28/09/2017

ENZIMAS

Enzimas
Son protenas simples o conjugadas que
actan como biocatalizadores en las
reacciones bioqumicas, es decir aumentan
las velocidades de las reacciones sin ser
consumidas en ellas, por lo que son
reutilizables.
Sin embargo, a diferencia de los
catalizadores inorgnicos, no son estables y
deben reemplazarse constantemente.

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Grupo prosttico: Compuestos

orgnicos (de naturaleza no proteica) o
un in unido covalentemente a la enzima
y que es necesaria para la accin
enzimtica.
Coenzima: Molcula orgnica (no
proteica) que se une dbilmente a la
enzima (por enlaces e interacciones
diferentes a los covalentes) y que es
necesaria para la accin enzimtica.

Apoenzima o apoprotena: porcin

proteica de la enzima, es decir aquella
que esta constituida exclusivamente por
aminocidos.
Holoenzima: Corresponde a la
composicin global de la enzima, es
decir, a la aponenzima ms el grupo
prosttico, o bien la apoenzima ms la
coenzima, etc. La holoenzima es la forma
activa y completa de la enzima.

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Cofactor: Cualquier componente

qumico adicional a la enzima requerida
por esta para ser activa. Generalmente
son uno o ms iones inorgnicos
(llamados por algunos autores como
activadores) o bien, una molcula
orgnica compleja como las coenzimas,
o bien a derivados vitamnicos. Algunas
enzimas requieren de ambos.

Zimgenos: Proenzimas o preenzimas

son formas inactivas de la enzima que
requieren de la eliminacin de un
segmento de la molcula para dejar al
descubierto el sitio activo. La eliminacin
del fragmento es por accin de
proteasas o bien con un pH especfico.

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Isoenzimas: Formas alternativas de una

misma enzima, que difieren en la
composicin de algunos aminocidos,
pero que catalizan una misma reaccin.

Sitio activo: Regin especfica de la

enzima que es ocupada por el sustrato,
este interacciona con la enzima
mediante enlaces dbiles; en este sitio
ocurre la activacin del sustrato y se
realiza la reaccin.

Sitio alostrico
La enzima tiene un sitio activo que es donde
lleva a cabo la reaccin enzimtica, en este
sito estn los grupos funcionales del enzima
que hacen la reaccin.
El sitio alostrico esta aparte o cerca del sitio
de accin y es un lugar donde se le puede
unir otra sustancia, que impide o incrementa
la velocidad de la reaccin enzimtica, las
molculas que activan o disminuyen la
actividad de la enzima.

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Las enzimas son protenas

Catalizan reacciones qumicas necesarias
para la sobrevivencia celular
Sin las enzimas los procesos biolgicos
seran tan lentos que las clulas no podran
existir.
Las enzimas pueden actuar dentro de la
clula , fuera de sta.

S ES
E + S EP E + P
ES

E E E E

La enzima disminuye la energa de

activacin
Sin enzima
Con enzima

La Ea de la hidrlisis de la urea
baja de 30 a 11 kcal/mol con la
E+S accin de las enzimas, acelerando
la reaccin 1014 x
El aumento de temperatura
necesario para producir la reaccin
E+P no catalizada seria de 529C
Tiempo de la reaccin

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Enzima - Catalizador
Tanto la enzima como el catalizador
aceleran la velocidad de una reaccin
qumica.
Una enzima puede transformar 1000
molculas de sustrato/ segundo
Las enzimas tienen 3 propiedades que los
catalizadores NO tienen
Especificidad por el sustrato
Se inactivan por desnaturacin
Pueden ser reguladas

Las enzimas se unen a los reactivos

(sustratos) reduciendo la energa de
activacin

Cada enzima tiene una forma nica

con un sitio o centro activo en el que
se une al sustrato

Despus de la reaccin, enzimas y

productos se separan.

Las molculas enzimticas no han

cambiado despus de participar en la
reaccin

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Las enzimas cumplen su papel cataltico

gracias a:
Fijacin estereoqumica del substrato
Transformacin cataltica del mismo

En ambas funciones participan:

Cadenas laterales de los aminocidos

Grupos o molculas no proteicas:
Grupos prostticos
Iones metlicos
Cofactores

Los siguientes hechos:

Especificidad de la reaccin enzimtica
Carcter heterogneo de la catlisis enzimtica

Nos llevan a postular la existencia de un Centro

Activo en la molcula de enzima, capaz de:

Fijar especficamente al substrato

Transformarlo catalticamente.

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Enzima

Sustrato

Sitio activo

La unin del sustrato es muy

especfica

Complementariedad geomtrica
Complementariedad de cargas, uniones
inicas
Modelos:
Encaje inducido
Llave cerradura.
Estado de transicin

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Teoras de la accin enzimtica

Modelo de Llave y Cerradura
Substrato y enzima se acoplan de forma
estereospecfica,de la misma manera
que una llave se ajusta a su cerradura.
Modelo aceptado durante mucho tiempo;
hoy se considera insuficiente al no
explicar algunos fenmenos de la
inhibicin enzimtica

Teoras de la accin
enzimtica
Modelo de Ajuste Inducido
Tanto la enzima como el substrato
sufren una alteracin en su estructura
por el hecho fsico de la unin.
Est mucho ms de acuerdo con todos
los datos experimentales conocidos
hasta el momento.

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Teoras de la accin enzimtica, 3

Estabilizacin del Estado de Transicin

La teora del Ajuste Inducido se ampla en la actualidad

definiendo la accin enzimtica como

Segn lo cual, el Centro Activo enzimtico es en realidad

complementario no al substrato o al producto, sino al
estado de transicin entre ambos.

Una enzima puede unir dos sustratos

en su sitio activo

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Clasificacin y
nomenclatura de enzimas

Clasificacin y nomenclatura
Nombre sistemtico: Grupo transferido

ATP: hexosa fosfotransferasa

Donador Aceptor Tipo de reaccin catalizada

Grupos
Nmero Enzyme Commission:
qumicos
Enzyme EC 2.7.1.1 Enzimas
Comission Subgrupo
Grupo

Nombre comn (sustrato+asa): Hexokinasa

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Clasificacin y nomenclatura

Clasificacin de enzimas por Grupos

EC 1.x Oxidorreductasas
EC 2.x Transferasas
EC 3.x Hidrolasas
EC 4.x Liasas
EC 5.x Isomerasas
EC 6.x Ligasas

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, en que tomos de
oxigeno hidrogeno son trasladados entre molculas:

Ared + Box Aox + Bred

AH2 + B A + BH2

En las reacciones redox, siempre tienen que estar presentes a

la vez el aceptor y el dador electrnico.

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas

Nombre: Dador:Aceptor oxidorreductasa

b-D-Glucosa : O2 1-oxidorreductasa EC 1.1.3.4

Dador Aceptor

Nombre comn:
Glucosa oxidasa

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 1: Oxidorreductasas
Nomenclatura del subgrupo en oxidorreductasas:
EC 1.1.x - Deshidrogenasas
EC 1.2.x - Oxidasas
EC 1.3.x - Peroxidasas
EC 1.4.x - Oxigenasas
EC 1.5.x - Hidroxilasas
EC 1.6.x - Reductasas
etc.
Aplicaciones: Ensayos de diagnostico clnico (glucosa oxidasa y colesterol oxidasa
Deslignificacin Bioblanqueamiento

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Catalizan reacciones de transferencia de tomos
grupo de tomos entre molculas:

A-X + B A + B-X

Dador: Aceptor Grupo transferido - transferasa

ATP: D-Hexosa Fosfotransferasa EC 2.7.1.1

Nombre comn: hexokinasa

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 2: Transferasas
Clasificacin de subgrupo de las transferasas:
EC 2.1.x - Grupos monocarbonados
EC 2.2.x - Grupos aldehido o ceto
EC 2.3.x - Aciltransferasas
EC 2.4.x - Glicosiltransferasas
EC 2.5.x - Alquil- o Ariltransferasas
EC 2.6.x - Grupos nitrogenados
EC 2.7.x - Grupos fosfato
EC 2.8.x - Grupos sulfato
EC 2.9.x - Grupos selenio
Aplicaciones: Sntesis de oligosacridos

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Catalizan reacciones de hidrlisis y tambin su reverso. Son
las ms comunes en el dominio de la tecnologa enzimtica:

A-B + H2O A-OH + H-B

No se suelen utilizar nombres sistemticos en las

hidrolasas. Muchas de ellas conservan el nombre
Primitivo. Ejemplo: Quimosina EC 3.4.23.4.

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Clasificacin de las hidrolasas:
3.1.-.- Esterasas (carboxilesterasas, fosfoesterasas, sulfoesterasas)
3.2.-.- Glicosidasas
3.3.-.- ter hidrolasas
3.4.-.- Pptido hidrolasas
3.5.-.- Acil anhdrido hidrolasas
etc.
Aplicaciones: Lipasas Sntesis de tensioactivos
Proteasas Fabrico de quesos
Glicosidasas Clarificacin de jugos; liberacin de aromas en los
vinos; aplicaciones textiles

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 3: Hidrolasas
Caso particular Pptido hidrolasas: clasificacin comn (no
sistemtica)

I. Segn la situacin del enlace atacado:

- Exopeptidasas (extremos de la cadena) (Peptidasas)
- Endopeptidasas (interior de la cadena) (Proteinasas)
II. Segn el mecanismo cataltico:
- Serin proteinasas
- Tiol proteinasas
- Aspartil proteinasas
- Metaloproteinasas

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Catalizan reacciones reversibles de remocin de grupo de
tomos del sustrato (este grupo no incluye las hidrolasas):

A-B A+B
Ejemplo
Nombre sistemtico:
Histidina amonio-liasa (EC 4.3.1.3)

Nombre comn:
Histidasa

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 4: Liasas
Clasificacin de las liasas:
4.1.x - Actan sobre enlaces C-C
4.2.x - Actan sobre enlaces C-O
4.3.x - Actan sobre enlaces C-N
4.4.x - Actan sobre enlaces C-S
4.5.x - Actan sobre enlaces C-Haluro (S-, Cl-, Br-, I- At-)
4.6.x - Actan sobre enlaces P-O
4.99.x - Otras liases
Aplicaciones: Pectato liasa Remueve los compuestos indeseables (ceras,
pectinas, protenas) en fibras en la industria textil bioscouring

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Catalizan reacciones de isomerizacin moleculares

A B
Ejemplo:
Glucosa isomerasa (EC 5.3.1.5)

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 5: Isomerasas
Clasificacin de las isomerasas:

5.1.x - Rasemasas y Epimerasas

5.2.x - cis-Trans-Isomerasas
5.3.x - Oxidoreductasas Intramolecular
5.4.x - Transferasas Intramoleculares (mutases)
5.5.x - Liasas Intramoleculares
5.99.x - Otras Isomerasas

Clasificacin y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Catalizan la unin de dos grupos qumicos a expensas
de la hidrlisis de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.).

A + B + ATP A-B + ADP + Pi

Ejemplo: Glutationa sintasa (EC 6.2.2.3)

Nombre sistmico:
G-L-glutamilo-L-cisteina:glicina ligase

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Clasificacin y nomenclatura
Grupo 6: Ligasas
Clasificacin de las ligasas:

6.1.x - Forman enlaces C-O

6.2.x - Forman enlaces C-S
6.3.x - Forman enlaces C-N
6.4.x - Forman enlaces C-C
6.5.x - Forman enlaces steres fosfricos
6.6.x - Actan sobre enlaces N-metal

Cintica Enzimtica

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Cintica Enzimtica
La cintica enzimtica es el anlisis cuantitativo del efecto
de cada uno de los factores que intervienen en la actividad
enzimtica, que se evala a travs de la velocidad de la
reaccin catalizada.
Las variables ms importantes son:
Concentracin de enzima, sustratos y productos
(incluyendo inhibidores y/o activadores)
pH
Temperatura

Baja
concentracin
de sustrato

ALTA
concentracin
de sustrato
SATURACION

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Efecto de la concentracin de substrato

. . . .
v
.
.
.
.
[s]

Concepto de velocidad inicial

d[P]
[ ] v = dt , t 0
p

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Una cintica hiperblica implica un proceso saturante:

Hay un nmero limitado de sitios en la enzima

para fijar substrato; una vez que estn ocupados
todos, por mucho que aumente la concentracin
de substrato, la velocidad permanecer constante
tendiendo a un valor asinttico

k+1 k+2
E+S ES E+P
k-1

Relacin entre Km y Vmax

Michaelis y Menten
Vmax
Velocidad de la reaccin (v)

Vmax/2

Km Concentracin de Sustrato [S]

La Km es la concentracin de sustrato
donde se obtiene la mitad de la Vmax

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Vmax

Velocidad de la reaccin (v)

Vmax/2

Km Concentracin de Sustrato [S]

A mayor Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato

A menor Km mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato

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R e p re s e n ta c i n d ire c ta

v 100
Vmax
80

60
Vmx s
v
40 Km s

20

s
0
0 20 40 60 80 100

Km

Definicin Actividad Enzimtica

Es el nmero de moles de sustrato que

reaccionan para formar producto, por mol de
enzima y por unidad de tiempo. Esto supone
que la enzima est plenamente saturada con
sustrato y por tanto que la reaccin se efecta
con su mxima rapidez
El ndice de recambio muestra la eficiencia
impresionante de la catlisis enzimtica

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Efecto del pH en la ENZIMA

Cada enzima tiene un pH ptimo para su actividad

El pH afecta las interacciones inicas

Efecto del pH

1. Sobre la fijacin del substrato al centro activo:

- Grupos disociables de la enzima
- Grupos disociables del substrato

2. Sobre la transformacin cataltica del substrato

3. Sobre la estructura de la protena enzimtica

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Efecto de la temperatura en la ENZIMA

Aumento de la Desnaturacin
velocidad por calor

15 40 75
Temperatura

Cada enzima tiene una temperatura ptima.

Coenzimas

Las coenzimas son pequeas molculas

orgnicas, que se unen a la enzima.
Las coenzimas colaboran en la reaccin
enzimtica recibiendo transitoriamente
algn grupo qumico: H+ , OH, CH3 .
La enzima sin la coenzima recibe el nombre
de APOENZIMA

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El NAD es una coenzima aceptora de H

Sustrato
oxidado

Algunas enzimas requieren metales para

mejorar su actividad

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Isoenzimas o Isozimas
Son formas moleculares diferentes de una
misma enzima
Catalizan la misma reaccin
Ejemplo: Lactato deshidrogenasa
Lactato + NAD ==== Piruvato + NADH
M4, M3H1, M2H2, M1H3 y H4
Se diferencian por su movilidad electrofortica
Usadas en clnica: sueros normales y sueros
con alguna patologa

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As esta actividad corresponde al mximo potencial

cataltico que las enzimas poseen para un determinado
conjunto de condiciones ambientales. Luego, estas
deben ser consideradas en las expresiones matemticas
representativas del proceso enzimtico.
Existen situaciones (sustratos heterogneos) donde la
velocidad inicial de reaccin no es representativa del real
potencial cataltico de la enzima.
Se asume que la velocidad inicial de reaccin es
proporcional a la concentracin de protena enzimtica.

Inhibicin enzimtica

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Inhibidor:
Efector que hace disminuir la actividad enzimtica, a travs de
interacciones con el centro activo u otros centros especficos
(alostricos).

Esta definicin excluye todos aquellos agentes que inactivan a

la enzima a travs de desnaturalizacin de la molcula enzimtica

De esta forma, habr dos tipos de inhibidores:

I. Isostricos: ejercen su accin sobre el centro activo

II. Alostricos: ejercen su accin sobre otra parte de la

molcula, causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad enzimtica.

Inhibicin enzimtica
isostrica

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Los inhibidores isostricos pueden ser de dos tipos:

1. Inhibidor reversible: establece un equilibrio con la enzima libre,

con el complejo enzima-substrato o con ambos:

E+I EI

ES + I ESI

2. Inhibidor irreversible: modifica qumicamente a la enzima:

E+I E

Inhibicin reversible

(a) El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre,

impidiendo la fijacin del substrato: Inhibicin Competitiva

(b) El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo

haga o no el substrato; el inhibidor, por tanto, no impide la
fijacin del substrato a la enzima, pero s impide la accin
cataltica: Inhibicin No Competitiva

(c) El inhibidor se fija nicamente al complejo enzima-substrato

una vez formado, impidiendo la accin cataltica; este tipo
se conoce como Inhibicin Anticompetitiva

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Inhibicin Competitiva

Inhibidores Competitivos

Compiten con el sustrato por el sitio

activo de la enzima
Se une solo a la enzima libre
V mx no se altera y K M cambia

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Inhibicin competitiva

Al aumentar la cantidad
de SUSTRATO el
inhibidor competitivo es
desplazado y se forma
producto

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Sin inhibidor

Con inhibidor

El inhibidor competitivo
aumenta la Km

Km Km
Sin con
inhibidor inhibidor

Inhibicin No Competitiva

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Inhibidor No Competitivo

Se une a un lugar diferente del sitio

activo la enzima
Se une a la enzima libre y tambin al
complejo enzima-sustrato
Por accin del inhibidor disminuye la Vm
pero el valor de Km no se altera

Inhibicin NO competitiva

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Inhibidor NO competitivo
El inhibidor NO competitivo se une a la enzima en un
sitio diferente del sitio activo

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Inhibicin
Anticompetitiva o
Incompetitiva

Inhibidor Incompetitivo
En este tipo de inhibicin el inhibidor se enlaza al centro
activo pero solo despus de que el sustrato lo haya hecho y,
por tanto, inhibidor y sustrato no compiten. De esta manera,
aunque todo el sustrato est saturando la enzima y toda la
enzima est como complejo ES, el inhibidor puede
enlazarse produciendo un complejo inactivo ESI.

Como I solo se une a ES estimula la formacin de ES y, por

tanto, incrementa la unin del sustrato a la enzima,
disminuyendo Km . Sin embargo, el complejo ESI no
conduce a productos y Vm disminuye.

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Inhibidor Incompetitivo

Se une a un lugar diferente del sitio

activo de la enzima
Se une slo al complejo enzima-sustrato
Los efectos que tiene: disminuye el valor
de Km y tambin el de Vmx

S
E ES E+P
I
Inhibicin
Anticompetitiva
ESI

El inhibidor slo puede fijarse al complejo ES;

el complejo ESI no es productivo

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Inhibicin enzimtica
alosterica

Enzimas Alostricas
Son enzimas cuya estructura proteica est formada
de varias subunidades
No se rigen por la cintica de M - M
Adems del sitio o centro activo tienen sitios
alostricos o de regulacin
Sitio activo/sustratos;
Sitio alostrico/moduladores o reguladores
La relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de sustrato sigue cintica sigmodea

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Enzimas alostricas
Las enzimas alostricas
presentan estructura
cuaternaria.
Tienen diferentes sitios
activos, unen mas de una
molcula de sustrato
La unin del sustrato es
cooperativa
la curva de velocidad
presenta una forma
sigmoidal

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Concepto de Cooperatividad
La unin de los sustratos al sitio activo de
una subunidad produce un cambio
conformacional que por contacto fsico se
transmite a las subunidades vecinas,
facilitando las interacciones
Modelos de unin: secuencial y concertado
Ejemplos: unin Hb-O2, enzimas alostricas
y sus sustratos

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RESUMEN

Las enzimas son protenas que catalizan

las reacciones biolgicas
Presentan especificidad por su sustrato
Cada enzima presenta dos parmetros
importantes Vmax (saturacin de la
enzima) y la Km (medida de la afinidad
por el sustrato)

RESUMEN

La actividad enzimtica puede ser

inhibida, por inhibidores competitivos
(similares al sustrato) o por inhibidores
no competitivos
competitivos..
La temperatura y el pH afectan a la
enzima en su actividad cataltica
cataltica..
Algunas enzimas requieren de
coenzimas y/o cofactores para su
actividad..
actividad

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