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ANLISE INSTRUMENTAL
ESPECTROFOTOMETRIA
CEFET QUMICA RJ Anlise Instrumental - apostila de espectrofotometria molecular
SUMRIO
1. INTRODUO
5. A LEI DE LAMBERT-BEER
10.BIBLIOGRAFIA
1
CEFET QUMICA RJ Anlise Instrumental - apostila de espectrofotometria molecular
1. INTRODUO
2
CEFET QUMICA RJ Anlise Instrumental - apostila de espectrofotometria molecular
A teoria quntica, modelo atual da estrutura qumica, informa que os nveis de energia dos
eltrons em tomos neutros so quantizados, isto , os eltrons assumem estados discretos1 de
energia e s passam de um nvel de energia para outro se receberem uma quantidade exata. Essa
energia pode ser muito alta, e fazer com que o eltron saia da estrutura atmica e o tomo neutro se
torne um on. A partir desse limite, que a energia de ionizao, o tomo neutro passa a poder
receber qualquer quantidade de energia e no mais "pacotes discretos". Cada elemento qumico tem
estrutura eletrnica e nveis de energia diferenciados, tem uma energia de ionizao caracterstica e
absorve uma srie diferente de "pacotes discretos"2:
1Discreto, nesse caso, quer dizer uma energia fixa e definida em cada nvel.
2 A unidade de absoro no espectro, absorbncia, ser explicada mais adiante.
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Espectro de Absoro
do Vapor de Sdio
Como ser nas molculas, em que os eltrons estabelecem ligaes qumicas? Uma
molcula tem movimento rotacional e vibracional (a ligao qumica vibra em torno do
comprimento mdio). Esse movimento quantizado e ela no gira nem vibra em qualquer
velocidade. Os nveis de energia rotacionais e vibracionais tambm dependem da estrutura
molecular. Existem estados rotacionais discretos, estados vibracionais discretos e mesmo estados
eletrnicos discretos, antes que o eltron seja ejetado e a ligao qumica se rompa. A partir da
energia de ionizao da molcula qualquer quantidade de energia pode ser absorvida.
Esquema dos nveis de energia na molcula: A-nvel eletrnico, B-nivel vibracional, traos finos-nvel rotacional.
Os ftons de uma determinada freqncia podem ser absorvidos, se eles estiverem
"sintonizados" na freqncia que fornece a energia necessria para a transio de um estado
rotacional para outro, ou de um estado vibracional para outro, ou de um estado eletrnico para outro
numa determinada molcula. Outras possibilidades so:
A transio de um estado eletrnico para outro estado eletrnico, acompanhada tambm de uma
modificao no estado vibracional original.
A transio de um estado vibracional para outro, acompanhada tambm de uma modificao no
estado rotacional original.
A transio de um estado eletrnico para outro acompanhada de modificaes no estado
vibracional e tambm no rotacional.
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As possibilidades de absoro de energia numa molcula so bem maiores que num tomo3,4:
100
80
% Transmitncia
60
40
20
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Comprimento de Onda (mm)
Mesmo na regio do contnuo (a regio aps a ionizao em que se absorve qualquer pacote
de energia), h possibilidades de absoro discreta, isto , um eltron de camada mais interna (fora
da camada de valncia) pode ser colocado num nvel de energia externo camada de valncia.
Nesse nvel, ele pode ainda estar ligado ao tomo ou molcula. Esse fenmeno necessita de uma
quantidade de energia maior do que a energia de ionizao. bvio, tambm, que isso desarranja
toda a estrutura atmica e esse estado instvel, mas a probabilidade de ocorrer uma absoro de
energia nessa faixa maior, pois a molcula tem mais uma maneira de absorver o mesmo fton.
Quando um fton se aproxima ocorrem trs eventos: ele passa direto, ou refletido, ou
absorvido (se possui a freqncia necessria). O fenmeno da absoro ocorre nas freqncias
quantizadas do tomo ou molcula, ou se a energia mais alta que a energia de ionizao.
Mesmo quando a freqncia do fton a correta, existe uma probabilidade da absoro no
ocorrer, pois o fton pode ser refletido ou passar direto. Mas isto no igual para cada freqncia
passvel de ser absorvida. Ao longo do espectro de freqncias existem probabilidades maiores ou
menores de ocorrer absoro. Essa probabilidade, de um modo geral, cai conforme aumenta a
freqncia da radiao eletromagntica. Ftons de alta energia, de modo geral, tm menor
probabilidade de serem absorvidos que os de energia mais baixa, embora hajam inverses.
3Ficaa sugesto de calcular quantas mais possibilidades de estados de energia uma molcula tem do que um tomo.
4Esteespectro numa regio onde s ocorrem excitaes rotacionais e vibracionais e mesmo assim o nmero de bandas
maior que no espectro atmico. A unidade de intensidade, % Transmitncia, ser explicada mais adiante.
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5O forno de microondas uma fonte de microondas sintonizada numa freqncia em que molculas de gua absorvem.
O aumento do movimento rotacional da gua faz com que, por coliso, as molculas da comida aumentem o seu estado
de movimento e a comida se aquece. O prato no esquenta por quase no conter molculas de gua na sua estrutura.
6Por ser de freqncia mais baixa que as outras radiaes ionizantes, o ultravioleta tem maior probabilidade de
absoro. Ele , na prtica, absorvido totalmente na pele e no consegue chegar nas clulas mais internas. A sua maior
incidncia nos dias atuais, pela destruio da camada de oznio, aumenta o nmero de casos de cncer de pele.
7O raio-X mais "penetrante" que o ultravioleta, pela sua probabilidade de absoro ser menor. A matria tem que ser
mais compacta (densa) para que haja razovel absoro ou reflexo. Por isso ele usado para fotografar o os ossos.
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EXERCCIOS
2)Se o tomo ou molcula absorve, ele tambm pode liberar a energia absorvida sob a forma de
ftons. Como isso acontece? Pesquise.
4)Quais os fenmenos bsicos que podem ocorrer quando um fton vai ao encontro de um tomo ou
molcula?
Como visto anteriormente, cada faixa de comprimento de onda (freqncias) origina um tipo
de informao diferente. A intensidade de absoro nos diferentes comprimentos de onda na faixa
do microonda e no infravermelho d informaes sobre a estrutura molecular (quem est ligado
com quem e com que tipo de ligao qumica). O visvel no to rico em informaes estruturais,
mas pode dar valiosas informaes quantitativas. Do ultravioleta em diante, podemos obter
informaes sobre a composio elementar (pois so as camadas internas do tomo, no-ligadas,
que absorvem). Vamos nos deter sobre a anlise da absoro no visvel.
Num raciocnio intuitivo, a concentrao de uma substncia colorida, dissolvida num
solvente incolor (como a gua), proporcional intensidade de cor da soluo. Desse modo, a
intensidade de cor uma medida da concentrao da soluo.
Como medir quantitativamente a intensidade da cor de uma soluo? Como a relao exata
disso com a concentrao? Analisemos por que certas substncias so coloridas e tambm por que
as substncias podem ter cores diferentes:
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As substncias so coloridas porque absorvem luz visvel. Desse modo, a luz que emerge de uma
substncia s vai ter os comprimentos de onda (freqncias) que ela no absorveu.
A retina ver, ento, mais fortemente as cores que deixaram de ser absorvidas. O preto existir
quando a substncia (ou mistura de) absorve todas as cores da luz visvel.
Cada substncia, pela sua estrutura molecular, absorve um padro de cores especfico. Desse
modo, o padro de cores refletido e absorvido determinar a cor final da substncia.
Pode-se concluir que a cor da substncia a luz que ela no absorveu. A luz que interage e
que tem relao com a estrutura eletrnica a cor que no se v. Por exemplo, uma substncia que
amarela aos olhos humanos tem como cor mais fortemente absorvida o azul. Uma substncia azul
tem como cor complementar o amarelo, que a cor mais fortemente absorvida.
Para medir a concentrao mede-se a luz absorvida e no a refletida. Melhor ainda, incide-se
sobre a amostra apenas a luz que interessa (aquela que absorvida) e exclui-se os outros
comprimentos de onda.
O que se mede diretamente no a quantidade de luz absorvida. S se poderia fazer isto se
houvesse um detetor junto a cada molcula, para ver se ela absorveu ou no o fton. O que se faz
normalmente medir a luz que consegue passar, e no a luz que absorvida.
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Se incide-se um feixe de luz com intensidade Po, aps passar pela amostra ele ter uma nova
intensidade P, menor do que Po, pois uma parte da luz foi absorvida. A nova intensidade
detectada.
amostra de concentrao C
Para medir concentrao, os outros fatores no podem variar e deve-se manter:
o mesmo comprimento de onda para o mesmo tipo de amostra.
a mesma espessura de cubeta.
a mesma intensidade de Po.
Como P depende de Po, h que se garantir que Po sempre igual nas diferentes
medies. Para escapar desse problema, mede-se a razo P/Po, e no P sozinho. Essa razo
chamada de transmitncia (T), definida como:
P
T =
Po
8Quanto maior o dimetro do tubo, maior a distncia que os ftons percorrem e maior a chance de colidir com as
molculas capazes de absorver.
9Se a amostra nada absorve, P = P e T = 1. Se a amostra tudo absorve, P = 0 e T = 0.
o
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gerasse um sinal eltrico proporcional intensidade de luz percebida. Esse sinal eltrico seria
repassado a um registrador qualquer (voltmetro, ampermetro, etc.), dependendo do tipo de sinal
eltrico gerado.
Os aparelhos mais simples que medem a transmitncia, utilizam como fonte de luz uma
lmpada de tungstnio similar quela utilizada na iluminao residencial.
O monocromador mais simples o filtro, isto , uma pelcula que s deixa passar uma certa
faixa de comprimento de onda e aparelhos com essa construo so chamados de fotocolormetros.
Os monocromadores mais sofisticados so aquels que contm prisma ou rede de difrao
como elementos de disperso. Um monocromador com prisma teria o seguinte esquema:
EXERCCIOS
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5) Uma luz branca proveniente de uma fonte de radiao foi dispersa em seus comprimentos de
onda e ento todo o feixe foi dirigido para um frasco transparente contendo soluo de sulfato de
cobre amoniacal diludo (cor azul). As radiaes que saem da soluo foram dirigida para um
anteparo branco. Observe o desenho e assinale a alternativa correta para aquilo que se observou no
anteparo.
( ) ausncia de luz.
( ) luz branca.
( ) uma faixa de luz amarela.
( ) uma faixa de luz azul.
( ) todas as cores do arco ris.
6)Por que se mede a intensidade do feixe com a amostra e sem a amostra? Qual a vantagem? Por
que o feixe sem a amostra medido com a cubeta s com o solvente?
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5. A LEI DE LAMBERT-BEER
0
0
Concentrao
Concentrao
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A = ebC
l1 l 2
l3
A
l1
A l2
l3
Concentrao
Qual a melhor reta para anlise quantitativa? a que fornece a melhor sensibilidade. Ou
seja, a que melhor distingue entre duas concentraes muito prximas e que d maior sinal para
amostras diludas. Claramente v-se que l1 atende a esses requisitos. Duas concentraes prximas
tero em l1 a maior diferena em absorbncia. l1 o comprimento de onda de absoro mxima
para a substncia, simbolizada como lmax.
EXERCCIOS
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5) Sabe-se que uma amostra absorve do poder radiante incidente num determinado comprimento
de onda. Calcule a sua absorbncia.
6) Sabe-se que o espectro de absoro do derivado nitrogenado B dissolvido em etanol tem lmax =
420 nm. Indique qual a cor da soluo alcolica de B e qual a cor do filtro ideal para sua
determinao quantitativa.
CH
3
CH N N N NO
3 2
CH(CH )
32 B
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11) A 452 nm, uma soluo com 1,68 10-3 g/L de clorofila B em etanol, apresentou transmitncia
igual a 49,7%. Sabendo que sua absortividade molar nesse comprimento de onda de 1,63 105
L/mol.cm, calcule o peso molecular da clorofila B, considerando b = 1,00 cm.
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13) 0,200g de cobre metlico puro foram dissolvidos em cido ntrico, um excesso de amnia foi
adicionado para formar o cromforo Cu(NH4)4+2 e a soluo resultante diluda a um litro em b.v.
Uma alquota foi para um copo do colormetro Dubosq at encher 10,0 mm.
Uma amostra de 0,500 g foi tratada com cido ntrico, excesso de amnia e diluda a 500,00
mL. Essa soluo foi colocada no outro copo do colormetro Dubosq e, para obter igualdade de
colorao, a profundidade foi ajustada para 16,0 mm. Calcule o teor de cobre na amostra.
14) Uma soluo padro de ferro foi preparada com 350 mg de Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O e dissolvidos
em 500,00 mL (sol. A). Uma alquota de 2,00 mL de A foi misturada com 5 mL de cloridrato de
hidroxilamina a 5%, 5 mL de o-fenantrolina a 5 %, o pH foi ajustado at 2 e a soluo resultante foi
avolumada a 100,00 mL (sol. B). A absorbncia de B a 510 nm foi 0,361 numa clula de 1,00 cm.
100,00 mL de uma gua de poo foram evaporados a 80C at restar 5 mL, em seguida
acrescentou-se 5 mL de cloridrato de hidroxilamina a 5%, 5 mL de o-fenantrolina a 5 %, o pH foi
ajustado at 2 e a soluo resultante foi avolumada a 50,00 mL (sol C). A absorbncia de C a 510
nm foi 0,248 numa clula de 1,00 cm. Calcule a concentrao de Fe em ppm na gua do poo e a
absortividade molar do complexo Feo-fenantrolina.
15) Um fotocolormetro porttil com resposta linear ao poder radiante, foi utilizado para a
anlise absorciomtrica. O seu registrador estava defeituoso, porm os demais componentes do
aparelho estavam em boas condies. Utilizou-se um micro-ampermetro para medir a corrente
eltrica proveniente do sistema de deteco e cubeta com 20 mm de caminho tico. Foram feitas
avaliaes do branco e dos padres nos filtros vermelho e azul conforme a tabela abaixo:
FILTRO VERMELHO FILTRO AZUL
corrente %T ABS Corrente %T ABS
Branco 145,4 mA 78,2 mA
Padro 80,0 mA
1,00 mg/L
Padro 69,3 mA
2,00 mg/L
A) Complete adequadamente, as lacunas da tabela.
B) Considerando MM do soluto = 200, a absortividade molar _______ L.mol-1Cm-1 no filtro
vermelho e _______ L.mol-1Cm-1 no filtro azul.
C) Pode-se afirmar que a cor da soluo analisada no ________________(vermelha ou azul).
Justifique.
D) Uma amostra, diluda 50 vezes, apresentou uma corrente de 100,0 mA, no filtro de maior
sensibilidade. A sua concentrao em mmol/L ______.
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0,6
0,5
0,4
A
0,3
0,2
0,1
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40
-0,1
Conc (ppm Mn)
De posse do grfico (ou da equao da reta calculada a partir dos pontos experimentais) pode-se
fazer, por interpolao, a leitura da amostra, ou calcular pela equao. A absorbncia da amostra
desconhecida permitir a obteno da concentrao desejada.
Nem sempre possvel a leitura direta da amostra, por vrias razes:
a amostra pode conter mais de um cromforo (substncia que absorve luz).
11 Esse ltimo procedimento permite escolher o lmax, que o melhor comprimento de onda para proceder a anlise.
Essa varredura consiste em ler a transmitncia a cada comprimento de onda selecionado. Nos aparelhos de feixe simples
mais antigos, o ajuste do 0 e do 100% tem que ser feito a cada comprimento de onda, pois a fonte de luz no bem
estabilizada.
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as condies de pH, agentes complexantes, solventes, etc., podem no ser reprodutveis nos
padres, e esses fatores podem afetar a absortividade da substncia.
a amostra pode estar diluda demais e fora da faixa tima de leitura.
Contornar esses e outros fatores exige o emprego de tcnicas que sero estudadas adiante.
O uso de vrios padres para se fazer uma curva de calibrao diminui a possibilidade de
erros grosseiros que poderiam acontecer com o uso de um s padro. A curva de calibrao permite
tambm o clculo de e ou a para o comprimento de onda utilizado, pois eb (ou ab) coeficiente
angular da reta de calibrao. Para calcular e ou a, basta dividir o coeficiente angular pelo valor de
b.
Para diminuir o erro, muitas vezes o branco da amostra no simplesmente o solvente. Em
vrias anlises, o composto que se quer analisar no colorido, isto , no absorve no visvel. Como
existem muitos mtodos sensveis e especficos para desenvolver cor em vrios tipos de analitos, a
cor desenvolvida na amostra para o analito que se quer medir. O branco, no caso, pode ser a
prpria amostra com todas as etapas do tratamento, menos aquela que d cor ao analito. Com isso,
qualquer outro componente da amostra que possa ter alguma absorbncia descontado no branco.
O composto que absorve luz chamado de cromforo, e importante distinguir que muitas vezes o
cromforo no o analito, e sim um composto derivado dele.
O espectro de varredura importante, pois, como j foi dito, muitas vezes a amostra tem
algum componente colorido que interfere na anlise. Nesse caso, pelo espectro de varredura, pode-
se escolher um outro comprimento de onda que tenha boa sensibilidade (alto valor de e) mas que
no sofra a interferncia do componente colorido. Outras tcnicas para driblar esse problema sero
mostradas adiante.
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3)Para analisar o contedo de nitrito, uma massa de 20,048 g de uma amostra de presunto foi
cortada, moda, tratada e filtrada quantitativamente para que o nitrito fosse extrado, reagisse e
formasse o composto colorido. O filtrado foi avolumado a 100,00 mL, mas a soluo apresentou
transmitncia pequena. Sendo assim, pipetou-se 25,00 mL da soluo e diluiu-se a 50,00 mL.
Novamente a transmitncia apresentou-se pequena. Fez-se nova diluio, pipetando 10,00 mL dessa
ltima soluo e diluindo-se a 50,00 mL. Leu-se, ento uma transmitncia de 65,8%.
De uma soluo estoque de NaNO2 a 0,450 g/L, V (mL) de NaNO2 T (%)
foram feitos padres retirando-se alquotas com uma bureta, 1,00 88,2
acrescentando-se 10 mL do reagente colorimtrico e 5,00 51,4
avolumando com gua em b.v. de 500,00 mL. Os dados 8,00 36,0
esto na tabela ao lado. 10,00 28,8
14,00 16,0
a) Qual o teor de nitrito na amostra original?
b) Qual seria o melhor branco para a leitura da amostra?
c) Se a anlise fosse efetuada em um fotmetro de filtro, qual o filtro escolhido?
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5)O grfico e a tabela abaixo correspondem s varreduras de solues 4,0 10-4 mol/L, realizadas
num espectrofotmetro, de um indicador submetido a diversos valores de pH.
0,800
0,600
Absorbncia
0,400
7,0
0,200 5,0
pH
3,0
0,000
400
460 1,0
520
580
640
l (nm ) 700
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C x Vx Cp
A = eb + eb Vp
VT VT
C V
O coeficiente linear eb x x contm a concentrao procurada (Cx) e os outros termos so
VT
conhecidos. A seguir temos um exemplo de uma curva de adio-padro para a anlise de Fe (II)
em gua, por meio do desenvolvimento de cor com o tiocianato:
Vp (mL) A
Anlise de Fe (II) por Adio-Padro 0,00 0,240
em Espectrofotometria
5,00 0,437
1,200 10,00 0,621
1,000 15,00 0,809
20,00 1,009
0,800
A 0,600 Vx = 10,00 mL
Cp = 10,0 ppm
0,400
VT = 50,00 mL
0,200 eb = (coef.ang. Vt)/Cp = 0,191
0,000
Cx(ppm) = (coef.linearVt)/(ebVx) = 1,00
0,00 5,00 10,00 15,00 20,00
A = 0,0382 Vp + 0,241 Vp (mL)
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Uma outra maneira de fazer esse mesmo clculo dividir o coeficiente linear pelo
coeficiente angular, que, calculando pelas expresses anteriores, equivale a CxVx/Cp. Substituindo-
se os valores de Vx e Cp, pode-se achar o valor de Cx.
Esse problema tambm pode ser resolvido de maneira grfica, prolongando-se a reta e
achando o Vp negativo em que a absorbncia cairia a zero (tcnica da extrapolao). O clculo
utilizando esse modo de resoluo deixado como exerccio.12
Esse mtodo se torna mais preciso quanto maior o nmero de solues utilizadas para
anlise. Quando no se quer tanta preciso, pode-se utilizar uma adio nica de padro e fazer o
clculo com os valores obtidos antes e aps a adio. Tambm se pode fazer a adio sem respeitar
o volume constante, o que operacionalmente mais simples. Um nmero menor de solues
preparadas com a amostra pode ser desejvel, quando a quantidade de amostra pequena.
Deixamos tambm a deduo matemtica desses dois casos para o estudante13.
Esses dois mtodos (adio mltipla e adio nica) se prestam principalmente a anlises de
apenas um cromforo em soluo.
EXERCCIOS
1)Para determinar a concentrao de ferro em sistemas aquticos, um analista tomou cinco alquotas
de 10,00 mL de gua de um lago e adicionou a cada uma delas, respectivamente, exatamente 0,
5,00, 10,00, 15,00 e 20,00 mL de uma soluo-padro contendo 10,0 ppm de Fe+3, completando a
seguir os volumes a 50,00 mL com gua deionizada e excesso de SCN-, de modo a formar o
complexo [FeSCN]+2 (vermelho). Em um determinado comprimento de onda, as absorbncias
medidas para as cinco solues foram, respectivamente, 0,240; 0,437; 0,621; 0,809; 1,009. Pede-se:
a) A equao da curva de adio padro e a concentrao de ferro na amostra original.
b) Sabendo-se que b = 1,00 cm, a absortividade molar do complexo no comprimento de onda.
12 Nos exerccios aps este tpico existem casos que podem ser resolvidos desta maneira.
13 Os exerccios 7 e 8 obrigatoriamente tm que ser resolvidos desta ltima forma.
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Aps isto, 0,100 mL de soluo padro contendo 55,00 mg/mL de Pb foi adicionada a
50,00 mL da soluo de amostra. A absorbncia encontrada para essa nova soluo foi de 0,180.
Calcule o teor de Pb no material em mg/g (ppm). Observe que no houve diluio a um volume
final, mas o volume de adio desprezvel comparado ao volume de amostra.
3)2,00 mL de urina so analisados para obter o teor de fosfato, adicionando-se reagentes que
desenvolvem cor, diluindo a 100,00 mL, medindo sua absorbncia a 700 nm e obtendo um valor
de 0,375. A uma segunda alquota de 2,00 mL so adicionados 5,00 mL de uma soluo padro de
fosfato contendo 45,0 mg/L de fosfato. Depois do desenvolvimento de cor e diluio a 100,00 mL,
a absorbncia foi de 0,506 a 700 nm. Calcular a concentrao de fosfato na amostra em mg/L.
2,00 mL dessa ltima soluo foram tomados e avolumados a 100,00 mL. A absorbncia
lida para a soluo diluda foi 0,470. Foram retirados mais 2,00 mL dos 25,00 mL iniciais, aos quais
se adicionou 4,00 mL de uma soluo-padro do complexo com concentrao de 15,0 ppm de
glicose e tambm diluiu-se a 100,00 mL. A absorbncia para essa soluo foi 0,610.
a) Qual o melhor filtro para medir a absorbncia dessa amostra em fotocolormetro?
b) Qual a concentrao em mg% de glicose na amostra de sangue?
5)2,00 mL de uma soluo 2,00 x 10-4 mol/L de um corante foram transferidos para uma clula de
absoro com 2,00 cm de dimetro interno e capacidade at 5 mL. A absorbncia da soluo no
lmax foi 0,500. Em seguida 2,00 mL de uma soluo 3,00 x 10-4 mol/L do corante foram misturados
com a soluo que estava na cubeta e homogeneizou-se a soluo resultante. Qual a absorbncia
lida?
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6)Para a anlise de nitrito no salame, 10,08 g da amostra de salame foram T (%) V (mL)
tratados convenientemente e diludos at 250,00 mL. Cinco alquotas de 61,8 0
10,00 mL foram transferidas, cada uma para bales volumtricos de 100,00 53,6 1,00
mL. Ao primeiro balo volumtrico, adicionou-se 5,00 mL de um reagente 39,0 3,00
colorimtrico adequado a fim de formar o cromforo e completou-se com 29,8 5,00
gua destilada, enquanto nos demais, alm dos 10,00 mL da soluo amostra 18,6 8,00
e do regente colorimtrico, foram adicionados respectivamente, 1,00; 3,00,
5,00 e 8,00 mL de uma soluo padro de nitrito a 2,00 ppm e s ento o
volume final foi ajustado a 100,00 mL. Aps o preparo das solues,
procedeu-se a determinao a 435 nm, obtendo-se os resultados ao lado:
7)Considere no exerccio 3 que 5,00 mL de padro foram adicionados diretamente nos 100,00 mL
contendo outra amostra e obtiveram-se as mesmas leituras de absorbncia. Calcule a concentrao
de fosfato. Nesse caso a variao de volume no desprezvel.
8)No exerccio 4, considere que os 4,00 mL de padro foram acrescentados a 50,00 mL da soluo
de outra amostra e foram obtidas as mesmas leituras. Calcule a concentrao de glicose. Novamente
a variao de volume no desprezvel.
Esse mtodo aplicado quando se quer analisar dois ou mais cromforos em soluo
simultaneamente e, o que a situao mais comum, os espectros possuem regies de superposio.
Se na soluo de amostra existe mais de um cromforo, os espectros de absoro desses
cromforos podem se sobrepor numa dada extenso de comprimento de onda. Ento, a anlise dessa
amostra em apenas um comprimento de onda, quando se escolhe um lmax, dever corresponder a
um dos cromforos e o(s) outro(s) provavelmente no estar(o) na regio de absorbncia mxima.
Mas isso gera uma impreciso na medida, pois a absorbncia nesse l corresponde no s ao
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cromforo em questo, mas tambm a absorbncia do(s) outro(s) em soluo. A seguir apresenta-se
os espectros de dois cromforos denominados x e y, misturados numa dada concentrao Cx e Cy.
cromforo X
cromforo Y
A
absorbncia total
l (nm)
Como podemos ver, no lmax de x existe uma contribuio de y e no lmax de y existe uma
contribuio de x. Nesse caso, em cada l:
Atotal = Ax + Ay
Escolhe-se os lmax de cada um dos compostos, onde cada um deles tem a maior
sensibilidade. lx ser o lmax do composto x, e ly o do lmax do composto y. Pela lei de Lambert-
Beer, a contribuio de cada um deles para a absorbncia total em cada comprimento de onda ser:
A total ( l x ) = e xx bC x + e yx bC y
A total ( l y ) = e xy bC x + e yy bC y
e xx e e yx so as absortividades de x e y no lx, e e xy e e yy so as absortividades de x e y no ly.
Se os e so conhecidos em cada l (podem ser obtidos medindo-se padres de cada
cromforo) e o b tambm, as nicas incgnitas das equaes so Cx e Cy. Tem-se ento um sistema
de equaes do primeiro grau de fcil resoluo, onde pode-se calcular as duas concentraes. Fica
como exerccio para o estudante o desenvolvimento de um sistema para trs cromforos14.
14Esse tipo de anlise tem limitaes: a amostra tem que ter todos os cromforos determinados, com o e conhecido em
cada l necessrio e a incerteza na determinao de um cromforo aumenta com o aumento do nmero de cromforos.
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EXERCCIOS
HO OH HO O
C O C
COOH
O
I II
Faixa de pH (zona de viragem)
8,2 (incolor) - 10,0 (vermelho, lmax 553 nm)
De acordo com a faixa de pH da fenolftalena, faa um esboo dos espectros de absoro da
fenolftalena nas condies de pH estabelecidas nos grficos abaixo. Considere que a concentrao
nominal da fenolftaleina em todos os casos de 4,00 x 10-3 mg/mL , a absortividade molar da
espcie II 3,5 x 104 L mol-1 cm-1 a 553 nm, 7,0 x 102 a 480 nm e 1,5 x 103 a 620 nm, o caminho
tico de 2,00 cm e MM da fenolftalena 318 g/mol.
Espectro de absoro - pH 8,0 Espectro de absoro - pH 9,0
1,0 1,0
0,8 0,8
0,6 0,6
Abs
Abs
0,4 0,4
0,2 0,2
0,0 0,0
400 500 600 700 800 400 500 600 700 800
comp de onda (nm) comp de onda (nm)
0,4 0,4
0,2 0,2
0,0 0,0
400 500 600 700 800 400 500 600 700 800
comp de onda (nm) comp de onda (nm)
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4) ons de terras raras tm picos de absoro finos e eDy (L/mol.cm) eEu (L/mol.cm)
baixo e. Para Dy+3 e Eu+3 temos os e nos lmax: 394 nm 0,50 306
908 nm 2,46 0,00
Se uma soluo contendo esses ons tem uma absorbncia de 0,206 a 394 nm e 0,201 a 908
nm numa cubeta de 5,00 cm, calcule as concentraes desses ons.
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Absorbncia
Desvio
Positivo
Desvio
Negativo
Concentrao
Como desvios da lei de Beer normalmente ocorrem em concentraes mais altas, uma das
solues mais comuns diluir mais a amostra, para que a anlise ocorra na faixa linear da curva,
desde que o valor de e (que d a sensibilidade do cromforo naquele comprimento de onda) e a
sensibilidade do aparelho que mede a absoro permitam. A faixa de trabalho normal dos mtodos
espectrofotomtricos vai de 10-2 mol/L a 10-7 mol/L, com vrias excees.
muito importante conhecer em que faixa de concentrao ocorre um desvio significativo
da lei de Beer. Essa mais uma das razes por que nunca se deve extrapolar os resultados de uma
curva de calibrao para calcular a concentrao de uma amostra, cujo valor de absorbncia caiu
fora dos limites dos valores de absorbncia dos padres.
Outro fator da instrumentao que pode causar desvios aparentes da lei de Beer a mudana
de sensibilidade do detector com o tempo.
EXERCCIOS
1)Para cada uma das seguintes situaes, preveja em qual a Lei de Beer mostrar um desvio
aparente negativo, um desvio positivo ou praticamente nenhum.
a) A substncia absorvente a forma no-dissociada de um cido fraco.
b) A entidade absorvente o ction em equilbrio com a base fraca.
c) Um metal est sendo determinado atravs de um reagente que desenvolve cor, medido em um
colormetro fotoeltrico com o filtro apropriado. No mesmo sistema adicionada uma
quantidade igual e insuficiente do reagente para reagir completamente com trs padres mais
concentrados, entre os dez examinados.
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3)Em uma anlise espectrofotomtrica na regio do ultravioleta de uma amostra gasosa, verificou-
se um desvio da Lei de Beer. A anlise media a concentrao de NO2 em uma amostra de ar. Essa
substncia encontra-se no seguinte equilbrio:
2 NO2 N2O4
A absorbncia no varia linearmente com a concentrao analtica do NO2. Com o incremento da
concentrao, a absorbncia no aumenta proporcionalmente. Justifique por que ocorre esse desvio
e mostre graficamente como se observa o mesmo.
BIBLIOGRAFIA
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Item F:
1- a = 22 L/g.cm
teor de Mn = 0,59%
2- a) grfico
b) espectrofotmetro
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