MANEJODE

MICROPIPETAS

Objetivos
Identificarlaspartesquecomponenlasmicropipetas.
Utilizarlasdemaneraadecuadayseguirloscuidadosindicadosparasu
mejorconservacin.
Realizar el clculo de la exactitud y del coeficiente de variacin de las
medicionesconmicropipetas.



Antecedentesacadmicos
Manejodematerialdelaboratorio.
Tiposdemicropipetas.
Calibracindemicropipetas.
Tiposdeerroresdemedicin.

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BioqumicaCelularydelosTejidosI

Introduccin
Lasmicropipetassondispositivosquesecaracterizanporcarecerdedepsito
yqueseutilizanparamedirotransvasarpequeosvolmenesdelquidode
un recipiente a otro con gran exactitud, permiten medir volmenes
pequeos que van desde 0.1 L y comnmente hasta 1 mL. Hoy en da
existen unagrancantidaddecompaas ymodelossimilares que funcionan
bajounmismoprincipiodepistones.Porloanterior,esimportanteconsultar
las instrucciones del fabricante sobre el empleo correcto de cada modelo.
Una caracterstica comn a todas es que utilizan puntas descartables
plsticasqueseajustanalextremodecadamodelodemicropipeta.Enestas
puntasdeplsticoesdondesedepositaellquidoamedir.
Existen micropipetas que solo miden un volumen fijo y otras que miden
volmenes variables. Las de volumen fijo son ms precisas que las de
volumen variable. Adems pueden ser usadas de forma manual o
electrnicamente automatizada; siendo stas ltimas de alto costo por lo
quesuusoselimitaenequiposautomatizadosorobticos
La pipeta mecnica o de pistn funciona generalmente transmitiendo la
fuerzaqueunoperadorejercesobreunmboloqueseencuentraunidoaun
pistnmedianteunejequelosdesplazaalolargodeuncilindrodelongitud
fija,forzandounvolumenpredefinidodelquidofueradelapipeta.
Lapipetasdepistndevolumenfijo,dispensanunvolumenpredeterminado
delquido,elcualesconocidocomovolumennominal(Vn)ylasdevolumen
variable permiten ajustar el volumen dispensado dentro de un rango
determinado en las especificaciones de la pipeta; en este caso, la variacin
delvolumenselogramodificandolalongituddelacarreradelpistndentro
delmbolomedianteunmicrmetro.
Laspipetasdepistnpueden serde desplazamientoporaireoneumticas,
debidoaqueexisteunvolumendeaireentrelacabezadelpistnyellquido
enelcilindro,odedesplazamientodirectoporqueelpistnseencuentraen
contactodirectoconellquido(Fig.1).

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 Manejodemicropipetas

Fig.1.Tiposdepipetasdependiendodelaformadelpistn.Imagentomada

deOrganizacinPanamericanadelaSalud(2005).Manualde
mantenimientoparaequipodelaboratorio(178).

Todaslaspipetasdepistndisponendepuntasdesechablesparaminimizar
losriesgosdecontaminacin.Parafacilitarelusodeltipodepuntaadecuado
los fabricantes han adoptado un cdigo de color segn el volumen a
dispensar(Cuadro1)yqueenlasdeusomsgeneralcoincideconelcolorde
laspuntasutilizadas.

Cuadro1.Capacidaddelaspipetasporcdigodecolores

Volumen dispensado por la pipeta. Color caracterstico utilizado para

Rango en microlitros L identificar

0.1-2.5 L Negro

0.5-10 L Gris

2.0-20 L Gris/ amarillo

10-100 L Amarillo

50-200 L Amarillo

100-1000 L Azul

500-2500 L Rojo

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BioqumicaCelularydelosTejidosI

LaspipetasutilizadasennuestroslaboratoriossondeltipoGilson(Figs.2y
3).Cadamarcatienesusparticularidades,especialmenteconelajusteexacto
de las puntas desechables; sin embargo, el uso, cuidado y calibracin es
similarparatodaslasdesutipo.

Fig.2.ImgenesdepipetasdelamarcaGilsondedistintas

capacidades.

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 Manejodemicropipetas

Tornillodelbotn Botnpulsador
pulsador

Ruedadentada
Botnparaquitar
decontrol
puntas
volumen

Ventanade
volumen

Eyectordepunta

Conodepipeta

Punta
desechable

Fig.3.Esquemadelaspartesquecomponenunmicropipetadela
marcaGilson.

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BioqumicaCelularydelosTejidosI

Recomendacionesparaelpipeteo:

La profundidad de inmersin de la punta es especialmente importante

enelusodevolmenespequeos.Silapuntasesumergedemasiado,se
aspiramsliquidodebidoalaumentodelapresin.Siporelcontrario,
la punta no se sumerge lo suficiente, se puede cargar aire con las
consiguientesburbujasyvolumeninadecuado.
Es fundamental mantener un ritmo, velocidad y tcnica adecuada al
mover el mbolo. Una aspiracin demasiado rpida e incontrolada
puede llevar a la formacin de aerosoles, salpicaduras y posible
contaminacin del eje y del pistn, lo que puede producir incluso
prdidadevolumendelamuestra.
Sedebeprocurarmantenerelngulodeinmersindelapipetaloms
cercano a la vertical posible. De otra forma, la columna vertical de
lquido ser ms pequea y se aspirar demasiada muestra. Por el
contrario, al dispensar el lquido, la punta se ha de mantener en un
ligero ngulo frente a la pared del vaso para asegurar un correcto
vaciado.
Paralamayoradeaplicacionesserecomiendadispensarconelextremo
de la punta apoyado contra la pared del recipiente. As se reduce o
elimina el hecho de que se quede algo de muestra en el interior de la
puntadespusdeacabarladispensacin.Retirarlapipetadeslizandoel
extremo de la punta hacia arriba por la pared lateral para liberar
cualquiergotarestanteenelorificiodelapunta.Otratcnicaconsiste
endosificardirectamenteenlasuperficiedellquido.Escrucialusaruna
puntadeparedfinaparaquenoquedeningunagotaenelinteriordela
punta. Si se dispensa directamente dentro del lquido tendremos que
sacarlapipetamantenindolaenelsegundotopeparaevitarunatoma
demuestradespusdeladispensacin.
Se recomienda enjuagar previamente las puntas como mnimo dos
vecesconellquidoapipetearparacompensarlapelculadelquidoen
elinteriordelapunta.Elenjuaguepreviotambintieneotrasventajas:
ayudaaneutralizarlosefectosdecapilaridadeigualalatemperaturay
humedad del aire del interior de la pipeta con la temperatura y
humedaddelamuestra.

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 Manejodemicropipetas

Material
Micropipetasp20,p200,p1000yp5000L
Balanzaanaltica
Unacajapetriounvasodeprecipitadode10mL.
Puntasdesechablesparalasmicropipetas
Aguadestilada



Mtodo
1. Pasosparamanejarunamicropipeta:

a. Ajustarelvolumengirandolaruedadentada
de control de volumen hasta que en la
ventanaaparezcaelvolumendeseado.

b. Colocar una punta descartable adecuada en la

punta de la pipeta haciendo una leve presin
paralograrunbuenajuste.

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BioqumicaCelularydelosTejidosI

c. Oprimir el botn pulsador con el dedo pulgar,

hasta el primer tope y sin soltarlo introducir
verticalmente la pipeta, hasta que la punta se
sumerja de 2mm para volmenes pequeos,
hasta5mmparavolmenesmayoresdentrodel
lquido.

d. Liberar lentamente la presin sobre el botn,

despus de 23 segundos retirar, siempre
verticalmente,lapipetadellquidodeslizandola
puntacontralapareddelrecipiente.

e. Apoyandolapuntacontralapareddelrecipiente
colocarellquido,presionarlentamenteelbotn
pulsador hasta el primer tope. Despus de un
segundo,ysinsoltarelbotnpulsador,terminar
devaciarlapipetapresionandohastaelsegundo
tope.

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 Manejodemicropipetas

f. Retirar la pipeta deslizando la punta contra la

pared del recipiente.

2.Precaucionesparano daarelsistemainterno de pistonesque poseela

micropipeta:

a.Ellquidonodebeentrarencontactoconelconodelamicropipeta.

b.Nuncainvertirlamicropipetaconlapartedearribahaciaabajo.

c. No colocar la micropipeta en forma horizontal si la punta tiene

lquido.

d. Jams ajustar el volumen fuera del rango de la micropipeta (No

forzareltornillomicromtricodeajustedevolumen).

3.Clculodelaexactitud(E%)ydelcoeficientedevariacin(CV%):

a. Para cada micropipeta revisar el porcentaje de exactitud (E%) y el

coeficiente de variacin (CV%) en todo el rango usando al menos dos
volmenesdiferentesyelvolumenmnimoyelmximodelamicropipeta.

b.Seleccionarlamicropipetaylaspuntasadecuadas.

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BioqumicaCelularydelosTejidosI

c.Colocarelvasodeprecipitadounacajapetrienlabalanza,anotar
elpesoytararacero.

d.Tomarelvolumendeaguadestiladaconlamicropipetaycolocaren
elvasoqueseencuentraenlabalanza.

e.Registrarelpesodelaguaaadido.Ladensidaddelaguaes1g/mLa
25 C, por lo tanto un volumen de 1 mL corresponde aproximadamente a
unamasade1g,(1ml=1000L).

f.Repetirelprocedimientodiezvecesparacadavolumen.

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 Manejodemicropipetas

4.Clculodelvolumenmedio:

Los valores de las pesadas del control gravimtrico son slo la masa del
volumen dosificado. Para obtener el volumen real se debe efectuar un
clculo corrector. El clculo corrector se realiza por multiplicacin del valor
mediodelosvaloresdelaspesadas(x)conelfactorZ(mL/gqueeslomismo
queL/mg),quetomaenconsideracinladensidaddelagua,latemperatura
de control y la presin atmosfrica. Z es igual a 1.0032 L/mg, referido a
21.5C, 1013 mbar (hPa) y a la utilizacin de agua destilada o Z es igual a
1.0029L/mg,referidoa20.5Cy1013mbar(hPa).

Ejemplo:

Valoresdelcontrola21.5C(Z=1.0032L/mg)

VolumencontroladoVo(eselvolumendelapipetaquesecalibra)

EjemploVo(L):20L(x)

ValornominalV(mg)=Volumencontrolado/Z

Valornominal(mg):(20L/1.0032L/mg)=19.9362mg

x1=20.0mgx2=19.9mgx3=19.5mgx4=19.6mgx5=19.9mg

Valormedio

=xi/n
x =resultadodelaspesadas

n=nmerodepesadas

Volumenmedio

= *Z =promediodelaspesadas
Z=factor
Exactitud

E(%)= Vnominal/Vnominal*100

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Desviacinestndar

S=Z*

Coeficientedevariacin

CV(%)= *100

Silosvalorescalculadosdeexactitud(E%)yelcoeficientedevariacin(CV%)
son menores que los valores de tolerancia o iguales a stos, entonces la
pipetaestenorden.

Limitesdetolerancia

Volumen(L) E%nominal CV%nominal

510 1.0 0.8

2010 0.7 0.4

1001000 0.5 0.2

Esta metodologa permite adiestrarse en el control de la precisin y la

exactitud de una pipeta, comparar diversos tipos de pipetas entre s para
detectar si hay diferencias entre ellas. Adems detectar la exactitud y la
precisindeunlotedepipetasycontrolarfactoresatribuiblesalautilizacin
deunapipetapordiversosusuarios.

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 Manejodemicropipetas

Resultados
- Realizar en anlisis de los datos obtenidos con las frmulas
proporcionadas.
- Calcularlaexactitudyprecisinquetienenlasmicropipetasutilizadas
enellaboratorio.

Cuestionario
1.Definaqueescalibracin

2. Cules otros parmetros se utilizan para realizar la calibracin de una

pipeta?

3.Definaqueesexactitudyprecisin

4.Qumarcasdemicropipetassonlasmscomunes?

5. Cuntos rangos de volumen se manejan en las micropipetas y cules

son?

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Referencias
1. CatlogodeProductosdeManejodelquidos.LT800507/A.USA:Gilson
S.A.S.;2011.
2. Garca M, Silva M. Manual del tcnico superior de laboratorio de
anlisisclnicos.Espaa:MAD;2004.
3. Instrucciones de Trabajo Estndar para Pipetas. AESOP13640.
Germany:EppendorfAG;2013.
4. Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de mantenimiento
paraequipodelaboratorio.Washington:2005.
5. Segal C, Ortega G. Manual de prcticas de biologa molecular de la
clulal.Mxico:FacultaddecienciasdelaUNAM;2005.
6. UsersGuide.PIPETMANP.LT801129/A.France:GilsonS.A.S.;2009.

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