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TESIS
TARAPOTO - PERU
2007
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTN
FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
TESIS
"Estudio preliminar de la Composicin Fitoqumica en
Extractos de Cormos de la especie Jergn Sacha
(Dracontium loretense krause) y su Variacin segn su
Ubicacin Geogrfica"
INGENIERO AGROINDUSTRIAL
A mi hermana Diana y mi
hermanito Jos por
brindarme su apoyo morai
por el logro de mis objetivos.
Rosalia
AGRADECtMlENTOS
Al ing. Oennis Ross por sus valiosos y constantes consejos para el desarrollo del
presente trabaje.
Pg.
RESUMEN .................................................................................................1
ABSTRAC .................................................................................................3
1. lNTRODUCClN .....................................................................................5
11. REVISIN BIBLIOGRFICA.......................................................................7
2. 7 .3 Suelo ................................................................................................ 13
3.1 Materiales............................................................................................. 16
3.1.1 Material Biolgico ................................................................................. 16
3.1.1.1 Material Botnico ............................................................................... 16
3.1.1.2 Animales De Experimentacin ..............................................................16
3.1.2 Material, Equipos, Reactivos Y Disolventes Para El Ensayo Fitoqumico ......... 16
3.1.2.1 Materiales ....................................................................................... 16
3.1.2.2 Equipos .......................................................................................... 17
3.1.2.3 Reactivos Y Solventes ........................................................................ 18
3.1.3 Material Para El Ensayo Farmacolgico..................... -~- ............................ 18
3.1.3.1 Frmacos .........................................................................................18
3.1.3.2 Materiales.........................................................................................19
3.2 Mtodos ................................................................................................ 19
3.2.1 Estudio Fitoqumico ............................................................................... 19
3.2.1.1 Obtencin, Identificacin, Clasificacin Y Taxonoma De La Especie ............. 19
3.2.1.1.1 Obtencin ....................................................................................... 19
3.2.1.1.2 Identificacin ....................................................................................19
3.2.1.1.3 Clasificacin Taxonmica .................................................................. 20
3.2.1.2 Desecacin Y Pulverizacin De La Muestra Vegetal.. ................. : .............. 20
3.2.1.3 Identificacin De Los Principales Fitoconstituyentes .................................. 20
3.2.1.4 Obtencin De Los Extractos .................................................................23
3.2.1.5 lndentificacin Mediante Reacciones De Coloracin Y Precipitacin............ ,25:
4.1.1.2.4 'Ensayo De La Concentracin Del Sistema De Elusin ptimo Por C.C.O ... 38
4, t 1.2.5 Fraccionamiento De las Muestras Por C.C.D ....................................... 39
V. CONCLUCIONES .....................................................................................54
ANEXOS ....................................................................................................59
INDICE DE ANEXOS
Pg.
Pg.
Pg.
11 N~IT'~rp q~ fracciones
: ': . , ,
que dan positivo a las reacciones de
identjf!~~jn para las muestras de extracrtos de cormos de
4~r~rf~cicha (Dracontium loretense krause) .................... .40
1
1
El anHsis espectroscpico W se realiz a las fracciones seieccionadas.
fe'QP de practicada la cromatografa en columna, encontrndose que estos
espei....'iros presentaron rangos que pertenecen af grupo de flavonoides;
probablemente de isoftavonas , indicados por (Lock, 1998).
2
ABSTRACT
The present investigation work was carried out in its first stage in the
faboratory if chemistry of The National University of San Martn, betg
3
The analysis spectroscopic UV was carried out to fhe fractiom
sefected after having practiced the chromatography in column, beng that
fuese speclra prese~=d ranges that betong tho te flaw.taids group;
specificaHy of the isoflavinas, indicated by (Lock, 1998),
4
l. INTRODUCCJOM
5
Esta investigacin busca tener un mejor conocimiento de la composicin
firoqumca de esta especie debido a las diversas posibitidades de
transformacin de fa misma a derivados agroindustriafes fffof'armacufrcas y
nutricuticos plantendonos tos siguientes objetivos.
H. REVISIN BIBLIOGRAFJCA
7
Nombres comunes:
"Fer de lande", "Hierba de Jergn", "Hurignpe.. (v. Amarakaeri), "Mangoro" (v.
,M-ts~ge-k"""
r cu f 11 CI t "'R-....
UllUI --1 0 --"
'OCIU y "Si... .......... .;
HClllYI ""o~"-
' f CI (v s-h:ni..-.
' .,..11.1u - ~;,t...-\
~lllUU /t ""ff<a~"
i;) ........
Jergn", "See.. (v. Ese eja). "Shanao Rao.. (v. Orahuaca) (UAP, 1998).
..
2.3 DESCRIPCION DE LAS PARTES DE LA PLANTA.
2.3.1 Cormos.
FIGURA 1
10
secan por inactividad. Desde que la mayoria de las plantas
normamente empiezan a tener cormelos en ta superficie, constituye un
mecanismo necesario para permitir que el cormo se expanda y se
profundice ms, protegiendo al conno de ser comido por animales
herbvoros, como el cerdo salvaje. Por otro lado estos animales son
responsables para la dispersin de cormelos, (ZHU, 1998).
11
D. amazonense Zhu, D. angustispathum Zhu, O. aspersipathum Zoo,
D. asperum koch, D. bogneri Zhu, D. changuango verdern, D. croatii Zhu,
~ ~~-~-~~,_...,,. 7&,.,. n
LJ. \JICZllU-t"...r:>UR.Rlt L.HU., U.
n'r:lVIUffii-,..m 7lo.....
tt-r 1 IUtH.&t L.UU, o nt~~~~ 71..U
. l:J"",....'"""'~ L.U 1
o
4-n..~
IUhl:J't"-
2.7.2 Clima
Bosque hmedo tropical, con temperatura .promedio anual de 18
a 24C y precipitacin pfuviaf de 1200 a 3300 mm/ao {ffAP, 1998.
12
2.1.3-Suelo
Arenoso, franco y franco..arcilloso, con pH cido y abundante
materia rnymca (tw>: 1900).
2. 7 A Epoca De Siembra
13
2.7.7 :ENEMIGOS NATURALES-
2.9 usos
14
Hernia (pulsario): Tomar el cocimiento de los cormos con un pace
de tabaco.
2.11 TOXICIDAD.
Los chamanes, curanderos y brujos del Llano amaznico usan el
Jergn Sacha y que sus principios activos inhiben las Monoxioxidasas
(MAO). Estudiando la toxicidad de 1O especies vegetales; encontr que D.
. Loretense prcticamente no tiene toxicidad (Ros, 1998).
15
111. MATERIALES Y MTODOS:
3.1 MATERIALES
3.1.2.1 Materiales:
Pinzas de probetas
Soportes de columnas
f enn.~etros
Pera de decantacin de 200 y 250 mt.
Matraces Erlenmeyer de 50 1 250 y 500 mi.
16
Pipetas de 1,2,5 y 10 mf.
Gradillas de tubos de ensayo
Pape! de aiuminia
Tubos de ensayo de 5,8 y 10 mt
Vasos de precipitacin de 20, 50, 100 y 250 ml.
Piscetas
Kitasatos
P:mbetas de 50, 100 Y-250 mi.
Baln
Papel filtro Wathman nmero 411
Embudos
Micropipetas de 100-1000 L.
3.1.2.2 Equipos
,Bafanza anafffica digital OENVER tNSTRUMENT
CMPANY1 rnodefo AA2001 capacidad de 210 g.
Exactitud de 0.1 mg. USA
Balanza de triple brazo OHAUS, capacidad de 2610 g.
Exactitud de O. t g.
~OIMPEX
11
Sao Maria temperatura mxima de
cocina elctrica "MERCtl".
Columna cromatogrftea de 24.5 cm. de largo x 2cm.
de dimetro interno.
Estufa elctrica de secado y esterilizacin "fANEM
modelo 315 SE. Temperatura mxima 220 C. 1400
watts.
lmpara porttif de fuz W. "DESAGA MfNUVISJf {254--
SSS nm)
Espectofotmetro UVNJS de ptica inversa~ modelo
HP8452A.
17
3..1.2.2 Reactivos y Solventes:
3.1.3.1 Frmacos:
Trementina - Dropaksa
18
3.1.3.2 Materiales:
Tijera
Razuradoras
Jeringas
Aguas hipodrmicas N 25
Sonda nasogstrica
Alcohol medicinal
Algodn
3.2. MTODOS:
3.2.1.1.1 Obtencin:
3.2.1.1.2 Identificacin:
19
3:.2.1.1.3Clasificacin taxonmica:
Subreino Eucaryotes
Reno Vegetal
Divisin Spennatophyb:a
Orden Spadeciflorae
Familia Araceae
Clase Monocotifednea
Gnero Dracontium
Especie loretense krause
Nombre Cientfico Dracontium sp.
20
Fraccin "A"
a. Taninos.:.
Reaccin con Cloruro Frrico.~ Unas gotas de FeCfs a11% sobre
un extracto alcohtico del material;. erarn cofbra~"les azul~ verde
negra con compuestos fenlicos y taninos.
Reaccin de Gelatina - Ctoruro de Sodio.* Preparamos una
mezcla de solucin de NaCf al 5% con solucin de gelatina al 1%
y agregamos unas gotas de este reactivo al extracto; un
precipitado es indicativa de la presencia de taninos.
b. Flavonoides:
Fraccin "B"
a. Esteroides:
.Reaccin de Libermman Burchard. Se agrega a ta muestra unas
pocas gotas de cido Actico y 3mf. de una mezcla en p.'OpOTcin
50: 1 de Anhdrido Actico con cido sulfrico concentrado. la
reaccin ser positiva si aparece coJor azul, verde o naranja.
b. Quinonas:
Reaccin de Bomtrager.-;_Agregar a fa muestra unas gotas de
benceno, mezclar fa muestra agitando suavemente con 5mt de
NaOH al 5% acuoso. La reaccin es positiva s,i la fase acuosa
toma un color rojo.
21
Fraccin "C"
a. Cardenlidos:
b. Esteroides:
f raccion "O"
.a. ,flavonoides:
Reaccin de Shnoda .~. fdem fraccirr wA"
&. l.eucoantcdanklinas:
22
Reaccin de Rosenheim.- A 1mr. de muestra se agrega una
mezcia de cido Clorhdrico 2N con 1 propanof; se agita y se hace
haw de 15-30 minutos. ta reacci."l es posmva si se ~'"Va
color rojo para leucoantocianidinas y marrn para catequinas.
c. Esteroides:
d. Alcaloides:
:Fraccin '"E"
a. Flavonoides:
b. Leucoantociandinas:
23
Despus de este tiempo se filtro al vaco; se coloc en
bao Maria a s#c hasta evaporar .ef sotvente, obteniendo tos
extractos hexnko, dOrofmfco y etan~-
24
3:.Z.t.5 Identificacin mediante reacciones de coloracin y
~ipitacin:
25
3.2.1.7.3 Determinacin De Los Sistemas De Efusin;
Se realizaron diferentes ensayos con mezdas de
solventes orgnicos fos cuafes fueron clasificados segn su
polaridad teniendo como nonna Ja siguiente sene erutrpica.
(Dominguez 1973}.
p
o
Hexano \,,,
A
Oiclorometano R
t
Cloroformo D
A
Acetato de etilo o Aumento del poder
e
Acetona R
E
Etanol e
1
Metano E
N
T
Agua E
3.2.1.7.5 Revelados.
Se realiz utitizando como revelador yodo y luz Ultra
Vmreta a 250 y 366 nm.
26
3.2.1.8 Cromatografa en colummr.
27
3.2-~ 1.0 Identificacin y detenninacin de los metabolitos
secundaos presentes en fas fracciones:
29
b. Administracin del extracto acuoso.
Una vez inducida ta inflamacin se administra por vfa
oral eJ ,extracto acuoso preparado a diferentes
concentraciones.
Para lo cua1 se utilizaron 24 especmenes de Rattus-
rattus var. Afbinus. los animales fueron distribuidos en 4
grupos experimenta~es:
.
N TRATAMIENTOS
-GRUPO
I E~ TO T1 T2 T3
A 6 X
B 6 X 100 mgJkg. p. e
$ e s X 150mg!kg.p,c
Ju D 6 1 X j 20omg11<9_ P-<
e
nte: Elaboracin Propia
l..eyemk TO= Ttatamiettto Con TM!'Mntiaa
T1. T2:, T3 = Extracto Acu<>so A 100 mglkg.p.'C, 150 mglkg. p.'C y 200 mglkg. p.c
respectivamente.
30
IV. RESULTADOS
4.1. MARCHA FfTOQUMICA DE LOS EXTRACTOS DE LAS DIFERENTI:S
-MUESTRAS. Este trabaio se realiz mediante ta marcha fitoqumica citada por Lock~
1998, como se muestra en el siguiente cuadro:
Fraccin Resultado
De
.Metabofito Coforyfo
Los Prueba Anlisis
Secundario Precipitacin
Extractos (v
=3 m!)
Taninos Feci... Verde oscuro {-) (-}
A Gelatina Precioitado
.. Ftavonoides Shinoda Roio (+) (+) (+)
Esteroides Libermman Verde o
Burchard Azulverdoso
s Quinonas Borntrager Rojo en fase. H (-) (-)
acuosa
Cardnofdos Kedde Prpura o (-) (-)
Violcea
Esteroides Libermman Verde (-) (-)
1 e Burchard
~Alcaloides------ braaendorff
Azulverdoso
Narania --+~(-++_'l_..,c'-_f_+_')__,, __f_+_+ >---.
~~------ ~-~..,,.__.<!l.~,_J:!>__ _l!L_
. Maver Blanco o crema .f+l f++l (+++}
Wagner Marrn (+++} (+) (++}
Aavonoides Shinoda Roto f+++} {+} (++}
. Cateauinas Rosenhein Marrn . _l!1 (+} __J:~l.-
Esteroides Ubermman Verde o (++) {+) {+)
o Burchard Azulverdoso
r______ -s-1a_nco
___o_cre_
-----
Aiea1oide&~~-+-M-a-v1 _m_a_.,,___<_+~J-<+-'l~--f+-+)
r~----~---__Qat~inas
Aavonoides Shinoda
Rosenheim
. Rojo . _ . __ ..... (-} _ -l _ . {-,)
Marrn~----LJ!L __ (+) J:~J-
31
Cuadro N 2: Resumen Cualitativo de los Fitoconstituyentes encontrados
-en Jos extractos de cormos de Jergn Sacha (Dracontium foretense krause),
de las muestras en estudio, segn la marcha fibxr.;mi'ca.
Metabolito Prueba ! Coloro Resultado
Secundario Anlisis ( Precipitacin M1 Mi M3
flavonoldes Shnoda Rojo (+++) (+) (+}
Esteroides JUbermman -
lVerdozo (++) (+) (+)
-Burchard t
1
Afcaloides Drangendorff Naranja (++) {+) (++)
Hager Precipitado (+) (+) (+}
1 .......... --
Mayer Blanco o (+} (++} (++}
crema
Wagner Marrn (+)
1 (+++) (+)
Catequinas Rosenheim Marrn (+) (+) (+)
- .
32
wnfro N 3: Resultados cualitativos de los Fitoconstituyentes presentes en
4 tipos de .extractos de cormos de Jergn Sacha (Oracontium lofetense
krause), de las muestras en estudio por ei mtodo d& prueba a Ja gota.
Metaboltto Prueba
Oicioro-
Secundario-
Esteroides
!Ubermann
Anlisis
Coloro
Precipttacin
Verde
M1
(++)
Resulfado
~.
(+)
M.,. !
(+}
metnico aurd?ard
Quinonas Bomtrager Rojo en tase (-) H (;.)
acuosa
Mtantico Tanlns
Acuoso
Acido
Leyenda:
(,.) : .Ausencia det metabonto
(+} : Presencia del metabotito con menor intensidad de color
(++) : Presencia del metabofrto con intensidad media de caror
(+++) : Presencia del metaboUto oon mayor intensidad de ca~or
M1 : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito Pamashto.-
'Vane t.fa! M.ishquiyacu.
Mz : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, distrito
Barranquita.
M3 : Muestra procedente de la provincia. de San Martn; sector Cerro
escatera (altura Km . 28- Carretera Tarapoto a 'Yurimaguas).
33
Cuadro N 4: Resumen Cualitativo de los Fitoconstituyentes presentes en
los extractos de cormos de Jergn Sacha (Dracontium loretense krause), de
las muestras en estudio, por el mtodo de pruebas a la gota.
Leyenda:
34
Cuadro N 5
Eleccin del solvente de mejor extraccin usando reacciones de color y/o
precipitacin para las muestras en estudio.
Prueba - Anlisis
Taninos Alcaloides Flavonoides Qui nonas Esteroides Catequinas
Solventes
Gelatina Fec'3 Wagner Mayer Dragendorff Ac. Shinoda Bomtrager Libermman Rosenheim
Pi rico Burchard
(no polar) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (+)
Hexano
(med. (-) (-) (+) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (+)
Polar)
Cloroformo
(polar) (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) (+)
Etanol
Cuadro N 06
Eleccin del solvente nico por Cromatografa De Capa Delgada
(C.C.D) en el extracto etanlico de cormos de Jergn Sacha (Dracontium
loretense Krause).
Solventes M1 M2 M3
Hexano (-) (-) (-)
Didorometano (+) (+) (+)
Cloroformo (+) (+) (+)
Acetato de etilo (+) (+) (+)
Acetona (+) (+) (+)
Etanol (-) (-) (-)
Metanol (+) (+) (+)
Benceno . (++) (++) (++)
Cuadro N 07
leyenda:
Mejor combinacin de solventes(+++): Benceno+ cloroformo.
M1 : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito
Pamashto-Valle del Mishquiyacu.
36
M2 : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito Barranquita
M3 : Muestra procedente de la Provincia de San Martn; sector Cerro
escalera (altura Km., 28 - Carretera Tarapoto a Yurimaguas).
Cuadro N 8:
Leyenda:
37
4.1.1.2.4 Ensayo De La Concentracin Del Sistema De Elusin
ptimo Por Cromatografa De Capa Delgada (C.C.D)
Con los resultados obtenidos anteriormente se ha buscado la
mejor proporcin de los componentes del sistema habindose obtenido
los resultados que se detallan en el cuadro N 9.
Cuadro N 9
Eleccin de la proporcin ms adecuada por Cromatografa De Capa
Delgada (C.C.D) en las muestras de extractos de cormos de Jergn Sacha
(Dracontium loretense Krause) utilizando el sistema de solvente mixto.
Proporcin Resultado
Sistema
(mi) M1 M2 M3
0.1; 1.0; 1.9 + + +
0.4; 1.0; 1.6 + + +
0.8; 1.0; 1.2 + + +
1.0; 0.1; 1.9 ++ ++ ++
1.0; 0.4; 1.6 ++ ++ ++
1.0; 0.8; 1.2 ++ ++ ++
Benceno 1.2; 0.8; 1.0 +++ +++ +++
+ 1.6; 0.4; 1.0 ++++ ++++ ++++
Cloroformo 1.9; 0.1; 1.0 ++ ++ ++
+ 1.2; 1.0; 0.8 ++ ++ ++
Etanol 0.6; 1.0; 0.4 + + +
1.9; 1.0; 0.1 + + +
.
1.0; 1.2; 0.8 + + +
38
Leyenda:
Proporcin utilizada:(+++)
M1 : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito Pamashto-
Valle del Mishquiyacu.
M2 : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito
Barranquita.
M3 : Muestra procedente de la Provincia de San Martn; sector Cerro
escalera (altura Km., 28 - Carretera Tarapoto a Yurimaguas ).
Cuadro N 1O:
Fracciones positivas a las reacciones de identificacin obtenidas de los
extractos de Jergn Sacha (Dracontium loretense Krause) por Cromatografa
en Columna (C.C).
Sistema de Volumen Total frascos Fracciones positivas a las reacciones.
Muestra Extracto recolectado
Elusin recolectados Flavonoides Esteroides Alcaloides
por frasco lmll
Benceno+
Cloroformo 2-7;
2
M1 Etanlico +Etanol 10 30 11-21; 6; 3;7
5-11
(1.6;0.4; 1.0) 25
Benceno+
2-5; 7-9;
Cloroformo 2-5;
M2 Etanlico 10 30 11-12; 5;8
+Etanol 7-8
14-15.
(1.6;0.4;1.0)
Benceno+
Cloroformo 2-7;
M3 Etanlico 10 30 3-8 2;3
+Etanol 10
(1.6;0.4; 1.0)
Fuente: Elaboracin Propia
39
En base a estos resultados podemos resumir el total de pruebas positivas a
los metabolitos Flavonoides, Esteroides y Alcaloides, presentes en las
muestras confrme se detalla en el cuadro N 11.
Cuadro N 11:
Nmero de fracciones que dan positivo a las reacciones de
identificacin para las muestras de extractos de cormos de Jergn Sacha
(Dracontium loretense Krause).
Leyenda:
M1 Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito
Pamashto-Valte del Mishquiyacu.
M2 : Muestra procedente de la Provincia de Lamas, Distrito
Barranquita.
M3 : Muestra procedente de ta Provincia de San Martn; sector Cerro
escalera (altura Km., 28 - Carretera Tarapoto a
Yurimaguas).
40
4.1.1.2. 7 Ensayo Farmacolgico Anti inflamatorio
De acuerdo a la metodologa descrita anteriormente se ha
trabajado la actividad antiinflamatoria in vivo, habiendo ensayado con
24 especmenes Rattus rattus va albinus.
41
Figura 3:
2
S' F4 - Ml
:!.
11> 1.5
e
o
o>
.o<
0.5
o
200 300 400 500 600 700 ~~(nrro)
01
N
S' F6 - Ml
:!.
0.8
I~
I~
0.6
I~ 0.4 1
1
0.2
o
/~
1 1
2!)) 300 400 500 600 700 wovaengin rm
1
o
0.2
S'
0.2
:!. F7 - Ml
11>
e
0.15
o
o> 0.1
.o<
0.05
J
o
' 1
200 300 400 500 11
600 700 Wo.i.:;i~grt1(rrn)
42
Figura 4:
2 N
1.75
1.5
'5
~ 1.25 F2 M2
ru
g
"
~ 0.7
~ 0.5
0.25
o "A.'V-~J
1 200 300 400 500 600 700 W::ivelena1h (nmJ
--,
43
Figura 5:
2.5
5' 2
:f.
Cll
u
e
_g l.5
~
<{
F2 - M3
0.5
o
200 309. 400 500 600 700 IMlvelenath (nm
2.5
2
5
~
"'go 1.5
.e
.o
<{
F3 -M3
0.5
~
o
200 300 400 500 600 700 Wavelena1h (nm]
0.8
0.7
5' 0.6
~
"'ue 0.5
~ 0.4
F6-M3
.o
<{ 0.3
0.2
0.1
44
ENSAYO FARMACOLGICO
Evaluacin estadstica de los valores promedio de las diferencias de los dimetros del edema formado tras la administracin de
cada uno de los tratamientos.
PERIODO DE EVALUACION DESPUES DE LAADMINISTRACION
8 HORAS 24 HORAS 36 HORAS 48 HORAS 72 HORAS 96 HORAS
TRATAMIENTOS Dimetro Dimetro Dimetro Dimetro .Dimetro Dimetro
(cm) N de S (cm) N de S (cm) Nde S (cm) N de S (cm) N de S (cm)
O.E. O.E. D.E. O.E. O.E. D.E.
0.217 0.400 0.325 0.133 0.050 0.000
A
(trementina)
0.088 0.077 0.099 0.041 0.055 0.000
B 0.175 0.325 0.092 0.017 0.000 0.000
,.,
~!:.. P>0.05 P>0.05 P>0.05 P>0.05 P>0.05
(A+100mg.
(N.S)
(N.S)
(N.S)
(N.S)
De extracto) 0.0418 0.069 0.080 0.041 0.000 0.000
e 0.183
P>0.05
0.258
P>0.05
0.100
P>0.05
0.000
P>0.05
0.000
P>0.05
0.000
(A+150mg.
(N.S) (N.S) (N.S) (N.S)
De extracto) 0.103 0.116 0.095 0.000 0.000 0.000
D 0.225 0.008 0.000 0.000 0.000 0.000
P>0.05 P>0.05 P>0.05 P>0.05 P>0.05
(A+200 mg.
(N.S) (N.S) (N.S) (N.S)
De Extracto) 0.069 0.020 0.000 0.000 0.000 0.000
Leyenda:
a= Nivel de significancia (a= 0.05), prueba t, respecto al tratamiento A
N.S. = No Significativo
Fig. 1: Promedios temporales de las disminuciones de los
dimetros del edema formado tras la administracin de los
diferentes tratamientos
0.5
-
E
u
0.4
- . - Trementina
.___. 0.3 \ -e- 100 mg Ext.
\
o 1o 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tiempo ( h)
o.s---
0.4 v-----1 11
'' 11------~- ;Q Tren-entina
l :~
46
4.2. DISCUSIONES:
4.2.1 Marcha Fitoqumica
Para la deteccin cualitativa de los fitoconstituyentes se us la
marcha fotoqumica indicada por (Lock, 1998, ver anexo 2)
encontrndose: Flavonoides y Esteroides con mayor intensidad de
color Alcaloides y Catequizas en menor intensidad de color y/o
precipitacin en las 03 muestras analizadas ; siendo la muestra 1
procedente de la Provincia de Lamas, Distrito Pamashto- valle del
Mishquiyacu la que present marcada precipitacin e intensa
coloracin en las reacciones practicadas, respect a las otras 2
muestras en estudio.
47
hormonas esteroidales, los cuales poseen una variada gama de
aplicaciones farmacolgicas.
49
4.2.5 Fraccionamiento Por Cromatografa De Columna (C.C)
50
A estas fracciones se les practic los espectros de absorcin
UV, encontrndose entre todas que de la muestra 2 la nica que
presento un espectro significativo fue la fraccin 2, las fracciones que
tuvieron un espectro significativo de acuerdo con la literatura de (Lock,
1998) nos indica la presencia de flavonoides especficamente de
lsoflavonas cuyas bandas de absorcin estn presentes en el rango
para la banda 11 (275-295 nm.); y para la banda 1 (300-380 nm); como
se comprueba en la fraccin 4 , 6 y 7 de la muestra 1, la fraccin 2 de la
muestra 2 y las fracciones 2, 3, 6 de la muestra 3 segn la tabla 1 de
valores de absorcin para flavonoides (ver anexo 4).
.
muestra mas representativa, que para el caso es la muestra 1
procedente de la provincia de Lamas; Distrito de Pamashto debido a la
marcada precipitacin e intensa coloracin en las reacciones
practicadas respecto a las muestras procedentes de la provincia de
Lamas, Distrito Barranquita y la muestra procedente de la Provincia de
San Martn; sector Cerro escalera. Reportndose la respuesta
antiinflamatoria de los animales de experimentacin en la tabla N 01;
luego de haber administrado trementina en la regin del muslo de la
extremidad posterior (grupo A). El promedio obtenido de los 6
especmenes luego de 24 horas de administracin de trementina es de
0.4 cm. , lo cual representa el mximo de la respuesta inflamatoria para
realizar los controles posteriores observndose una disminucin del
efecto inflamatorio con una disminucin del dimetro del edema hasta
0.325+/- 0.099; 0.133 +/- 0.041 y 0.050 +/- 0.055 a las 36 , 48 y 72
horas respectivamente, lo que representa el curso normal del proceso
inflamatorio.
51
Los signos clnicos de la inflamacin se caracterizan 'por
presentar eritema, calor, edema, dolor, y/o perdida de la funcin. La
inflamacin inducida por trementina produce un edema en el muslo del
espcimen, el cual es posible medir ptimamente. La trementina es un
agente muy eficaz en los procesos inflamatorios experimentales 8
horas despus de su aplicacin (BOWMAN, 1984).
52
grupo "B" desaparece a las 48 horas (P< 0.05); para el Grupo "C"
desaparece a las 36 horas (P<0.05); para el grupo "O" desaparece a las
24 horas; lo que se corrobora grficamente las figuras 01 y 02; donde
se puede evidenciar con mayor claridad los resultados al graficar en
curvas y barras los dimetros (cm). Del edema en relacin al tiempo
(h).
53
V. CONCLUSIONES
54
VI.- RECOMENDACIONES
55
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
5. BURKILL L.L; 1935 "A Dictionary of the economic Products of the malay
peninsule" VOL 1(A-M)-4 Mill banck; London S.W.L.
56
12.HARRISON J; 1983 "Curso de Farmacognosia l. UNMSM. Direccin
Universitaria de Bibliotecas y Publicaciones. Lima - Per.
16.MAC BRIDE; K.F. 1951 "FLORA OF PERU" BOT Ser. Field-at. History. VOL XII;
Pant 111; N 01 CHICAGO.
21. RIOS l.F.; 1998 "Toxicidad aguda de 10 especies vegetales con propiedades
medicinales" biodiversidad de salud. Edit. UTEHA.
29. VILLACRS l.V. 1998. "Cercosporiosis del Jergn Sacha (Dracontium loretense
krause) causado por cercospora bellynchii sacc. Biodiversidad-Salud.
58
VIII. ANEXOS
59
UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTIN
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS
DECANATURA
Jr. Amorarca 3ra. Cdra. '1(094) 524074
CIUDAD UNIVERSITARIA
CERTIFICADO
GENERO Dracontium
FAMILIA Araceae
60
Anexo 2 Marcha Fitoqumica Preliminar
Muestra de Cormos
Cardenlidos
R. Kedde
/ Evaporar a sequedad
+ 2ml HCL 1%
R. Lierbermman Burchard
Fase Clorot rmica etanlica Lavar con sol Na2S04 Fase acuosa remanente
(10ml) secar Na2S04 _______.
Filtrar y llevar a 50ml
1
Fraccin d Evaporar a sequedad + 2.5ml Fraccin e
61
MARCHA FITOQUMICA
Pruebas a la gota
Los siguientes ensayos tienen por objeto obtener una visin general de los
diferentes metabolitos secundarios que puedan estar presentes en el material en
estudio. Se obtendrn extractos de diferentes polaridades.
Para ello se realizaran 4 tipo de extracciones.
1. Diclorometnica: compuestos de muy baja polaridad como: Esteroides, Quinonas.
2. Metanlica; compuestos de polaridad muy variada, como Esteroides, Alcadoides,
Flavonoides, Taninos.
3. Acuosa cida: compuestos bsicos, como: Alcaloides.
4. Acuosa: compuestos de alta polaridad: Flavonoides, Leucoantocianidinas,
Saponinas, Taninos.
Procedimiento
Pese 1 gramo del extracto
Agregue de 5 a 1O ml de solvente (para extractos diclorometnico, metanlico,
acuosa cida, acuosa)
Se someti a reflujo controlado por 1O minutos, en bao Mara.
Se dej enfriar y luego se filtr
62
Luego se realizaron los ensayos que corresponda de acuerdo a cada extracto
obtenido. (PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL PER, 1998).
63
Anexo N 4 Bandas de absorcin al UVNIS de los diferentes tipos de flavonoides.
64
Anexo 5 Esquema General de Trabajo Fitogumico
MACERACIN
CROMATOGRAFIA EN
CAPA FINA
CROMATOGRAFA EN
COLUMNA
FRACCIONES
RECOLECTADAS
REACCIONES DE
COLORACIN Y/O
PRECIPITACION
65
Anexo 6 Diversas Tcnicas de Identificacin
Reaccin de Dragendorff: Este reactivo (yoduro de bismuto y potasio) da, con los
alcaloides en solucin dbilmente acidulada, precipitados de color rojo o anaranjado.
(DOMINGUEZ, 1973 Y LOCK, 1998).
Reaccin De Hager: La solucin acuosa saturada de cido pcrico produce con los
alcaloides, picratos cristalizados de color amarillo. Observar al microscopio.
(DOMINGUEZ, 1973).
Reaccin de Mayer: Este reactivo (yoduro de mercurio y potasio) da con casi todas las
soluciones de alcaloides, precipitados de color blanco, blanco amarillento o amarillo
limn claro (DOMINGUEZ, 1973 Y LOCK, 1998).
66
alcohol amlico. Se agita y se deja reposar observando el color en la fase amlica. La
reaccin es positiva si se observa color rojo intenso o rosado dbil para
leucoantocianidinas y marrn catequinas (DOMJNGUEZ, 1973 Y LOCK, 1998).
67
Anexo N 7.
Evaluacin de los valores, promedio de las diferencias de dimetro del edema tras la aplicacin de trementina.
68
Anexo N 8
Evaluacin de los valores, promedio de las diferencias de dimetro del edema. Tras la aplicacin de 100~g./kg.p.c. del extracto acuoso
de Jergn Sacha.
69
Anexo N 9
Evaluacin de los valores promedio de las diferencias de dimetro del edema. Tras la aplicacin de 150mg./kg.p.c. del extracto acuoso
de Jergn Sacha.
70
Anexo N 10
Evaluacin de los valores promedio de las diferencias de dimetro del edema. Tras la aplicacin de 200mg./kg.p.c. del extracto acuoso
de Jergn Sacha.
71
_,.:
Anexo N 11
Tratamiento de las diferencias de dimetro del edema. Tras la aplicacin de 1OOmg./kg.p.c. del extracto acuoso de Jergn Sacha.
TIEMPO DE EVALUACION EN HORAS
Rata N 8 24 36 48 72 96
Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto.
1. (R. cola) 0.20 0.20 0.40 0.35 0.30 0.15 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
2. (cola) 0.35 0.20 0.55 0.45 0.50 0.10 0.20 0.10 0.10 0.00 0.00 0.00
3. (Lomo) 0.15 0.15 0.35 0.30 0.30 0.10 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
4. (B. Der.) 0.10 0.20 0.35 0.25 0.30 0.00 0.10 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
5. (B. Izq.) 0.25 0.20 0.35 0.30 0.20 0.20 0.15 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
6. 0.25 0.10 0.40 0.30 0.35 0.00 0.15 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
(Cabeza).
Promedio 0.216666 0.175000 0.400000 0.325000 0.325000 0.091667 0.133333 0.016666 0.050000 0.00 0.00 0.00
O.E 0.087559 0.041833 0.077459 0.068920 0.098742 0.080104 0.040824 0.040824 0.054772 0.00 0.00 0.00
T Student Valor P =0.317661 Valor P =0.1068273 Valor P =0.001151 Valor P =0.000578 Valor P =0.049332
-
Rechazo p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05
Ho
72
Anexo N 12
Tratamiento de las diferencias de dimetro del edema. Tras la aplicacin de 150mg./kg.p.c. del extracto acuoso de Jergn Sacha.
TIEMPO DE EVALUACION EN HORAS
Rata N 8 24 36 48 72 96
Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto.
1. (R. cola) 0.20 0.30 0.40 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
2. (cola) 0.35 0.20 0.55 0.35 0.50 0.20 0.20 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
3. (Lomo) 0.15 0.15 0.35 0.25 0.30 0.15 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
4. (B. Der.) 0.10 0.10 0.35 0.15 0.30 0.00 0.10 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
5. (B. Izq.) 0.25 0.05 0.35 0.10 0.20 0.00 0.15 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
6. 0.25 0.30 0.40 0.30 0.35 0.05 0.15 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
(Cabeza).
Promedio 0.216666 0.183333 0.400000 0.258333 0.325000 0.100000 0.133333 0.00 0.050000 0.00 O.DO 0.00
O.E 0.087559 0.103280 0.077459 0.115830 0.098742 0.094868 0.040824 0.00 0.054772 0.00 0.00 0.00
T Student Valor P =0.559920 Valor P =0.031972 Valor P =0.002419 Valor P =1.177E-05 Valor P =0.049332
-
Rechazo p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05
Ho
Fuente: Elaboracin Propia.
73
Anexo N 13
Tratamiento de las diferencias de dimetro del edema. Tras la aplicacin de 200mg./kg.p.c. del extracto acuoso de Jergn Sacha.
TIEMPO DE EVALUACION EN HORAS
Rata N 8 24 36 48 72 96
Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto. Estndar Tto.
1. (R. cola) 0.20 0.10 0.40 0.10 0.30 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
2. (cola) 0.35 0.25 0.55 0.25 0.50 0.05 0.20 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
3. (Lomo) 0.15 0.25 0.35 0.15 0.30 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
4. (B. Der.) 0.10 0.20 0.35 0.10 0.30 0.00 0.10 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
5. (B. Izq.) 0.25 0.30 0.35 0.20 0.20 0.00 0.15 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
6. 0.25 0.25 0.40 0.10 0.35 0.00 0.15 0.00 0.10 0.00 0.00 0.00
(Cabeza).
Promedio 0.216666 0.225000 0.400000 0.150000 0.325000 0.008333 0.133333 0.00 0.050000 0.00 0.00 0.00
O.E 0.087559 0.068920 0.077459 0.063245 0.098742 0.020412 0.040824 0.00 0.054772 0.00 0.00 0.00
T Student Valor P =0.85833 Valor P =0.000112 Valor P = 1.656E-05 Valor P =1.177E-05 Valor P =0.049332
-
Rechazo p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05 p < 0.05
Ho
Fuente: Elaboracin Propia.
74
ANEXO 14
JERGN SACHA
(Dracontium loretense krause)
1
-~~ ;, ~---~ __,..,,...
/r
'~
CROMATOGRAFA EN COLUMNA
75
Trujillo, 07 de l\tayo del 2U02
Sr.:
Dr. Carlos Sabana Gamarti_i
Decano de la Facultad de Farmacia y Bioqumica
Presente
De n especial consideracin:
Me es grato dirigirme a usted para saludarle y a la ,.u. comunicarle que la seorita Maria
Rosala Bocanegra Linares. alumna de la Facultad de lnget~,ffa Agroindustrial de Ja
,._. V
Sin otro particular me despido de usted no sin antes manifestarle las muestras de mi mas
aHa estima,
Atentamente,
76
Trujillo1 07 de Mayo del 2002
De mi especial consideracin:
77
\;S{. DECANO DE LA FACULTAD DE FARMAC-IAY BJOUl~AlCA
.D.E LA UNIVER$1Q~ffi):!NACtONAL DE TRUJILLO. qu,:suscribe.~
-CERTl:FIC.A
t:.