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CDIGO 1130599796
FACULTAD DE TECNOLOGA
QUMICA INDUSTRIAL
PEREIRA
2014
VALIDACIN Y CLCULO DE INCERTIDUMBRE PARA EL ENSAYO DE
NITRITOS Y NITRATOS EN EL LABORATORIO DE QUMICA AMBIENTAL DE
LA UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PEREIRA
FACULTAD DE TECNOLOGA
QUMICA INDUSTRIAL
PEREIRA,
2014
2
Nota de aceptacin:
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________
________________________________
Firma del presidente del jurado
_________________________________
Firma del jurado
_________________________________
Firma del jurado
3
DEDICATORIA
4
Agradecimientos
A todas aquellas personas que de uno u otro motivo han contribuido para
sacar esta enorme empresa adelante, como lo es poder llegar a la cima de esta
larga carrera con obstculos que es la educacin.
5
Llegar una poca en la que una investigacin diligente
y prolongada sacar a la luz cosas que hoy estn
ocultas. La vida de una sola persona, aunque estuviera
toda ella dedicada al cielo, sera insuficiente para
investigar una materia tan vasta... Por lo tanto este
conocimiento slo se podr desarrollar a lo largo de
sucesivas edades. Llegar una poca en la que
nuestros descendientes se asombrarn de que
ignorramos cosas que para ellos son tan claras...
Muchos son los descubrimientos reservados para las
pocas futuras, cuando se haya borrado el recuerdo de
nosotros. Nuestro universo sera una cosa muy limitada
si no ofreciera a cada poca algo que investigar... La
naturaleza no revela sus misterios de una vez para
siempre.
6
TABLA DE CONTENIDO
7
5.11. REALIZACION DE LA VALIDACION Y EVALUACION DE LOS
RESULTADOS ................................................................................................... 37
5.12. CERTIFICADO DE VALIDACIN ............................................................. 38
5.13. ARCHIVO .................................................................................................. 38
5.14. INCERTIDUMBRE .................................................................................... 38
6. METODOLOGIA .............................................................................................. 400
6.1 Revisin de metodologas analticas .......................................................... 400
6.1.1 Documentacin del ensayo de Nitrito .................................................. 400
6.1.2 Procedimiento Estndar de Operacin SOP. ....................................... 400
6.2 Elaboracin de matriz AMEF ...................................................................... 400
6.3 Definicin de los parmetros ...................................................................... 400
6.4 Ejecucin de actividades analticas: ........................................................... 400
6.4.1 Induccin a la actividad analtica, ........................................................ 400
6.4.2 Recoleccin, preparacin de muestras ................................................ 400
6.5 Procesamiento de datos: ............................................................................ 400
6.6 Anlisis de los resultados: .......................................................................... 411
7. RESULTADOS................................................................................................... 42
8. CONCLUSIONES .............................................................................................. 43
9. RECOMENDACIONES ...................................................................................... 44
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................. 45
8
LISTA DE ANEXOS
9
LISTA DE ILUSTRACIONES
Ilustracin 1 Ciclo del Nitrgeno. Tomado de (Romero) ........................................ 15
Ilustracin 2 Diagrama de Flujo de Validacion ....................................................... 36
Ilustracin 3 Diagrama Estimacion de la Incertidumbre ......................................... 39
Ilustracin 4 Diagrama de puntos criticos del ensayo de Nitritos ........................... 46
Ilustracin 5.Reaccion de la determinacion de Nitritos .......................................... 53
Ilustracin 6. Fuentes que aportan incertidumbre para el metodo de Nitritos ........ 72
Ilustracin 7 Contribuciones a la incertidumbre del analisis de Nitritos .................. 85
Ilustracin 8. Etapas del ensayo de Nitritos ........................................................... 85
Ilustracin 9 Diagrama de puntos criticos del ensayo de Nitratos ......................... 87
Ilustracin 10 Curva de Calibracin para determinar el rango Lineal de Nitratos.853
Ilustracin 11 Curva de Calibracin Final de Nitratos. ........................................ 904
Ilustracin 12 Fuentes que aportan incertidumbre para el metodo de Nitratos. ... 108
Ilustracin 13 Contribuciones a la incertidumbre del analisis de Nitratos ............ 111
Ilustracin 14. Etapas del ensayo de Nitratos ...................................................... 113
10
LISTA DE TABLAS
11
RESUMEN
Para evaluar la calidad del agua, los nitratos y nitritos presentes en ella, indican el
grado de afectacin del lquido, con su presencia se modifican los procesos
qumicos y biolgicos que normalmente ocurren en las aguas naturales, lo que
trae consigo algunos efectos perjudiciales para los seres humanos tanto como
para otras especies.
El presente trabajo tiene como propsito realizar una revisin del protocolo
utilizado para la validacin de los mtodos analticos para la determinacin de
nitratos y nitritos en aguas naturales, mediante espectrometra ultravioleta-visible
(UV/VIS). Para validar estas tcnicas fue necesario establecer una evidencia
documental para el Laboratorio de Qumica Ambiental de la Universidad
Tecnolgica de Pereira.
Los criterios utilizados que permiten obtener un alto grado de confiabilidad de los
datos generados, fueron uniformes y consistentes.
12
ABSTRAC
To assess water quality , nitrates and nitrites present in it , indicate the degree of
involvement of the liquid, with its presence of chemical and biological processes
that normally occur in natural waters are changed, which brings some detrimental
effects human beings as well as for other species.
This paper aims to conduct a review of the protocol used for the validation of
analytical methods for the determination of nitrate and nitrite in natural water by
ultraviolet - visible spectroscopy (UV / VIS ) . To validate these techniques was
necessary to provide documentary evidence to the Environmental Chemistry
Laboratory of the Technological University of Pereira.
This work has as main objective the Validate uncertainty calculation , the
traceability tests for nitrites and nitrates in the Environmental Chemistry Laboratory
of the Technological University of Pereira. In Specific: Validate assays nitrites and
nitrates through the estimation of the characteristic parameters of the test, estimate
the measurement uncertainty , the traceability of the data. methodology in this
study was reviewing his footsteps analytical methodologies in the assay of nitrite
and nitrate, the definition of its parameters, the performance of the analytical, data
processing , and analysis of the results for conclusions .
The criteria used to allow high degree of reliability of the data generated were
uniform and consistent.
13
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1
Romero J ACUIQUIMICA: Anlisis qumico del agua Pg.73-85
2
RODIER, JAnlisis de Aguas: aguas natrurales, aguas residuales, agua de mar .Barcelona,
1981.(Rodier, 1981)
14
Ilustracin 1 Ciclo del Nitrgeno. Tomado de (Romero)
15
2. JUSTIFICACIN
Las mediciones en general y las mediciones analticas en particular, se utilizan
particularmente para tomar decisiones de diferentes tipos. Uno de ellos es la
relacin compra/venta o aceptacin/rechazo. La importancia de estas mediciones
radica en que deben ser realizadas de una manera confiable, lo cual no siempre
es evidente. El objetivo de la validacin de mtodos de medicin es el
establecimiento de una evidencia objetiva, documentada, que muestre y
demuestre con un alto grado de probabilidad que el mtodo utilizado es lo
suficientemente fiable para producir el resultado previsto dentro de los intervalos
definidos. Las organizaciones que realizan mediciones analticas deben tener
bien definido un sistema de control de calidad y los procedimientos de
aseguramiento de calidad3.
5.4.5.3. El rango y la exactitud de los valores que se pueden obtener con los
mtodos validados (por ejemplo incertidumbre de los resultados, lmite de
deteccin, selectividad del mtodo, linealidad, lmite de respetabilidad y/o
reproducibilidad, robustez frente a influencias externas y/o sensibilidad cruzada
frente a interferencias de la matriz de muestra/objeto de ensayo), evaluados para
su uso previsto, deben ser los adecuados para satisfacer las necesidades de los
clientes.
3
Eurachem Guide The fitness for Purpose of Analytical Methods PP 1998 (Eurachem Guide,
1998)
4
Icontec, Norma Tcnica NTC-ISO/IEC colombiana 17025: Requisitos generales para la
competencia de los laboratorios de ensayo y calibracin (Icontec , 2005)
16
IDEAM, bajo la norma planteada (Icontec , 2005) y en coherencia con la filosofa
de continuo mejoramiento adoptada por el laboratorio, segn la demanda de los
usuarios se requiere ampliar el alcance de dicha acreditacin, cubriendo el
ensayo de nitritos y nitratos, para ello es necesario validar este mtodo de acuerdo
a los requerimientos de la norma (Icontec , 2005). Es en este sentido que radica la
importancia y el alcance de este trabajo.
17
3. OBJETIVOS
3.1. GENERAL
3.2. ESPECFICOS
Validar los ensayos de nitritos y nitratos a travs de la estimacin de los
parmetros caractersticos del ensayo.
Estimar la incertidumbre de la medicin.
Determinar la trazabilidad de los datos.
18
4. INTRODUCCIN
Todas las actividades desarrolladas por una institucin como el Laboratorio de
Qumica Ambiental de la UTP deben ser sistemticas y planificadas para
responder adecuadamente a la confiabilidad de los datos entregados asegurando
su calidad. Este aseguramiento de la calidad debe describir las medidas que un
laboratorio usa para la gestin de calidad de sus operaciones. Esto se logra con
implementacin de un Sistema de Gestin de la Calidad acreditado bajo la Norma
NTC-ISO/IEC 17025.
19
5. MARCO DE REFERENCIA
5.1. DEFINICIONES5
Blanco: Muestra preparada para la lectura final, pero que no contiene analitos.
Puede ser un blanco de los reactivos.
5
Vocabulario Internacional de Metrologa - Conceptos fundamentales y generales, y trminos
asociados (VIM)
20
Diagrama de calibracin: Expresin grfica de la relacin entre una indicacin y
el resultado de medicin correspondiente. Un diagrama de calibracin es la banda
del plano definido por el eje de las indicaciones y el eje de los resultados de
medicin, que representa la respuesta del instrumento para medir diferentes
valores.
Factor de cobertura: Nmero mayor que uno por el cual se multiplica una
incertidumbre estndar combinada de medida para obtener una incertidumbre
expandida de medida. Usualmente se usa el smbolo K para el factor de cobertura
21
Fiabilidad: Capacidad de un mtodo analtico para mantener durante periodos de
tiempo apropiados los criterios fundamentales de validacin. La fiabilidad indica
las prestaciones del mtodo para uso rutinario.6
6
Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales
sobre la validacin de mtodos. Santiago de Chile, 2010 (Instituto de Salud Pblica, 2010)
7
IDEM
8
IDEM
9
IDEM
22
Lmite de cuantificacin: Mnima cantidad de analito que puede determinarse
cuantitativamente con una adecuada exactitud y precisin.10
10
IDEM
23
Muestra: Producto resultante de la operacin de muestreo.
24
desviacin estndar, la varianza o el coeficiente de variacin bajo las condiciones
especificadas de la medicin.
25
Resultado de medicin: Conjunto de valores de una magnitud atribuidos a un
mensurando acompaados de cualquier otra informacin relevante disponible.
11
Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales
sobre la validacin de mtodos. Santiago de Chile, 2010 (Instituto de Salud Pblica, 2010)
26
=
Siendo:
=Valor de una lectura.
=numero de lecturas
=( )
=
Siendo:
= Valor de una lectura.
= Promedio de la totalidad de lecturas.
= Numero de lecturas
% =
Siendo:
= desviacin estndar de las lecturas.
= promedio de la totalidad de lecturas.
27
5.3. ANLISIS QUMICOS
El anlisis qumico resulta ser transversal a una amplia gama de actividades con
importantes implicancias sociales y econmicas. El obtener un resultado confiable
a partir de la aplicacin de un anlisis qumico, no es una tarea trivial debido a la
dependencia del resultado con la metodologa empleada, el tipo de muestra, su
concentracin, y en algunos casos, a la necesidad de aislar al analito de la matriz
de la muestra. Finalmente, que este resultado responda adecuadamente a las
necesidades de informacin requerida.
Por otro lado es necesario considerar que en la actualidad gran parte de los
resultados analticos son obtenidos a partir de mediciones instrumentales y que
por lo tanto, se requiere realizar previo a la medicin una adecuada calibracin del
instrumento en orden a obtener datos confiables y comparables. La interferencia
de la matriz en el proceso de medicin es otra dificultad a salvar. Para ello, se han
establecido herramientas que permiten establecer la comparabilidad y veracidad
de las mediciones; siendo estas:
12
MATERIALES DE REFERENCIA Y COMPARACIONES INTERLABORATORIOS: Herramientas
para el control de la calidad en laboratorios de ensayo, Manuel A. Leiva-Guzmn. Ed. Aquaprint,
Santiago de Chile, 2006. (Leiva Guzmn, 2006)
28
Legislacin en metrologa. Se requiere avanzar en el desarrollo de un marco
legal que permita el desarrollo, diseminacin y aplicacin de la metrologa en el
mbito comercial de modo que las mediciones puedan ser defendibles no slo
cientficamente sino tambin, legalmente. Estos conceptos aparecen
generalmente en las legislaciones de algunos pases, pero no han sido adaptados
a las exigencias econmicas y sociales actuales.
29
Desarrollo y validacin de mtodos primarios. En qumica resulta difcil
establecer mtodos primarios de medicin, dada las exigencias que stos deben
cumplir y slo se cuenta con pocas de estas metodologas. Los resultados que
proveen resultados son los que presentan una menor incertidumbre y son
directamente trazables al sistema internacional de medidas. Por lo anterior, resulta
importante el desarrollo y aplicacin de este tipo de metodologas.
Requerimientos de calidad
lmites de deteccin,
lmites de cuantificacin,
sensibilidad,
Procedimientos para determinar la incertidumbre
Procedimientos para establecer la trazabilidad
30
Materiales de referencia, y
Participacin en pruebas de aptitud
5.5. TRAZABILIDAD
Segn el Vocabulario Internacional de Metrologa 13 es la Propiedad del resultado
de una medicin o el valor de un patrn, por el cual puede ser relacionado con los
patrones de referencia, usualmente patrones nacionales o internacionales, a
travs de una cadena ininterrumpida de comparaciones, teniendo establecidas las
incertidumbres 14
13
Vocabulario Internacional de Metrologa VIM del Comit Conjunto para las Guias en Metrologa.
14
JCGM 200, Vocabulario Internacional de Metrologa: Conceptos fundamentales y generales, y
a
trminos asociados (VIM) 1 Edicin en espaol, 2008 (JCGM, 2008)
31
e) Referencia a las unidades del Sistema Internacional (SI); la cadena de
comparaciones debe terminar en los patrones primarios para la realizacin de las
unidades del SI, salvo que no sea tcnicamente posible.
a) Demostrar que la calibracin de los equipos crticos y por tanto los resultados
de la medicin generados por dichos equipos, de acuerdo con el alcance de su
acreditacin, son trazables al Sistema Internacional de Unidades (SI).
32
puede demostrar mediante la aplicacin de alguno de los siguientes
mecanismos15:
REGISTROS
15
Sistema Nacional de Acreditacin, criterios para la Trazabilidad de las Mediciones Lima Per
2013
33
al organismo responsable de la calibracin, de la certificacin del material de
referencia.
Demostrar que los mtodos son adecuados a los anlisis propuestos en las
condiciones descritas. La validacin es la herramienta que permite obtener
las pruebas documentales al respecto.
34
Ensayos para la determinacin de caractersticas frmaco tcnicas
diferentes.
Ensayos de lmite de impurezas y de cuantificacin de impurezas.
Ensayos para la determinacin den fluidos biolgicos y en productos
naturales.
Ensayos microbiolgicos.
35
Reproducibilidad: Evala la precisin entre laboratorios (precisin
interlaboratorios).
36
5.10. PROTOCOLO DE VALIDACIN
37
INFORME DE VALIDACION
5.13. ARCHIVO
Los documentos referentes a la validacin se archivaran adecuadamente durante
todo el tiempo de vida del producto o servicio 16
5.14. INCERTIDUMBRE
Para la estimacin de incertidumbre se recomienda seguir los cuatro pasos
principales:
16
CAPACHA E., HENRY P., LLANOS R., GIOVANNA P., Desarrollo y validacin de un mtodo
analtico para la cuantificacin de dexametasona y clotrimazol en crema, por HPLC y anlisis de
productos comercializados en el Per Universidad de San Marcos Lima, Per 2007 (Capcha
Espinoza & Llanos Rebaza, 2007)
38
3. Cuantificacin de los componentes de incertidumbre (componente por
componente) usando estimados para los parmetros y dems fuentes
identificadas, obtenidas por experimento, de la validacin o de ensayos
intra o interlaboratorios.
17
Validacin de mtodos y determinacin de la incertidumbre de la medicin: Aspectos generales
sobre la validacin de mtodos. Santiago de Chile, 2010
39
protagonista japons de actividades en control dela calidad, y recientemente
redescubierto como herramienta til.
6. METODOLOGIA
La metodologa que se emple para dar cumplimiento a cada uno de los objetivos
propuestos en el presente documento se describe como una serie de actividades.
40
6.6 Anlisis de los resultados:
41
7. RESULTADOS
De acuerdo con los objetivos trazados para la elaboracin del presente trabajo, se
realiz un cuadro resumen donde se seala el producto obtenido de las
actividades realizadas, materializndose en los diferentes documentos que se
describen en la tabla 2, que se incluirn como anexos.
42
9. CONCLUSIONES
Se valid el ensayo de Nitritos a travs de los parmetros caractersticos como:
Lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud, precisin bajo condiciones
de repetibilidad, reproducibilidad, rango lineal, rango de trabajo y porcentaje de
recuperacin; lo que permiti concluir que el mtodo Colorimtrico para la
determinacin de Nitrito propuesto en el Standard Methods for the examination of
water and wastewater es apto para el alcance y uso propuesto.
El ensayo de Nitratos es apto para el uso siempre que los usuarios manifiesten la
aceptacin de datos aunque no cumplan con el criterio de correccin de
background, teniendo en cuenta que se evidenci durante la validacin que los
datos de % recuperacin efectuados con muestras cumplen con el criterio de
aceptacin. Tambin se evidencia cumplimiento en cuanto a Repetibilidad y
reproducibilidad.
43
9. RECOMENDACIONES
Es muy importante que las muestras, patrones, materiales volumtricos y de
medicin se aclimaten a 20 C, temperatura para la cual ya est dada su
incertidumbre y as minimizar los errores.
44
10. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
45
LISTA DE ANEXOS
ANEXO A. Puntos crticos del ensayo de Nitrito.
FLUJOGRAMA.
46
La preparacin de la solucin intermedia, la solucin estndar y los patrones,
debido a que cualquier cambio en sus concentraciones afectar los resultados.
El pH de la muestra debe estar entre 5,00 y 7,00 para que los nitritos presenten no
se reduzcan a amoniaco, ni se oxiden a nitratos.
47
ANEXO B. AMEF Nitritos
48
49
50
ANEXO C. PLAN DE VALIDACIN DEL ENSAYO DE NITRITO MEDIANTE
EL MTODO COLORIMETRICO. 4500 NO2- B. Standard Methods for the
examination of water and wastewater (DE 097).
Se trata de un mtodo colorimtrico basado en la reaccin de Griess.
La reaccin es la siguiente
51
Termstato marca Julabo F34, Sistema de purificacin de agua Simplicity
MILLIPORE- Fotmetro marca Shimadzu UV-1700 Pharmaspec
Reactivos
Agua tipo II
Nitrito de Sodio
cido Fosfrico 85%
Sulfanilamida
N-(1-Nafti)l-etilendiamina
Hidrxido de Sodio 1N
Acido Clorhidrico 1N
Tabla2. Reactivos
Vidriera y materiales
52
Solucin Estndar de Nitritos: Concentracin terica de 1,0 mg NO2-/L,
preparado por dilucin, tomando 5 mL de la solucin intermedia y diluyendo a 250
mL con agua tipo II, aforando a 20 C.
Los patrones para las adiciones se prepararon una sola vez para toda la validacin
a partir de la solucin intermedia de 50 mg NO2-/L. Las adiciones sugeridas se
hicieron diariamente.
53
M2: ARD con una concentracin de Nitrito cercana a 0,75 NO2-/L.
2. OBJETIVO DE LA VALIDACIN
Criterios de aceptacin
Se toma la concentracin de las muestras como (mg NO3- + NO2- -N/L) dando a
entender que realizando este mtodo de la misma forma como se describe en e l
Standard Methods for the examination of water and wastewater pagina 4-120, el
NO3- no produce interferencias.
54
3. PARMETROS DE VALIDACIN.
Aplica
Parmetro
S No
Lmite de deteccin X
Lmite de cuantificacin X
Exactitud X
Precisin X
Repetibilidad X
Repetibilidad intermedia X
Reproducibilidad X
Recuperacin X
Sensibilidad X
Tabla 5.Parmetros caractersticos a evaluar para el mtodo de Nitritos.
55
Precisin, encuentran dentro del rango de aplicacin del mtodo:
expresada como M1: Muestra natural. Muestra de ARD Afluente de la PTAR de
porcentaje de la UTP.
coeficiente de M2: Muestra natural. Muestra de ARD Afluente de la PTAR de
variacin (%CV). la UTP.
56
Anexo D. Resultados Validacin Nitritos.
Corrida 1:
57
Corrida 2:
-
Tabla 8. Resultados Patrn 0,01 mgN-NO2 /L.
-
Tabla 9. Resultados Patrn 0,02 mgN-NO2 /L.
En las tablas 7 y 9 se observa que los resultados obtenidos para el patrn de 0,02
mg N-NO2-/L cumplen con los criterios de aceptacin del mtodo ya que se
58
obtuvo un %CV y % E menor o igual al 10%. Por esta razn se concluye que el
limite de cuantificacin experimental es 0,02 mgN-NO2-/L.
Discusin de Resultados
Al lote de datos de cada estndar o muestra obtenidos se les realiz la prueba F,
sta prueba considera la razn de dos varianzas mustrales, es decir, la razn de
los cuadrados de las desviaciones estndar. La cantidad calculada (F est dada
por la ecuacin1.
12
. 1 = 2
1
2
1 1 s12 + 2 1 s22
. 2 =
1 + 2 2
Se puede demostrar entonces que la prueba de t est dado por: Ecuacin 3
1 2
. 3 =
. 1 1
1 + 2
59
Lmites de Deteccin y de Cuantificacin
A continuacin se muestran los resultados obtenidos durante los das de
validacin para el estndar de menor concentracin.
= 3
= 10
= 3
= 3 0,0005
= ,
= 10
= 10 0,0005
= ,
60
Exactitud expresada como %E
A continuacin se recopilan los resultados de los estndares durante los siete das
de la validacin.
Tabla 11. Resultados de los estndares durante los siete das de validacin.
61
Precisin expresada como %CV
A continuacin se consolidan los resultados obtenidos durante los das de
validacin para las muestras analizadas.
Para las muestras naturales: M1, M1+Ab (12%y 33%), M1+ Aa (80%) y M2 la
prueba F muestra que todas las poblaciones de datos son estadsticamente
iguales, ya que no hay diferencias significativas entra las varianzas de las series
de datos obtenidas durante la validacin, con un 95% de confianza.
62
Las muestras naturales presentan %CV por debajo del 10% lo que evidencia
condiciones de repetibilidad.
Repetibilidad Intermedia.
En la siguiente tabla se muestran los resultados obtenidos para los diferentes
patrones efectuando el anlisis un da en la maana y en la tarde.
63
Da Estndar bajo (Eb) Estndar medio Estndar alto (Ea)
(Em)
0,02 mg N-NO2/L 0,5 mg N-NO2/L 1,0 mg N-NO2/L
1
. 4 1 = ( 1)2
=1
La desviacin estndar media del mtodo es 1,85 %CV valor que proporciona
evidencia de condiciones de reproducibilidad y que se encuentra por debajo de los
criterios de aceptacin establecidos para el mtodo.
% Recuperacin.
64
Los porcentajes de recuperacin obtenidos para la muestra adicionada fueron de
106,42% para la adicin baja del 12%, del 106,80% para la adicin baja del 33% y
de 106,00% para la adicin alta.
Los porcentajes de error obtenidos tanto para la adiciones bajas (6,42 % y 6,08%
respectivamente) como para la adicin alta (5,89%) son menores al 20%,
evidenciando que no existen efectos de matriz.
A partir de los valores promedio obtenidos, cada da, para la muestra y de los
valores promedio obtenidos, cada da, para las adiciones se calcul el porcentaje
de recuperacin mediante la siguiente ecuacin:.
% RECUPERACION
A * Vs V B *Vs *100
Cx * V
Donde:
A: Concentracin medida del analito a la muestra a la que se le ha hecho la
adicin conocida.
B: Concentracin base del analito en la muestra.
Cx: Concentracin del patrn de adicin.
Vs: volumen de la muestra antes de la adicin conocida del analito.
V: Volumen utilizado del patrn de adicin.
mg N-NO2/L mg N-NO2/L %R
Da
0,238 0,267
Da 1 108,94
0,239 0,265
65
0,26585 150 + 5 (0,2384 150)
% = 100
15
% = ,
Cartas de Control.
-
Tabla 16.Recopilacin de resultados del estndar de 0,5 mg N-NO2 /L para la elaboracin de carta de
control.
66
=
Dnde:
= promedio del subgrupo
= sumatoria de datos
=Nmero de datos
Para el dato 1:
0,516 + 0,520
= = 0.518
2
,
= = .
67
,
= = ,
Para determinar los lmites de control para los rangos se utiliz la siguiente tabla
de factores para lmites de control.
Tamao de
Factor A2
muestras
2 1,88
3 1,023
4 0,729
5 0,577
6 0,483
7 0,419
8 0,373
9 0,337
10 0,308
LCS = + A2*R
LCS=0,518 + (1,88*1,8x10-3)
LCS=0,521
LCI= Lmite de cuantificacin inferior.
LCI= - A2*R
LCI= 0,514
68
Anexo E. Estimacin de La incertidumbre de medicin de Nitritos.
1. Mesurando
Se mide la absorbancia por parte del complejo azo formado que se lee
espectrofotomtricamente a 540 nm. La intensidad de color es directamente
proporcional a la concentracin de Nitritos.
2. Modelo matemtico.
La ecuacin tpica que aparece al usar la tcnica de ultravioleta -visible es la de la
lnea recta como se muestra en la siguiente ecuacin.
= 1 + 0
De la ecuacin despejamos la componente que corresponde a la concentracin,
como se muestra en la siguiente ecuacin:
( 0 )
=
1
Donde
= La concentracin de masa (mg/L) de NO2, resultado de la curva de
calibracin.
= Es la respuesta observada del instrumento, en este caso la unidad es la
absorbancia.
=La ordenada al origen
=La pendiente calculada.
69
5. Diagrama Causa-Efecto.
= + ( )
Donde
=
= (0,0001g)
= 2,851006
= 2
70
Reemplazamos los datos
= 0,0001
= 2,851006
= 0,1244
= 1,00104
Donde
Factor de cobertura.
1,00 04
=
2
= ,
= 0,0001
= 2,851006
= 0,000
= 0,0001 + (2,851006 0)
71
= 1,00104
1,00 04
=
2
= ,
= ( ) + ( )
= ,
7,08105
=
0,1244
= ,
72
= ,
Para estos clculos se tuvo en cuenta que esta es una distribucin rectangular con
la siguiente formula
=
3
Donde
Para el O:
3,00104
=
3
= 1,73104
73
2 = 1,73104 2
2 = 3,46104
= ( ) + ( ) + ( )
= (, ) + (, ) + (, )
= ,
,
=
68,99531
= ,
74
f) Incertidumbre debida a la curva de calibracin.
Regresin Lineal.
= +
( b0 )
=
b1
Donde:
b0 La ordenada en el origen.
b1 La pendiente calculada.
75
CURVA DE CALIBRACION NITRITOS.
76
El patrn 8 se trabaj de la misma manera que los dems, es posible que
existiera una pequea variacin en las alcuotas para su preparacin, la cual se
observa en la diferencia de las lecturas.
Abs= 2,750 C + 0
R2= 0,998
S 1 1 ( MCR )2
uNO = + +
2
b1 p n SXX
Donde
= +
=
Y
= ( )
=
Donde:
77
Las "i" lectura observadas correspondientes a iMRC conocidas con las
que se calibro el instrumento.
S = 0,00189
b1 = 2,750
p=2
78
n=8
= 0,5
MCR = 0,333
Reemplazamos en:
S 1 1 ( MCR )2
u = + +
b1 p n SXX
Obtenemos:
u = 5,52 x 104
5,52 x 104
UC =
0,5
UC
= 1,10 x 103
C
Tenemos los resultados de los datos anteriores:
= , + , + , + ,
= ,
= , + ,
= ,
79
= , + ,
= ,
= ,
= ,
UNO2
NO
2
= (1,83x103 )2 + (1,033x103 )2 + (5,83x104 )2 + (1,10 x 103 )2 + (5,0 x 104 )2
UNO2
= 0,0025
NO2
80
Formato para guiar la estimacin de la incertidumbre Nitritos.
NO
2 muestra = NO2 muestra 0,0025 NO2 muestra
UNO2
Uexp = k
NO2
81
Incertidumbre Expandida:
NO
2 muestra = NO2 muestra 0,0025 NO2 muestra 2
NO
2 muestra = NO2 muestra 0,0050 NO2 muestra
V. Muestra 5,00E-04
82
Anexo F.TRAZABILIDAD DEL ENSAYO DE NITRITOS
En la figura 8 se muestran las diferentes etapas para el ensayo Nitritos de forma
tal que se pueda tener un panorama general para establecer la trazabilidad del
ensayo.
83
Aseguramiento de la Trazabilidad
84
ANEXO G. Puntos crticos del ensayo de Nitratos.
85
Como se observa en el anterior flujograma los puntos crticos de la determinacin
de Nitratos son:
Se adiciona 1mL de HCL 1N con el fin de evitar posibles interferencias con los
carbonatos presentes en la muestra.
86
Anexo H. AMEF NITRATOS
87
88
Anexo I. PLAN DE VALIDACIN DEL ENSAYO DE NITRATOS
MEDIANTE EL MTODO DE ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA.
4500 NO3- B. Standard Methods for the examination of water and
wastewater (DE 097).
89
6
Curva de Calibracion Nitratos
= 4,093 + 0
2,5
2
1,5
1
0,5
0
0 0,2 0,4 0,6 0,8
Absorbancia y = 3,955x
R = 0,999
Ilustracin 11. Curva de Calibracin Final de Nitratos.
90
Con la siguiente ecuacin:
= 3,955 + 0
Equipos
Reactivos
Agua tipo II
Nitrato de Potasio
Acido Clorhdrico 1N
Tabla 21. Reactivos
Vidriera y materiales
Balones aforados de 100 mL, 200mL, 250mL, 500mL, 1000 mL. Clase A
Pipetas aforadas de 3 mL, 6 mL, 8 mL, 10 mL, 25 mL, 50 mL, 100 mL. Clase A
Beakers de 100 mL, 250 mL.
Esptulas
Frasco lavador
Varillas de vidrio
Barras agitadoras de tefln
Tabla 22. Vidriera y materiales
91
Solucin Inicial: Concentracin terica de 100 mgNO3-/L, preparada por pesada
directa de 0.7221 g de Nitrato de Potasio, secado previamente a 105 C durante
24 horas y disuelto hasta completar 1 L con agua tipo II, aforando a 20 C.
4. Objetivo de la validacin
92
Matriz: Aguas residuales domesticas e industriales y aguas naturales
(superficiales y subterrneas).
5. Criterios de aceptacin
6. Parmetros de Validacin.
Aplica
Parmetro
S No
Lmite de deteccin X
Lmite de cuantificacin X
Exactitud X
Precisin X
Repetibilidad X
Repetibilidad intermedia X
Reproducibilidad X
Recuperacin X
93
Sensibilidad X
94
-
concentracin aproximada de 0.70 NO3 /L, a la cual se le
efectuar una adicin baja (M1 + Ab) de aproximadamente
-
0.21mg NO3 /L (30%) y una adicin alta (M1 + Aa) de
-
aproximadamente 0.56 mg NO3 /L (80%) de la concentracin
de la muestra.
95
Anexo J. RESULTADOS DE LA VALIDACIN DE NITRATOS.
= ( )
-
Tabla 25. Resultados patrn de 0,2mg N-NO3 /L para LC y LD
96
Datos Obtenidos de estndares y muestras durante la
validacin
-
Tabla 26. Resultados obtenidos para el estndar de 0,2 mgN-NO3 /L
97
Tabla 27.Resultados de los estndares durante la validacin
98
Como se observa los resultados obtenidos con las muestras (M1, M1+Ab, M1+Aa
y M2) no tienen coherencia alguna debido a que al realizar la correccin esta es
mayor al 10% de la lectura a 220 nm. A continuacin se presenta el consolidado
de datos de la muestra1 (M1):
99
Para calcular las correcciones se trabaj de la siguiente manera, como ejemplo se
tomarn los datos del Da 1:
= ()
= + ()
= 0,18927 + 0,15975
= 0,34902
= 0,34902 (2 0,15975)
= ,
= 3,955 + 0
Entonces
= 3,955 0,02952
= 0,1173 /
De la misma manera se calcularon los datos para todas las muestras obteniendo
siempre una lectura a 275 nm mucho mayor a la lectura a 220nm.
Repetibilidad Intermedia.
100
En la siguiente tabla se muestran los resultados obtenidos para los diferentes
patrones efectuando el anlisis un da en la maana y en la tarde.
Estndar
Da Estndar Bajo (Eb) Estndar Medio (Em) Alto(Ea)
0,20 1,00 2,50
101
DATOS 2,00 2,00 2,00
Media 0,21 1,01 2,47
S 0,02 0,03 0,04
%CV 8,06 2,68 1,72
%ERROR 6,39 1,20 -1,17
Tabla 31. Datos obtenidos bajo condiciones de Reproducibilidad
% Recuperacin.
102
En la siguiente tabla se recopila los resultados obtenidos del estndar para la
elaboracin de las cartas de control. En el laboratorio se decidi generar cartas de
control para el patrn de 1,0 mg N-NO3-/L.
-
Tabla 33. Recopilacin de resultados del estndar de 1,0 mg N-NO3 /L para la elaboracin de carta de
control.
103
Anexo K. Estimacin de La incertidumbre de medicin de Nitratos.
1. Mesurando
Se mide la absorbancia por parte del in Nitrato en el espectro ultravioleta a 220
nm.
4. Diagrama Causa-Efecto.
104
Ilustracin 12. Fuentes que aportan incertidumbre para el mtodo de Nitratos.
105
Formato para guiar la estimacin de la incertidumbre de Nitratos.
= , + , + , + ,
= ,
106
Incertidumbre por Solucin Estndar
= , + ,
= ,
= , + ,
= ,
= ,
= ,
= (, ) + (, ) + (, ) + (, ) + (, )
= ,
107
Expresin de los resultados
= ,
=
Incertidumbre Expandida:
= ,
= ,
V. Muestra 0,000577
108
Anexo L.TRAZABILIDAD DEL ENSAYO DE NITRATOS.
Aclimatar la Solucin
Inicial
Aclimatar la Solucin
Estndar
109
Medir, con pipeta
volumtrica, los volmenes
de solucin estndar
establecidos para la
preparacin de cada patrn.
Aclimatar la muestra
Adicionar 2 mL de HCL 1N
Medicin Fotomtrica.
110