Universidade Federal da Paraba

Centro de Cincias da Sade

Curso de Graduao em Farmcia

PRISCILLA CRISPINIANO DOS SANTOS

NANOPARTCULAS: TOXICIDADE BIOLGICA

JOO PESSOA - PB
2014

0
 PRISCILLA CRISPINIANO DOS SANTOS

NANOPARTCULAS: TOXICIDADE BIOLGICA

Trabalho de Concluso de Curso apresentado

Coordenao do Curso de Graduao em
Farmcia, do Centro de Cincias da Sade, da
Universidade Federal da Paraba, como parte
dos requisitos para obteno do ttulo de
Bacharel em Farmcia.

ORIENTADOR:

Prof. Dr. Davi Antas e Silva

JOO PESSOA PB
2014
1
S237n Santos, Priscilla Crispiniano.

Nanopartculas: toxicidade biolgica / Priscilla Crispiniano dos Santos. - - Joo Pessoa: [s.n.],
2014.

55f.: il.
Orientador: Davi Antas e Silva.

Monografia (graduao) UFPB/CCS.

1. Nanopartculas. 2. Nanofarmacologia. 3. Nanotoxicologia. 4.Toxicidade biolgica. 5.

Nanobiotecnologia. 6. Regulao.

BS/CCS/UFPB CDU: 620.3+54-722(043.2)

2
 PRISCILLA CRISPNIANO DOS SANTOS

NANOPARTCULAS: TOXICIDADE BIOLGICA

Aprovada em ____ de ________________ de 2014

Banca examinadora

________________________________________________
Prof. Dr. Davi Antas e Silva
(Orientador)

_________________________________________________
Prof. Pablo Queiroz Lopes
(Examinador)

_________________________________________________
Prof Dr Micheline Azevedo Lima
(Examinadora)

3
Dedico este trabalho ao meu marido e aos
meus pais.

4
 AGRADECIMENTOS

Deus, obrigada pelo eterno e misericordioso amor e estmulo em todos os momentos da minha
vida;

Aos meus pais, pelo apoio, ensinamentos e zelo por minha vida. Por terem me mostrado o
caminho a seguir. A minha me, pela persistncia, dedicao materna e grande incentivo e ao
meu pai (in memoriam), pela sua ternura, bondade, compreenso, alegria e fora;

Ao meu marido, pela bondade, esforo e dedicao. Por permanecer ao meu lado, me
ajudando, alegrando meus dias e contribuindo para essa realizao;

Ao meu orientador, Prof. Davi Antas e Silva, pela confiana depositada em mim, pela
ateno, pacincia e ensinamentos transmitidos;

Prof. Micheline Azevedo Lima e ao Prof. Pablo Queirz Lopes, por terem aceitado
participar da banca examinadora do meu Trabalho de Concluso de Curso, contribuindo com
seus conhecimentos;

minha irm, pelo incentivo, por tentar ajudar e pelos momentos de diverso;

Evanize, pelo apoio e vontade em ajudar;

Thasa, amiga e companheira de curso, por sempre permanecer ao meu lado na graduao,
pela preocupao, disposio em ajudar e por compartilhar momentos de alegria;

Aos meus amigos da graduao, Talitta, Yuri e Paulo, pela boa convivncia;

Priscilla Maciel, pela amizade, por toda ajuda durante a iniciao cientfica;

Ao orientador, Prof. Robson Veras, pela oportunidade de ingressar na iniciao cientfica,

pelos ensinamentos e orientaes;

5
Ao Prof. Isac Almeida, pela oportunidade em participar do seu grupo de pesquisa de
farmacologia cardiovascular e equipe do laboratrio;

UFPB, aos colegas de curso e aos grandes professores que me capacitaram.

6
 Nanopartculas: toxicidade biolgica
SANTOS, P. C. (2014)
Trabalho de Concluso de Curso/Farmcia/UFPB

RESUMO

Nas ltimas dcadas observa-se um interesse sem precedentes na rea da

nanotecnologia, sendo um dos campos tecnolgicos mais atrativos e em amplo crescimento,
repercutindo no surgimento de produtos inovadores em reas estratgicas. No entanto, para
tanto crescimento, so poucos os estudos toxicolgicos para que haja regulao eficaz e para
que se assegure a sade da populao e do meio ambiente. Este estudo teve como objetivo
expor um panorama a partir de pesquisas relacionadas nanotoxicidade biolgica por
inalao, por via drmica, via sistema circulatrio, efeitos de citotoxicidade e dados
regulatrios, correlacionando com a farmacologia. Os estudos na literatura demonstram uma
grande capacidade de alcance das nanopartculas nos sistemas biolgicos, geralmente so
observadas respostas de ativao do sistema imunolgico e deposio em rgos com suas
respectivas patologias causada pela presena das nanopartculas. Em contrapartida ainda
lento o surgimento de leis para a composio de medidas regulatrias das nanopartculas. Este
trabalho sugere que os resultados existentes na literatura so capazes de compor medidas
regulatrias de segurana biolgica em aplicaes de produtos diversos, principalmente no
mbito da nanofarmacologia, porm nota-se desinteresse na aplicao de medidas
regulatrias.

Palavras- chaves: Nanopartculas, Nanofarmacologia, Nanotoxicologia, Toxicidade

biolgica, Nanobiotecnologia, Regulao.

7
 ABSTRACT

In recent decades there has been an unprecedent interest in the area of nanotechnology, one of
the most attractive and high-growth technology fields, resulting in the emergence of
innovative products in strategic areas. However, due to such growth, there are still a few
toxicological studies so that an effective regulation could ensure that people's health and the
environment are safe. This study aimed to expose a panorama from a research related to
biological nanotoxicity by inhalation, dermal, via the circulatory system, effects of cytotoxic
and regulatory data, correlating with pharmacology. Studies in the literature show a wide
capacity range of nanoparticles in biological systems, usually responses immune system
activation and deposition are observed in organs with their respective pathologies caused by
the presence of nanoparticles. In contrast is still slow the emergence of laws for the
composition of regulatory measurements of nanoparticles. This work suggests that existing
results in the literature are able to compose regulatory biosecurity measures in various product
applications, especially within the nanofarmacology, however there is noted disinterest in the
application of regulatory measurements.

Key words: Nanoparticles, Nanofarmacology, toxicology, biological toxicity,

Nanobiotechnology, Regulation.

8
 LISTA DE FIGURAS

Figura 1: Microscpio de fora atmica (AFM);

Figura 2: Seqncia de imagens demonstrando diferentes grandezas da pele da mo ao

DNA;

Figura 3: Exemplos de nanopartculas: Lipossoma (A), dendrmero (B);

Figura 4: Diferentes formas farmacuticas com nanopartculas polimricas;

Figura 5: Mecanismos de toxicidade dos frmacos;

Figura 6: Corpo humano e as vias de exposio nanopartculas, rgos afetados, e doenas

associadas a partir da epidemiologia, in vivo e in vitro;

Figura 7: Comparao de tamanho de macrfago de rato para tamanho nanopartculas (em

escala). Macrfagos humanos so at duas vezes maiores do que os macrfagos de ratos;

Figura 8 - Microfotografia de clulas de adenocarcinoma humano (A549) expostas a um

nanotubo de carbono de parede mltipla, onde so visveis duas clulas binucleadas (devido
inibio da citocinese induzida experimentalmente) exibindo um microncleo e alguns
aglomerados de NMs. O microncleo contm fragmentos de cromossomas ou mesmo
cromossomas inteiros e refletem a ao nociva do agente em estudo sobre os cromossomas.

9
 LISTA DE ABREVIATURAS, SIGLAS E SMBOLOS.

FDA United States Food and Drug Administration

TCC Trabalho de Concluso de Curso

UFPB Universidade Federal da Paraba

EMEA Europe, the Middle East and frica

ICH International Conference on Harmonisation

OECD Organisation for Economic Co-operation and Development

NPs Nanopartculas

NMs Nanomateriais

NCI National Cancer Institute

WHO World Health Organization

ROS Espcies Reativas de Oxignio

OBS: as abreviaturas e smbolos utilizados neste trabalho e que no constam nesta relao,
encontram-se descritas no texto ou so convenes adotadas universalmente.

10
 SUMRIO

1. INTRODUO .................................................................................................................. 12
2. OBJETIVOS ....................................................................................................................... 16
2.1. Objetivo geral .................................................................................................................... 17
2.2. Objetivo especfico ........................................................................................................... 17
3. METODOLOGIA............................................................................................................... 18
4. REVISO BIBLIOGRFICA .......................................................................................... 20
4. 1. CONSIDERAES SOBRE NANOTECNOLOGIA ..................................................... 21
4.1.1. Nanopartculas......................................................................................................... 22
4.1.2. Utilizao de nanopartculas na farmacologia ........................................................ 24
4.1.3. Toxicidade farmacolgica ....................................................................................... 27
4.2. REGULAO E NANOTOXICIDADE ......................................................................... 30
4.3. NANOTOXICIDADE BIOLGICA E SUA CORRELAO COM A
NANOFARMACOLOGIA ...................................................................................................... 31
4.3.1. Toxicidade pulmonar aps inalao ........................................................................ 34
4.3.2. Toxicidade digestiva aps ingesto ......................................................................... 37
4.3.3. Toxicidade drmica por nanocosmticos ................................................................ 38
4.3.4. Possveis efeitos txicos nos sistema sanguneo. .................................................... 39
4.3.5. Genotoxicidade e citotoxicidade de nanopartculas ................................................ 40
4.4. RISCOS NANOTECNOLGICOS .................................................................................. 43
5. CONCLUSO..................................................................................................................... 45
6. REFERNCIAS ................................................................................................................. 47

11
Introduo
12
1. INTRODUO

Devido ao crescente avano quanto s aplicaes da nanotecnologia em diversos

setores estratgicos, surge uma grande preocupao relacionada ao dano biolgico. Estudos
toxicolgicos ainda no so suficientes para a criao de uma regulao segura e eficaz,
podendo repercutir em grandes impactos ambientais, ao passo que pesquisas demonstram
resultados de toxicidade desses novos produtos.
Desde a pr-histria o homem tenta modificar o ambiente em que vive para aproveitar a
natureza da melhor maneira. Aps muitos progressos criou vrias cincias e descobriu
diferentes formas de utilizao de substncias que se aplicam em diversas reas, tais como,
sade e tecnologia. Dentre esses muitos avanos, surge um novo conhecimento no final do
sculo XX, entre as dcadas de 1970 e 1980, quando grupos de cientistas exploraram a
nanocincia para o surgimento da nanotecnologia (SANTOS; 2008). A nanocincia
multidisciplinar, sendo necessrio o envolvimento de vrias outras cincias, tais como, fsica,
qumica, biologia, engenharia e matemtica.
Em 1974, o cientista Nrio Taniguchi utilizou o prefixo nano, palavra derivada do
latim, nanus, que denomina coisas demasiadamente pequenas. Por esta razo, recorreu a
essa epistemologia para melhor representar a nanocincia, que tem como produto e ferramenta
a nanotecnologia. Na nanotecnologia as partculas so manipuladas com magnitude
extremamente pequenas, na escala de nanmetros (nm), que equivalente a bilionsima parte
de um metro (CHAVES; 2007). No entanto, os benefcios se apresentam acompanhados
tambm de desvantagens, pois as nanopartculas podem interferir negativamente sobre o
homem e o meio ambiente pela facilidade de contato com estruturas biolgicas muito
pequenas.
A nanobiotecnologia definida como o estudo, processamento, fabricao e desenho de
dispositivos orgnicos com nanomateriais para atuao biolgica ou biomateriais, nos quais
pelo menos um componente funcional possui tamanho nanomtrico. As reas importantes da
nanobiotecnologia incluem Nanomedicina (biologia molecular e gentica), Fsica-mdica
(diagnstico), Nanofrmacos (frmacos encapsulados) e Nanocosmtica (encapsulao de
ativo). (SANTOS, 2009). Por estar intimamente ligada interao biolgica, a
nanobiotecnologia vem sendo palco de diversos estudos toxicolgicos para uma melhor
aplicabilidade, com diminuio de impactos negativos decorrentes das da nanotecnologia
sobre os organismos.

13
 No campo da sade, a rea da cincia farmacutica recorre a vrios artifcios para obter
diversos tipos e formas de preparaes dos veculos estratgicos para que medicamentos
alcancem uma melhor disponibilidade dos princpios ativos em seu local de ao. Para
melhoria dessas respostas, os artifcios farmacolgicos vm se transformando com os avanos
nos estudos da nanotecnologia, que esto contribuindo para melhorias na medicina e na rea
das cincias farmacuticas, surgindo um novo campo de atuao, a nanofarmacologia.
A eficcia de uma droga depende de seu mecanismo de ao, do veculo de entrega, da
via de administrao, concentrao correta, distribuio e eliminao (ASHAI, 2012;
RAUCH, 2013). Os medicamentos nanotecnolgicos possuem a capacidade de carrear
princpios ativos em seus locais alvos com mais especificidade, contornando problemas
associados aos medicamentos disponveis comercialmente, tais como, toxicidade,
estabilidade, dosagem, eficcia, segurana e adeso do paciente ao tratamento (SAHOO,
2003). Entretanto a nanofarmacologia necessita de mais estudos a respeito dos possveis
riscos relacionados toxicidade, por se tratarem de substncias muito pequenas e alcanarem
lugares que antes eram impossveis de serem alcanados pelos produtos convencionais.
Devido ao fato de que a utilizao de nanomateriais seja uma estratgia promissora, a
produo desses produtos est aumentando rapidamente (ROCCO, 2001), o que acarretar em
um aparecimento de nanomateriais no ar, gua, solos e organismos (MUELLER E
NOWACK, 2008). Essa questo ambiental relacionada aplicao da nanotecnologia faz com
que se faa necessrio uma ateno maior voltada para a indstria que grande responsvel
por uma gama de impactos ambientais devido ao manuseio inadequado de seus materiais e
descarte inapropriado de resduos, assegurando a garantia do desenvolvimento e cumprimento
de ferramentas de sustentabilidade e minimizando os potenciais impactos que as
nanopartculas so capazes de causar, pelo fato de serem minsculas e carrearem substncias
qumicas com maior efetividade, podendo gerar altos ndices toxicolgicos.
A aplicabilidade da nanobiotecnologia em diversas reas requer uma investigao mais
aprofundada, visto que altera o ambiente biolgico, possuem maior acessibilidade em
barreiras fisiolgicas, e as propriedades fsico-qumicas desses novos reagentes so mais
complexas, tornando-se mais desafiadoras do que os produtos convencionais (FLORENCE,
2012; MUTHU, 2010).
Em decorrncia desses riscos a nanobiotecnologia e a aplicao da nanocincia na
farmacologia, pode resultar em algum potencial dano a sade humana, pelo fato de que as
caractersticas qumicas nanomtricas desses materiais aumentam a superfcie de contato com

14
a composio biolgica, sendo necessrio um conhecimento multidisciplinar e um
planejamento rigoroso, evitando efeitos adversos.
O objetivo desse trabalho demonstrar, a partir de um estudo aprofundado, potenciais
efeitos de toxicidade relacionados nanobiotecnologia e utilizao de nanopartculas na
farmacolgica, bem como os efeitos txicos.

15
Objetivos
16
2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo geral

Expor um panorama com pesquisas relacionadas nanotecnologia e toxicidade biolgica,

correlacionando com a farmacologia.

2.2. Objetivo especfico

Descrever algumas consideraes sobre nanotecnologia;

Expor os principais usos farmacolgicos de nanopartculas;
Fazer um levantamento sobre pesquisas relacionadas nanotoxicidade biolgica;
Estudar os riscos da nanotoxicidade biolgica, correlacionando com os possveis
efeitos de toxicidade farmacolgica.

17
Metodologia
18
3. METODOLOGIA

O presente estudo foi construdo atravs de uma reviso bibliogrfica, realizada entre o
perodo de 2001 a 2014, a partir de algumas bases de dados como: PubMed, Medline, Sibi
(USP), Portal Peridicos Capes, Bireme, ISI, SCIRUS, IBICT, Web of Science e Dissertation
Abstracts. Na pesquisa, foram consultados artigos originais de pesquisa e de reviso, bem
como livros, revistas e internet, sobre o tema nanotoxicidade, e palavras-chave:
nanofarmacologia, nanotecnologia, nanopartculas, nanotoxicologia, toxicidade biolgica. Os
artigos obtidos foram avaliados segundo a sua relevncia e que apresentam tpicos
diretamente relacionados com o assunto. Os dados foram descritos na forma de tabelas,
grficos, figuras.

19
Reviso bibliogrfica
20
4. REVISO BIBLIOGRFICA

4. 1. Consideraes sobre nanotecnologia

Para muitos a nanotecnologia teve seu marco inicial em 29 de dezembro de 1959 com o
fsico Richard Feynman, durante o encontro anual da Sociedade Americana de Fsica. Ele
afirmou que em breve os cientistas poderiam manipular tomos, construir estruturas
nanomtricas e aplic-las onde quisessem desde que as leis naturais fossem mantidas. Esta
afirmao define a nanotecnologia, que a capacidade de manipular partculas em escala
manomtrica, e planejar sua ao de acordo com o que se deseja, possibilitando a construo
de matrias inexistentes na natureza (FEYNMAN, 1959).
No entanto, aps a afirmao de Feynman o incio das aplicaes nanomtricas ocorreu
na dcada de 80 com os microscpios de varredura por tunelamento, em 1981, Gerd Binning e
Heinrich Roherer, sendo possvel a primeira visualizao dos tomos individuais.
Em 1989 Donald M. Eigler da IBM na Califrnia, nos Estados Unidos, escreve a
palavra IBM com 35 tomos de xennio mostrando que estruturas poderiam ser construdas
tomos por tomos ou molculas por molculas.
Ainda no ano de 1986, Gerd Bining inventou uma ponta do microscpio capaz de
enxergar qualquer coisa. Junto ponta, foi acoplado um pequeno pedao de diamante que
contorna os tomos exercendo uma presso pequena, o suficiente para no destru-la. Este
ficou conhecido como o microscpio de fora atmica (AFM) (CADIOLI; SALLA, 2006).

Figura 1: Microscpio de Fora Atmica (AFM).

FONTE: CAPOZZOLI, U. A cincia do pequeno em busca da maioridade. Revista
Duetto, Scientific Americam Brasil, ed. n 1, junho de 2002. Disponvel em:
http://www2.uol.com.br/sciam/reportagens/a_ciencia_do_pequeno_em_busca_da_maioridade
_imprimir.html. Acesso em maio de 2014.

21
 Em 1991 Sumio e Iijama da NEC, em Tsukuba no Japo sintetizaram nanotubos de
carbono. (CADIOLI; SALLA, 2006). Segundo DURN, MATTOSO E DE MORAIS 2006,
p.17, os nanotubos revolucionaram a nanotecnologia, pois exibiram resistncia mecnica
muito alta e capacidade de aplicaes singulares.
Desde a afirmao visionria de Richard Feynman em 1959 a respeito da
nanotecnologia, e a primeira aplicao nos anos 80, notria a ascenso de descobertas e
aplicaes dessa nova tecnologia. A utilizao da nanocincia em diversas reas alterou
profundamente o cenrio atual do mundo, devido s suas vantagens sobre os produtos
convencionais.
A importncia da nanotecnologia multidisciplinar, pois possvel aplic-la em
diversos setores obtendo eficcia significativa sobre os produtos, como eletrnicos,
permitindo a compactao dos computadores a microcomputadores e chips; energia, um
exemplo so pesquisas a respeito da condutividade do grafeno, que uma estrutura laminar,
composta por tomos de carbono que se agrupam formando hexgonos, possui uma
condutividade eltrica perfeita, permitindo que os eltrons deslizem sobre eles, o que pode ser
aplicado em telas touch screen e at aplicaes na indstria farmacutica. Outras aplicaes
so sabo em p, lentes. Essa ascenso requer cuidados quanto os limites biolgicos e
ambientais.

4.1.1. Nanopartculas

O nanmetro corresponde bilionsima parte do metro ou a milionsima parte do

milmetro (1x10-9 m). A palavra nanotecnologia vem do grego, onde o prefixo nano significa
ano. (MARTINELLO, AZZEVEDO, 2009).
As nanopartculas so termodinamicamente instveis e tm a tendncia natural de se
agregarem e crescerem. Desta forma, o grande desafio do qumico de materiais consiste
exatamente em preparar nanomateriais estveis, que permaneam nesta escala de tamanho
sem sofrer decomposio e sem agregao e crescimento, e monodispersos, tanto com relao
ao tamanho quanto com relao forma de suas partculas, que possam ser manipulados,
dispersos, depositados sobre substratos, sem perder suas caractersticas (ZARBIN, 2007)
As nanopartculas so estruturas nanomtricas que esto compreendidas na escala 1-100
nm (nanmetros). Elas podem se agregar e quando ultrapassam 100 nm, so consideradas
nanomateriais, que tambm possuem efeitos, porm no so consideradas nanopartculas, por
possurem uma dimenso maior que 100nm (SANTOS, 2009)

22
 A fsica e a qumica devem estar obrigatoriamente presentes nesta cincia, pois deve ser
caracterizado o grau de agregao, pureza, contaminao com outro material, provando a
confiabilidade do nanomaterial.
Segundo Arcuri, 2008, As nanopartculas mudam de comportamento no nvel nano
devido aos efeitos qunticos. uma constatao de que em escala nanomtrica as
propriedades dos materiais e elementos qumicos se alteram drasticamente. Apenas com a
reduo de tamanho e sem alterao de substncia, verificou-se que os materiais apresentam
novas propriedades e caractersticas como resistncia, maleabilidade, elasticidade,
condutividade e poder de combusto. Na medida em que a matria reduzida escala
nanomtrica as suas propriedades comeam a ser dominadas por efeitos qunticos. A
Mecnica Quntica a parte da fsica (mais particularmente, da fsica moderna) que estuda o
movimento das partculas muito pequenas. O conceito de partcula "muito pequena", mesmo
que de limites muito imprecisos, relaciona-se com as dimenses nas quais se comea a notar
efeitos como a impossibilidade de conhecer com infinita acuidade e ao mesmo tempo a
posio e a velocidade de uma partcula entre outras. Esses efeitos chamam-se efeitos
qunticos.
A figura 2 demonstra comparaes das grandezas macro, micro e nano sendo possvel
visualizar a pele ampliada em 1 centmetro at 1 nanmetro do tomo de DNA.

Figura 2: Seqncia de imagens demonstrando diferentes grandezas da pele da mo ao DNA.

Cada imagem 10 vezes menor que a imagem anterior.
23
Fonte: MORRISON, P.; OFFICE.C.; EAMES R., Powers of Ten, Scientific American
Press, 1982. Also Pyramid Films, Santa Monica, CA 1978.

A classificao das nanopartculas quanto natureza pode ocorrer de duas formas:

As nanopartculas engeinheiradas ou manofaturadas, elaboradas pela engenharia,
elaboradas pelo homem com um propsito; Representam a principal fonte de nanopartculas.
As incidentais ou antropognicas, de origem da atividade humana, antropognicas,
no intencional, so mais heterogneas, pois no foram feitas com finalidade especfica, ao
contrrio da classificao anterior. Exemplos: combusto de carvo, exausto de veculos, etc.
As naturais, so encontradas na natureza, provm de poeiras de minerais, rochas
vulcnicas, fumaa, etc.
As nanopartculas planejadas, que so elaboradas pela engenharia, so classificadas em
dois diferentes tipos, inorgnicas ou orgnicas. Na literatura encontra-se com mais facilidade,
trabalhos envolvendo nanopartculas inorgnicas, j as orgnicas so mais difceis.
As nanopartculas metlicas e xidos so os principais representantes do grupo das
nanoestruturas inorgnicas. Os exemplos mais comuns de nanopartculas orgnicas so os
componentes celulares e os vrus.
Na produo de produtos nanotecnlogicos, so usadas tcnicas para manipular a
matria, na escala de tomos e molculas. Existem dois mtodos de sntese e fabricao de
nanomateriais:
Top-down (Mtodos de cima para baixo): parte de uma estrutura grande para se fazer
uma estrutura pequena. (litografias pticas). As estruturas nanomtricas so produzidas
atravs da moagem de matrias macroscpicas.
Botton-up (Mtodos de baixo para cima): formao de nanoestruturas a partir de
tomos e molculas individuais, fazendo uma estrutura maior (auto- organizao). As
estruturas so formadas de tomos ou molculas capazes de se autorreajustar, sendo
disponvel somente com avano e aperfeioamentos tecnolgicos, pois exigem controle
rigoroso na produo dos materiais utilizados, onde deve ser bem fino. (MARCONI, 2009).

4.1.2. Utilizao de nanopartculas na farmacologia

A aplicao da nanotecnologia para o desenvolvimento de medicamentos mais seguros

e eficazes alterou o panorama das indstrias farmacuticas e de biotecnologia. Os sistemas de
entrega de frmacos, bem como o acelerado crescimento em inovao e sucessos emergentes

24
relacionados utilizao de nanopartculas, tm aumentado o interesse pela rea da
Nanomedicina. (KAMALY, 2012).
Na farmacologia, as nanopartculas possuem o objetivo de transportar substncias para o
organismo, tecidos e clulas, melhorando a eficcia teraputica e diminuindo o efeito txico
das substncias carreadas. Os sistemas de liberao nanoestruturados apresentam inmeras
vantagens para a administrao de frmacos, incluindo a capacidade de proteger as molculas
ativas contra degradao em meio fisiolgico, liberar controladamente a substncia ativa no
stio de ao, alm de permitir a administrao de frmacos hidrofbicos em sistemas
dispersos aquosos. As propriedades biofarmacuticas das substncias so significativamente
melhoradas com o uso de carreadores nanoestruturados, levando a importantes alteraes nos
processos farmacocinticos de absoro, distribuio, metabolismo e eliminao de frmacos,
permitindo ainda a reduo da dose e dos efeitos adversos dos mesmos (CARLUCCI &
BREGNI, 2009).
Diversos sistemas para liberao controlada de drogas tm sido engendrados e descritos,
com suas vantagens e desvantagens comparadas, podendo ser classificados em quatro grupos
principais: carregadores virais, compostos catinicos orgnicos, protenas recombinantes e
nanopartculas inorgnicas. (CORR, 2008; HILD 2008; CUNHA, 2010).
Os custos e o tempo para o desenvolvimento de um novo medicamento podem ser
significativamente reduzidos, visto que tal estratgia visa o aproveitamento teraputico de
molculas cuja estrutura, propriedades fsico-qumicas e/ou farmacolgicas foram
previamente estabelecidas. Alguns exemplos de sistemas de liberao a partir de
nanoestruturas so as: nanopartculas polimricas, nanopartculas slidas lipdicas,
lipossomas, nanoemulses, micelas e dendrmeros. (DEVALAPALLY, CHAKILAM, AMIJI,
2007). A figura 3 so exemplos de dendrmeros e lipossomas e nanoestruturadas. Sendo
possvel observar o carreamento de frmacos em estruturas que foram previamente planejadas
para atingir o local especfico e proteger o princpio ativo, evitando sua degradao e
assegurando a ao farmacolgica.

25
Figura 3: Exemplos de nanopartculas: Lipossoma (A) e dendrmero (B).
Fonte: SAHOO, S. K.; LABHASETWAR, V. Nanotech approaches to drug delivery and
imaging. Drug Discovery Today, v. 8 (24), p. 1112-1120, 2003.

As chamadas nanopartculas polimricas so sistemas carregadores de frmacos e

demais molculas que apresentam dimetro abaixo de 1 m (1.000 nm) que incluem as
nanocpsulas (NC) e nanoesferas (NE). Esses dois sistemas diferem entre si segundo a
composio, pela presena ou ausncia de leo em suas composies, e organizao estrutural
(MELO, 2010; OLIVEIRA, 2009; SANTOS, FIALHO, 2007; DURN ET AL., 2006;
SCHAFFAZICK ET AL., 2003).
As nanopartculas polimricas podem ser usadas em frmacos dissolvidos, recobertos,
dispersos ou encapsulados, sendo classificado em duas categorias: nanoesferas e
nanocpsulas. Elas so diferenciadas pela sua organizao estrutural e composio.
A nanoesfera formada por uma matriz polimrica, onde os frmacos se encontram
dispersos ou adsorvidos.
As nanocpsulas so estruturas responsveis pela veiculao de frmacos. Nelas a
localizao desses princpios ativos se encontra na parte interna da cavidade oleosa ou aquosa,
envolta por uma membrana polimrica, ou so adsorvidos nessa membrana. (SANTOS,
FIALHO, 2010).
A Figura 3 demonstra a nanopartcula polimrica e a diferena morfolgica entre a
nanoesfera (sistema matricial) e nanocpsula (sistema reservatrio). Os mtodos de obteno
para essas formas farmacuticas so semelhantes, com diferenas no processo de
polimerizao.

26
Figura 4: Diferentes formas farmacuticas com nanopartculas polimricas: (A) nanoesfera
(sistema matricial) e ao lado uma foto real com corte transversal demonstrando o ativo
distribudo uniformemente no interior e (B) cpsula (sistema reservatrio), foto demonstrando
o ativo concentrado no ncleo.
Fonte: LAMBERT, G. Oligonucleotide and Nanoparticles. Disponvel em
<http://perso.clubinternet.fr/ajetudes/nano/index. html> Acesso em dezembro de 2003.

Nanoemulses so sistemas heterogneos com a disperso de gotculas uniformemente,

contendo dois lquidos imiscveis dispersos um em outro na forma de glbulos de tamanho
reduzido comparados com as emulses, obtendo emulso (leo/gua-O/A ou gua/leo-A/O).
Os tipos de emulses so divididos pelo tamanho das partculas existentes. A
macroemulso, tem partculas do tamanho de 100 a 1m, a nanoemulso, que tem partculas
que variam de 100 a 200 nm, a microemulso, aonde suas partculas vo de 10 a 100 nm e a
soluo micelar, que tem partculas que variam de 1 a 10nm. (TATROS 2004; CAPEK,
2004).
A inovao da utilizao de nanopartculas auxilia no planejamento de frmacos. Os
exemplos citados de nanopartculas utilizadas representam o incio de uma fase crucial, onde
possvel obter sistemas de entrega de frmacos nunca vistos antes. Todavia, essa aplicao
deve caminhar acompanhada de estudos nanotoxicolgicos.

4.1.3. Toxicidade farmacolgica

Todas as substncias so venenos, no existe nenhuma que no seja. A dose correta

diferencia um remdio de um veneno. (Paracelso 1443-1541). A interao entre substncia e
organismo um ponto crucial para o planejamento dos frmacos, pois podem ser agentes
txicos, gerando respostas indesejadas, que altera ou destri funes vitais e levam morte.

27
 Os frmacos so prescritos com o intuito de prevenir ou tratar doenas. No entanto,
esses frmacos podem apresentar toxicidade para certos pacientes. As chances de um frmaco
causar mais prejuzo do que benefcios a um paciente dependem de diversos fatores, incluindo
idade, gravidez, predisposio gentica, ao no seletiva ou uso ou administrao
inapropriada do frmaco, dose do frmaco administrado ou outros frmacos utilizados pelo
paciente. (GOLAN, 2009).
A FDA (United States Food and Drug Administration) estabeleceu um sistema de
classificao dos frmacos baseado em dados obtidos em humanos e tambm em animais, que
engloba frmacos da classe A: seguros, at a classe X: de teratogenicidade comprovada.
(LEFEBRE, RUBIN, 2009).
No Brasil, a ANVISA (Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria), elaborou o Guia
para a conduo de estudos no clnicos de segurana necessrios ao desenvolvimento de
medicamentos em 2010. uma orientao para a conduo de estudos no clnicos de
segurana durante o desenvolvimento de medicamentos. No entanto, caso o
pesquisador/instituio consiga comprovar a segurana desses frmacos por outros estudos
cientfica e tecnicamente mais viveis, os dados apresentados podero ser avaliados pela
ANVISA.
A elaborao do guia foi baseada em documentos de agncias reconhecidas pela
vigilncia sanitria de medicamentos (FDA, EMEA), e de instituies de interesse na rea
(ICH, OECD, NCI, WHO), visando uma maior harmonizao com a regulamentao
internacional. Alm disso, o guia tambm tem a inteno de racionalizar estudos no clnicos,
evitando duplicidades e utilizao desnecessria de animais sem que isso possa comprometer
a obteno e a confiabilidade de informaes referentes segurana da droga a ser testada.
Os estudos no clnicos de segurana propostos nesse documento incluem: estudos de
toxicidade de dose nica (Aguda), toxicidade de doses repetidas, toxicidade reprodutiva,
genotoxicidade, tolerncia local e carcinogenicidade alm de estudos de interesse na avaliao
da segurana farmacolgica e toxicocintica (Administrao, Distribuio, Metabolismo e
Excreo ADME). (ANVISA, 2010).
Na figura 5 possvel visualizar os mecanismos de toxicidade dos frmacos ou seus
metablitos. Os frmacos podem ser destoxificados e excretados, mas tambm so capazes de
interagir com componentes do organismo e resultar em efeitos adversos leves ou graves,
podendo levar a morte.

28
 Os mecanismos de toxicidade so considerados para o planejamento de frmacos e
realizao de estudos toxicolgicos regulatrios de medicamentos, devido a essa capacidade
que os frmacos possuem de interferir nas atividades fisiolgicas atravs de ligaes ou
reaes que alteram o funcionamento do organismo e ocasionar efeitos txicos.

Figura 5: Mecanismos de toxicidade dos frmacos. Um frmaco ou seus metablitos ou

ambos interagem com receptores especficos, mediando efeitos adversos sobre o alvo ou no
relacionados ao alvo. Os metablitos podem ser destoxificados e excretados, ou podem reagir
com uma variedade de macromolculas, incluindo DNA, antioxidantes pequenos, como a
glutationa (GSH), ou protenas celulares ou plasmticas. A formao de complexos de DNA
sem reparo ou de reparo inadequado freqentemente mutagnica e pode levar ao cncer. O
comprometimento das defesas oxidativas pode resultar em inflamao e morte celular
(apoptose ou necrose). A formao de complexos frmaco-protena pode deflagrar respostas
imunes, que podem causar leso de clulas e tecidos. Independentemente do mecanismo de
leso, pode ocorrer uma graduao de respostas agudas, desde protetoras at a apoptose e
necrose. A inflamao crnica e o reparo tambm podem levar fibrose tecidual.
FONTE: GOLAN M.D., EHRIN, J. ARMSTRONG, M.D, ARMEN, H. TASHJIAN, DAVID,
E. Princpios de Farmacologia, Editora: GUANABARA KOOGAN, pg. 58-68, 2 Ed. 2009

29
4.2. REGULAO E NANOTOXICIDADE

Apesar das melhorias demonstradas pelos nanomateriais nos sistemas de entrega de

frmacos, existe uma grande preocupao quanto aos riscos de efeitos nocivos ao meio
ambiente e sade, em decorrncia da exposio aguda ou crnica dessas nanoestruturas
atravs de produtos cada vez mais presentes no mercado. Junto a essa nova realidade da
nanocincia, surge o campo da Nanotoxicologia (WHARHEIT, 2008), possibilitando a
realizao de estudos que avaliam os efeitos das nanopartculas em culturas de clulas (in
vitro) e em modelos animais (in vivo). Esses estudos nanotoxicolgicos so necessrios para
que se desenvolva uma regulao segura.
A metodologia desses testes baseia-se em expor nanopartculas nesses modelos e avaliar
parmetros para obter caractersticas de toxicidade. A partir desses estudos, possvel
caracterizar parmetros que iro compor a regulao. Atravs de estudos em organismos vivos
so analisadas diversas caractersticas sobre os efeitos malficos ainda desconhecidos.
essencial considerar essas caractersticas e registrar os dados obtidos nos estudos, tais como,
tamanho, constituintes, forma, ligantes de superfcie, rea de contato com o meio,
comportamento em soluo do meio de interesse, rota de exposio do organismo (inalao,
ingesto, pele, via intravenosa), entre outros. Uma classificao completa significa resultados
seguros e com ampla utilidade (BERT, 2013).
H tambm aspectos muito sutis nas propriedades de nanopartculas. Os efeitos
qunticos observados so responsveis por causar efeitos complexos, so potenciais respostas
no intencionadas, uma vez que a partcula nanomtrica apresenta alteraes quanto s
caractersticas fsicas e qumicas, tambm h alterao da resposta biolgica. Da a
importncia de inserir varias cincias, nesse caso, a fsica moderna onde se inserem estudos
de efeitos qunticos. Alm de respostas biolgicas no intencionadas, que so respostas
individuais, relacionadas a reaes pertinentes resposta gentica de cada organismo na
natureza.
Tais estudos nanotoxicolgicos, definem potenciais riscos quanto utilizao de
nanopartculas elaboradas, auxiliam na composio de aes preventivas proporcionando
segurana, limitando a indicao de uso, impedindo possveis riscos de interao com
organismos e indicando o seu destino aps manipulao ou descarte. Para isso, se faz
necessrio tomar medidas cautelosas de regulao desde ao planejamento at a indstria e
consumo.

30
 A nanotoxicologia na sociedade proporciona segurana para pesquisa e aplicao de
produtos para indstria, seleciona nanomateriais que aperfeioem produtos, que beneficie e
minimize os riscos, elabora requisies de dados e gera informaes para que o governo tome
decises aceitveis, disponibilizando essas informaes tambm para o pblico. A realizao
desses preceitos proporciona melhor aceitabilidade s nanotecnologias.
No entanto, os riscos aumentam na proporo que as tecnologias avanam. Observa-se o
no cumprimento do princpio da precauo, que adotado para as situaes de incerteza
cientfica, quando h riscos de uma atividade ou produto (BERGER FILHO, 2010). xidos
catalisadores, por exemplo, so utilizados sem controle adequado, e novos produtos no so
revisados em nenhum pas. necessrio que as idias de proteo a partir da nanotoxicologia
sejam desenvolvidas precavendo a sade de organismos e sistemas ecolgicos.

4.3. NANOTOXICIDADE BIOLGICA E SUA CORRELAO COM A

NANOFARMACOLOGIA

A nanotoxicologia uma ferramenta essencial que deve ser explorada conforme o

andamento de estudos e aplicaes inovadoras de partculas nanomtricas, proporcionando a
composio de medidas para a proteo biolgica a fim de impedir danos drsticos sade,
principalmente relacionados com a nanofarmacologia, evitando a toxicidade.
O planejamento de frmacos baseado nesses materiais deve ser minucioso, explorando
profundamente conhecimentos de diversas reas, tais como, biologia, fsica, qumica e
engenharia. A importncia da interdisciplinaridade se d devido ao tamanho nanomtrico
dessas partculas, pois h um aumento da interao superfcie/volume, o que aumenta a
superfcie de contato, aumentando a reatividade qumica na superfcie da nanopartcula
(ARCURI, 2008). Isso implica em cuidados desafiadores para a proteo biolgica atravs de
ferramentas fsico-qumicas, que est intimamente ligada s caractersticas da nanopartcula,
alm da necessidade de recorrer a outras cincias necessrias, principalmente s cincias
biolgicas, pela capacidade de exposio em sistemas ecolgicos, consequente interao com
organismos, podendo resultar em nanopartculas vencendo barreiras biolgicas causando
grande reatividade qumica em sua superfcie.
A aplicao em numerosos produtos, juntamente com o crescente aumento de
publicaes que expressam novas descobertas inovadoras na rea da nanotecnologia, desperta
a ateno para eventuais riscos e definio de uma poltica de regulao adequada, que

31
amenize danos decorrentes da utilizao dessas nanopartculas engenheiradas ou
manufaturadas. O grfico 1, expressa um levantamento de pesquisas no campo da
nanomedicina, obtido atravs da base de dados Web of Scienc, onde possvel observar um
aumento crescente de publicaes com a palavra Nanomedicine. Esses dados Reforam a
necessidade de desenvolvimento em pesquisas de toxicidade de nanopartculas, pelo fato de
que novas e numerosas descobertas geram incertezas quanto aos riscos de exposio.

Grfico 1: Publicaes com a palavra Nanomedicine de 2002-2012.

Fonte: BERT, R. Sntese e caracterizao de nanopartculas de prata conjugada com
pepitdeos antimicrobianos, dissertao de mestrado, So Carlos, 2013.

O sistema biolgico possui mecanismos qumicos de defesa e barreiras biolgicas

mecnicas responsveis pelo impedimento de corpos estranhos. As nanopartculas, devido ao
seu pequeno tamanho, so capazes de atravessar barreiras imunolgicas da pele, pulmes ou
trato gastrointestinal, podendo evoluir para problemas sistmicos decorrente da translocao
dessas partculas para a corrente sangunea e consequente presena em rgos, sistema
linftico, tecidos e clulas, dependendo de seu tamanho. Frente a essa problemtica, presume-
se que o uso inadequado das nanopartculas pode levar ao desenvolvimento de diversas
patologias como inflamaes, estresse oxidativo ou at levar ao cncer.
A figura 6 demonstra um resumo dos possveis efeitos adversos sade, demonstrando
as rotas das nanopartculas no organismo humano, seus rgos afetados e as doenas
associadas, sendo importante ressaltar que nem todas as nanopartculas produzem esses
efeitos, pois a toxicidade depende de diversos fatores como, tamanho, composio e outras

32
caractersticas qumicas ou fsicas que possuem potencial para respostas danosas que podem
variar de acordo com cada tipo de organismo. Essa figura foi construda a partir de dados in
vivo e in vitro por ingesto e contato.

Figura 6: Corpo humano e as vias de exposio nanopartculas, rgos afetados, e doenas

associadas a partir de estudos in vivo e in vitro.
Fonte: BUZEA, C., BLANDINO, I. I. P., ROBBIE. K., Nanomaterials and nanoparticles:
Sources and toxicity. Biointerphases, vol. 2, 4, 2007.

Ainda que no desenvolvimento de pesquisas sejam adotados parmetros seguros nos

testes de nanotoxicidade, que expressem resultados confiveis e com ampla utilidade, no
possvel prever eventuais efeitos biolgicos em uma dada aplicao de nanoestrutura, pois de
acordo com conceitos bsicos de toxicidade, cada organismo reage de maneira diferente. Essa
reao na maioria das vezes depende do componente gentico do indivduo. A observao da

33
resposta biolgica a nanopartculas fornece ferramentas bioqumicas necessrias para
conhecer e evitar exposio a substncias txicas.
Tambm difcil predizer a biodistribuio desses materiais, visto que so testados em
cultura de clulas, no sendo possvel observar efeitos sistmicos biolgicos, ou so
realizados testes em organismos vivos similares ao organismo humano e no no prprio
organismo humano.

4.3.1. Toxicidade pulmonar aps inalao

A preocupao em torno da inalao de nanopartculas se d principalmente ao fato de

que quanto menor a partcula, com mais facilidade ela vencer barreiras naturais do aparelho
respiratrio, se depositando e acumulando nos alvolos, prejudicando a capacidade
respiratria, pois os alvolos so responsveis pela troca gasosa de O2 do ar e CO2
proveniente da corrente sangunea corrente sangunea.
Uma vez depositadas no epitlio pulmonar, ao contrrio das partculas de tamanho
maior, as nanopartculas podem se translocar para locais extrapulmonares atingindo outros
rgos por diferentes rotas e mecanismos. Um possvel mecanismo seria a transcitose atravs
do epitlio do trato respiratrio acessando a corrente sangunea diretamente ou transportada
por linfcitos, resultando na distribuio das nanopartculas por todo o corpo.
(OBERDRSTER, 2005; CHEN, 2005).
As doenas que tm sido associadas com as nanopartculas inaladas so asma,
bronquite, enfisema, cncer de pulmo e outras doenas neurodegenerativas, como Parkinson
e Doenas de Alzheimer. Alguns estudos mostram que a inalao de partculas de TiO2 na
ordem de 20 nm podem causar uma grave inflamao pulmonar (SUZUKI, 2007).
Alm da passagem pela via respiratria, via mais evidente, estudos confirmam a
absoro de nanopartculas inaladas da mucosa olfativa pelos nervos olfativos no bulbo
olfativo (BUZEA, 2007). O que se pode concluir uma resposta de defesa por inalao de
nanopartculas, pelo fato de serem altamente penetrveis. Entretanto efeitos txicos no
intencionais ainda so difceis de serem obtidos, pois o sistema fisiolgico complexo para se
definir a farmacocintica ou aspectos farmacodinmicos txicos.
Cada vez mais as nanopartculas de xidos metlicos so aplicadas em diversos
produtos, demonstrando vantagens e efeitos interessantes na utilizao, a exemplo de
pesquisas com nanopartculas de xido de crio (CNPS), com propriedades regenerativas

34
nicas devido ao seu baixo potencial de reduo e a existncia de Ce (3+) / Ce (4 +) em suas
superfcies. Ce (3+) desempenha atividade redox nas CNPs. Esse estado de valncia mista
elimina espcies reativas de oxignio e nitrognio, auxiliando contra patologias associadas ao
estresse oxidativo e inflamao crnica. So bem tolerados em estudos in vitro e in vivo de
modelos biolgicos, o que torna CNPs bem adequado para aplicaes em nanobiologia e
medicina regenerativa (DAS, 2013). Esses resultados benficos so relevantes, pois podem
ser uma sada para reverter efeitos de estresse oxidativo ou inflamaes causadas pela
toxicidade, pelo uso inadequado de nanopartculas. As aplicaes de NPs devem respeitar
limites txicos preestabelecidos, gerados em pesquisas que demonstram efeitos malficos em
determinadas concentraes ou tamanhos, apresentados por nanopartculas de xidos
metlicos.
Resultados nanotoxicolgicos realizados com a NPs de xido metlico alertam quanto
exposio delas ao ambiente. Uma exposio aguda de NPs de xido de crio (NP CeO2) na
cabea e nariz de ratos demonstraram uma diminuio significativa na viabilidade celular,
aumento dos nveis de lactato desidrogenase, protena total e fosfatase alcalina no fluido de
lavagem broncoalveolar (LBA), leuccitos e neutrfilos elevados em 24 h de exposio,
concentraes de citocinas pr-inflamatrias (IL-1 , TNF e IL-6) significativamente
maiores no LBA e no sangue em todo o perodo. Macrfagos alveolares e neutrfilos
sobrecarregados com nanopartculas de CeO2 fagocitadas juntamente com nanopartculas de
CeO2 livres no fagocitadas, que foram depositados sobre as superfcies epiteliais dos
brnquios, bronquolos e regio alveolar do pulmo em 24 h de ps exposio. A exposio
de 14 dias demonstrou, por um longo perodo de tempo microgranulomas pulmonares
multifocais e biopersistncia de NP CeO2, sugerindo que a exposio aguda de nanopartculas
de CeO2 pela via respitarria, inalao, pode induzir citotoxicidade via estresse oxidativo e
pode levar a uma resposta inflamatria crnica (SIRINIVAS, 2011).
Esses resultados contribuem para adoo de medidas que evitem grandes exposies de
NPs no meio ambiente, ou cuidados quanto manipulao. O achado de neutrfilos e
macrfagos alveolares sobrecarregados de nanopartculas significa potencial risco de
distribuio sistmica desses materiais, alm da reduo da capacidade pulmonar.
Outro estudo com nanopartculas de xidos de crio, a partir de combustvel diesel
advindos do escape com catalisador, confirma a toxicidade pulmonar em ratos Sprague
Dawley por uma nica instilao intratraqueal, com doses de 0,15, 0,5, 1, 3,5 ou 7 mg / kg de
peso corporal, que reduziu significativamente a produo de xido ntrico (NO) aps um dia

35
de exposio, aumentando a produo de IL-12, e apoptose, atravs da ativao de caspases 9
e 3, (MA, 2011).
Apesar de achados que evidenciem utilizaes inovadoras em diversos produtos com as
nanopartculas de CeO2, a nanotoxicicologia norteia e define a melhor aplicao, desse
produto, uma vez que os xidos de crio, so cada vez mais utilizados em revestimentos para
filtros infravermelho, catalisadores, corantes para plsticos e outras aplicaes. No entanto
suas propriedades catalticas aplicadas em revestimento devem ser diminudas pela sua
capacidade de toxicidade.
Para avaliar a exposio por inalao de nanopartculas de xido de zinco (ZnO NP),
ratos (C57BL / 6) foram expostos a doses de 3,5 mg/m e 3, 4 h/dia, (sub-aguda); 13 semanas
(sub-crnicos) e necropsiados imediatamente (0 semanas) ou trs semanas (3 semanas). Aps
a exposio, observou-se inflamao pulmonar mnima, citotoxicidade ou alteraes
histopatolgicas no pulmo. Uma elevada concentrao de Zn no pulmo e LBA indica
dissoluo de ZnO NPs no sistema respiratrio aps inalao. A exposio durante 13
semanas com uma dose cumulativa de 10,9 mg/kg produziu um aumento da celularidade do
pulmo, mas outros marcadores de toxicidade no diferiram dos animais expostos de forma
simulada, levando concluso de que ZnO PN tem baixa toxicidade sub-crnica por inalao
(ADAMCAKOVA-DODD, 2014). Apesar de nanopartculas de ZnO serem utilizadas em
muitos produtos comerciais e o potencial para exposio humana est aumentando, alguns
estudos in vivo tm abordado os possveis efeitos txicos aps a inalao.
Um estudo de inalao, realizado por Morimoto, et al, 2011, utilizando uma alta
concentrao de nanotubos de carbono com mltiplas paredes e nanotubos de carbono de
parede simples, induziram inflamao ou formao granulomatosa no pulmo, e a instilao
intratraqueal induziu inflamao persistente no pulmo.
Entre as propriedades fsico-qumicas dos nanotubos de carbono, o aumento da rea de
superfcie de contato est associado com a atividade inflamatria, devido ao aumento na taxa
de neutrfilos medidos no fluido de lavagem broncoalveolar. Impurezas de metais tais como o
ferro e nquel aumentaram a toxicidade pulmonar de nanotubos de carbono. Os nanotubos de
carbono com mltiplas paredes, amorfos, induziram granulomas multifocais no pulmo
enquanto que os mais puros no. O estado de agregao tambm afeta resposta pulmonar, a
exposio de nanotubos de carbono bem dispersas conduziu ao espessamento da parede
alveolar e poucas leses granulomatosas no pulmo, enquanto nanotubos de carbono
aglomerados produzidos inflamao granulomatosa.

36
 Os valores da concentrao de exposio aceitvel em alguns pases foram baseados em
dados de inalao subaguda e subcrnica de estudos de instilao endotraqueal de fulereno e
nanotubos de carbono que so bem caracterizados. No Japo, a concentrao aceitvel de
exposio ao fulereno de 0,39 mg/m3. Na Europa, a concentrao proposta 44.4g/m3 para
a toxicidade aguda e 0.27g/m3 para a toxicidade crnica. As concentraes proposta de
exposio aceitveis de nanotubos de carbono so 0,03, 0,05, e 0.007mg/m3 no Japo, Europa
e Estados Unidos, respectivamente (MORIMOTO, 2011).
As nanopartculas tm a capacidade de ultrapassar barreiras biolgicas devido ao seu
tamanho nanomtrico. Os estudos existentes na literatura demonstram resultados semelhantes
que NPs de xidos metlicos possuem de se depositarem ou transpor barreiras alveolares, e
causar grande ativao do sistema imunolgico, fibroses, ou outras respostas sistmicas ainda
desconhecidas, a partir de exposies agudas a essas nanopartculas sendo possvel observar
efeitos crnicos, que preocupa quanto a exposies agudas ou crnicas. Os resultados desses e
outros estudos biolgicos geram dados com achados bioqumicos servindo como ferramenta
de avaliao e diagnstico frente a uma exposio aguda.
Os estudos de nanotoxicidade relacionados com a inalao apontam para adoo de
fatores limitantes na elaborao, produo e at o descarte correto de nanopartculas, evitando
principalmente, a emisso desse tipo de material na atmosfera. No entanto, sempre h desafios
e dificuldades quanto execuo de parmetros, ainda mais quando se trata de partculas
difceis de avaliar e quantificar quando expostas ao ar.

4.3.2. Toxicidade digestiva aps ingesto

A ingesto involuntria de nanopartculas pode ocorrer principalmente pelo consumo

de gua proveniente de aparelhos para purificao de gua que usam nanomateriais filtrantes
ou desinfetantes, de pesticidas com NPs, alm de outros exemplos como a ingesto de
alimentos que tiveram contato prolongado com utenslios que contenham prata. Apesar desta
possibilidade, estudos consideram que a ingesto deve ser pequena em termos de massa (EPA,
2008)
A ingesto prolongada de nanoprata foi comprovadamente relacionada com a
manifestao de argria, que uma rara doena diagnosticada em casos de abuso de ingesto
de sais de prata, causando o escurecimento irreversvel da pele (CHEN, 2008)
37
 Um Teste de Toxicidade Oral Aguda avaliou toxicidade de nanopartculas de prata
incorporadas em matriz polimrica (carboximetilcelulose) na utilizao em embalagens
alimentcias. Na concentrao e tamanho estudados, demonstrou degenerao celular no
fgado de ratos machos, na menor concentrao estudada (1g/mL), sugerindo o uso dessas
nanopartculas somente na funo de embalagem, sem ingesto como embalagem comestvel
(SIQUEIRA,2013).
Maciel et al, 2010, investigou a ao de nano (NP)- 66nm e micropartculas (MP)-
260nm de TiO2 sobre a resposta inflamatria no intestino delgado de camundongos. Houve
uma resposta pr-inflamatria, predominantemente do tipo Th1, no intestino delgado dos
camundongos, especialmente no leo. Esses dados representam uma evidncia in vivo do
potencial inflamatrio de partculas de TiO2 sobre o trato gastrointestinal. O dixido de titnio
(TiO2) um corante encontrado na forma de partculas em diversos produtos industrializados,
ainda existem poucos estudos investigando seus efeitos sobre o trato gastrointestinal.

4.3.3. Toxicidade drmica por nanocosmticos

O nmero de publicaes cientficas e patentes na rea de nanocosmtica vem

aumentando significativamente nesses ltimos anos, junto com a introduo no mercado
farmacutico e cosmtico de produtos nanotecnolgicos. (MARTINELLO, AZEVEDO,
2009). Cuidados com nanocosmticos merecem ateno devido presena crescente desses
produtos no mercado e um maior contato com o sistema biolgico. Ainda so desconhecidos
possveis efeitos txicos, alm de danos que so passveis de ocorrer decorrente da
possibilidade de mau uso, capacidade de cruzar membranas da pele e causar danos, alm da
produo do lixo com nanocosmticos. Um descarte inadequado outro fator potencial que
pode afetar os sistemas ecolgicos.
A absoro da nanopartculas pode penetrar no pulmo causando infeco. Podem trazer
riscos sade, por estarem disseminadas no solo, na gua e na atmosfera (MASSADA, 2009).
Os nanocosmticos vm se inserindo no mercado de diversas formas, entre elas,
fotoprotetores, maquiagem, creme antienvelhecimento e hidratante. O manuseio desses
produtos tambm oferece riscos.
Os possveis riscos esto na ingesto de partculas. Quando menores que 300 nm
podem atingir o sistema linftico e entrar na corrente sangunea. Na aplicao drmica,

38
partculas podem permear a pele e atingir a corrente sangunea se espalhando pelo corpo e
podendo atingir at o crebro (SANTOS, 2009).
As nanopartculas so aplicadas em protetores solares que refletem e dispersam radiao
ultravioleta de forma mais eficiente. Estudo com nanopartculas de TiO2 e ZnO por exemplo,
so usadas atualmente para proteo contra a exposio aos raios UV. Essa aplicao requer
cuidados quanto aos efeitos txicos na utilizao desses tipos de nanopartculas, uma vez que
em um estudo desenvolvido Zhang e colaboradores em 2011, essas nanopartculas
apresentaram efeitos txicos como, disfuno mitocondrial celular, alteraes morfolgicas e
apoptose, no intervalo de concentrao entre 0,25-1,50 mg/mL com nanopartculas de 20nm,
em clulas pulmonares fetais humanas.
Outra aplicao em nanoprodutos so os metais, na nanomedicina e em produtos de
consumo dirio como roupas, alimentos, produtos de limpeza e em cosmticos. Os estudos de
toxicidade para a nanopartcula nquel (Ni NP) demonstram o efeito de Ni PN no sistema
pulmonar, embora permaneam escassos. O estudo avaliou o efeito txico em clulas
epiteliais A549 de pulmo humano, tratados com NPs Ni nas concentraes de 0,1, 2, 5, 10 e
25 g/ml para 24 e 48 h. Resultados mostraram reduo da funo mitocondrial e tambm
induziu o estresse oxidativo, na dose e tempo-dependente. Alm disso, a atividade da enzima
caspase-3, marcador de apoptose era significativamente mais elevada em clulas tratadas com
o tempo e Ni NPs dosagem. Os resultados apresentaram uma toxicidade significativa de Ni
PN em clulas epiteliais A549 de pulmo humano, que susceptvel de ser mediada por
estresse oxidativo. Este estudo justifica avaliao mais cuidadosa de Ni PN antes de suas
aplicaes industriais (AHAMEDY, 2011). Essa nanopartcula cada vez mais utilizada em
indstrias modernas, tais como catalisadores, sensores e aplicaes eletrnicas como
refrigeradores. Devido a essas aplicaes industriais a emisso dessas NPs no ambiente
passvel de ocorrer, tornando a inalao principal fonte de exposio s Ni NPS. Quanto
aplicao em cosmticos, o risco principal ocorre pelo contato com vias drmicas. Um
levantamento de biomarcadores importante para medidas de preveno sade.

4.3.4. Possveis efeitos txicos nos sistema sanguneo.

As nanopartculas que entram no sistema circulatrio esto relacionadas ocorrncia

da arteriosclerose, e cogulos sanguneos, arritmia, doenas cardacas e morte, em ltima
anlise cardaca. Translocao para outros rgos tais como o fgado, bao, e at deposio no
39
sistema nervoso, o que pode resultar em doenas relacionadas a esses rgos. A exposio a
algumas nanopartculas est associada ocorrncia de doenas auto-imunes, tais como: o
lpus eritematoso sistmico, escleroderma, e artrite reumatide (BUZEA, 2007).
Para simular o acesso de nanopartculas respirveis corrente sangunea, partculas
provenientes da queima de diesel foram administradas por via intravenosa em ratos por
Nemmar e colaboradores em 2008. Os pesquisadores observaram uma reao inflamatria
sistmica caracterizada pelo aumento de moncitos e granulcitos e o decrscimo de glbulos
vermelhos e da concentrao de hemoglobina.

4.3.5. Genotoxicidade e citotoxicidade de nanopartculas

Quando as nanopartculas alcanam as clulas, podem ultrapassar a membrana celular

por diversos processos, como a endocitose, que consiste na invaginao da parede celular
sobre a partcula at englob-la totalmente (AUFFAN, 2006; YEHIA, 2007), ou por outro
processo proposto mais recentemente, que consiste na entrada destas partculas atravs de
organelas denominadas de caveolas, as quais so uma srie de lipdeos especializados na
funo de transportar partculas, sendo um dos mecanismos utilizados por vrus, de dimenses
nanomtricas, para adentrarem nas clulas.
A forma e tamanho manomtrico de uma nanopartcula permitem a sua entrada em
estruturas celulares. Tamanhos de 1 mcron at 100 nm esto dispostas na figura abaixo.
Contrastando com um macrfago de rato possvel perceber a facilidade que uma
nanopartcula possui em transitar essas estruturas. Em macrfagos humanos essa comparao
ainda mais preocupante, pois so maiores que macrfagos de ratos duas vezes mais.

Figura 7: Comparao de tamanho de macrfago de rato para tamanho nanopartculas (em

escala). Macrfagos humanos so at duas vezes maiores do que os macrfagos de ratos.
Imagem TEM reproduzida com a permisso da Environmental Health Perspectives (LI, 2003).
Fonte: BUZEA, C., Blandino, I. I. P., Robbie. K., Nanomaterials and nanoparticles:
Sources and toxicity. Biointerphases vol. 2, 2007.
40
 Um estudo recente, realizado por Zhang e colaboradores em 2011, investigou e
comparou os efeitos txicos in vitro de quatro tipos de nanopartculas de xido metlico
(ZnO, TiO2, SiO2 e Al2O3), em fibroblastos pulmonares fetais humanos (HFL1), expondo
nanopartculas de tamanhos similares de aproximadamente 20 nm. Os efeitos txicos das
clulas de HFL1 demonstram que os quatro tipos de nanopartculas de xido de metal
conduzem disfuno mitocondrial celular, alteraes morfolgicas e apoptose, no intervalo
de concentrao entre 0,25-1,50 mg / mL e os efeitos txicos so, significativamente, exibidos
com ZnO dependente da dose. o nanomaterial mais txico seguido por nanopartculas de
TiO2, SiO2, Al2O3. De acordo com os resultados, foi demonstrada uma o citotoxicidade
diferencial associada exposio aos xidos, ZnO, TiO2, SiO2, e nanopartculas de Al2O3, e
isto sugere uma ateno extrema na utilizao segurana desses nanomateriais.
Nanopartculas de CeO2 tambm induziram inflamao e citotoxicidade atravs de
instilao intratraqueal, sendo capazes de se deslocarem para o sangue e chegar s clulas
(MA, 2011). Esse estudo demonstra que NPs de CeO2 induzem inflamao pulmonar e leso
nos pulmes que pode conduzir a fibrose.
Caractersticas de nanopartculas de prata, tais como forma e tamanho so importantes,
no s por aumentar a atividade antimicrobiana, mas tambm por reduzir o tecido e as
toxicidades de clulas eucariticas. Os possveis riscos para a sade humana representados
pelas nanopartculas de prata o aumento da penetrao no ambiente, com posterior
disseminao da resistncia microbiana, so cada vez mais preocupantes, dado o aumento de
produtos contendo prata no mercado. Portanto, mais estudos so necessrios para caracterizar
plenamente a toxicidade e os mecanismos envolvidos com a atividade antimicrobiana dessas
partculas. Finalmente, esta uma importante rea de pesquisa que merece toda a nossa
ateno devido ao seu potencial de aplicao na luta contra microorganismos resistentes a
mltiplas drogas (BERT, 2013)
Em estudos realizados com clulas, expondo nanopartculas de prata em macrfagos,
em trs concentraes (30, 300 e 3000 ng.ml-1), duas concentraes de pesticidas
organoclorados (30 e 300 ng.ml-1) e a associao destes dois poluentes nas seis combinaes
possveis por 24 h, demonstrou que a maior concentrao de nanopartculas de prata foi
altamente citotxica e resultou em alteraes morfolgicas, aumento dos nveis de xido
ntrico (NO), e reduo das espcies reativas oxignio e do ndice fagoctico. No entanto, a
associao de maiores concentraes de nanopartculas com os pesticidas apresentou efeitos

41
mais pronunciados ou diferentes dos observados aps exposio s nanopartculas isoladas.
Esses efeitos da associao ficaram claros para os nveis de xido ntrico e atividade
fagoctica (maiores na associao), bem como espcies reativas de oxignio (menor na
associao). Assim, este trabalho demonstra que a associao dos dois xenobiticos conduz a
efeitos que no so observados ou previsveis pela exposio isolada (PESSOTTO, 2013).
A figura 8 demonstra a deposio de nanotubos de carbono de adenocarcinoma humano
(A549). Os nanotubos de carbono esto sendo largamente aplicados nas mais diversas reas.

Figura 8: Microfotografia de clulas de adenocarcinoma humano (A549) expostas a um

nanotubo de carbono de parede mltipla, onde so visveis duas clulas binucleadas (devido
inibio da citocinese induzida experimentalmente) exibindo um microncleo e alguns
aglomerados de NMs. O microncleo contm fragmentos de cromossomas ou mesmo
cromossomas inteiros e refletem a ao nociva do agente em estudo sobre os cromossomas.
Fonte: LOURO, E., TAVARES, A.,LEITE E., SILVA, M.J., Nanotecnologias e sade
pblica. tecno hospital, Dossi, 2013.

Em um estudo realizado para investigar a citotoxicidade e genotoxicidade de

nanopartculas revestidas com ons prata (Ag+) em linhagem de clulas alveolares humana,
A549. Foi detectados danos no DNA induzidos por ROS e um aumento de adutos de DNA
volumosos aps a exposio Ag NP. O nvel de adutos de DNA volumosos foi fortemente
correlacionado com os nveis de ROS e pode ser inibida por antioxidantes, sugerindo Ag NPS
como um mediador de Genotoxicidade induzida por ROS (FOLDBJERG, 2010).
Nanopartculas superparamagnticas de xido de ferro (SPIONs) so de grande
interesse na nanomedicina, devido sua capacidade para agir, simultaneamente, como um
agente de contraste em imagem por ressonncia magntica e como um sistema de entrega de
frmacos especficos, possuindo boa biocompatibilidade (OLIVEIRA, 2013). Resultados
realizados em estudos no ano de 2013 por Oliveira et al, fornecem evidncias de que doses

42
elevadas de nanopartculas de xido de ferro, revestidas com dextran-aminado, podem
produzir neurotoxicidade transitria, coincidente com nveis cerebrais elevados de ferro, bem
como alteraes comportamentais.

4.4. RISCOS NANOTECNOLGICOS

H uma classificao baseada em parmetros de testes toxicolgicos, a toxicidade das

nanopartculas depende de vrios fatores, como: tamanho, agregao, a composio, a
cristalinidade, a funcionalizao da superfcie, etc. (BUZEA, 2007). Esses parmetros foram
adotados para compor documentos de regulao, elaborados por rgos de defesa da sade.
Estima-se que at 2015 sero movimentados mundialmente cerca de US$ 1 trilho, e
que todo o setor de semicondutores e metade do setor farmacutico estar dependente destes
novos materiais. Desta forma, torna-se importante a obteno do mximo de dados com
caractersticas de estabilidade, antes de se aplicar nos produtos, alm de se descobrir
informaes de toxicocintica que ainda so pouco elucidadas e de toxicodinmica para se
conhecer os efeitos.
Segundo Meireles da ANVISA, a meta tentar fazer regulao com o que existe, pois
no h lei tramitada em congresso nacional que permita a consolidao de medidas
regulatrias.
Mtodos de caracterizao dos pesticidas so realizados nos EUA, antes de entrar no
mercado. A abordagem europia exige que a indstria prepare avaliaes de riscos e de
regulamentos para obter mais dados bsicos para substncias qumicas, sendo uma abordagem
a ser considerada agora. A maior parte dos nanomateriais no produzida em grandes
toneladas, sendo necessrio aprender a lidar com a produo dessas nanopartculas.
necessria abordagem integrada, processo regulatrio formal do governo para gerar mais
informaes (WHITE, 2010). J esto ocorrendo mudanas socioambientais com impactos,
portanto deve haver investimento em nanotoxicologia. Providenciar biomarcadores (humanos
e do meio ambiente) que no est em paralelo com o desenvolvimento de produtos que at j
esto no mercado (SILBERGED, 2010). A falta de investimento em nanotoxicologia pode
repercutir negativamente futuramente. A falta de legislao tambm caminha lentamente. H
evidncias de que lavar tecidos com nanoprata libera prata na gua e contamina o meio
ambiente, o que sugere a necessidade de legislar. Outra questo uma deficincia na
capacidade analtica, falta de estudos de simulao, alm de que as NPs so difceis de

43
detectar no ambiente (MONSERRAT, 2010). No se pode controlar e avaliar sobre a
exposio de nanomateriais, no havendo informao de onde h exposio mais alta em
certos tipos populao a nanomateriais. Um foco provvel de avaliao a populao mais
rica, que utiliza com mais freqncia produtos com esses materiais, isso pode ser uma fonte
de especulao (WHITE, 2010).
H urgncia em gerar mais informaes toxicolgicas de qualidade e com rapidez, pois
a aplicao desenfreada e sem muitas medidas regulatrias preocupante. H marco
regulatrio nos pases, mas a construo inadequada faz com que no se alcance a aplicao,
como muitas leis existentes que existem no papel e no so aplicadas (SILBERGED, 2010).
Segundo a USEPA (U.S. Environmental Protection Agency), mais de 60.000 mortes por
ano so atribudas inalao de nanopartculas atmosfricas, sendo reportado que a
contaminao atravs da respirao pode atingir outros rgos como corao e crebro.

44
Concluso
45
5. CONCLUSO

Os estudos nanotoxicolgicos ainda no so suficientes para dar suporte ao

crescimento em pesquisas inovadoras e crescente aplicao no campo da nanotecnologia. O
desenvolvimento de pesquisas fornece dados in vivo e in vitro, no entanto respostas sistmicas
em organismos humanos so difceis de serem obtidas.
No h quantidades considerveis de dados de biomarcadores humanos, alm da
dificuldade de quantificar essas partculas na natureza. Os resultados existentes demonstram
respostas sistmicas por contato, utilizando animais, ou em cultura de clulas, sendo possvel
observar respostas gerais, envolvendo todos os sistemas biolgicos, desde toxicidade na pele
at citotoxicidade ou genotoxicidade. O que mais preocupante a dificuldade de compor
leis a partir de dados j existentes.
possvel prever impactos biolgicos negativos futuramente, visto que notria a
aplicao desenfreada de nanotecnologia gerando lucros para a indstria pela boa aceitao e
vantagens desses produtos, em contrapartida, nota-se um desinteresse governamental pela
rea de pesquisas nanotoxicolgicas, que no gera lucros.

46
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