1.

Mtodos basados en criterios morfolgicos: Los rasgos morfolgicos (estructurales)

han ayudado a los taxonomistas por muchos aos a clasificar organismos. Los organismos
superiores tienen rasgos anatmicos tan diferentes que pueden ser fcilmente utilizados
en su clasificacin, pero con respecto a los microorganismos, stos lucen bajo el
microscopio tan similares que se dificulta su clasificacin. Es decir, que estos
microorganismos que se ven tan parecidos bajo un microscopio, pueden diferir en
propiedades bioqumicas, fisiolgicas y/o serolgicas. Sin embargo, aun cuando la
morfologa celular dice poco sobre las relaciones filogen- ticas, sigue siendo til para la
identificacin bacteriana. Por ejemplo: la presencia de endosporas y su localizacin resulta
de mucha utilidad en la identificacin de bacilos esporulados.

2. Mtodos basados en tincin diferencial: Es posible sacar conclusiones en relacin con

la morfologa de una bacteria, examinando una lmina que fue sometida a un proceso de
tincin diferencial. Estos criterios morfolgicos encabezan las primeras etapas del proceso
de identificacin bacteriana. La mayor parte de las bacterias, teidas con Gram, las
podemos clasificar como gram positivas o gram negativas, otras tinciones diferenciales,
como la cido resistente, se aplican a otro tipo de bacterias, como por ejemplo
micobacterias. Un examen microscpico de una lmina teida por medio de gram o de una
tincin diferencial es til para obtener una informacin rpida sobre la calidad de un
ambiente clnico. Por otro lado, un mdico tambin puede obtener suficiente informacin
de un reporte tcnico de laboratorio para comenzar el tratamiento apropiado de un
paciente

4. Mtodos basados en pruebas bioqumicas: Las pruebas bioqumicas han sido

ampliamente utilizadas para diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamentan en
demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar azcares, la presencia de enzimas,
la degradacin de compuestos, la produccin de compuestos coloreados, etc. Aun
bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base
a pruebas bioqumicas. Por ejemplo, las bacterias entricas gram negativas, forman un
grupo muy grande y heterogneo cuyo hbitat natural es el tracto gastrointestinal de
humanos y otros animales. Esta familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios patgenos
que causan sndromes diarreicos. Un gran nmero de ensayos han sido desarrollados de
manera de identificar rpidamente al pat- geno, para que posteriormente el mdico, con
base al reporte, indique el tratamiento adecuado, o para que los epidemilogos puedan
localizar la fuente de la infeccin. Existen flujogramas, como el que se describe a
continuacin para la identificacin bacteriana, mediante pruebas bioqumicas de
microorganismos. Por ejemplo, la presencia de un coco bacilo gram negativo, facultativo,
fermentador de glucosa, oxidasa negativo, nos indica la presencia de una enterobacteria.
4. Mtodos basados en tipificacin con fagos: La interaccin entre un virus bacteriano (fago) y su
clula bacteriana sensible es sumamente especfica, ya que el proceso de adsorcin se encuentra
mediado por receptores especficos tanto en el virus como en la clula bacteriana. A una placa con
medio de cultivo slido inoculado con un cultivo puro de una determinada bacteria, se le aade
una alcuota de un fago especfico; ste puede ocasionar la lisis de las bacterias, hecho que se
evidencia en el cultivo como zonas claras definidas, denominadas placas, que indican que hubo
infeccin y lisis celular. El uso de fagos especficos permite identificar y subclasificar bacterias
dentro de una misma especie.

5. Mtodos basados en ensayos serolgicos: Los mtodos serolgicos, implican la utilizacin de

preparaciones de inmunoglobulinas especficas provenientes del suero o de un reactivo, y que
pueden ser de gran utilidad en la identificacin microbiana en muestras puras o en muestras
biolgicas. Cada uno de los mtodos tiene su fundamento particular, pero en lneas generales,
todos se basan en la reaccin de un antgeno presente en el agente microbiano con su anticuerpo
correspondiente. La solucin que contiene los anticuerpos se denomina antisuero

Estos mtodos son muy tiles en diversas situaciones:

Si a travs de un sistema miniaturizado basado en pruebas bioqumicas se determin que la

bacteria causante de la infeccin es un miembro del genero Salmonella, utilizando una batera de
antisueros contra el antgeno O presente en el lipopolisacarido de las bacterias gram negativas, es
posible identificar a la Salmonella aislada hasta el nivel de serotipo (poli O, A, B, C, D, etc.).

La inmunofluorescencia : ha resultado ser sumamente til en casos de infecciones de diferente

origen. Puede utilizarse para la identificacin del microorganismo aislado o presente en una
muestra biolgica. En el mtodo directo se fija la muestra problema a una lmina y se pone en
contacto con el antisuero especfico marcado con una sustancia fluorescente (rodamina o
fluorescena). Una vez transcurrido el tiempo para que tenga lugar la reaccin antgeno
anticuerpo, se expone la lmina a la radiacin ultravioleta para visualizar la reaccin. Tambin
existe la tcnica indirecta, donde en primer lugar se utiliza el anticuerpo especfico no marcado y
posteriormente se utiliza un anti anticuerpo marcado.
Mtodos basados en deteccin molecular:

A travs de procedimientos y reactivos, se pueden detectar determinadas secuencias de

ADN que son propias de un determinado agente microbiano.

PCR se aplica generalmente para la identificacin de organismos que no pueden ser

cultivados por mtodos convencionales

Ejemplos: Bacterias Vibrio cholerae, helicobacter pylori, Staphylococcus aureus. Shigella

dysenteriae, Escherichia coli, Mycobacterium tuberculosis.

Virus: Parvovirus, Rotavirus, Adenovirus Rhinovirus.

Protozoarios: Toxoplasma gondii, entamoeba histolyticum, Tripanosoma cruzi

Identificacin microbiana :

Se entiende por identificacin microbiana al conjunto de tcnicas y procedimientos que se aplican

para establecer la identidad de un organismo.

Mtodos utilizados para identificacin microbiana:

Mtodos basados en criterios morfolgicos.

Mtodos basados en tincin diferencial.

Mtodos basados en pruebas bioqumicas.

Mtodos basados en pruebas serolgicas.

Mtodos basados en deteccin molecular.

No todos los organismos se identifican por las mismas tcnicas, ni con base a un solo mtodo,
sino a la combinacin de uno o ms.