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Biblioteca Digital - Direccin de Sistemas de Informtica y Comunicacin

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE AGRONOMA

S
IA
AR
CU
PE
RO
AG
AS

CONTROL DE Proarna bergii DIST. EN ESPRRAGO CON


CI

JUVENILES DE Heterorhabditis spp. EN MACAB ALTO,


EN

RZURI, LA LIBERTAD
CI
DE
CA

TESIS PARA OPTAR EL TTULO DE


TE
IO

INGENIERO AGRNOMO
BL
BI

Autor : Bach. Kevin Ashley Pedro Narro Esquivel

Asesor : M. Sc. Carolina Esther Cedano Saavedra

TRUJILLO - PER

2015

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PRESENTACIN

SEOR DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

SEORES MIEMBROS DEL JURADO:

S
IA
Con el fin de cumplir con las disposiciones vigentes contenidas en el

AR
Reglamento de Tesis Universitaria de la Escuela Acadmico Profesional de

CU
Agronoma, someto a vuestro elevado criterio la tesis titulada Control de Proarna

PE
bergii Dist. en esprrago con juveniles de Heterorhabditis spp. en Macab Alto,
RO
Rzuri, La Libertad con el propsito de obtener el Ttulo Profesional de Ingeniero
AG

Agrnomo.
AS

Trujillo, Octubre de 2015.


CI
EN
CI
DE
CA
TE

Br. Kevin Ashley Pedro Narro Esquivel


IO
BL
BI

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CONTROL DE Proarna bergii DIST. EN ESPRRAGO CON JUVENILES


DE Heterorhabditis spp. EN MACAB ALTO, RZURI, LA LIBERTAD

TESIS

PARA OBTENER EL TTULO PROFESIONAL DE:

INGENIERO AGRNOMO

S
IA
Presentada por:

AR
CU
Br. Kevin Ashley Pedro Narro Esquivel

PE
RO
Asesorada por:
AG

..
AS
CI

M. Sc. CAROLINA CEDANO SAAAVEDRA


EN
CI
DE

Sustentada y aprobada, ante el siguiente Jurado:


CA
TE
IO
BL

M. Sc. Miryam Borbor Ponce


BI

PRESIDENTE

Dr. Luis Antonio Ramrez Torres M. Sc. Csar Apolitano Urbina

SECRETARIO MIEMBRO

ii

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DEDICATORIA

A Dios, por siempre estar conmigo y mostrarme el camino de la verdad y el amor.


Para l todo agradecimiento y la gloria por siempre.

A mi madre Mara Anglica por su amor, sacrificio y apoyo para siempre confiar en

S
IA
m y toda la dedicacin que tuvo para que logre este objetivo.

AR
CU
PE
A mi hermano Bryan por siempre estar presente para pasar momentos buenos
RO
sacndonos una sonrisa.
AG
AS

A mi Padre, hermanos, familia, amigos, compaeros, profesores, a todas aquellas


CI

personas que me apoyaron en esta carrera universitaria, confiaron en m y espero no


EN

haberles defraudado.
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

iii

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AGRADECIMIENTO

Agradezco a mi madre y Padre, hermanos y dems familia que de alguna forma


hicieron posible el desarrollo de este trabajo.

Agradezco a la M. Sc. Carolina Cedano Saavedra, asesora de esta investigacin, por

S
IA
su amistad, apoyo y profesionalismo para concluir este trabajo.

AR
CU
PE
A amigos y compaeros que me apoyaron en este trabajo, realizando las aplicaciones
RO
y evaluaciones en campo y laboratorio. Especialmente a Rub, Zinthia, Malqui,
AG

Andy, Richar, Juan.


AS
CI

A la Ing. Carolina Zavaleta y el Laboratorio Biomil Solutions, por el apoyo con el


EN

material de trabajo para esta investigacin.


CI
DE
CA

El autor
TE
IO
BL
BI

iv

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RESMEN

La presente investigacin, se realiz en el fundo Los Sauces, localizado en Macab


Alto, distrito de Rzuri, provincia de Ascope, regin La Libertad. En un campo de
esprrago de 12 aos de edad con la variedad UC 157 F2 conducido con riego por
gravedad.
El estudio tuvo como objetivo determinar el nivel de juveniles infectivos de

S
Heterorhabditis spp que presente mayor control de Proarna bergii en esprrago.

IA
AR
Se emple el diseo de bloques completos al azar, con tres tratamientos y tres

CU
repeticiones. Los tratamientos usados fueron: 60 000 juveniles infectivos (JIs)/m

PE
lineal (T1), 120 000 JIs/m lineal (T2), y un testigo (T0) sin aplicacin de juveniles
RO
infectivos de Heterorhabditis. Se realiz tres aplicaciones semanales y las
AG

evaluaciones al mes de las aplicaciones recogiendo todas las ninfas de Proarna


AS

bergii de las calicatas.


CI
EN

A partir del material de campo, en laboratorio se realizaron infestaciones en Galleria


CI

mellonella para verificar la presencia del nemtodo entomopatgeno. La evaluacin


DE

estadstica fue en base al anlisis de varianza; y, a la prueba de Tukey al 1% de


CA

significancia.
TE
IO

Los resultados no mostraron diferencia estadstica entre los tratamientos en estudio,


BL

la aplicacin de 120 000 JI/m lineal de Heterorhabditis spp. alcanz en promedio


BI

16.02 % de control de Proarna bergii en el cultivo de esprrago en Macab alto, La


Libertad.

Palabras clave: Esprrago, juveniles infectivos, Proarna bergii, control, infestacin.

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ABSTRACT

The present investigation was performed in the fundo Los Sauces, located in Macab
Alto district Rzuri, Ascope province, La Libertad region. In a field of asparagus 12
years old with the variety UC - 157 F2 driven with irrigation by gravity.
The study had as objective to determine the level of infective juveniles of

S
Heterorhabditis spp that present greater control of Proarna bergii in asparagus.

IA
AR
Was used, the design of blocks complete at random, with three treatments and three

CU
repetitions. The treatments used were: 60,000 infective juveniles (IJs) / m linear (T1),

PE
120,000 IJs / m linear (T2), and a witness (T0) without application of infective
RO
juveniles of Heterorhabditis. Is performed three weekly applications and the
AG

evaluations of applications per month by collecting all the nymphs of the Proarna
AS

bergii of the soil pits.


CI
EN

From the material of field, in the laboratory is performed infestations in Galleria


CI

mellonella to verify the presence of entomopathogenic nematode. The statistical


DE

evaluation was based on analysis of variance; and the Tukey test at 0.01% level.
CA
TE

The results no showed statistical difference between the treatments in study, the
IO

application 120 000 JI / m linear Heterorhabditis spp. reached 16.02% Proarna


BL

bergii control in the cultivation of asparagus at Macabi alto, La Libertad.


BI

Keywords: Asparagus, infective juveniles, Proarna bergii, control, infestation.

vi

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NDICE

Pg.

PRESENTACIN .............................................................................................................. i

JURADO CALIFICADOR ii

DEDICATORIA ................................................................................................................... iii

S
IA
AGRADECIMIENTO .......................................................................................................... iv

AR
CU
RESUMEN ............................................................................................................................ v

PE
ABSTRACT ......................................................................................................................... vi
RO
INDICE GENERAL ........................................................................................................... vii
AG

ndice de Tablas ........................................................................................................... ix


AS
CI

ndice de Figuras ............................................................................................................ x


EN

CAPITULO I: INTRODUCCIN ...................................................................................... 12


CI
DE

CAPITULO II: REVISION BIBLIOGRAFICA ................................................................ 15


CA

2.1. Produccin de Esprrago en el Per ........................................................... 15


TE

2.2. Morfologa de la planta de Esprrago ......................................................... 15


IO
BL

2.3. Plaga Proarna bergii .................................................................................. 16


BI

2.3.1. Ubicacin taxonmica ...................................................................... 16

2.3.2. Ciclo biolgico .................................................................................. 16

2.3.3. Comportamiento ............................................................................... 17

2.3.4. Daos ................................................................................................ 20

2.4. Nemtodo Heterorhabditis spp ................................................................... 21

2.4.1. Caractersticas .................................................................................... 21

vii

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2.4.2. Ciclo de vida de los nemtodos ......................................................... 22

2.4.3. Comportamiento del nemtodo entomopatgeno ............................. 23

2.4.4. Ecologa del nemtodo entomopatgeno ........................................... 25

2.4.5. Mecanismos de defensa contra los nemtodos .................................. 27

2.4.6. Uso de nemtodos en el control biolgico ......................................... 28

S
CAPITULO III: MATERIAL Y MTODOS ..................................................................... 30

IA
AR
3.1. rea experimental ........................................................................................ 30

CU
3.2. Material en estudio....................................................................................... 30

PE
3.3. Materiales..................................................................................................... 31
RO
AG

3.4. Mtodos ....................................................................................................... 33


AS

3.5. Procedimiento de la investigacin .............................................................. 36


CI

3.6. Caractersticas evaluadas ............................................................................. 38


EN
CI

CAPITULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIN ............................................................. 40


DE

4.1. Resultados ................................................................................................... 40


CA

4.1.1. Porcentaje de mortalidad ................................................................. 40


TE
IO

4.1.2. Patogenicidad ................................................................................... 44


BL

4.2. Discusin .................................................................................................... 46


BI

CAPITULO V: CONCLUSIONES .................................................................................... 49

CAPITULO VI: RECOMENDACIONES .......................................................................... 50

CAPITULO VII: REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS ................................................... 51

ANEXOS ............................................................................................................................ 54

viii

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NDICE DE TABLAS

Titulo Pg.

Tabla 3.1: Descripcin de los tratamientos...................................................................... 33

Tabla 4.1: Efecto de los tratamientos sobre la mortalidad de ninfas de P. bergii


con Heterorhabditis spp. en la primera evaluacin. ....................................... 41

Tabla 4.2: Prueba de Tukey de la primera evaluacin respecto al porcentaje de

S
IA
mortalidad en ninfas de P. bergii con la aplicacin de dos

AR
concentraciones de Heterorhabditis spp. en esparrago UC 157 F2 en

CU
Ascope, La Libertad ....................................................................................... 41

PE
Tabla 4.3: Efecto de los tratamientos sobre la mortalidad de ninfas de P. bergii
RO
con Heterorhabditis spp. en la segunda evaluacin ....................................... 42
AG

Tabla 4.4: Prueba de Tukey de la segunda evaluacin respecto al porcentaje de


AS

mortalidad en ninfas de P. bergii con la aplicacin de dos


CI

concentraciones de Heterorhabditis spp. en esparrago UC 157 F2 en


EN

Ascope, La Libertad ....................................................................................... 42


CI
DE

Tabla 4.5: Efecto de los tratamientos sobre la mortalidad de ninfas de P. bergii


CA

con Heterorhabditis spp. en la tercera evaluacin ......................................... 43


TE

Tabla 4.6: Prueba de Tukey de la tercera evaluacin respecto al porcentaje de


IO

mortalidad en ninfas de P. bergii con la aplicacin de dos


BL

concentraciones de Heterorhabditis spp. en esparrago UC 157 F2 en


BI

Ascope, La Libertad. ...................................................................................... 43

Tabla 4.7: Promedio de larvas de G. mellonella afectadas con nemtodos


recuperados de P. bergi, mediante mtodo de trampeo... ............................... 45

Tabla 9: Ninfas de P. bergi por tratamiento en cada evaluacin realizada .................. 55

ix

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NDICE DE FIGURAS

Titulo Pg.

Figura 4.1 Porcentaje de mortalidad de ninfas de P. bergii ..40

Figura 2. Adulto de Proarna bergii en el campo. ................................................................ 55

S
Figura 3. Dao de posturas de hembra de Proarna bergii................................................... 56

IA
AR
Figura 4. Conteo de nemtodos Heterorhabditis para la aplicacin en campo. .................. 56

CU
Figura 5. Medicin de concentracin del nemtodo Heterorhabditis para su

PE
aplicacin en campo. ........................................................................................... 57
RO
Figura 6. Aplicacin a chorro continuo del nemtodo Heterorhabditis con ayuda de
AG

una mochila sobre el cultivo afectado por la plaga Proarna bergii. .................. 57
AS

Figura 7. Calicata realizadas durante las evaluaciones y recoleccin de ninfas de


CI
EN

Proarna bergii ..................................................................................................... 58


CI

Figura 8. Ninfas de Proarna bergii tradas de campo y colocadas en suelo estril


DE

para comprobar si presentan el nemtodo entomopatgeno ............................... 58


CA

Figura 9. Ninfas de Proarna bergii en laboratorio despus de 15 das recolectadas de


TE

campo. ................................................................................................................. 59
IO
BL

Figura 10. Observacin a travs de estereoscopio del nemtodo Heterorhabditis


BI

presente el cadver de Proarna bergii ............................................................. 59

Figura 11. Presencia del nemtodo Heterorhabditis en cadver de Proarna bergii. .......... 60

Figura 12. Larvas de Galleria mellonella infestadas con nemtodos recuperados de


los cadveres de Proarna bergii. ...................................................................... 60

Figura 13. Observacin de nemtodos emergidos del cadver de Proarna bergii. ............ 61

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CAPITULO I

1. INTRODUCCIN

En los ltimos aos el Per se ha situado entre los principales productores de


esprragos a nivel mundial. El xito se debe a que la industria del esprrago aplica
normas de calidad que permiten obtener productos con calidad satisfactoria,
demostrada por la permanente demanda internacional asegurando la inocuidad y la

S
IA
calidad del producto. El desarrollo de los departamentos productores de esprrago

AR
est asociado principalmente con esta actividad agroexportadora, permitiendo un

CU
mayor dinamismo de los mismos. Como fuente de trabajo, la agricultura del

PE
esprrago es mucho ms importante que la de otros cultivos tradicionales de las
RO
zonas, como algodn, maz, etc. (Obrien, 2004, p. 5).
AG

Los esfuerzos ms importantes en la atencin de los problemas de la cadena agro


AS

productiva del esprrago han sido orientados al establecimiento de los mecanismos


CI
EN

de cooperacin incentivados por el gobierno y la iniciativa privada; el compromiso


CI

del sector con la inocuidad y la calidad; la importancia de la normalizacin del


DE

esprrago para el desarrollo de la competitividad de las empresas y el aumento de la


eficiencia en el mercado (Obrien, 2004, p. 5).
CA
TE

La Gerencia Regional de Agricultura La Libertad (2014) seala que el rea


IO
BL

instalada de esprrago en La Libertad al 2014 asciende a 10 993.31 Has.,


BI

distribuidas en las provincias de la costa.

Los productores de esprrago de la zona de Macab Alto en Rzuri provincia de


Ascope, manifiestan que en las plantas de esprrago se observan sntomas de
necrosis de ramas, muerte de coronas y reduccin del nmero de plantas por rea.
Al observar esto, los agricultores examinaron detenidamente la rizsfera de estas
plantas encontrando en el suelo ninfas de Proarna bergii y atribuyeron su efecto a
esta plaga. Se ha realizado la aplicacin de insecticidas qumicos directamente al
suelo pero con resultados negativos ya que las ninfas del insecto plaga se

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encuentran a profundidades mayores hasta donde no llega el producto qumico; as


mismo, al ser el esprrago una hortaliza de exportacin, cuya fisiologa natural es
acumular reservas, no se puede aplicar altas concentraciones de qumicos por las
restricciones de los mercados internacionales al poder residual del o los
insecticidas.

Esta especie P. bergii de la familia Cicadidae (Hemptera), se presenta en ciertas

S
reas de la irrigacin Chavimochic en La Libertad. Es considerada como una

IA
especie fitfaga de escasa importancia econmica o plaga potencial. Los adultos

AR
son de actividad nocturna. Las ninfas se desarrollan bajo la superficie del suelo

CU
entre los 40 y 60 cm de profundidad; sin embargo se puede encontrar ninfas a 90

PE
cm de profundidad o ms. Las ninfas se alimentan de races en descomposicin y
RO
ocasionalmente se pueden alimentar de races en desarrollo (Snchez, 2011, p.
AG

57).
AS
CI

Mendoza (2005) seala que las ninfas de Proarna bergii, se alimentan de las
EN

raicillas del cultivo de esprrago; el dao del adulto lo produce la hembra al colocar
CI

sus huevos dentro de la rama de esprrago, destruye la zona medular del tejido
DE

interrumpiendo la conduccin del flujo de savia, lo que ocasiona la necrosis


CA

paulatina, de adentro hacia fuera, logrando en definitiva secar la rama (p. 26).
TE
IO

Madrigal (2001) es de la opinin que la incorporacin de agentes biolgicos para la


BL

regulacin de insectos y otros organismos plagas; se hace ms urgente como una


BI

respuesta a las restricciones cada vez ms estrictas para el uso de agroqumicos y a


las exigencias de calidad en los productos de origen agrcola y pecuario para
mercados internacionales y an para los nacionales. No menos importantes son las
exigencias en lo que tiene que ver con la proteccin del medio ambiente y la
biodiversidad dentro de la moderna concepcin del desarrollo sostenible (p. 69).

13

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Mayta (2011) considera que el control microbiano de insectos es considerado como


la utilizacin dirigida de entomopatgenos con el objeto de disminuir la poblacin
de las plagas insectiles, acta en armona con el medio ambiente, reduciendo y
mitigando la poblacin de insectos plaga. Entre los entomopatgenos se citan
bacterias, hongos, virus, protozoarios y nematodos (p. 7).

En relacin a los nemtodos entomopatgenos, se ha determinado que estos

S
pueden eliminar o mantener las plagas en niveles bajos de tal modo que no

IA
ocasionen daos econmicos a los cultivos y se les encuentra viviendo en el suelo

AR
en busca de insectos hospederos, y logrando buen desarrollo en lugares frescos,

CU
hmedos y con poco sol, constituyndose en un grupo importante en el control

PE
biolgico de insectos plaga (Zavaleta, 2009, p. 2). RO
AG

Dada la importancia econmica que est adquiriendo esta plaga, para el cultivo de
AS

esprrago en la zona de Macab Alto, y al no tener resultados positivos en el


CI

control con los mtodos utilizados, el objetivo del presente trabajo fue determinar
EN

el nivel de juveniles de Heterorhabditis spp. que presente el mayor control de


CI

Proarna bergii en esprrago, como alternativa de control biolgico que garantice


DE

seguridad, economa y permanencia, sin riesgo de acumulacin de residuos y


CA

contaminacin del ambiente.


TE
IO
BL
BI

14

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CAPTULO II

2. REVISIN DE LITERATURA:

2.1.Produccin de esprrago en el Per.

El Per es el primer pas exportador de esprrago del mundo. El

S
IA
banco Scotiabank estim que en el 2014 las exportaciones peruanas de esprragos

AR
ascenderan a US$ 570 millones. El Per es el tercer pas con mayor rendimiento

CU
por hectrea en produccin de esprragos del mundo con 11.4 toneladas mtricas

PE
por hectrea, detrs de Irn (22.9 t) y Polonia (15t), segn la Organizacin para la
RO
Alimentacin y la Agricultura (FAO) El Per exporta esprragos en las siguientes
AG

presentaciones: frescos, conservas y congelados. El 68% de las exportaciones


realizadas son esprragos frescos; 24%, en conserva; y 8%, congelados (Gestin,
AS

2014).
CI
EN

En el ao 2013, los principales departamentos productores de esprrago fueron La


CI

Libertad (49,96%) e Ica (39,85%) al contribuir con el 89,8% a la produccin total.


DE

La Red de Organizaciones Productivas Agropecuarias (REOPA) ubicada en el valle


CA

Chicama, cuenta en la actualidad con 270 hectreas de esprragos en produccin,


TE

110 asociados y 50 productores independientes que abastecen de materia prima. Sus


IO

asociados son pequeos productores de Paijn, Rzuri y Chocope en La Libertad y


BL

Reque en Lambayeque (Centro de Investigacin y Emprendimiento para el


BI

Desarrollo Integral La Libertad, 2014).

2.2.Morfologa de la planta de esprrago.

El sistema radicular en el esprrago es el rgano de fijacin, absorcin,


almacenamiento y circulacin. El 90% de su sistema radicular se ubica dentro de
los 40 cm de la superficie del suelo. Las races fibrosas y cilndricas forman una
masa radicular con mltiples raicillas, llamada corona; en el centro y arriba de ella

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se ubican las yemas que darn origen a los tallos. Las yemas al crecer darn origen,
cuando haya una gran acumulacin de sustancias de reserva, a tallos suculentos que
inicialmente no se ramifican y cuando se cosechan tiernos reciben la denominacin
de turiones. Cuando no hay acumulacin de sustancias de reserva en las races, los
tallos no sern suculentos sino delgados, una planta con mltiples brotes ser una
planta con muy pocas reservas (Delgado, 1994, p. 13-14).

S
La corona tambin puede desarrollar yemas directamente del rizoma,

IA
lateralmente a la parte central de ste, fuera de la zona de desarrollo de los grupos

AR
de yemas centrales. Estas yemas laterales se producen generalmente por daos

CU
extremos: sequias, exceso de humedad, falta de nutrientes o sustancias de reserva,

PE
cortes, etc. y sern delgadas y propensas a abrirse ms rpidamente (Delgado,
RO
1994, p. 15).
AG
AS

2.3.Plaga Proarna bergii


CI
EN

2.3.1. Ubicacin taxonmica:


CI
DE

Clase: Insecta
CA

Divisin: Neoptera
TE

Orden: Homoptera
IO

Familia: Cicadidae
BL

Tribu: Fidicinini
BI

Gnero: Proarna
Especie: Proarna bergii, Distant 1892

2.3.2. Ciclo biolgico:

El periodo de incubacin de los huevos en condiciones de campo a una


temperatura de 22,4 C y 68 % de humedad relativa (HR), es de 60,5 das durante
los meses de marzo hasta mayo. La longevidad promedio del macho es

16

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relativamente superior al de la hembra siendo de 8,5 y 7,5 das respectivamente. En


condiciones de laboratorio a 17,4 C y 72,9 % H.R., la duracin promedio de la
ninfa I y II es de 155 y 195 das, que equivalen a 5 y 6,5 meses aproximadamente
(Mendoza, 2005, p. 36).

2.3.3. Comportamiento ninfal

S
2.3.3.1.Emergencia de la ninfa I

IA
AR
La poca de emergencia est directamente relacionada a las estaciones ms

CU
clidas del ao; emergen a cualquier hora del da de preferencia en horas de la

PE
maana y tarde, naciendo aproximadamente 10 ninfas por rama por da (Mendoza,
RO
2005, p.40).
AG
AS

2.3.3.2.Desplazamiento
CI
EN

Despus de la eclosin del huevo dentro del tejido de la planta, la ninfa


CI

sale por la abertura de la oviposicin, luego cae al suelo buscando alguna grieta o
DE

abertura donde pueda ingresar y construir una galera. En la construccin de estas


CA

galeras la ninfa utiliza sus patas anteriores como palana mecnica, para la
TE

perforacin El espacio de la galera que construye no es larga solo queda un


IO

espacio suficiente para ella; pues va cerrando el camino de ingreso con el mismo
BL

desmonte que va abriendo (Mendoza, 2005, p.40-41).


BI

2.3.3.3.Alimentacin

La cigarra P. bergii en su alimentacin, es polfaga porque no solamente se


alimenta del esprrago, sino tambin de otra especies arbreas como Acacia
macranta huaranguillo y Schinus molle molle. Las ninfas se alimentan de las
raicillas del cultivo de esprrago; una ninfa para alimentarse realiza galeras hasta
encontrar una raicilla suculenta e inmediatamente construye un habitculo

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alimenticio, de pared compacta incluyendo en su interior esta raz, permaneciendo


durante un largo tiempo alimentndose de la savia de esta hasta lograr la muerte y
nuevamente vuelve a realizar la galera hasta encontrar otra raz (Mendoza, 2005,
p.41).

2.3.3.4.Distribucin espacial

S
IA
La distribucin vertical con respecto a la corona de esprrago, el I estadio

AR
llega hasta los 30 cm ubicndose por debajo de la corona, el II estadio no se

CU
encontr, el III y IV se van profundizando llegando hasta los 65 y 88 cm

PE
respectivamente mientras que la ninfa V se ubica entre los 15 y 50 cm de
RO
profundidad en la mayor parte del ao; en el mes de diciembre se observa con
AG

mayor frecuencia a la ninfa V ubicada entre los 7 y 10 cm de profundidad sobre la


AS

corona de esprrago. En cuanto se refiere a la distribucin horizontal de las ninfas,


CI

el I y III estadio se ubican hasta los 20 y 40 cm respectivamente, mientras que el IV


EN

y V estadio llegan hasta los 80 cm, distancia que coincide con la mitad del fondo de
CI

surco (Mendoza, 2005, p.42).


DE
CA

2.3.3.5.Emergencia de la ninfa V
TE
IO

Mendoza (2005) menciona que la emergencia de la ninfa V se inicia desde el mes


BL

de agosto con pocos individuos y va acrecentndose en los meses de verano hasta


BI

abril. La emergencia sucede saliendo de su habitculo, para dirigirse hacia la


superficie del suelo, dejando agujeros de 7 cm de profundidad y 1,7 cm de
dimetro. Una vez estando en la superficie busca cualquier soporte areo como
turiones, tallos, ramas y rastrojos de cosecha. Si encuentra una planta desarrollada
(1,20 m altura), sube hasta llegar al pice fijndose en una rama, y si encuentra una
soporte de madera de una choza de almacenaje de la cosecha, puede llegar a
trepar hasta los 3 m de altura. Luego la ninfa entra en un periodo de hipometabolia,

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donde paraliza todo movimiento permaneciendo as hasta que se produzca la


emergencia del adulto (p. 43).
2.3.4. Comportamiento del imago

2.3.4.1.Emergencia:

La emergencia de los adultos se realiza inmediatamente despus de

S
la emergencia de la ninfa V, dejando la exuvia sobre el soporte adherido

IA
(Mendoza, 2005, p. 43).

AR
CU
2.3.4.2.Cantos y apareamiento:

PE
RO
Los tipos de cantos producidos por la cigarra macho son de
AG

atraccin de la hembra y de alarma; ambos se producen de forma conjunta o


AS

masal, emitindose a distancias de 40 a 50 metros a la redonda, se inicia con


CI

un zumbido suave y poco a poco se va intensificando, generalmente estn


EN

ubicados uno por planta El canto de alarma ocurre cuando perciben la


CI

cercana de alguna persona o depredador cerca del cultivo, en donde se


DE

mantiene refugiados en el follaje siendo ms intensa que el canto de


CA

atraccin y solo dura pocos segundos (Mendoza, 2005, p. 44).


TE
IO
BL

2.3.4.3.Oviposicin:
BI

La hembra coloca sus huevos en el interior del tejido de una rama


de esprrago de 1,7 a 2 mm de dimetro, para lo cual se coloca en la parte
inferior de est mirando hacia arriba y levanta su ovopositor para introducir 2
mm de profundidad dentro del tejido; luego mediante contracciones
abdominales coloca 6 huevos en cada postura, dispuesto oblicuamente en
doble hilera, permaneciendo de 3 a 9 minutos. Posteriormente retira el
ovipositor y avanza 5 mm para volver a ovipositar. Finalizada cada

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oviposicin queda un astillado levantado y sobresaliente en la superficie de la


corteza de la rama; puede llegar a producir 36 posturas o incisiones por rama.
Por lo general oviposita en el tercio superior de la planta y raras veces lo hace
en el tercio medio, en este ltimo son fcilmente infectadas por hongos
fitopatgenos. La oviposicin de las cigarras ocurre generalmente en la
estacin de verano desde diciembre a febrero (Mendoza, 2005, p. 46).

S
2.3.5. Daos:

IA
AR
2.3.5.1.Oviposicion:

CU
La hembra al colocar sus huevos dentro de la rama de esprrago, destruye la

PE
zona medular del tejido interrumpiendo la conduccin del flujo de la savia, lo
RO
que ocasiona la necrosis paulatina, de adentro hacia afuera, logrando en
AG

definitiva secar la rama (Mendoza, 2005, p. 48).


AS
CI

2.3.5.2. Alimentacin:
EN

La alimentacin de las ninfas, al succionar la savia en las races, ocasiona el


CI
DE

debilitamiento general de la planta y en consecuencia baja el rendimiento de


la cosecha Los adultos tambin se alimentan al succionar la savia de los
CA

tallos del esprrago, sin embargo, este tipo de dao no ha sido tan
TE

significativo, porque no se ha observado lesiones posteriores a esta accin


IO

(Mendoza, 2005, p. 49).


BL
BI

2.3.5.3. Desplazamiento ninfal


El desplazamiento de las ninfas en el suelo logra causar un dao mecnico
en la cabellera del cultivo debido que al encontrar las races y raicillas en su
camino cortan con la lmina de la cara interna de la tibia y con la sierra
femoral del primer par de patas cavadoras (Mendoza, 2005, p.49).

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2.4. Nematodo entomopatgeno Heterorhabditis spp:

2.4.1. Caractersticas:

Madrigal (2001) describe entre las caractersticas que hacen de los

S
nematodos entomopatgenos un grupo interesante de controladores biolgicos

IA
pueden destacarse los siguientes: (p. 80)

AR
CU
- Alta virulencia y rpida accin al matar rpidamente al hospedero.

PE
- El tercer estado larval (estado infectivo) no se alimenta y esta
RO
morfolgica y fisiolgicamente adaptado para sobrevivir por largos
AG

periodos en el suelo en ausencia de su hospedero.


AS

- Los nemtodos Steinernematidae y Heterorhabditidae estn asociados


CI

con bacterias que ocasionan la muerte del hospedero.


EN

- Tienen un alto potencial reproductivo y muestran respuesta numrica con


CI

respecto al hospedero.
DE

- Pueden criarse masivamente en laboratorio.


CA

- Tienen un amplio rango de accin, aunque algunos son muy especficos.


TE

- Alta resistencia a productos qumicos y a condiciones ambientales


IO

adversas.
BL

- Tanto los nemtodos entomopatgenos como las bacterias asociadas son


BI

inocuos para humanos y animales domsticos.


- Tienen un efecto sinergistico con otros entomopatgenos (ejemplo
Bacillus thuringiensis)
- No causan dao a las plantas por ser especficos para insectos.
- Algunas especies se pueden reproducir sin el concurso del macho
(partenognesis)
- Estn exentos del requisito para su comercializacin en Europa y Estados
Unidos.

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2.4.2. Ciclo de vida de los nemtodos:

Como la mayora de los nemtodos, los Heterorhabditidos poseen un


ciclo de vida que incluye el huevo, cuatro estados juveniles (separados entre s
por mudas) y los adultos. Es decir: huevo, J1, 1ra muda; J2, 2da muda; J3

S
IA
(juvenil infectivo), 3ra muda; 4ta muda; adultos (macho y hembra) (Leucona,

AR
1996, citado por Mayta, 2011, p. 10).

CU
PE
Kaya y Stock (1997) citado por Cortes (2009) seala que en
RO
Heterorhabditis spp. todos los estados de vida, excepto los juveniles infectivos
AG

(J3), son hallados dentro del insecto-husped. Los nemtodos


AS

entomopatgenos para poder sobrevivir hace simbiosis con una bacteria que
CI

est en su interior (para Heterorhabditis, el gnero es Protorhabdus) y


EN

usualmente esta bacteria simbitica mata al insecto dentro de 48 horas (p. 5).
CI
DE

El ciclo de Heterorhabditis se inicia con el ingreso del juvenil


CA

infectivo (J3) al hospedero, dentro de este pasa al cuarto estadio y luego se


TE

convierte en una hembra hermafrodita, produce huevos de los cuales se origina


IO

la primera generacin, de aproximadamente mil nematodos entre hembras y


BL

machos. Estos se desarrollan y producen la segunda generacin, los cuales


BI

despus de 14 das emergen como juveniles infectivos del cadver a buscar un


nuevo hospedero e iniciar de nuevo el ciclo (Wang y Bedding, 1996, citado
por Mayta, 2011, p. 11).

Leucoma (1996) seala que la reproduccin ocurre dentro del cadver


del hospedante, y dependiendo del tamao del cadver, se producen de una a
tres generaciones de nemtodos antes que los nutrientes lleguen a agotarse (p.
54).

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Mayta (2011) seala que los juveniles infectivos del tercer estadio son
de vida libre, no se alimentan debido a su tracto digestivo colapsado y a la
boca y ano cerrados, posiblemente para evitar la prdida de agua o el acceso
de patgenos. Mientras estn en el suelo suspenden su desarrollo, morfologa y
fisiologa, y estn adaptados para sobrevivir por largos periodos en el suelo
cubiertos por una cutcula firme del segundo estadio. El metabolismo se
reduce al mnimo, permitiendo a estos sobrevivir por varias semanas o meses

S
(p. 11).

IA
AR
2.4.3. Comportamiento del nemtodo entomopatgeno:

CU
PE
La capacidad del nemtodo para su supervivencia, resistencia,
RO
encontrar y atacar hospederos es la clave para su utilizacin en el control de
AG

plagas con resultados favorables en campo.


AS
CI

2.4.3.1. Bsqueda y hallazgo de los hospederos


EN
CI

Los juveniles infectivos (JIs) localizan al insecto vivo hospedante


DE

usando varios mecanismos como gradientes de dixido de carbono,


CA

compuestos de la cutcula (Cortes, 2009, p. 6).


TE
IO

Segn Kaya y Stock (1997) citados por Buendia (2007), el


BL
BI

comportamiento de los JIs que esperan o que buscan a su hospedero


puede ser caracterizado como emboscadores (sentar y esperar),
intermedios y navegantes (ampliamente buscadores). Los JIs
navegantes estn representados por nemtodos que estn
constantemente buscando a los insectos hospederos en capas ms
profundas del suelo y son ms efectivos contra insectos sedentarios
que se alimentan de races (p. 13-14)

23

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2.4.3.2. Penetracin a los hospederos:

Los juveniles infectivos entran al insecto hospedero a travs de las


aberturas naturales (boca, ano y espirculos) y penetra al hemocele.

S
IA
En ocasiones, pueden penetrar tambin a travs de las reas

AR
intersegmentales (Buendia, 2007, p. 14). Por otro lado Ishibashi y

CU
Kondo (1990) citados por Cortes (2009), mencionan que el gnero

PE
Heterorhabditis sp. tiene una mayor posibilidad de penetracin en
RO
comparacin a gneros, ya que posee un diente terminal con el que
AG

raspa las reas intersegmentales de la cutcula del insecto,


facilitndole la entrada (p. 22).
AS
CI

La susceptibilidad de una especie de insecto a una especie de


EN
CI

nematodo puede aumentar o disminuir entre los estados y estadios de


desarrollo ya que los primeros estadios se alimentan activamente
DE

mientras que la alimentacin de los estadios ms desarrollados se va


CA

reduciendo. Debido a que una de las entradas para los nematodos es la


TE

boca, la actividad reducida de alimentacin hace que las larvas ms


IO

grandes sean menos susceptibles a los nematodos (Mayta, 2011, p.


BL
BI

14).

2.4.3.3. Asociacin mutualista nematodo-bacteria:

La asociacin mutualista entre los nematodos y bacterias, es nica y


altamente especfica. Los nematodos actan como vectores y protegen
a las bacterias de las condiciones ambientales del suelo que
contribuyen significativamente en la patognesis durante la liberacin

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e invasin del hospedero. Las bacterias juegan un papel nutricional


para el nematodo, al crear condiciones favorables para su desarrollo,
reproduccin y antibiosis contra otros organismos extraos (Mayta,
2011, p. 15).

Segn Cortes (2009), el JI de Heterorhabditis posee la bacteria


Photorhabdus luminecens como bacteria simbionte, se localiza en el

S
IA
esfago y en la porcin ventricular del intestino (p. 23).

AR
CU
Una vez en el hemocele los juveniles infectivos liberan la bacteria

PE
simbionte, que coloniza y rpidamente se propagan y matan al
RO
hospedero en 48 horas por septicemia letal. Los insectos muertos por
AG

este mecanismo presentan una coloracin rojo, rojo ladrillo, purpura


o rojo carmelita (Poinar, 1998 citado por Cortes, 2009, p. 23).
AS
CI
EN

La bacteria simbionte establece condiciones favorables para el


CI

desarrollo de los nematodos al producir antibiticos que previenen e


DE

inhiben el crecimiento de muchas especies de bacterias y hongos en


el cadver (Poinar, 1998 citado por Cortes, 2009, p. 24).
CA
TE

Seguidamente los nematodos se alimentan de las clulas de la


IO

bacteria y los productos de los tejidos descompuestos del hospedero


BL
BI

que sirven de nutrientes para su reproduccin. Seguidamente se


producen de dos a tres generaciones, antes que se desarrollen en
juveniles infectivos que emergen del cadver (Mayta, 2011. p. 16)

2.4.4. Ecologa de los nematodos entomopatgenos

El impacto que ejercen sobre ellos los factores biticos y abiticos es


una limitante para su comportamiento, eficacia, dispersin y supervivencia. Es

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por esto que es necesario conocer las diferentes interacciones con su medio
ambiente.

2.4.4.1. Factores abiticos

Respecto a la textura del suelo, Los JIs presentan baja sobrevivencia


en los suelos arcillosos y mayor incidencia se encuentra en suelos

S
IA
franco arenosos (Mayta, 2011, p. 18).

AR
CU
Segn Kaya (1990) citado por Mayta (2011), la humedad del suelo

PE
es considerada el factor ms importante, tiene un gran impacto sobre
RO
la capacidad de bsqueda del hospedero, la actividad infectiva de los
AG

nemtodos entomopatgenos y la variabilidad de la eficacia en el


AS

control. En suelos mojados y saturados, el movimiento de los


CI

nematodos puede ser restringido debido a la poca tensin superficial


EN

necesariamente forzosa para el movimiento y el desplazamiento de


CI

los nematodos en suelos secos, tambin puede ser restringido, debido


DE

a que los nemtodos se vuelven quiescentes o anhidro biticos (p.


CA

18).
TE
IO

Segn Kaya (1990) citado por Mayta (2011), La temperatura afecta


BL

la supervivencia de los nemtodos. Cuando estos son expuestos a


BI

temperaturas bajo 0 C y sobre los 40 C muchos mueren, pero el


efecto depende del tiempo de exposicin y de las especies.
En general la actividad de los Heterorhabditidos se da a temperaturas
de 10 a 16 C, sin embargo el rango de temperaturas vara entre
nemtodos del mismo gnero, especie y cepa (p. 18-19).

Segn Warton (1986), la aireacin en el suelo es otro factor que


afecta a los nemtodos, ya que son organismo aerobios y la baja

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disponibilidad de oxigeno puede reducir su supervivencia. El


porcentaje de oxgeno en el suelo disminuye con la profundidad y
an ms rpido en suelos arcillosos y limosos que en los arenosos y
la sobrevivencia de los nemtodos se ve afectado por los bajos
niveles de oxgeno en suelos arcillosos, suelos saturados con agua y
aquellos con alto contenido de materia orgnica (Mayta, 2011, p.
19).

S
IA
Segn Lewis (2006), los nemtodos entomopatgenos son muy

AR
sensibles a la luz del sol, especialmente a la porcin ultravioleta,

CU
siendo considerado como el factor abitico ms destructivo, que

PE
afecta la persistencia de los nemtodos y otros entomopatgenos
RO
(Mayta, 2011, p. 19).
AG
AS

2.4.4.2.Factores biticos
CI
EN

Existen factores biticos que afectan la supervivencia de los JIs,


CI
DE

como las sustancias aleloqumicas producidas por las races de las


plantas que afectan el proceso de ubicacin del hospedero. Otros
CA

competidores son los virus, hongos, bacterias que sincronizan la


TE

infeccin con los JIs, el resultado depende de los factores


IO

ambientales como la temperatura y la humedad del suelo (Kaya,


BL
BI

1990 citado por Mayta, 2011, p. 19-20).

2.4.5. Mecanismos de defensa contra los nematodos


entomopatgenos

Un insecto resiste a la infeccin de los nemtodos a travs de


mecanismos de defensa, los cuales son:

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i. Morfolgicos: En la cual la quitinosa del insecto cubre virtualmente


toda la superficie externa, constituyendo la primera lnea de la defensa
pasiva... La resistencia fsica ocurre cuando el nemtodo no puede
penetrar el tegumento del insecto hospedero(Narayanan, 2007, citado
por Mayta, 2011, p. 17).

Las larvas de los escarabajos emplean defensas morfolgicas

S
como aperturas naturales pequeas, espirculos con placas filtrantes,

IA
mandbulas con gran alcance y cerdas que impiden el ingreso de los

AR
nemtodos (Corrie y Degree, 2005, citado por Mayta, 2011, p. 17).

CU
PE
ii. De comportamiento: La resistencia del comportamiento ocurre
RO
cuando el insecto evita activamente o rechaza el nemtodo. Las larvas
AG

del escarabajo pueden evitar la infeccin limpiando nemtodos lejos


AS

de la boca, masticando (mordiendo), frotando (rasguado la cabeza) y


CI

cepillando las mandbulas con las patas y raster, tambin incluyen las
EN

excreciones salivales y anales (Corrie y Degree, 2005, citado por


CI

Mayta, 2011, p. 17).


DE
CA

iii. Fisiolgicos: Bajo este mecanismo est: el pH alto del intestino,


TE

presencia de proteasas; que son perjudicial a los JIs de


IO

Heterorhabditis. La resistencia fisiolgica a la infeccin implica la


BL

destruccin del nematodo por las enzimas digestivas en la zona


BI

alimenticia, la melanizacin y encapsulacin del nematodo dentro del


hemocele (Corrie y Degree, 2005, citado por Mayta, 2011, p. 17).

2.4.6. Uso de nemtodo en el control biolgico:

Madrigal (2001) seala que los nemtodos que se han mostrado ms


importantes en el control biolgico de plagas corresponden a las familias
Steinernematidae y Heterorhabditidae, cuyos miembros estn mutualistamente

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asociados con bacterias de los gneros Xenorhabdus y Protorhabdus que


ocasionan septicemia y otros tipos de afecciones letales en sus hospederos.

Los nemtodos entomopatgenos presentan un amplio rango de


hospederos que incluye a la mayora de los rdenes y familias de insectos. Las
familias Heterorhabditidae y Steinernematidae son usadas principalmente en
cultivos agrcolas, en aquellos que poseen un estadio susceptible en el suelo o

S
en la superficie del mismo (Sanchez y Rodriguez, 2007, p. 80).

IA
AR
Se han desarrollado investigaciones empleando a Heterorhabditis sp.

CU
sobre el control de plagas como Cosmopolites sordidus en cultivos de banano,

PE
Diaprepes abbreviatus y Phyllophaga spp. en caa de azcar, Hypotenemus
RO
hampey en caf, entre otros (Sanchez y Rodriguez, 2007, p. 80).
AG
AS

Se conocen antecedentes de control sobre plagas agrcolas como:


CI

polilla taladradora de las grosellas Synanthedon tipuliformis Clerck


EN

(Lepidoptera: Sesiidae), polilla de la papa Tecia solanivora Povoni


CI

(Lepidoptera: Gelechiidae) en Venezuela, en California USA se utilizan para


DE

el control de Diaprepes abbreviatus, polilla de los pistachos Amyelois


CA

transitella y Gryllotalpa hexadactyla. (Sanchez y Rodriguez, 2007, p. 81).


TE
IO

En el Per existen reportes de aislamientos nativos en la zona de Junn


BL

y su rol en el control del gorgojo de la papa Premnotrypes suturicalus, en la


BI

zona central Caete (Lima) es otro de los reportes parasitando larvas de


Bothinus sp y Anomala sp. (Alva, 2008, p. 30)

29

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CAPITULO III

3. MATERIALES Y MTODOS:

3.1. REA EXPERIMENTAL:

3.1.1. Ubicacin del rea experimental:

El presente trabajo se desarroll durante los meses de julio a noviembre

S
del 2014 y se realiz en el fundo Los Sauces ubicado en el sector Macab

IA
Alto, distrito de Rzuri, provincia de Ascope en la regin de La Libertad y

AR
en el Laboratorio de Sanidad Vegetal de la Escuela de Agronoma de la

CU
Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de Trujillo.

PE
RO
3.2. MATERIAL EN ESTUDIO:
AG
AS

3.2.1. Material biolgico:


CI
EN

a. Cultivo de esprrago var. UC-157 F2, conducido para cosecha en


CI

verde de 12 aos de sembrado y con riego por gravedad. La etapa


DE

fenolgica del esprrago cuando se desarroll la investigacin fue de


CA

crecimiento vegetativo.
TE

b. Larvas de Galleria mellonella utilizadas para la produccin de los


IO

nemtodos entomopatgenos.
BL

c. Juveniles infectivos del nemtodo entomopatgeno Heterorhabditis


BI

spp. aplicados en el campo para el control de la plaga.


d. Ninfas de Proarna bergii.

30

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3.3. MATERIALES:

3.3.1. Material de campo:

Palana
Bolsas plsticas
Depsitos plsticos

S
Wincha

IA
Estacas

AR
Rafia

CU
Letreros

PE
RO
AG

3.3.2. Insumos:
AS

Larvas de Galleria mellonella


CI

Nematodos Gnero Heterorhabditis


EN
CI
DE

3.3.3. Materiales y equipos de laboratorio:


CA

a. Materiales:
TE
IO

Pinzas
BL

Bistur
BI

Placas Petri
Pizetas
Pipetas
Guardapolvo
Depsitos plsticos
Tela porosa
Papel toalla
Leja

31

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Tamiz de 38 micras
Formol

b. Equipos:

Estereoscopio
Microscopio binocular

S
IA
AR
3.3.4. Materiales de escritorio:

CU
Papel bond A4

PE
Libreta de apuntes RO
Lpiz
AG

Memoria USB
AS

Cmara Fotogrfica
CI

Computadora
EN

Calculadora
CI
DE

3.3.5. Servicios:
CA
TE

Internet
IO

Transporte
BL

Impresin
BI

Empastado

32

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3.4. MTODOS:

3.4.1. Tipo de diseo:

Se emple el Diseo de Bloques Completos al Azar (DBCA) con 3


tratamientos y 3 repeticiones por tratamiento. Para determinar las diferencias
estadsticas entre tratamientos, se realiz el Anlisis de Varianza para cada variable;

S
IA
as como la Prueba de Tukey al 1% de significancia, para comparar los tratamientos

AR
en estudio con el Testigo, y determinar el mejor tratamiento.

CU
PE
3.4.2. Tratamientos (T): RO
AG

Tabla 3.1 Descripcin de los tratamientos


AS
CI

DESCRIPCIN DE
EN

TRATAMIENTO CLAVE
TRATAMIENTOS
CI

Testigo T0 Sin aplicacin


DE
CA

Tratamiento 1 T1 60 000 JI/m lineal


TE

Tratamiento 2 T2 120 000 JI/m lineal


IO
BL
BI

33

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3.4.3. Descripcin del campo experimental:

Parcela:
Ancho: 5.7 m
longitud: 15 m
rea: 85.5 m2

IA
Bloques:

AR
Longitud: 17.1 m

CU
Ancho: 15 m

PE
rea: 256.5 m2
RO
Dist. entre bloques: 2 m
AG

rea experimental:
AS

Longitud: 17.1 m
CI
EN

Ancho: 49 m
CI

rea: 837.9 m2
DE
CA
TE
IO
BL
BI

34

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3.4.4. Croquis del rea experimental:

S
IA
AR
CU
PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

35

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3.5. PROCEDIMIENTO DE LA INVESTIGACIN:

3.5.1. Delimitacin del rea experimental

De acuerdo al croquis del rea experimental, se procedi a delimitar


los bloques y unidades experimentales correspondientes a cada tratamiento con el
uso de estacas y rafia y a la identificacin de estos mediante el uso de carteles

S
con la clave del tratamiento correspondiente.

IA
AR
CU
PE
3.5.2. Nivel poblacional inicial de la plaga
RO
AG

Se muestre el rea de cada unidad experimental para conocer el


nivel poblacional inicial de la plaga, para lo cual se hizo calicatas de 1 x 1 x
AS

0.7 m. al pie de las plantas desde el lomo del surco hasta la profundidad de la
CI
EN

corona examinando cuidadosamente el suelo extrado y se cont el nmero


CI

promedio de ninfas de Proarna bergii.


DE

3.5.3. Obtencin de los nemtodos entomopatgenos: Heterorhabditis


CA

spp.
TE
IO


BL

Material a infestar
BI

Se procedi a infestar larvas de Galleria mellonella del ltimo


estadio, se colocaron 300 larvas en una caja de plstico N5 (taper)
con papel toalla en la base.

Conteo de nemtodos e infestacin:

De la muestra total con nemtodos entomopatgenos, se sac


alcuotas de 10 L con la micro pipeta, se coloc en una placa Petri y

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se contaron los nematodos activos, este conteo se repiti 3 veces para


obtener un promedio. De acuerdo al volumen total, por regla de tres
simple se calcul el nmero de nemtodos de la muestra.

Se prepar una suspensin en relacin a 20 juveniles infectivos


(JI) / larva de Galleria mellonella. Como se coloc 300 larvas por
taper se requiere una suspensin de 6000 juveniles en estado infectivo

S
IA
los cuales fueron aplicados en 5 mL de agua con formol al 0.2 %. Se

AR
asperj la suspensin con nematodos infectivos sobre el papel y las

CU
larvas. Se coloc la tapa de plstico y se dej por 2 das, tiempo que

PE
las larvas mueren por septicemia y se tornan de un color rojizo por
RO
efecto de la bacteria Protorhabdus spp.
AG

Oreo y cosecha de nemtodos:


AS
CI

Dos das despus de la infestacin se procedi a cambiar la


EN

tapa de plstico por una tapa de papel o tela, y dej por 3 das. Las
CI

larvas afectadas se desinfestaron con leja al 0.2% por 2 minutos y


DE

luego se enjuagaron con abundante agua con formol al 0.2%.


CA

Se acondiciono las larvas desinfestadas en cmara White (caja


TE

plstica con una lmina de 1 cm de agua con formol al 0.2%), y se


IO

sell con tela. Despus de 10 a 13 das de la infestacin empezaron a


BL

emerger los nemtodos en estado juvenil.


BI

Con la pizeta se agreg agua con formol sobre las larvas, luego
la suspensin de nemtodos del fondo de la placa se pas por el tamiz
de 38 micras y se recolect en vaso de plstico. Se realiz un conteo
de los nemtodos juveniles en la suspensin.

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3.5.4. Aplicacin de nemtodos al cultivo

Se aplic con una mochila de palanca los juveniles infectivos, en una


suspensin de 20 litros y en las cantidades indicadas de acuerdo a cada
tratamiento por unidad experimental. Esta aplicacin se realiz en tres
oportunidades con una frecuencia semanal.

S
IA
3.6. CARACTERSTICAS EVALUADAS:

AR
CU
3.6.1. Porcentaje de mortalidad

PE
RO
Se determin en relacin al nmero de ninfas por metro lineal, para lo
AG

cual 30 das despus de cada aplicacin, se evalu en el surco central de


AS

cada unidad experimental 1 metro lineal ubicado al azar. En esta rea se


CI

hizo una calicata con dimensiones de 1 x 1 x 0.7 m. y se colect todas las


EN

ninfas vivas y muertas que se encontraron. Las ninfas colectadas se


CI

contaron y observaron detenidamente para determinar si hay algn


DE

impacto como cambio de color y /o menor movimiento.


CA
TE

3.6.2. Patogenicidad
IO

Para saber con exactitud si las ninfas de P. bergii que se obtuvieron de


BL

las evaluaciones fueron realmente afectadas por los nemtodos


BI

entomopatgenos aplicados, se llev las ninfas al laboratorio para


procesarlas empleando dos mtodos diferentes:

3.6.2.1. Recuperacin del entomopatgeno en suelo estril:

Se llen arena en 9 recipientes de vidrio, luego se esterilizaron en estufa


a 120C por 90 minutos. Una vez fra la arena se verti en 9 depsitos o

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baldes plsticos descartables de 1 kilo de capacidad hasta la mitad, luego


se distribuy en los envases todas las ninfas de P. bergii colectadas de
cada tratamiento despus se complet con la arena restante.

Se humedeci la arena y se tap con tela porosa; pasado 15 das se


observaron las ninfas de cada tratamiento para determinar si tenan algn
cambio de color; y tambin se observ en el estereoscopio la presencia de
nematodos entomopatgenos.

S
IA
Los nemtodos observados en cada tratamiento fueron colectados con

AR
ayuda de un tamiz, luego observados al microscopio, se tom una

CU
alcuota con 800 nemtodos en estado infectivo y se aplic a 20 larvas de

PE
Galleria mellonella y se evalu el porcentaje de mortalidad.
RO
AG

3.6.2. 2. Mtodo del trampeo:


AS
CI
EN

Se recolect suelo del punto de muestreo en los primeros 20 a 25 cm de


CI

cada unidad experimental. Se verti el suelo de cada tratamiento en


DE

depsitos plsticos (balde descartable de 1 L) hasta de su capacidad; se


CA

coloc 5 larvas sanas de Galleria mellonella en cada depsito y se las


TE

cubri con una pequea capa de suelo. Finalmente se tap con sus
IO

respectivas tapas plsticas y se volte los depsitos boca arriba. Pasado


BL

una semana se observ si presentaban colocacin rojiza que indica la


BI

presencia de nematodos entomopatgenos.

39

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CAPITULO IV
RESULTADOS

4.1. RESULTADOS

4.1.1. Porcentaje de mortalidad:

En el grfico 1 se muestra los datos correspondientes al porcentaje de mortalidad

S
IA
de ninfas de Proarna bergii obtenido en cada tratamiento en las diferentes

AR
evaluaciones realizadas durante la conduccin del experimento.

CU
PE
20.00 RO
18.00 17.32
AG

16.00 15.74
15.00
AS

14.00
CI
PORCENTAJE

12.00
11.91
EN

10.82
10.00 To
CI

9.58
8.00 T1
DE

T2
6.00
CA

4.00
TE

2.00
0.00 0.00 0.00
IO

0.00
BL

1 2 3
EVALUACIONES
BI

Figura 4.1 Porcentaje de mortalidad de ninfas de P. bergii

40

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Tabla 4.1: ANVA de los datos de la primera evaluacin sobre la


mortalidad de ninfas de P. bergii con Heterorhabditis spp.

F.V S.C. G.L. C.M. F p


Bloques 0.07560324 2 0.03780162 0.9970555 0.44531817
Tratamiento 2.3154848 2 1.1577424 30.5366131 0.00377846
Error 0.15165302 4 0.03791326
Total 2.54274106 8

S
IA
AR
CU
C.V.= 5.79%

PE
RO
AG

Tabla 4.2: Prueba de Tukey de la primera evaluacin del porcentaje de mortalidad de


AS

ninfas de P. bergii con la aplicacin de dos concentraciones de


CI

Heterorhabditis spp. en esparrago UC 157 F2. Ascope, La Libertad.


EN
CI

Media Grupos
Tratamientos
DE

(valores probit) Homogneos


T2 3.8800 a
CA

T1 3.5358 a
TE

T0 2.6740
IO
BL
BI

41

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Tabla 4.3: ANVA de los datos de la segunda evaluacin sobre la mortalidad de


ninfas de P. bergii con Heterorhabditis spp.

F.V S.C. G.L. C.M. F p


Bloques 0.05539638 2 0.02769819 0.84545158 0.49403486
Tratamiento 3.27389542 2 1.63694771 49.9657175 0.00148124

S
Error 0.13104567 4 0.03276142

IA
AR
Total 3.46033747 8

CU
PE
C.V.= 5.14 % RO
AG
AS
CI

Tabla 4.4: Prueba de Tukey de la segunda evaluacin respecto al porcentaje de


EN

mortalidad de ninfas de P. bergii con la aplicacin de dos concentraciones


CI

de Heterorhabditis spp. en esparrago UC 157 F2. Ascope, La Libertad.


DE

Media Grupos
CA

Tratamientos
(valores probit) Homogneos
TE

T2 4.0329 a
IO

T1 3.8546 a
BL

T0 2.6736
BI

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Tabla 4.5: ANVA del efecto de los tratamientos sobre la mortalidad de ninfas de P.
bergii con Heterorhabditis spp. en la tercera evaluacin.

F.V S.C. G.L. C.M. F p


Bloques 0.04650457 2 0.02325229 0.96872611 0.45385772
Tratamiento 3.3422065 2 1.67110325 69.6207412 0.0007798

S
Error 0.0960118 4 0.02400295

IA
AR
Total 3.48472288 8

CU
PE
C.V.= 4.4% RO
AG
AS
CI

Tabla 4.6: Prueba de Tukey de la tercera evaluacin respecto al porcentaje de


EN

mortalidad en ninfas de P. bergii con la aplicacin de dos


CI

concentraciones de Heterorhabditis spp. en esparrago UC 157 F2 en


Ascope, La Libertad.
DE
CA
TE
IO

Media Grupos
Tratamientos
BL

(valores probit) Homogneos


BI

T2 4.0822 a
T1 3.8058 a
T0 2.6736

El anlisis de varianza de las tres evaluaciones correspondientes a la


variable porcentaje de mortalidad de ninfas de P. bergii (Tabla 4.1, tabla
4.3 y tabla 4.5), muestran diferencia estadstica significativa para la

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fuente de variacin concentracin de Heterorhabditis spp. a un nivel de


confianza del 95%, por lo que se concluye que los tratamientos del
experimento producen un efecto diferente sobre la mortalidad de ninfas
de P. bergii

Al realizar la prueba de Tukey en las tres evaluaciones (tabla 4.2, tabla

S
4.4 y tabla 4.6) se observa que el T2 (120 000 JI/m lineal) y T1 (60 000

IA
JI/m lineal) conforman un mismo grupo sin diferencia estadstica entre

AR
ellos y difieren significativamente con el testigo (T0) donde no se

CU
aplic nematodos entomopatgenos .

PE
RO
AG

4.1.2. Patogenicidad
AS
CI

4.1.2.1. Recuperacin del entomopatgeno


EN
CI

Los nematodos recuperados de las ninfas de Proarna bergii, procedentes


DE

de los diferentes tratamientos del rea experimental no produjeron


CA

infeccin a las larvas de Galleria mellonella.


TE
IO
BL

4.1.2.2. Mtodo del trampeo


BI

En la tabla 4.7se presenta el promedio del porcentaje de larvas de Galleria


mellonella que fueron afectadas por los nematodos entomopatgenos
presentes en el suelo procedente del rea donde se aplic los tratamientos.
Aqu, podemos observar que en los tratamientos T1 y T2 se obtuvo 42%
y 60% respectivamente de larvas de G. mellonella afectadas por los
nemtodos del genero Heterorhabditis.

44

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Tabla 4.7: Promedio de larvas de G. mellonella afectadas por Heterorhabditis


spp. mediante mtodo de trampeo.

Larvas de G. mellonella
Tratamientos Evaluadas Promedio de Afectadas Porcentaje de
promedios
(3 repeticiones) (3 repeticiones) (3 repeticiones)

T0 5 0 0%

S
IA
AR
T1 5 2.1 42 %

CU
T2 5 3 60 %

PE
RO
AG
AS
CI
EN
CI
DE
CA
TE
IO
BL
BI

45

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4.2. DISCUSION:

4.2.1. Porcentaje de mortalidad

Los porcentajes de mortalidad obtenidos en esta investigacin con los


tratamientos T1 (10.77%) y T2 (16.02%) se encuentran en el rango de

S
IA
mortalidad obtenido por Quintero (2003), sobre larvas del tercer estadio

AR
de Phyllophaga menetriesi utilizando dosis de 7000 y 10000 juveniles

CU
infectivos ( JIs) de Heterorhabditis bacteriophora/larva; donde obtuvo

PE
mortalidades comprendidas entre 15 y 30 % respectivamente.
RO
Quintero et al., (2004) al aplicar nemtodos entomopatgenos nativos del
AG

genero Heterorhabditis para el control de adultos de la broca del caf


AS

Hypothenemus hampei (Ferrari) obtuvo un 28.58%


CI

Los porcentajes de control obtenidos en esta investigacin, si bien se


EN

encuentran entre los rangos obtenidos por otros investigadores, para el


CI

control de la plaga resultan insuficientes. Probablemente el bajo efecto


DE

se deba a que los nemtodos entomopatgenos en el suelo son


CA

afectados por factores abiticos adversos entre los cuales la falta de


TE

humedad del suelo, al respecto Kaya (1990) citado por Mayta (2011),
IO

refiere que la humedad del suelo es el factor ms importante en la


BL

capacidad de bsqueda y la actividad infectiva del nemtodo (p. 18).


BI

Por otro lado, cuando se da el riego por gravedad en el cultivo de


esprrago se presenta condiciones de saturacin del suelo lo que afecta a
los nemtodos, tal como lo menciona Alva (2008), ya que los nematodos
son organismos aerbicos y la baja disponibilidad de oxigeno puede
reducir su supervivencia.

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Bhatnagar (2004) citado por Mayta (2011), seala que el efecto de los
nematodos entomopatogenos est influenciado por diversos factores
como metodologa utilizada en el ensayo, especie o strains, grado de
atraccin de los JIs frente a los hospederos, la rapidez de los nemtodos
para la invasin del hospedero, la dosis y tiempo requerido por el
complejo nemtodo bacteria para matar al hospedero y el tiempo
necesario para la propagacin del nemtodo dentro de cuerpo del

S
hospedero, especie del hospedero, tamao, estado larval y mecanismos

IA
de defensa que presentan (p. 45)

AR
CU
Las ninfas de Proarna bergii encontradas en el campo en la mayora eran

PE
de los ltimos estadios, probablemente su estado avanzado de desarrollo
RO
genere una mayor resistencia a la infeccin del nematodo ,como lo seala
AG

Mayta (2011), quien refiere que la resistencia de los insectos se debe


principalmente a dos factores; la edad, como resultado del mejoramiento
AS

de la resistencia natural y los factores inmunolgicos que juegan un rol


CI
EN

importante, de tal modo que en los estados iniciales del hospedero la


CI

respuesta de los anticuerpos ser ms baja frente a una invasin por


DE

nemtodos que en los estados ms desarrollados.


CA

Ishibashi y Kondo (1990) citado por Mayta (2011), indicaron que algunas
TE

caractersticas morfolgicas, fisiolgicas y mecanismos de defensa del


IO

insecto hospedero dificultan la penetracin de los JIs de los nematodos


BL

entomopatgenos, lo que explicara que a mayor tiempo de evaluacin se


BI

observ mayor control. En las larvas ms grandes como T. molitor, larvas


de cerambicidos y larvas de S. frupiderda el mayor porcentaje de
mortalidad es a las 96 horas, en tanto que en larvas de E. postfaciatus, G.
mellonella, A. fraterculus, P. opercilella y Prodiplosis sp., la mayor
mortalidad se observa a las 48 horas (p. 55)

47

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4.2.2. Patogenicidad

Buenda (2007), menciona que la patogenicidad no depende solo del


organismo, sino tambin, de otros factores como el medio ambiente,
estado de desarrollo y tamao del husped. Las ninfas de Proarna bergii
son de mayor en tamao en comparacin con las larvas de G. mellonella
que se utiliza para la produccin de nemtodos, por lo que la produccin

S
IA
de nemtodos dentro de P. bergii es diferente. Caicedo (2004) citado por

AR
Buenda (2007), al respecto explica que la eficacia de los nemtodos

CU
entomopatgenos difiere significativamente en el control de una especie a

PE
otra de insecto debido a la tasa de penetracin de los JIs al insecto es
RO
variable segn el husped, al igual que el tiempo de liberacin de la
AG

bacteria simbitica y el grado de virulencia de la misma para causar la


muerte del insecto (p. 38). Lo expresado por Buenda y Caicedo explicara
AS

porque los nematodos obtenidos de las ninfas de P. bergii no tienen la


CI
EN

misma capacidad de virulencia que los aplicados al suelo cuya


CI

patogenicidad fue comprobada mediante la tcnica del trampeo


DE
CA
TE
IO
BL
BI

48

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CAPITULO V

CONCLUSIONES

El control expresado en promedio de porcentaje de mortalidad de ninfas de


Proarna bergii en esprrago UC 157 F2, utilizando el nemtodo entomopatgeno
del gnero Heterorhabditis fue del 10.8 %(T1) y 16% (T2) respectivamente.

S
IA
AR
Los tratamientos T1 y T2 no mostraron diferencia estadsticas significativas, por

CU
lo que se concluye que la aplicacin de 60 000 JIs/m lineal y 120 000 JIs/m

PE
lineal de Heterorhabditis spp. alcanzaron el mismo efecto.
RO
No hubo infeccin en larvas de G. mellonella cuando se les infesto con los
AG

nemtodos recuperados de ninfas afectadas de P. bergii tradas de campo.


AS
CI
EN

Mediante el mtodo del trampeo utilizando suelo donde se aplic los tratamientos
CI
DE

T1 y T2, se obtuvo 42% y 60% respectivamente de mortalidad de larvas de G.


mellonella comprobndose as que el nematodo entomopatgeno del gnero
CA

Heterorhabditis se encontraba establecido en el rea experimental.


TE
IO
BL
BI

49

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CAPITULO VI

RECOMENDACIONES

S
Repetir la investigacin en campos de produccin de esparrago conducidos con

IA
sistema de riego por goteo para tener un mejor control de los factores abiticos que

AR
afectan la eficiencia de los nematodos entomopatgenos.

CU
PE
RO
Utilizar otra metodologa de aplicacin del nemtodo en el cultivo de esprrago,
AG

que garantice eficiencia, bajos costos de aplicacin, mejor control de la plaga y


mayor supervivencia del nemtodo.
AS
CI
EN

Aplicar una mayor concentracin de nemtodos entomopatgenos del gnero


CI

Heterorhabditis spp. para lograr incrementar la mortalidad de ninfas de Proarna


DE

bergii dist. en esprrago.


CA
TE
IO
BL
BI

50

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CAPITULO VII

7.1. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Alva, E. 2008. Tesis: Control biolgico de las plagas: parasitoides, predadores


y entomopatgenos. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias
Biologicas. p. 30.

S
Buendia, O. 2007. Tesis: Efectividad del nemtodo Heterorhabditis sp. en la

IA
mortalidad de Galleria mellonella L. bajo condiciones de laboratorio.

AR
Universidad Nacional Agraria La Molina, Facultad de Agronoma. p. 13-14.

CU
Cortes, C. 2009. Tesis: Actividad entomopatogena de Beauveria bassiana,

PE
Metarhizium anisopliae y Heterorhabditis sp sobre Prodiplosis longifila
RO
(Gagn) en condiciones de campo y laboratorio. Universidad Nacional de
AG

Trujillo. Facultad de Ciencias Biolgicas. p. 5-23


AS

Delgado F. 1994. El Cultivo del Esprrago. Proyecto TTA INIAA. p. 13-15


CI

Kaya, H. K. and Stock. S.P. Techniques in insect nematology, in: manual of


EN

techniques in insect Pathology. L. A. Lacey, ed. Academic Press. London.


CI

1997.
DE

Leucona, R. 1996. Microorganismos patgenos e mpleados en el control


CA

microbiano de insectos plaga. BB. AA. Edit. Roberto E. Leucona editor.


TE

Argentina. p. 54
IO

Madrigal, A. 2001. Fundamento de Control Biologico de plagas, Universidad


BL

Nacional de Colombia sede Medelln, Facultad de ciencias, 1 Edicin.


BI

Mayta, S. 2011. Tesis: Patogenicidad de Hterorhabditis sp. y algunos hongos


entomopatgenos en Anomala testaceipennis Blanchard, 1850 (Coleoptera
Scarabaeidae) bajo condiciones de laboratorio. Universidad Nacional Agraria
La Molina, Escuela de Post Grado. p. 7-19
Mendoza, J. 2005. Tesis: Morfo-biologa y algunos aspectos del comportamieto
de la cigarra Proarna bergi Dist. (Homoptera: Cicadidae) en el cultivo de
esprrago, Alto Moche, Trujillo, Per. Universidad Nacional de Trujillo,
Facultad de Ciencias Biolgicas. p. 26-49

51

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ANEXOS
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Tabla 9. Ninfas de P. bergi por tratamiento en cada evaluacin realizada

1EVAL bloque1 bloque2 bloque3 PROMEDIO


T0 76 73 91 80
T1 73 63 83 73
T2 65 63 76 68

2EVAL bloque1 bloque2 bloque3 PROMEDIO

S
T0 68 80 87 78

IA
T1 57 68 82 69

AR
T2 58 67 73 66

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PE
3EVAL bloque1 bloque2 bloque3 PROMEDIO
RO
T0 68 75 88 77
T1 61 63 82 69
AG

T2 59 61 71 64
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Figura 2. Adulto de Proarna bergii en el campo.

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Figura 3. Dao de posturas de hembra de Proarna bergii.


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Figura 4. Conteo de nemtodos Heterorhabditis para la aplicacin en campo.

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Figura 5. Medicin de concentracin del nemtodo Heterorhabditis para su aplicacin en


campo.
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Figura 6. Aplicacin al suelo del nemtodo Heterorhabditis con ayuda de


una mochila en el cultivo afectado por la plaga Proarna bergii.

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Figura 7. Calicata realizada para la evaluacin y recoleccin de ninfas de Proarna


bergii.
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Figura 8. Ninfas de Proarna bergii tradas de campo y colocadas en suelo estril para
comprobar si presentan el nemtodo entomopatgeno.

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Figura 9. Ninfas de Proarna bergii en laboratorio despus de 15 das recolectadas de


campo.
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Figura 10. Ninfas de Proarna bergii afectadas con el nemtodo Heterorhabditis.

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Figura 11. Presencia del nemtodo Heterorhabdtis en cadver de Proarna bergii.
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Figura 12. Larvas de Galleria mellonella infestadas con nemtodos recuperados de los
cadveres de Proarna bergii.

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Figura 13. Nematodos emergidos del cadver de Proarna bergii.
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