F