Las enzimas

Para utilizar enzimas en restauracin, es necesario entender qu son, cmo funcionan, en

qu condiciones, etc. Sin estos conocimientos, no comprenderemos cmo actan y no
sabremos manipularlas correctamente. En restauracin de obras de arte, muchos de los
profesionales evitan emplearlas por la falta de informacin, conocimiento y
experimentacin con enzimas. Muchos de ellos tienen miedo por los posibles efectos que
pueden ocurrir despus de su empleo. No obstante, tampoco conocen hasta dnde penetran
los disolventes en la superficie de una obra y qu efecto tienen sobre sta y en su propia
salud a corto y largo plazo. Por estos motivos, realizamos una bsqueda de informacin
relacionada con enzimas, en libros especializados de enzimologa y de restauracin.

Las enzimas son biomolculas de naturaleza proteica que aceleran la velocidad de

reaccin hasta alcanzar un equilibrio. Constituyen el tipo de protenas ms numeroso y
especializado y, actan como catalizadores de reacciones qumicas especficas en los seres
vivos o sistemas biolgicos. Muchas de las enzimas no trabajan solas, se organizan en
secuencias, tambin llamadas rutas metablicas, y muchas de ellas tienen la capacidad de
regular su actividad enzimtica

I.1 Estructura de las enzimas

Para comprender cmo funcionan las enzimas, es necesario saber qu son y conocer la
importancia de su estructura. Las enzimas son protenas globulares formadas por una o ms
cadenas polipeptdicas plegadas, creando una hondonada donde encaja el sustrato y tiene
lugar la reaccin.

Esta zona de la enzima se denomina centro activo y slo unos pocos aminocidos estn
implicados en l. La proximidad de los aminocidos en el centro activo est determinada
por la estructura terciaria, aunque tambin pueden ocupar posiciones adyacentes en la
estructura primaria. En una enzima con estructura cuaternaria, los aminocidos del centro
activo pueden encontrarse incluso en diferentes cadenas.

La configuracin tridimensional del centro activo es complementaria a la del sustrato y

posee una distribucin complementaria de sus cargas sobre la superficie de unin. Es decir,
si una regin del sustrato tiene una carga negativa, la zona correspondiente del centro
activo tendr una carga positiva y viceversa.
En 1894, Emil Fischer, un qumico alemn, compar la especificidad de la enzima con una
llave y su cerradura. Pero, estudios posteriores sugirieron que el centro activo es ms
flexible que el ojo de una cerradura: la unin entre la enzima y el sustrato altera la
conformacin de la enzima, ajustando el centro activo al sustrato.

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Se piensa que este cambio inducido puede crear cierta tensin en las molculas reactivas y
facilitar de esta manera la reaccin.

Figura 1 . Enzima con un sustrato (azul)

unido al centro activo (hondonada) con un
amino cido clave del sitio activo (rojo).

I.2 Mecanismo de accin de las enzimas. Catlisis enzimtica.

I.2.1 Energa de activacin

En toda reaccin qumica se produce la transformacin de unas molculas iniciales
denominadas sustratos (S) en las reacciones bioqumicas, en unas sustancias finales o
productos (P). Esta transformacin necesita, en la mayora de las reacciones, un aporte
inicial de energa que aumenta la energa cintica de las molculas y stas, reaccionan
permitiendo que un mayor nmero de ellas, choquen con suficiente fuerza para superar su
repulsin mutua y debilitar los enlaces qumicos que poseen. La energa que deben poseer
las molculas para iniciar la reaccin se conoce con el nombre de energa de activacin
[Figura 2]
.

I.2.2 El catalizador
Un catalizador disminuye la energa de activacin necesaria para una reaccin, porque
forma una asociacin pasajera con las molculas que reaccionan. Esta asociacin aproxima
a las molculas que reaccionan y, favorece tanto la ruptura de enlaces existentes, como la
formacin de otros nuevos. Cuando existe un catalizador en la energa de activacin, esta
reaccin puede suceder rpidamente sin o con poca adicin de energa. El catalizador no
sufre ninguna alteracin permanente en el proceso y puede volver a utilizarse.

Gracias a las enzimas, las clulas son capaces de desarrollar reacciones qumicas a gran
velocidad y a temperaturas relativamente bajas.

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Figura 2. Grfico de la diferencia de energa que necesita una reaccin no catalizada (line
ms gruesa) y la misma reaccin con catlisis enzimtica (lnea fina). (ES) significa la
unin de la enzima y el sustrato, (EI) la enzima con el compuesto intermedio y, (EP) la
enzima con el producto. Los asteriscos significan los estados de transicin correspondientes
a cada complejo ES, EI y EP.

I.2.3 Reacciones enzimticas

En estas reacciones, la enzima (E) se une al sustrato (S) para formar el complejo enzima-
sustrato (ES). Despus tiene lugar la transformacin del sustrato (S) en producto (P),
liberndose el producto (P) y quedando libre la enzima (E) para una nueva unin con el
sustrato

E+S ES EI EP P+E

Las enzimas, como los dems catalizadores, aceleran la reaccin sin alterar la posicin de
equilibrio. En una reaccin qumica tenemos:

Sustrato Producto

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 Figura 3. Esquema de la reaccin enzimtica

I.2.4 La constante de equilibrio

La constante de equilibrio K, se produce en las reacciones enzimticas y siempre tiene un
valor constante fijado por la relacin entre las velocidades en uno u otro sentido,

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independientemente de que el catalizador est o no presente. La catlisis hace disminuir
considerablemente el tiempo necesario para alcanzar el equilibrio

K= [P]/ [S]

K = constante de equilibrio
[P] = concentracin de producto
[S] = concentracin de sustrato

I.3 Regulacin de la actividad enzimtica

I.3.1 Rutas metablicas

En los seres vivos, las maneras para regular la actividad enzimtica son diversas. Existen
rutas metablicas que estn formadas por grupos de enzimas que actan conjuntamente en
el metabolismo celular. Las enzimas trabajan en serie, formando vas enzimticas, de forma
que el producto de una enzima constituye el sustrato de la siguiente.

Todas las rutas metablicas pueden ser controladas por enzimas reguladoras. stas varan
su actividad dependiendo de ciertas seales y normalmente la primera enzima de la ruta es
la reguladora. sta se llama el punto de compromiso de la va.

La actividad de estas enzimas se modula por diferentes molculas seal, que generalmente
son metabolitos de poco peso molecular o cofactores..

Las vas enzimticas suponen ventajas para las clulas

Por una parte, los grupos de enzimas que constituyen una va comn pueden segregarse
dentro de la clula e incluso, si estn ubicadas en las membranas, pueden estar alineadas en
secuencia.
Otra ventaja es la escasa acumulacin de productos intermedios. Cada producto tiende a ser
usado en la siguiente reaccin de la va enzimtica.

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I.3.3 Efecto de las concentraciones de enzima y de sustrato

La actividad enzimtica viene limitada por diferentes factores como puede ser la
concentracin de enzimas, de sustrato y la disponibilidad de cofactores.

La velocidad de la reaccin est relacionada directamente con la concentracin de la

enzima y esta velocidad es diferente para cada enzima. Cuando la concentracin de la
enzima es constante, la velocidad aumenta hasta alcanzar un mximo (Vmax) aunque la
concentracin del sustrato siga aumentando. Todas las molculas de enzima estn ocupadas
por molculas de sustrato y la velocidad no puede aumentar

Existe un periodo inicial denominado estado pre-estacionario que es cuando la enzima se

mezcla con el gran exceso de sustrato y durante el cual, aumenta la concentracin ES.
Seguidamente aparece el estado estacionario donde ES permanece constante en el tiempo.

Las clulas regulan la velocidad de las reacciones enzimticas mediante la regulacin de las
concentraciones de la enzima. Muchas enzimas son degradadas rpidamente y se sintetizan
slo cuando se necesitan. Otras, se segregan en forma inactiva y se activan cuando se
necesitan.

Figura 4. Efecto de la concentracin de la enzima y sustrato en la velocidad de la reaccin

enzimtica

I.3.4 Efectos de la temperatura y del pH

1. La temperatura

Cada enzima tiene una temperatura ptima de actuacin. Por debajo y por encima de esta
temperatura, la enzima ralentiza la velocidad de la reaccin enzimtica. Se observa que
muchas de las enzimas, duplican la velocidad de una reaccin enzimtica cuando se
aumenta la temperatura de unos 10 C aproximadamente y luego cae muy rpidamente por
encima de los 40 C
.
El aumento en la velocidad de reaccin se produce porque con temperaturas ms altas,
existen ms molculas de sustrato con suficiente energa para reaccionar; la disminucin de

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la velocidad de la reaccin es debida a la desnaturalizacin de la enzima (la mayora de las
protenas globulares se desnaturalizan por encima de 60 - 70C).

2. El pH
La actividad enzimtica tambin viene regulada por el pH de la solucin enzimtica. El pH
ptimo o intervalo de pH de cada enzima es diferente y cuando vara, la conformacin de la
enzima se altera, producindose un cambio en el estado de ionizacin de grupos del sitio
activo y llegando a no ser funcional

Esto es debido a que la conformacin de una protena depende tambin, de las atracciones y
repulsiones entre los aminocidos cargados negativamente y los cargados positivamente.
Adems algunas cadenas laterales de aminocidos pueden actuar como cidos o bases
dbiles que desarrollan funciones crticas en el sitio activo del enzima.

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Las enzimas pueden tener dos tipos de curvas:
- La primera curva posible de la actividad enzimtica es en pico. Esto significa que la
enzima necesita un control riguroso del pH del medio en el que se encuentra. El 100% de su
actividad se encuentra en un pequeo intervalo entorno a un pH determinado.

-La segunda posibilidad es que la enzima mantenga una actividad superior al 75%
alrededor del pH ptimo. Estas curvas experimentales suelen ser facilitadas por el
fabricante o vienen en documentos tcnicos.

I.3.5 Inhibicin
Los inhibidores son sustancias que disminuyen, o incluso anulan, la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas.
La inhibicin puede ser de distintos tipos [Figura 7]
:
1. Reversible:
a) Competitiva
b) No competitiva
c) Acompetitiva

2. Irreversible

I.3.5.1 Inhibiciones reversibles

- Inhibicin competitiva

Algunos compuestos inhiben la actividad enzimtica ocupando temporalmente el centro

activo de la enzima. Esta forma de regulacin se conoce como inhibicin competitiva, ya
que el inhibidor (compuesto parecido al sustrato) y el sustrato compiten por unirse al centro
activo. La inhibicin competitiva es reversible. El resultado de la competencia en cada
momento depende de cuntas molculas de sustrato y de inhibidor estn presentes.
Por ejemplo, en una va enzimtica:

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el producto final (E) puede tener una estructura similar al producto B y competir por el
centro activo de la enzima Ez. Cuando E sea consumido por la clula, el centro activo de la
enzima Ez estar disponible totalmente para B.

- Inhibicin no competitiva
En la inhibicin no competitiva, el inhibidor que no necesita parecerse al sustrato, se une a
la enzima en un sitio distinto al centro activo. La unin del inhibidor no competitivo a la
enzima, no bloquea la fijacin del sustrato e inactiva la enzima, este presente o no el
sustrato. Al igual que la inhibicin competitiva, la inhibicin no competitiva es reversible.

- Inhibicin acompetitiva o incompetitiva

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En la inhibicin acompetitiva el inhibidor se fija a un sitio diferente al del sitio activo. Este
inhibidor slo se une a la enzima (E) cuando ya se ha formado el complejo ES enzima-
sustrato. El inhibidor slo se une al complejo (ES)

I.3.5.2 Inhibicin irreversible

Algunas sustancias inhiben a las enzimas irreversiblemente, porque se unen
permanentemente con grupos funcionales al centro activo o, porque desnaturalizan
completamente a las protenas. Los inhibidores suicidas o inactivadores basados en el
mecanismo, son compuestos poco reactivos que en un inicio dejan que la reaccin
enzimtica normal se realice, pero que al ser transformados, se convierten en compuestos
muy reactivos que se combinan irreversiblemente con la enzima.

I.3.6 Otros Tipos de regulacin enzimtica

La actividad enzimtica puede regularse de diferentes maneras. Se ha visto hasta el
momento, el efecto de los cofactores, la temperatura, el pH y la inhibicin. No obstante,
existen otro tipo de reguladores expuestos a continuacin:

I.3.6.1 Regulacin por modificacin covalente

La regulacin covalente se produce por la unin covalente de un modulador a una enzima.

Esta modificacin covalente puede ser reversible cuando las enzimas modifican su funcin,
unindose covalentemente a ciertas molculas. (Fosfato, adenosina- monofosfato, ad.-
difosfato, a grupos metilo.)

I.3.6.2 Por fijacin a protenas control

La protena control bloquea la funcin de la enzima cuando se une a ella.

I.3.6.3 Por escisin proteica (se diferencia de las tres otras porque es
irreversible)
La escisin proteica suele formar una enzima activa, partiendo de un precursor inactivo de
la enzima, llamado zimgeno. La escisin de esta molcula conlleva a la activacin de la
enzima.

I.3.6.4 Interacciones alostricas

La interaccin alostrica es un mecanismo con el cual, una enzima puede activarse o

inactivarse temporalmente. Estas interacciones slo ocurren cuando las enzimas poseen al
menos dos sitios de unin. Uno sera el centro activo y el otro, conocido como centro
regulador, sera el sitio donde se une el efector alostrico.

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Las interacciones alostricas suelen localizarse en puntos estratgicos de las vas
enzimticas, en los primeros pasos o en puntos de ramificacin entre varias vas. A veces,
el propio sustrato acta de efector activador y su unin a la enzima induce cambios en la
conformacin del centro activo que favorecen la catlisis enzimtica.

Otras veces, el producto final de una secuencia de reacciones acta como efector alostrico
inhibiendo la funcin de una de las enzimas. Este proceso se denomina inhibicin por
retroalimentacin o inhibicin feed-back, y supone un ahorro energtico, pues el exceso de
producto final inhibe su propia sntesis en los primeros pasos.

I.4 Nomenclatura

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Existen diferentes sistemas de clasificar las enzimas: numrica, funcional y sistemtica. A
continuacin se ven los tres tipos de formas:
I.4.1 Numrica

A cada enzima se le asignan 4 nmeros separados por puntos y precedidos por EC: EC
1.1.1.49.
El primer nmero designa la clase, el segundo la subclase, el tercero la subsubclase y el
cuarto el orden en la lista.

I.4.2 Clases segn su funcin

Las enzimas se pueden organizar clasificndolas segn el sustrato sobre el que actan y
adems se les puede aadir un sufijo ASA. Por lo tanto en la tabla siguiente se exponen las
enzimas clasificadas segn la funcin que desempean.

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I.4.3 Sistemtica

Las enzimas pueden ser nombradas de forma sistemtica, es decir que su nombre ser
formado por el nombre del sustrato sobre el que trabajan, el tipo de reaccin que realizan y
ASA. Este nombre puede ser fijo segn la reaccin que desempean.
Nombre del sustrato + tipo de reaccin de los enzimas + ASA
Algunos ejemplos:

1. Deshidrogenasa:
Son oxidoreductasas en las que el aceptor de electrones es distinto del O2
2. Oxidasas:
Son enzimas REDOX en los que el aceptor es el O2 (Ej. glucosa oxidasa.)
3. Oxigenasa:
Cataliza la adicin de O2 al sustrato

Bibliografia

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Omega, Barcelona, 2006, p. 194.
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CREMOSI, P., Luso degli enzimi nella pulitura di oprer policrome, Ed. Il prato, Padova,
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