Tecido Vegetal

CAPTULO 8 - TECIDO VEGETAL
Ana Rita A. Nogueira'

Areolino de Oliveira Matos?
Ciraca A. F. de Santana do Carmo", Coordenadora
Oav J. Silva"
Flvio Lages Monteiro"
Gilberto Batista de Souza'
Gilson Villaa Exel Pitta"
Gonalo Mouro Carlos?
Henrique de Oliveira"
Jos Anibal Comastri Filho"
Mario Mivazawa'?
Waldemar de Oliveira Neto"
1. INTRODUO
Os teores dos elementos N, P, K, Ca, Mg, S, B, CI, Cu, Fe, Na, Mn, Mo
e Zn, encontrados nos tecidos vegetais, constituem um dos parmetros mais
eficientes para avaliar o estado nutricional das plantas. As anlises qumicas
do tecido vegetal, em conjunto com a anlise de solo, so amplamente
utilizadas na agricultura para diagnstico do estado nutricional das plantas,
constituindo um dos mais valiosos instrumentos de auxlio na recomendao
de um programa racional de adubao, principalmente no caso de culturas
perenes e semiperenes, como as fruteiras e a cana-de-acar. Essas
determinaes so normalmente realizadas nas folhas, por ser esse o rgo
que melhor reflete se a planta est bem nutrida ou no, se h falta ou
excesso de nutrientes.
Para a determinao dos teores dos elementos qumicos presentes nas
plantas, so utilizados diferentes mtodos analticos. Muitos so os fatores
envolvidos na escolha dos mtodos e os mais importantes so: fatores
de segurana (periculosidade, toxidez), disponibilidade do equipamento,
elemento a ser determinado, preciso e exatido, tempo necessrio para
'Embrapa Pecuria Sudeste; 2Embrapa Amaznia Oriental; 3Embrapa Solos; "Ernbrapa Semi-
rido; 5Embrapa Agrobiologia; 6Embrapa Milho e Sorgo; 7Embrapa Cerrados; 8Embrapa
Agropecuria Oeste; 9Embrapa Pantanal; 'Olnstituto Agronmico do Paran, IAPAR; "Embrapa
Soja.
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obteno dos resultados, limites de deteco e determinao, capacitao
do analista e custo. Os resultados fornecidos so referentes aos teores dos
elementos presentes na matria seca do tecido vegetal.
Neste documento esto descritos alguns dos principais mtodos de
anlise de plantas normalmente executados em laboratrios da Embrapa.
So mtodos tradicionais, j devidamente avaliados e publicados, que
so adotados por apresentarem boas condies de preciso e de exatido
analticas.
2. DECOMPOSiO E SOLUBILlZAO
2.1 INTRODUO
Para a determinao dos teores de elementos qumicos individuais

em amostras de plantas normalmente necessria a transformao da
matriz orgnica original em uma forma inorgnica simples. A grande maioria
das tcnicas analticas exige que o analito esteja dissolvido em meio aquoso.
Em razo da baixa solubilidade das plantas em gua, para que o analito
de interesse esteja disponvel para anlise necessria a decomposio do
material orgnico com agentes oxidantes e/ou altas temperaturas, para sua
incinerao e aumento da capacidade oxidante dos cidos. Apesar de no
estarem sendo tratadas neste trabalho, existem tcnicas que requerem que as
amostras estejam na forma slida, como espectrometria at~ica com arco,
fasca, ablao com laser e aquelas baseadas em reaes de combusto.
Outras tcnicas podem ainda ser aplicadas s amostras, tanto na forma
slida como na forma lquida, tais como anlise por ativao neutrnica
instrumental e espectrometria de fluorescncia de raios X (KRUG, 2000).
Normalmente, a dissoluo de plantas realizada por um dos
seguintes mtodos: via seca (mediante alta temperatura de combusto) e via
mida (digesto em meio cido). As duas tcnicas apresentam resultados'
semelhantes, quando realizadas de maneira apropriada. Na escolha de
uma tcnica ideal para a dissoluo de uma amostra, deve-se sempre ter
em mente os resultados esperados, tais como os teores aproximados dos
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analitos na amostra e os nveis de sensibilidade da tcnica que se deseja
empregar (AOAC, 1995; MILLS & JONES, 1996; QUEVAULlEE: 1995).
Assim, o mtodo deve ser capaz de disponibilizar completamente o elemento
de interesse e ser razoavelmente rpido, os reagentes no devem atacar
o recipiente em que ser feita a reao, o que pode provocar perdas por
adsoro e/ou absoro, e no conter contaminantes que possam interferir
nos resultados. Deve-se ainda verificar as temperaturas de trabalho, para
que no haja perdas por volatilizao ou formao de aerossis e a soluo
final dever conter todos os analitos de interesse. Item fundamental a ser
considerado a segurana, pois o procedimento dever apresentar o mnimo
de insalubridade e de periculosidade, devendo-se atentar pata o uso correto
dos equipamentos de proteo coletiva e individual.
2.2. DECOMPOSiO POR VIA SECA
2.2.1. PRINCPIO
Baseia-se na queima da frao orgnica da amostra, obtendo-se resduo
inorgnico na forma de cinza solvel em soluo diluda de cido (HCI, HNO)
ou de lcali (NH40H, NaOH). A amostra de tecido vegetal colocada em
cadinho (quartzo, porcelana, etc.) e incinerada em forno tipo mufla eltrico
a uma temperatura entre 500 e 550C na atmosfera ambiente. O oxignio
da atmosfera atua como agente oxidante e o resduo proveniente da queima
constitudo por xidos de metais, sulfatos no volteis, fosfatos, silicatos
e outros. Por este mtodo podem ser determinads os seguintes elementos:
K, Ca, Mg, S, Fe, Mn, Cu, B, Mo e AI.
2.2.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

a) Forno do tipo mufla, com controle de temperatura.
b) Cadinhos de porcelana.
c) Pina metlica, para manuseio dos cadinhos.
2.2.3. REAGENTES E SOLUES

a) gua destilada e desionizada.
b) cido ntrico (HN03), 1,0 moi L-1:diluir 71,4 mL de HN03 concentrado em
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cerca de 400 mL de gua, esfriar e transferir para balo volumtrico de 1000
mL. Completar o volume com gua.
c) cido clordrico (HCI), 1,0 moi l.": diluir 83,3 mL de HCI concentrado em
cerca de 400 mL de gua, esfriar e transferir para balo volumtrico de 1000
mL. Completar o volume com gua.
2.2.5. PROCEDIMENTO
Transferir, para cadinho de porcelana, 0,50 g ( 0,001 g) de amostra
previamente seca a 65C por 48 a 72 h e moda em moinho de facas, com
peneira de 1,0 mm. Colocar o cadinho em forno do tipo mufla com temperatura
controlada e aumentar gradativamente a temperatura para 500 a 550C.
Incinerar a amostra durante 2 a 4 h, aps atingir a temperatura desejada, at
a obteno de cinzas claras. Esfriar, recuperar em 5,0 mL de HCI ou HN03 a
1,0 moi l.". Transferir para balo volumtrico de 25 mL, completar o volume
com gua e filtrar. A soluo est pronta para determinao elementar. O
extrato poder sofrer novas diluies, para obter a concentrao do elemento
desejado dentro da faixa analtica do instrumento.
OBSERVAES:
1. A temperatura do forno do tipo mufla deve ser elevada
lentamente, at atingir de 500 a 550C. As amostras
no devem nunca ser colocadas em forno quente, nem
a porta do forno ser aberta durante a fase inicial da
queima. A tualmente tambm so comercializados fornos
do tipo mufla que utilizam radia microondas como
fonte de aquecimento.
2. Em certos casos, as perdas por volatilizao podem ser
evitadas pela adio de modificadores. Por exemplo,
adio de H2SO4: os c/oretos relativamente volteis, tais
como PbCI2' CdCI2 e NaCI, so convertidos em sulfatos
no volteis. As perdas de nions, como os de cloreto
e os que contm arsnio, fsforo ou bora, podem ser
evitadas pela adio de vrias bases, geralmente xidos
ou hidrxidos de metais alcalinos ou alcalino-terrosos,
carbonatos de alcalinos, nitrato de metais alcalino-
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terrosos e acetato de magnsio.
3. Amostras com altos teores de carboidratos requerem o
tratamento com agentes modificadores auxiliares para
a completa queima do carbono existente na amostra.
A presena dos modificadores tambm pode acelerar a
oxidao, prevenir a volatilizao de certos componentes
das cinzas e prevenir as reaes entre os componentes
da cinza com o material do cadinho. A seguir, descrito
procedimento que pode ser adotado nesse caso:
Transferir 0,50 g ( 0,001 g) de amostra seca e
moda para cadinho. Adicionar 10 mL de soluo
do agente auxiliar (7% (m/vl) de nitrato de magnsio
(Mg(NOJ26H20)) e colocar o cadinho em banho de areia
ou sobre chapa aquecedora at completa secagem. Aps
esse procedimento, o cadinho colocado no forno do
tipo mufla e a temperatura deve ser lentamente elevada
at 500C, permanecendo nessa temperatura durante 4
h. A amostra resfriada e as cinzas so dissolvidas em
HN03 ou HCI a 20% (v/v) ou gua rgia (1 parte de HN03
concentrado para 3 partes de HCI concentrado), para
solubilizao das cinzas.
VANTAGENS
a) No utilizao de soluo de cidos oxidantes concentrados.
b) Possvel utilizao de massas elevadas de amostras, o que permite a
determinao de elementos presentes em baixas concentraes.
LIMITAES
a) Perdas por volatilizao de alguns elementos (Co , Pb, Se, As, dentre
outros).
b) Baixa velocidade analtica.
c) Alto consumo de energia eltrica
d) O esmalte de cadinhos de porcelana, mais comumente utilizados, pode
reagir com silicatos, fosfatos e xidos presentes nas amostras. Em casos
especiais recomendvel trabalhar com cadinhos de quartzo ou' de
platina.
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2.3. DECOMPOSiO POR VIA MIDA
2.3.1. PRINCp!o
o mtodo mais utilizado para decomposio de material vegetal.
As amostras so solubilizadas com cidos oxidantes concentrados ou
mistura desses com perxido de hidrognio. Os cidos ou as misturas mais
utilizados so: HN03, H2S04, HCI, HC104, HN03 + HCI, HN03 + HC104,
HN03 + H202, HN03 + HCI04 + H2S04, HCI04 + H2S04 e H2S04 + H202
A maioria das amostras totalmente oxidada, deixando os elementos a
serem determinados na soluo cida em formas inorgnicas simples e
apropriadas para anlise. A utilizao individual do cido ou da mistura
depende da natureza da amostra e do elemento a ser analisado. Este mtodo
recomendado para determinao, dentre outros, dos elementos K, Ca, Mg,
Cu, Fe, Mn, Zn, AI, Na, Cr, Ni, V, Pb, Cd, Co e Mo. Pode tambm ser usado
para a determinao de N, P e S, entre os no-metais. Entretanto, alguns
elementos podem ser perdidos completa ou parcialmente por volatilizao.
aqui podendo ser includos os halognios, alm de Sb, As, B, Hg e Se,
dependendo do procedimento utilizado.
Alm dos blocos digestores, a digesto por via mida tambm pode
ser realizada em fornos com radiao microondas especficos para utilizao
em laboratrios. Esses fornos podem operar com sistemas fechados com
alta presso ou sistemas com radiao focalizada, que operam presso
atmosfrica. As microondas constituem energia eletromagntica no
ionizante, que causa movimento pela migrao de ons e pela rotao dos
dipolos. A fonte de energia para a solubilizao das amostras so ondas de
rdio, de cerca de 2.450 MHz, cuja potncia varia de 600 a 1.000 W.

a) Capela de exausto resistente a cidos oxidantes.
b) Bloco digestor com controlador de temperatura (itens A, B, E e F).
c) Forno de radiao microondas com controladores de presso e temperatura
- sistema fechado de alta presso (item C).
d) Forno com radiao microondas focalizadas - presso atmosfrica
(item D).
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e) Tubos de digesto em vidro borossilicato, medindo 25 x 250 mm (itens
A, B, E e F).
f) Frascos de borossilicato, Teflon" ou quartzo (item C).
g) Vidrarias (pipetas, bales volumtricos, funis, etc.) (itens A a F).
Observao: A, B, C, D, E e F referem-se aos procedimentos,
descritos no item 2.3.4.

a) Soluo nitro-perclrica (HN03 + HCI04), na proporo de 2:1. Misturar
400 mL de HN03 a 65% (v/v) + 200 mL de HCI04 a 72% (v/v) (item
A).
b) Soluo nitro-perclrico-sulfrica Il-lN , + HCI04 + H2S04), na proporo
de3:1:1 (item C).
c) Soluo de perxido de hidrognio + cido sulfrico (H202 + H2S04), na
proporo de 1: 1 (item D).
d) cido ntrico (HN03) a 65% (v/v) (item B, C e D).
e) Perxido de hidrognio (H20) a 30% (item B, C e D).
f) cido sulfrico concentrado (97 a 98%).
g) Mistura cataltica: pesar 100 9 de sulfato de potssio + 10,0 9 de sulfato
de cobre, misturar bem e triturar em almofariz.
Observao: A, B, C e D referem-se aos procedimentos,

descritos no item 2.3.4.
A TENO: Lembre-se de que voc est manuseando

cidos. Use os equipamentos de proteo individual:culos,
avental e luvas.
2.3.4. PROCEDIMENTOS
A) DECOMPOSICO COM MISTURA CIDA: CIDO NTRICO E CIDO

PERCLRICO
Transferir, para tubo de digesto, 0,50 9 ( 0,001 g) de amostra previamente

seca a 65C por 48 a 72 h e moda em moinho de facas, com peneira de
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1,0 mm. Adicionar 6,0 mL do reagente 2.3.3.a., misturar bem e deixar
. temperatura ambiente por aproximadamente 4 h (ou por uma noite).
Colocar os tubos no bloco de digesto e aquecer gradativamente at
120C; manter nessa temperatura at cessar totalmente o desprendimento
de N02 (vapor castanho). Aumentar a temperatura lentamente, at atingir
210C, temperatura que mantida at que se obtenham fumos brancos
de HCI04H20 e que o extrato se apresente incolor ( 20 min). Esfriar e
completar o volume para 50,0 mL com H20. Nessas condies, a soluo
final estar em meio de HCI04 a 0,25 moi l,".
OBSERVAES
1. Retirar os tubos do bloco se houver indcio de perda do
material.
2. No utlzar cido perclrco em concentrao superior a
72%.
3. A diluio depender da concentrao do enelito na
amostra, para se atingir a concentrao necessria
dentro da faixa analtica da tcnica instrumental utilizada,
podendo ser menor ou maior.
4. Em algumas amostras com alto teor de slca (p. ex.,
palha de arroz), ocorre extravasamento do tubo de
anlise, podendo provocar perdas de soluo e de analito.
Nesse caso, recomendado o emprego da mistura de
cidos (item 2. 3. 3. c), pois o H2S04 ajuda a prevenir esse
problema.
VANTAGENS
a) As plantas so decompostas quase que totalmente com essa combinao
de cidos oxidantes.
b) Mtodo mais empregado para dissoluo de plantas.
c) cido ntrico modera a ao oxidante do cido perclrico, reagindo
com materiais facilmente oxidveis, que poderiam reagir com o cido
perclrico de maneira perigosa.
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LIMITAES
a) Por ser empregado na forma oxidada e a quente, o cido perclrico
apresenta perigo de exploso quando em contato com material orgnico.
Ler, por exemplo, descrio de mais de 30 casos de exploses violentas
no "Handbook of Laboratory Safety", Boca Raton, CRC Press, 2nd ed.,
1971. 854p.
b) Necessidade de utilizao de capelas especiais.
c) Utilizao de cidos concentrados e de difcil aquisio, pois se trata
de produtos controlados pelo Exrcito, pela Polcia Civil e pela Polcia
Federal.
d) Emisso de vapores txicos.
B) DECOMPOSIO COM CIDO NTRICO E PERXIDO DE HIDROGNIO
Transferir, para tubo de digesto, 0,50 g ( 0,001 g) de amostra previamente

seca a 65C por 48 a 72 h e moda em moinho de facas, com peneira de 1,0
mm. Adicionar 4,0 mL de HN03 conce~trado (65%), deixar em repouso por
uma noite. Aquecer lentamente o bloco digestor, at 120C, e manter nessa
temperatura por 1 h. Retirar os tubos do bloco e deixar esfriar. Adicionar
4,0 mL de H202 (30%), retornar ao bloco e repetir a adio de perxido de
hidrognio, at a soluo se tornar incolor. Deixar esfriar, transferir para
balo volumtrico de 50 mL e completar o volume com gua.
OBSERVAO: Mistura adequada. para amostras com alto

teor de carbono.
VANTAGENS
a) No utilizao de cido perclrico.
b) H202 um agente oxidante poderoso.
poder oxidante do cido ntrico
aumentado com a utilizao do perxido de hidrognio, que atua como
agente oxidante auxiliar.
e) H202 eomereializado com alto grau de pureza.
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LIMITAES
a) A amostra no totalmente decomposta.
b) Emisso de vapores txicos.
C) DECOMPOSIO ASSISTIDA POR RADIAO MICROONDAS EM

FRASCOS DE ALTA PRESSO
tecido vegetal solubilizado com cido ntrico e perxido de hidrognio

em sistema fechado, a cerca de 180C e presso de 20 a 25 bar (KRUG,
2000). importante que o equipamento seja equipado com sensores de
presso e temperatura. Pesar 0,25 g ( 0,001 g) de amostra previamente
seca a 65C por 48 a 72 h e moda em moinho de facas com peneira de
1,0 mm. Transferirpara frasco de decomposio adequado, fornecido pelo
fabricante do equipamento (pTFE modificado, quartzo, etc.). Adicionar 5,0
mL de HN03 a 65% (v/v) e 2,0 mL de H202 em cada frasco. Se necessrio,
deixar a mistura em repouso por alguns minutos, at que diminuam eventuais
reaes com a amostra. Um dos frascos do equipamento deve ser reservado
para o branco, em que adicionado o mesmo volume de reagentes, sem
amostra. Colocar os discos de segurana, fechar os frascos e coloc-I os
no carrossel, conforme descrito no manual do equipamento. Programar a
rampa de aquecimento conforme o programa adequado para a amostra e
iniciar a digesto. Esfriar, transferir para balo volumtrico (25 a 100 mL) e
completar o volume com gua.
OBSERVAES:
1. A proporo de amostra:cido e o programa de
aquecimento so definidos de acordo com a amostra
e em funo das caractersticas especficas do forno de
microondas utilizado.
2. Tomar sempre o cuidado de ter uma amostra no frasco
de controle de presso e temperatura para o correto controle
da decomposio.
3. Os polmeros modificados e o quartzo so empregados
I
por serem materiais que no absorvem energia das
154
microondas e resistem aos cidos oxidantes a quente.
4. Em amostras com altos teores de slica poder ser
utilizado cido fluordrico. nesse caso, no pode ser utilizado
frasco de quartzo.
5. A diluio depender da concentrao do analito na
amostra para se atingir a concentrao necessria dentro
da faixa analtica da tcnica instrumental utilizada, podendo
ser menor ou maior.
VANTAGENS
a) Mtodo rpido e preciso.
b) Menor consumo de reagentes.
c) Mnimo de contaminao.
d) Desprendimento de gases e vapores txicos controlado.
e) No h perda de analitos por volatilizao.
f) Temperatura e presso de trabalho mais elevadas.
LIMITAES
a) Segurana (h risco de exploses).
b) Nmero reduzido de amostras por anlise.
c) Limitao na massa de amostra (mximo 0,5 g).
d) Possveis efeitos de memria (em conseqncia da porosidade do
frasco).
e) Necessidade de resfriamento antes da abertura do frasco.
f) Alto custo do forno de microondas e dos acessrios.
D) DECOMPOSiO DE PLANTAS ASSISTIDA POR MICROONDAS COM

RADIAO FOCALIZADA
Pesar e transferir para frasco apropriado deO,5 a 5,0 9 ( 0,001 g) de amostra

peneira de 1,0 mm. Operar o sistema conforme as instrues fornecidas
155
pelo manual de operaes do equipamento. Normalmente, utilizado maior
volume de cido do que no sistema fechado. Esses cidos so adicionados
durante a execuo do programa de aquecimento. Esfriar, transferir para
balo volumtrico (25 a 100 mL) e completar o volume com gua.
OBSERVAES:
1. A utilizao de frascos abertos operados sob presso
atmosfrica viabiliza a programao de adio de
reagentes durante o ciclo de aquecimento.
2. adequado para o tratamento de elevadas massas de
amostras orgnicas que poderiam causar problemas
de segurana se tratadas em sistemas fechados
con vencionais.
3. Neste tipo de equipamento, a radicao microondas
focalizada individualmente em cada frasco, sendo
o sistema equipado com sensores individuais de
temperatura, permitindo o controle da temperatura em
cada cavidade.
4. A diluio depender da concentrao do analito na
. amostra para se atingir a concentrao necessria dentro
da faixa analtica da tcnica instrumental utilizada,
podendo ser menor ou maior.
VANTAGENS
b) Maior segurana (trabalha em presso atmosfrica).
c) Adequado para o tratamento de elevadas massas de amostra.
d) Adio de reagentes de maneira seqencial.
e) Alta eficincia e controle da energia fornecid reao.
LIMITAES
a) Nmero reduzido de amostras por anlise.
b) Alto custo.
156
c) Maior consumo de reagente, quando comparado com sistemas
fechados.
d) Possibilidade de contaminao.
e) Desprendimento de gases e vapores txicos (recolhidos em coletores).
f) Pode haver perda de analitos por volatilizao.
E) DECOMPOSIO POR VIA MIDA COM CIDO SULFRICO
Pesar 0,20 9 ( 0,001 g) de amostra previamente seca a 65C por 48 a 72h

e moda em moinho de facas, com peneira de 1,0 mm. Transferir para tubo
de digesto de 25 x 250 mm, adicionar 0,7 9 de mistura cataltica (K2S04 +
CuS04; 10:1 - item 2.3.3.g) e 2,5 mL de H2S04 concentrado (2.3.3.f), levar
ao bloco digestor e iniciar o aquecimento a 50C, aumentando a temperatura
gradativamente at 350C; depois de as amostras clarearem, manter por
mais 1 h no bloco digestor. final da digesto indicado pela colorao
verde-clara da soluo. Esperar esfriar e transferir para balo volumtrico de
100 mL, completando o volume com gua desionizada.
OBSERVAES:
1. Mistura utilizada para determinao de nitrognio,
fsforo e protena total.
2. Para diminuir o tempo de decomposio, poder ser
adicionado 1,0 mL de H202 a 30% antes de se iniciar o
aquecimento.
3. Para anlise de nitrognio, poder ser destilada a
amostra total. Nesse caso no h necessidade de
fazer esta diluio, apenas devero ser adicionados
aproximadamente 10 mL de gua desionizada para que
no haja cristalizao da amostra.
4. A utilizao de cido sulfrico no recomendada
para plantas com alto teor de Ca. Pode haver a
formao de sulfato de clcio (CaSOj, relativamente
insolvel, reduzindo o teor de clcio na soluo e
causando decrscimo no valor de outros elementos em
conseqncia de co-precipitaes.
157
VANTAGENS
a) Mtodo adequado para grande nmero de amostras.
b) Mais utilizado para a determinao de protena-nitrognio.
LIMITAES
a) Desprendimento de gases e vapores txicos.
b) Manuseio de cidos corrosivos e controlados pelo Ministrio do Exrcito,
pela Polcia Civil e pela Polcia Federal.
F) DECOMPOSIO POR VIA MIDA COM CIDO SULFRICO E PERXIDO

DE HIDROGNIO
Transferir, para tubo de digesto, de 0,10 a 0,30 g ( 0,001 g) de amostra

previamente seca a 65C por 48 a 72 h e moda em moinho de facas com
peneira de 1,0 mm. Adicionar 2,0 mL de H2S04 concentrado; misturar bem.
Esfriar e depois adicionar lentamente 2,0 mL de H202 a 30% pela parede
do tubo, com o tubo em rotao. Aguardar o incio da reao e colocar o
tubo no bloco digestor. Aquecer a 350C, at o aparecimento de fumos
brancos e continuar o aquecimento por mais 30 mino Remover o tubo do
bloco de digesto e deixar a amostra esfriar. Lentamente, adicionar 0,8 mL
de H202 e colocar de volta no bloco digestor. Aquecer, at o aparecimento
de fumos, por 20 mino Depois de o extrato ficar incolor, remover o tubo do
bloco digestor, esperar esfriar, transferir para balo volumtrico de 100 mL
e completar o volume com gua.
OBSERVAES
l . Mistura utilizada para determinao de nitrognio, fsforo
e protena total.
2. Se a colorao amarelada persistir, adicionar mais
algumas gotas de H202 antes de transferir o extrato para
balo volumtrico.
3. A utilizao de cido sulfrico no recomendada para
plantas com alto teor de Ca. Pode haver a formao
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de sulfato de clcio (CaS04), que relativamente
insolvel, reduzindo o teor de clcio na soluo e
causando decrscimo no valor de outros elementos em
conseqncia de co-precipitaes.
VANTAGENS
a) Mtodo rpido.
b) Adequado para grande nmero de amostras.
LIMITAES
c) Desprendimento de gases e vapores txicos.
d) Manuseio de cidos corrosivos e controlados pelo Ministrio do Exrcito,
pela Polcia Civil e pela Polcia Federal.
c) Baixo nmero de elementos disponibilizados para anlise (devido a
problemas de co-precipitao).
d) Amostra no totalmente digerida (silicatos).
2.4. EXTRAO COM SOLUO DE CIDOS DILUDOS (1,0 moi L" de

HCI ou HN03)
2.4.1. PRINCPIO
Os elementos qumicos do tecido vegetal so solubilizados na soluo cida
diluda a 1,0 moi L,l (MIYAZAWA et aI., 1984). A decomposio da matria
orgnica no completa, porm essa extrao apresenta alta correlao na
determinao de alguns elementos (B, Ca, Cu, K, Mg; Mn, Na, P, Zn e N03')
com outros mtodos em que a decomposio da matria orgnica total,
como a decomposio por via seca ou por via mida (itens 2.2 e 2:3).
Banho com termostato.
Frasco de vidro borossilicato ou tubo de polietileno de 50 mL.
Agitador circular, de mesa, com controle de velocidade.
Funil de 15 mL.
Papel-filtro quantitativo, do tipo Whatman 42, de 15 mm de dimetro.
159
a) Soluo com 1,0 moI. L-1 de HCI ou HN03
2.4.4. PROCEDIMENTO
Pesar, e transferir para frasco apropriado, 'de 0,5 g ( 0,001 g) de amostra
peneira de 1,0 mm. Adicionar 25,0 mL de soluo com l,O moi L-1 de HCI ou
HN03 e anotar a massa total. Aquecer por 15 min no banho com termostato
a 80C, agitar durante15 min no agitador circular a 250 rpm. Esfriar, repor a
gua evaporada at massa inicial com gua e filtrar.
OBSERVAES:
1. Mtodo completo descrito em: Miyazawa, M., Pavan,
M., Bloch, M.F.M., Anlise qumica de tecido vegetal,
Instituto Agronmico do Paran, IAPAR, Londrina.
1992. Circular nQ 74.
2. A recuperao do P total quando determinado
em espectrmetro de emisso ptica com plasma
indutivamente acoplado ICP OES (altas temperaturas
permitem a determinao de P orgnico, em soluo,
alm do P inorgnico).
3. Para anlise de tecido vegetal na rotina, anotar a massa
total (frasco, amostra e soluo cide extratora) para
facilitar a reposio da gua evaporada.
4. Como alternativa, em lugar de pesar, possvel adicionar
o cido, aquecer e a seguir completar o volume em
balo volumtrico, mediante diluio apropriada (25 ou
50 ml.) e filtrar o extrato,
5. Seringa descartvel de 10 mL pode ser utilizada em
substituio ao funil, com a vantagem de ocupar menos
espao e exigir papel-filtro com menor dimetro (15
mml, cortado com vazador de .15 em.
160
VANTAGENS
a) Menor poluio do ambiente do laboratrio com gases e vapores txicos
ou corrosivos.
b) No h necessidade de aparelhagem especfica (como capela, mufla e
bloco digestor).
c) Simples, rpido e facilmente adaptvel para anlises em rotina.
d) Baixo custo.
LIMITAES
a) Extrao parcial dos elementos AI, Fe e S.
3. DETERMINAES ANALTICAS
3.1. NITROGNIO
3.1.1. SEMIMICRO KJELDAHL
3.1.1.1. PRINCPIO
Tcnica de decomposio por via mida, seguida por destilao a vapor e
titulao para a quantificao do nitrognio amoniacal (N-NH4 +). Proposta
por Kjeldahl em 1883, a tcnica permanece a mesma, com pequenas
modificaes. Muito utilizada para determinao indireta de protenas em
vrias amostras biolgicas, assim como de nitrognio em plantas, para
avaliao do estado nutricional. O cido sulfrico (H2S04), na presena de
K2SO 4 (para elevar o ponto de ebulio do cido) e de um catalisador (CuSO 4)'
decompe a protena e os aminocidos do tecido vegetal em N-NH4 +. Como
este uma espcie inica, no h problemas de perda por volatilizao. A
mistura alcalinizada com NaOH aqu?so e o NH4 + reduzido a NH3, que
destilada por arraste a vapor, complexada em cido brico com indicador
misto e titulada com soluo padronizada de H2SO 4 ou HCI (MALAVOL T A et
al., 1989; MILLS & JONES, 1996).
161
3.1.1.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS
a) Bloco digestor.
b) Balana analtica.
c) Oestilador semimicro de Kjeldahl.
d) Tubo para digesto de 25 x 250 mm.
e) Pipeta automtica.
f) Bureta de 20,0 mL.
g) Erlenmeyer de 50,0 mL.
3.1.1.3. REAGENTES E SOLUES

b) Hidrxido de sdio, 13,0 moi L-1: pesar 520,0 g de NaOH e dissolver em
1000 mL de gua.
c) lcool etlico 99 G.L.
d) cido sulfrico concentrado, p.a. (97% a 98%).
e) cido brico a 2% (rn/v): dissolver cerca de 20,0 g de cido brico em
cerca de 800 mL de gua desionizada, agitando at dissolver o sal. Aps
dissoluo, adicionar 15,0 mL de verde de bromocresol a 0,1 % (m/v), 6,0
mL de vermelho de metila a 0,1% (m/v) e 2,0 mL de NaOH a 0,1 moi L-l.
Completar para 1000 mL com lcool.
f) Verde de bromocresol a 0,1% (m/v): pesar 0,1 9 de verde de bromocresol
e dissolver em lcool etlico. Completar o volume para 100 mL com
lcool.
g) Vermelho de metila a 0,1% (m/v): pesar 0,1 9 de vermelho de metila e
dissolver em 2 mL de lcool etlico. Completar" o volume para 100 mL com
gua.
h) TRIS (tris(hidroximetil)aminometano) (padro primrio). 0,2 moi L-1: pesar
2,4228 9 de TRIS, transferir para balo volumtrico de 100 mL, dissolver
e completar o volume com gua isenta de CO2
i) cido sulfrico, 1,0 moi l,": em balo volumtrico de 1000 mL, com
aproximadamente 500 mL de gua, adicionar lentamente 27,5 mL (ou
50,52 g) de cido sulfrico concentrado (densidade de 1,84 9 crn' e
96% a 98% em massa), esperar esfriar e completar o volume com gua
(soluo-estoque) .
162
j) cido sulfrico, 0,1 moi L-': em balo volumtrico de 1000 mL, com
aproximadamente 500 mL de gua desionizada, adicionar lentamente
100 mL da soluo-estoque (3.1 .1.3.i) e completar o volume com gua.
Essa soluo dever ser padronizada com soluo de TRIS (3.1.1 .3.h).
k) Padronizao do cido sulfrico, 0,1 moi L-': em erlenmeyer de 125 mL,
adicionar 1 mL de TRIS a 0,2 moi L-' (3.1.1.3.h), 1 mL de soluo de
H3B03 (3.1.1.3.e), 1 mL de gua isenta de CO2 e titular com o H2S04
a 0,1 moi L-' (3.1.1.3.j). A concentrao exata do cido dada pela
seguinte expresso: C, x V1 = C2x V2, em que C, e V, a concentrao.
e o volume do H2S04 e C2 e V2, a concentrao e o volume de TRIS.
3.1.1.4. PROCEDIMENTO
A destilao realizada por arraste a vapor. Em sistema de destilao,
colocar, na sada do condensador, erlenmeyer de 125 mL, com 1 mL de
soluo de cido brico (item 3.1.1.3.e), e transferir alquota de 20 mL ou
toda a soluo obtida da amostra solubilizada de acordo com o item 2.3.4.E.
Adicionar 1 mL de soluo de NaOH (item 3.1 .1.3.b) e imediatamente dar
incio destilao. coletando aproximadamente 35 mL de destilado. Titular
com soluo de cido sulfrico a 0,1 moi L-' (item 3.1 .1.3.j).
OBSERVAES:
1. Prova em branco deve ser feita juntamente com
as amostras, para verificao de possibilidade de
contaminao dos reagentes.
2. 1,0 mL de H2S04 a 0,1 mal [-1 neutraliza 2,8 mg de N.
3. Mtodo mais empregado para a determinao de
protenas e nitrognio total em plantas.
4. A sada do condensador dever estar mergulhada na
soluo de cido brico para evitar perdas de NH3.
VANTAGEM
a) Baixo custo.
b) Aplicvel para diversos tipos de matrizes.
163
c) Possibilidade de automatizao: no mercado j existem equipamentos de
destilao automatizados.
LIMITAES
a) Baixa velocidade analtica.
b) Uso de reagentes corrosivos, como o cido sulfrico e o hidrxido de
sdio.
3.1.2. ESPECTROFOTOMETRIA COM REAGENTE DE NESSLER
3.1.2.1. PRINCPIO
Mtodo proposto por J. Nessler, em 1856. Aplica-se para solues que
contenham nitrognio na forma de amnio. Fundamenta-se na reao da
amnia livre com soluo alcalina de iodeto de mercrio (11)em iodeto de
potssio. Essa reao produz um composto colorido, castanho-alaranjado,
cuja intensidade da cor proporcional concentrao de nitrognio presente
na soluo; apresenta resposta linear na faixa de 5 a 40 mg L-l. A reao do
on amnia com o reagente de Nessler pode ser assim representada:
a) Bloco digestor.
b) Balana analtica.
c) Espectrofotmetro.
d) Tubo para digesto de 25 x 250 mm.
e) Micropipeta automtica, com volume regulvel de 1,0 a 5,0 mL.
f) Frasco de vidro do tipo "snap-cap" de 100 mL.
g) Copos plsticos descartveis de 50 me
h) Dispensador de lquidos de 20,0 mL.
i) Agitador de tubos.
164
b) Reativo de Nessler: pesar 45,5 g de Hgl2 e 34,9 g de KI, juntar os dois
reagentes e transferir para balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar
500 mL de gua, agitando sempre at dissolver. Juntar 112,0 g de KOH
previamente dissolvidos em 300 mL de gua, agitar bem e completar o
volume. Deixar em repouso por trs dias, para decantar o sedimento, ou
centrifugar a 3000 rpm. reagente bastante estvel se armazenado em
frasco escuro e arrolhado.
c) Soluo de hidrxido de sdio, 2,5 moi L": pesar 100 g de NaOH, dissolver
em gua, transferir para balo volumtrico de 1000 mL e completar o
volume com gua.
d) Soluo de metassilicato de sdio a 10% (m/v): pesar 100 g de Na2Si03,
dissolver em gua, transferir para balo volumtrico de 1000 mL e
completar o volume com gua. A seguir, filtrar a soluo utilizando papel-
filtro de filtragem semilenta. Esse reativo tem a finalidade de evitar a
turbidez da reao.
e) Soluo mista de hidrxido de sdio + metassilicato de sdio (1: 1):
misturar partes iguais das solues de NaOH (item 3.1.2.3.c) e de Na2Si03
(item 3.1.2.3.d).
f) Soluo reagente: soluo mista e soluo de Nessler (item 3.1.2.c.b) na
proporo de 1,0 mL da soluo mista e 0,5 mL da soluo de Nessler. A
mistura deve ser preparada imediatamente antes da leitura.
g) Soluo analtica de N-NH+4: pesar 0,4714 g de (NH4)2S04' p.a., seco
em estufa a 105C, e completar o volume at 1000 mL com gua. Essa
soluo contm 100 mg L-1 de nitrognio.
h) Solues analticas: 0,0; 1,0; 2,0; 3,0 e 4,0 mg L-1 de N, preparadas a
partir de diluies apropriadas da soluo com 100 mg L-l de N.
Transferir 1,0 mL do extrato (item 2.3.4.F) ou das solues analticas (item
3.1.2.3.h) para copos plsticos descartveis. Adicionar 20,0 mL de gua
e 1,5 mL da soluo de trabalho (item 3.1.2.3.f). Proceder a leitura em
espectrofotmetro em comprimento de onda igual a 480 nm.
165
VANTAGENS
a) A colorao do complexo formado estvel no intervalo de 5 min at
12 h.
b) No existe interferncias de outros ctions (AI, Fe, Zn, Mn ou Mg).
c) Mtodo rpido e preciso.
d) Alta sensibilidade.
e) Adequado para grande nmero de amostras.
LIMITAO
a) O mtodo utiliza o metal Hq ", extremamente txico e voltil.
3.1.3. AZUL DE INDOFENOL - REAO DE BERTHELOT
3.1.3.1. PRINCPIO
Os compostos de nitrognio com a digesto sulfrica, transformam-se em
NH+4 que, em meio alcalino, reage com NaOCI e C6H50H formando o azul de
indofenol, cuja colorao proporcional concentrao de amnio presente
na amostra.

a) Espectrofotmetro.
b) Vidrarias.

a) Soluo do sal dissdico do cido etilenodiaminotetractico (EDTA): pesar
12,7 g de EDTA-Na2 e dissolver em cerca de 900 mL de gua. Ajustar o
pH da soluo para 10,0 com soluo de 0,01 moi L" de NaOH, transferir
para balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com gua.
b) Soiuo diluda de EDTA: pesar 3,0 g de NaOH, adicionar 30,0 mL da
soluo de EDTA-Na2 com pH 10,0 (item 3.1.3 .3.a), transferir para balo
volumtrico de 2000 mL e completar o volume com gua (soluo A).
c) Soluo de fenol: pesar 10,0 g de fenol e 0,05 g de nitroprussiato de
sdio. Dissolver em gua, transferir para balo volumtrico de 1000 mL e
completar o volume com gua (soluo B).
166
OBSERVAO: conservar em frasco escuro e na geladeira.
d) Soluo de NaOCI: pesar 5,0 9 de NaOH, 9,4 9 de Na2HP02,12H20 e 31,8

9 de Na3P04,12H20 e medir 20,0 mL de NaOCI. Misturar os reagentes,
dissolver em gua, transferir para balo volumtrico de 1000 mL e
completar o volume com gua (soluo C).
OBSERVAO: conservar em frasco escuro e na geladeira.
e) Soluo analtica de N-NH+4: pesar 4,714 9 de (NH)2S04' p.a., seco em

estufa a 105C, e completar o volume at 1000 mL com gua. Essa
soluo contm 1000 mg L,1de N.
f) Solues analticas: 5,0; 10,0; 20,0; 40,0; 60,0 e 80,0 rnq.L" de N,
preparadas a partir de diluies apropriadas da soluo com 1000 mq.L"
de N (3.1.3.3.e).
OBSERVAO
Antes de completar o volume com gua, adicionar
quantidade de cido sulfrico concentrado de acordo com a
concentrao desse cido na amostra.
Diluir 10 vezes o extrato obtido no item 2.3.4.E e transferir 1,0 mL dessa
soluo para tubo de ensaio de 30 mL. Adicionar 7,0 mL da soluo A
(item 3.1.3.3.b), 1,0 mL da soluo B (item 3.1.3.3.c) e 1,0 mL da soluo
C (item 3.1.3.3.d). Deixar reagir durante 2 h e proceder a leitura em
espectrofotmetro, em comprimento de onda igual a 630 nm. As solues
que sero empregadas como padro para a curva de calibrao devero
ser submetidas ao mesmo procedimento que o realizado com a amostra,
inclusive a diluio inicial (10 vezes).
VANTAGEM
a) Possibilidade de automao.
b) Mtodo altamente seletivo.
167
LIMITAO
a) Utilizao de feno I e nitroprussiato, compostos altamente txicos.
3.1.4. ANLISE POR INJEO EM FLUXO - REAO DE BERTHELOT
3.1.4.1. PRINCPIO
Os sistemas de anlise em fluxo, conhecidos por FIA (flow injection analysisl,
se baseiam na injeo da amostra em um fluxo transportador (impulsionado
por uma bomba peristltica), originando uma zona de amostra reprodutvel
que sofre disperso contnua durante seu transporte (RUZICKA & HANSEN,
1988). Aps receber os reativos necessrios para serem misturados
amostra, o fluxo direcionado ao detector, onde so realizadas as leituras
pertinentes, com base na intensidade do sinal analtico resultante. No mtodo
aqui descrito, o amnio reage com NaOCI e C6H50H em meio alcalino,
formando o azul de indofenol, cuja colorao proporcional concentrao
de amnio (item 3.1.3.1). No entanto, aqui o cido salicflico empregado em
lugar de fenol, em virtude de sua menor toxidez (NOGUEIRA et al.. 1996).

a) Bomba peristltica com 8 canais.
b) Tubos de Tvqon", para bombeamento das solues.
c) Injetor-comutador de acrlico do tipo 1:3.
d) Espectrofotmetro com clula de fluxo.
e) Registrador potenciomtrico.
f) Tubos de polietileno (0,8 mm d. i.).
b) cido sulfrico, 1,2 moi L-': 15,0 mL de H2S04 concentrado, empregado
COi,hJ fiuxo transportador (C, Fig. 1).
c) Hidrxido de sdio, 0,75 moi L-': dissolver 30 g de NaOH em 1000 mL de
gua (R" Fig. 1).
d) Soluo de cido saliclico-nitroprussiato, preparada em meio de NaOH a
0,35 moi L-': citrato de sdio a 5% (m/v) (para evitar precipitaes de
hidrxidos de metais), nitroprussiato a 0,50% (rn/v) (como agente que
168
catalisa a velocidade de formao do cromforo) e 0,2 mal L-1 de cido
saliclico (R2' Fig_ 1).
e) Soluo comercial de hipoclorito de sdio, com 2,0 a 2,5 % de cloro ativo
(R3' Fig. 1).
f) Soluo-estoque de 1000 mgL-1 de N: dissolver 4,716g de (NH4)2S04
em 1000 mL de gua.
g) Solues analticas de trabalho, entre 5 e 100 mg L-1 de N, devem ser
preparadas a partir de diluies apropriadas da soluo-estoque (item
3.1.4.3.f).
OBSERVAES
t. Para prevenir diferenas entre os tempos e as temperaturas
durante a digesto, as solues analticas devem ser
preparadas seguindo o mesmo procedimento aplicado s
amostras. Para isso, adiciona-se 0,0 (branco); 1,0; 2,0;
4,0; 6,0; 8,0 e 10,0 mL da soluo-estoque de 1000
mg [-1 de N em tubos de digesto, sendo em seguida
adicionada a mistura catalisadora, 2,5 mL de H2S04 e
digerindo em bloco digestor, juntamente com cada lote
de amostras (item 2. 3.4. E).
2. Os teores de NH4 nas amostras so obtidos a partir da
relao entre valor de absorbncia x concentrao.
a) Diagrama de fluxo
O diagrama de fluxos utilizado est descrito na Fig. 1. A amostra (A), obtida
a partir da decomposio com cido sulfrico (item 2.3.4.E), aspirada
para preencher a ala de amostragem {comprimento = 10 cm, 50 IlU,
que define o volume exato de amostra a ser introduzida no sistema, sendo
o excesso descartado (D). A poro selecionada introduzida no fluxo
transportador (C, 2,0 mL rnirr'), atravessa a bobina B1 (30 cm) para uma
perfeita homogeneizao, recebe NaOH (R1' 4,0 mL rnin'}, reagente cido
saliclico-nitroprussiato (R2' 0,6 mL rnin'] e hipoclorito (R3' 0,4 mL rnin') e,
aps passar pela bobina de reao (B2' 300 cm, 3rC), a amostra processada
169
atinge a clula de fluxo ( = 660 nm), apresentando sinal proporcional ao
contedo total de nitrognio na amostra, sendo em seguida descartada (O).
~==-=.~==== ..===========================.=.=-==--= =..==._=---=-=--=

... ..
==.==-=-===~
Figura 1. Diagrama de fluxos para a determinao de nitrognio. A, amostra,
C, fluxo transportador, 8, e 82, bobinas de reao, R" R2 e R3' reagentes,
D, descarte, , detector, /)., banho termostatizado. Mais informaes, no
texto.
VANTAGENS
a) Substituio de fenol por cido saliclico, no sendo necessrio pr-
tratamento da soluo descartada.
b) Alta velocidade analtica.
c) Sistema automatizado.
LIMITAES
a) Utilizao de nitroprussiato, reagente txico.
b) Altamente sensvel aos valores de pH. Pequenas variaes na acidez
final do extrato podero resultar em erros de anlise. Este problema
contornado com o acompanhamento da curva de calibrao em cada lote
de anlise.
170
3.2. FSFORO
3.2.1. AZUL DE MOLlBDNIO
3.2.1.1. PRINCPIO
O mtodo est baseado na complexao do on ortofosfato (P043+), em
presena de cido molbdico (H2Mo04), que, em meio fortemente cido e com
um redutor apropriado (p. ex., cido ascrbico), converte o M06+ em M03+,
produzindo o cido fosfomolbdico (HJP(M03010)]H20), de colorao azul,
devida ao molibdnio, cuja intensidade da cor proporcional quantidade
do fosfato contida na amostra, apresentando o mximo de absoro em 660
nm.

b) Agitador de tubos, para homogeneizao das amostras.
3.2.1.3. REGENTES E SOLUES

b) Soluo de molibdato de amnio a 2 % (rn/v): dissolver 20,0 g de
(NH4+)6M07024-4H20em 200 mL de gua. Em outro frasco, que contenha
500 mL de gua, dissolver 2,0 g de subcarbonato de bismuto e adicionar
150 mL de H2S04 concentrado. Esfriar, misturar as duas solues e
completar o volume para 1000 mL com gua (soluo A).
c) Soluo diluda de molibdato: transferir 300 ml.-da soluo A (3.2.1.3.a)
para frasco de 1000 mL e completar o volume com gua.
d) Soluo analtica concentrada, 1000 rnq.L" de P: transferir 4,3928 g
de KH2P04, p.a., em frasco de 1000 mL, adicionar 3,0 mL de H2S04
concentrado e completar o volume com gua.
e) Solues analticas de trabalho: preparar solues de 0,0; 0,5; 1,0; 2,0;
3,0 e 4,0 mg.L,1 de P, a partir de diluies da soluo de 1000 mq.L:'
de P.
f) cido ascrbico. p.a.
171
Transferir 5,0 mL de soluo analtica de fsforo ou do extrato obtido a
partir da decomposio da amostra (item 2.2, 2.3.4.A ou 2.3.4.E) para tubo
de ensaio de 45 mL, adicionar 10 mL da soluo diluda de molibdato (item
3.2.1.3.cl, aproximadamente 40 mg de cido ascrbico e agitar. Aps 30
min, efetuar a leitura da absorbncia em espectrofotmetro, no comprimento
de onda de 660 nm.
OBSERVAO:
Os teores de P nas amostras so obtidos a partir da relao
entre valor de absorbncia x concentrao.
VANTAGENS
a) Alta sensibilidade.
b) No utiliza reagente txico.
LIMITAES
a) Baixa estabilidade do complexo fsforo-molibdico.
b) Possvel interferncia de As em amostras tratadas com pesticida.
c) Sensvel a variaes de acidez.
3.2.2. AMARELO DE VANADATO
3.2.2.1. PRINCPIO
nion H2P04- reage com MoO/- e VO/ em meio cido, formando um
complexo de colorao amarela, que absorve a luz na reqio de 420 nm.

b) Agitador de tubos, para homogeneizao das solues.

b) Soluo de molibdato a 5% (m/v): dissolver 50,0 g de (NH4)6Mo024' p.a.,
em 800 mL de gua quente, esfriar e completar o volume para 1000 mL
com gua.
172
c) Soluo de vanadato a 0,25% (rn/v): dissolver 2,50 9 de (NH4)2V03' p.a.,
em 500 mL de gua quente e adicionar 350 mL de HN03 a 65%, esfriar
e completar o volume para 1000 mL com gua.
d) Soluo reagente: misturar em partes iguais as solues de molibdato
(item 3.2.2.3.b) e de vanadato (item 3.2.2.3.c) imediatamente antes do
uso
e) Soluo analtica concentrada, 1000 mgL-l de P (item 3.2.1.3.d).
f) Solues analticas de P: preparar solues que contenham 0,0; 5,0;
10,0; 15,0 e 20,0 mg L-l de P em H2S04 0,2 moi L", a partir de diluies
da soluo analtica concentrada de 1000 mg L-l de P.
Transferir 5,0 mL de soluo analtica de fsforo ou do extrato obtido a partir
da decomposio da amostra (item 2.2 ou 2.3.4.A) para tubo de ensaio de
45 mL. Adicionar 2,0 mL da mistura de reagentes (item 3.2.2.3.d). Aps 10
min, efetuar a leitura em espectrofotmetro (. = 420 nm).
OBSERVAES
1. Os teores de P nas amostras so obtidos a partir da
relao entre valor de absorbncia x concentrao.
2. O mtodo amarelo de vanadato menos sensvel que
o azul de molibdnio, porm sua colorao mais
estvel.
3. o mtodo mais usado para determinao de P em
amostras vegetais.
VANTAGENS
a) Apresenta boa estabilidade do complexo formado (10 min at 24 h).
b) Adequado para anlises em rotina.
c) Possibilidade de automao.
d) Ausncia de interferncia de outros ons.
e) Alta velocidade analtica.
LIMITAO
a) Menor sensibilidade quando comparado ao mtodo azul de molibdnio.
173
3.3. SDIO E POTSSIO
3.3.1. ESPECTROMETRIA DE EMISSO ATMICA
3.3.3.1.PRINCPI0
Quando uma soluo que contm diversas substncias atomizada e as
minsculas partculas da soluo so projetadas sobre uma chama, h
excitao dos tomos, isto , h deslocamento de certos eltrons a nveis
energticos mais elevados; quando os tomos voltam ao seu nvel energtico
natural, h emisso da energia absorvida na forma de radiao. Os tomos
excitados do elemento de interesse emitem luz em certos comprimentos de
onda discretos e caractersticos do elemento (p. ex., = 766 a 767 nm
para o potssio e 589 a 589,6 nm para o sdio). A radiao de comprimento
de onda de interesse separada da radiao emitida remanescente e sua
intensidade medida. Essa medida de intensidade pode ser relacionada
diretamente com a concentrao do elemento de interesse, comparando-se
a intensidade medida com uma curva de calibrao.

b) Fotmetro de chama.
c) Vidrarias.
d) Pipetas volumtricas.

b) Soluo 1000 mg L:' de potssio: dissolver 1,9067 9 de KCI, p.a., seco
em estufa a 100C por 2 h, e completar o volume a 1000 mL com gua.
Armazenar em frasco de polietieno sob refrigerao.
c) Curva de calibrao de potssio: em bales volumtricos de 100 mL,
transferir 0,0, 0,5, 1,0, 1,5 e 2,0 mL da soluo 1000 mg L-l de K
(3.1.1.3.b), completando o volume com soluo de 0,25 moi L-l de
HC104 Essas solues contm, respectivamente, 0,0, 5,0, 10,0, 15,0 e
20,0 mg.L-l de K.
d) Soluo 1000 rnq.L:' de sdio: dissolver 2,5421 9 de NaCl, p.a., seco em
estufa a 100C por 2 h, completando o volume a 1000 mL com gua.
Armazenar em frasco de polietieno sob refrigerao.
174
e) Curva de calibrao de sdio: em bales volumtricos de 100 mL,
transferir 0,0,0,5, 1,0, 1,5 e 2,0 mL da soluo 1000 rnq.L:' de Na (item
3.1.1.3.d), completando o volume com soluo de 0,25 moi L-l de HCI04
Essas solues contm, respectivamente, 0,0, 5,0, 10,0, 15,0 e 20,0
mg.L- de Na.
1
Diluir o extrato obtido na decomposio da amostra (item 2.3.4.A), para
a faixa ideal de trabalho. Como norma, em funo dos teores mdios de
K em amostras vegetais, pode-se diluir 10 vezes. Calibrar o fotmetro de
chama com as solues analticas e 20 mg L-1 de K (3.1.1.3.c). Quando
da estabilizao do aparelho, iniciar as leituras da curva de calibrao e das
amostras. A determinao de Na dever ser realizada diretamente no extrato
obtido pela decomposio da amostra (item 2.3.4.A). Calibrar o fotmetro
com as solues analticas de e 20 mg L-l de Na (item 3.1.1.3.e). Quando
da estabilizao do aparelho, iniciar as leituras da curva de calibrao e das
amostras.
OBSERVA ES:
5. Os teores de Na e K nas amostras so obtidos a

partir da relao entre a porcentagem de emisso x
concentrao.
6. Para facilitar o trabalho, pode-se preparar curva de
calibrao mista (K e Na).
7. Podero ser utilizadas concentraes de at 50,0 mg
[-1 de Na ou K na curva de calibrao, porm deve-
se observar o comportamento. Se no for uma reta,
deve-se utilizar a equao quadrtica para calcular os
resultados.
8. O espectrmetro de absoro atmica dever ser
preferencialmente utilizado no modo "emisso". Porm,
os custos sero mais elevados, em funo da utilizao de
acetileno em lugar de propano (fotmetro de chama).
9. ICP OES apresenta maior sensibilidade, podendo
ser vantajoso seu emprego em caso de anlises
175
multielementares. Porm, deve ser ressaltado que os
teores de Na e K em amostras de plantas so elevados,
no apresentando problemas devido sensibilidade.
VANTAGENS
a) Alta velocidade analtica.
b) Alta sensibilidade.
c) Adequado para anlises em rotina.
LIMITAO
a) Estreita faixa linear (fotmetro de chama).
3.4. CLCIO E MAGNSIO
3.4.1. ESPECTROMETRIA DE ABSORO ATMICA
3.4.1.1. PRINCPIO
A tcnica analtica se baseia na absoro de radiao das regies visvel e
ultravioleta do espectro eletromagntico por tomos no estado fundamental.
O espectrmetro de absoro atmica constitudo de fonte de radiao,
sistema de atomizao, conjunto monocromador e detector (transdutor). A
amostra nebulizada e, em chama ar-acetileno ou oxido nitroso-acetileno,
vaporizada, produzindo tomos no estado fundamental, que podem absorver
a energia radiante proveniente de uma lmpada de catodo oco, que emite
radiao com comprimento de onda especfico. Os tomos absorvem essa
luz, ocorrendo transio para um nvel de maior energia. A intensidade dessa
transio relacionada com a concentrao original dos tomos no estado
fundamental.

a) Espectrmetro de absoro atmica.
b) Lmpadas de catado oco de Ca e/ou de Mg.
c) Pipetas e bales volumtricos
176
b) Acido clordrico concentrado (37%).
c) cido perclrico a 70%.
-d) Soluo de lantnio ou estrncio a 10% (m/v): transferir 117,0 9 de La203
ou 302,0 9 de SrCI2-6H20 para frasco de 1000 mL, adicionar lentamente
125 mL de HCI concentrado. Esfriar e completar o volume com gua
e) Soluo de lantnio ou estrncio a 0,1 % (m/v): diluir 100 vezes a soluo
3.4.1.3.d.
f) Soluo analtica concentrada para absoro atmica de Ca e Mg (1000
rnq.L").
g) Solues analticas de Ca e Mg: diluir as solues de referncia (item
3.4.1.3.f), preparando solues com misturas de Ca (0,0, 1,0, 2,0 e 4,0
mg L-l) e Mg (0,0, 0,2, 0,4 e 0,8 mg l."). Essas solues devero ser
preparadas em meio de 0,25 moi l," de cido perclrico.
Transferir 1,0 mL do extrato obtido mediante a decomposio da amostra
(item 2) para recipiente adequado. completar o volume para 20 mL com a
soluo diluda de La ou Sr (item 3.4.1.3.f). verificar as condies adequadas
do equipamento (item 3.7).
OBSERVAES:
1. Mtodo mais utilizado para determinao de Ca e Mg.

2_ A adio de lantnio ou de estrncio necessria para
a supresso da ionizao do Ca e do Mg, evitando a
reao com fosfato e alumnio presentes e a formao
de compostos refratrios, termicamente estveis.
3. ICP OES apresenta maior sensibilidade, podendo
ser vantajoso seu emprego em caso de anlises
multielementares. Porm, deve ser ressaltado que os
teores de Ca e Mg em amostras de plantas so elevados,
no apresentando problemas devido sensibilidade.
177
VANTAGENS
d) Alta velocidade analtica.
e) Alta sensibilidade.
f) Adequado para anlises em rotina.
3.4.2. TITULAO COM EDTA
3.4.2.1. PRINCPIO
Clcio e magnsio so quantificados por complexao com o sal dissdico
do cido etilenodiaminotetractico (EDTA-Na), a partir da eliminao
de interferentes e da utilizao de diferentes complexantes e valores de
pH. Negro de eriocromo T (sal sdico do cido 2-hidrxi-2-naftilazo-6-
nitronaftalinosulfnico) empregado para a quantificao de Ca + Mg, em
valores de pH = 10. Azul de eriocromo R (cido calconcarboxlico. ou calcon)
utilizado para a determinao do Ca, aps elevao dos valores de pH para
12, para precipitar o magnsio presente na soluo. Fosfatos so eliminados
na forma de fosfato frrico. Cobre, zinco, nquel e cobalto so mascarados
com cianeto de potssio e ferro; alumnio e mangans so mascarados com
trietanolamina.

a) Vidraria graduada.
b) Bureta automtica, com preciso de 0,01 mL.
c) Agitador magntico.
d) Papel-filtro quantitativo de filtrao rpida.

b) Soluo de EDTA-Na2 (0,01 moi L-1): transferir para balo volumtrico de
1000 mL, 3,7225 g de EDTA-Na2 previamente seco em estufa entre 70
e 80 C durante 2 h e resfriado em dessecado r, dissolver e completar
D
o
volume com gua.
c) Soluo de negro de eriocromo T, a 0,5% (rn/v): dissolver 125 mg de
negro de eriocromo T em 25 mL de lcool rnetlico.
178
d) Soluo de calcon, a 1,0 % (rn/v): dissolver 100 mg de calcon em 100
mL de lcool metlico.
e) Soluo com pH 10: dissolver 7 9 de NH4CI em 58 mL de NH40H, adicionar
5 9 de KCN (cuidado), 15 mL de trietanolamina e completar o volume para
100 mL com gua. Armazenar em frasco plstico.
f) Soluo de cloreto frrico (1,0 rnq.rnl.' de Fe3+): transferir 4,8 9 de
FeCI36H20 para balo volumtrico de 1000 mL, adicionar 2,0 mL de HCI
concentrado e completar o volume com gua.
g) Soluo de cido actico a 1: 1: diluir 50 mL de H3CCOOH com 50 mL de
gua.
h) Soluo de vermelho de metila a 0,1 % (rn/v): transferir, para balo
volumtrico de 100 mL, 0,1 9 de vermelho de metila, dissolver e completar
o volume com lcool etlico.
i) Soluo de hidrxido de amnio a 25 % (v/v): transferir, para balo
volumtrico de 1000 mL, 250 mL de NH40H e completar o volume com
gua.
j) Soluo com pH 12: dissolver 20 9 de NaOH em 25 mL de gua, esfriar,
adicionar 5 9 de KCN (cuidado) e 15 mL de trietanolamina e completar
o volume para 100 mL em balo volumtrico. Armazenar em frasco
plstico.
OBSERVAO:
Cuidado, o KCN extremamente txico. Em meio cido
forma HCN, voltil, sendo necessria sua utilizao em meio
bsico para evitar maior toxicidede: Utilizar equipamentos
de proteo individual (EP/).
3.4.2.4 PROCEDIMENTO
a) Transferir 50 mL da soluo da amostra decomposta (item 2) para bquer
de 250 mL. Para eliminao do fosfato, adicionar 3,0 mL de soluo de
FeCI36H20 (item 3.4.2.3.f), 1,0 mL de soluo de cido actico (item
3.4.2.3.g), 2 gotas de soluo de vermelho de metila (item 3.4.2.3.h)
e adicionar soluo de NH40H (item 3.4.2.3.i) at viragem do indicador,
acrescentando mais 1 mL em excesso. Aquecer a soluo e deixar em
ebulio por 5 min, filtrar ainda quente e lavar com pequenas pores,
179
totalizando 10 mL de gua a aproximadamente 80C. Transferir o filtrado
para balo volumtrico de 100 mL, esfriar e completar o volume com
gua (soluo A).
b) Clcio: transferir, para erlenmeyer de 250 mL, 25,0 mL da soluo A
(item 3.4.2.4.a), acrescentando aproximadamente 50 mL de gua e, sob
agitao, 6,0 mL de soluo com pH 12 (item 3.4.2.3.j) e 5 gotas de
soluo de calcon (item 3.4.2.3.d). Titular com soluo de EDTA-Na2
(item 3.4.2.3.b), at obteno de cor azul estvel, que indica o ponto
final da titulao.
c) Clcio + magnsio: transferir, para erlenmeyer de 250 mL, 25,0 mL da
soluo A (item 3.4.2.4.a), acrescentando aproximadamente 50 mL de
gua e, sob agitao, 7,0 mL de soluo com pH 10 (item 3.4.2.3.e) e
5 a 7 gotas de soluo de negro de eriocromo T (item 3.4.2.3.c). Titular
com soluo de EDTA-Na2 (item 3.4.2.3.b), at obteno de cor azul
estvel, que indica o ponto final da titulao.
OBSERVAO
1) 1,0 mL de EDTA-Na2 a 0,01 moI L' equivalente a 0,4

mg de Ca.
VANTAGENS
a) Baixo custo.
b) Boa repetibilidade.
LIMITAES
a) Utilizao de reagentes altamente txicos e venenosos.
b) Mtodo sujeito a srios problemas de interferncia.
180
3.5. ENXOFRE
3.5.1 TURBIDIMETRIA
3.5.1.1. PRINCPIO
Baseia-se na quantificao da turbidez provocada pela precipitao do
on enxofre pelo cloreto de brio, na forma de sulfato de brio (BaSO 4)
(MALAVOLTA et a., 1989).
3.5.1.2 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

a) Espectrofotmetro ou turbidmetro.
b) Agitador do tipo Vortex",
3.5.1.3 REAGENTES E SOLUES

b) Cristais de BaCI2 passados em peneira de 60 "mesh" (malha = 0,25
mm).
c) Soluo analtica concentrada de S (1000 rnq.l." de S-S042.): pesar 5,434g
de K2S04, seco em estufa, dissolver em gua e completar o volume para
1000 mL.
d) Solues analticas de enxofre (0,0; 10,0; 15,0; 20,0; 30,0; 40,0
e 50,0 mg.L1 de S): em bales volumtricos de 100 mL, adicionar,
respectivamente, 0,0; 1,0; 1,5; 2,0;2,5; 3,0;4,0 e 5,0 mL da soluo
analtica concentrada de enxofre (item 3.5.1.3.c), completando o volume
com gua.
e) Soluo de HCI, 6 moi L1 (com 20 mg.L1 de S): dissolver 0,1 087g de
K2S04, seco previamente em estufa, em 200 mt de gua. Em seguida,
adicionar 500 mL de HCI. Agitar at completa dissoluo do sal e completar
o volume para 1000 mL com gua.
Transferir 2,0 mL do extrato obtido .na decomposio da amostra (item
2.3.4.A) ou da soluo analtica de S (item 3.5.1.3.d) e completar o volume
para 20,0 mL com gua. Em seguida, transferir 10,0 mL dessa soluo para
tubo de 30,0 mL, adicionando 1,0 mL da soluo de HCI (item 3.5.1.3.e) e
0,5 g de BaCI2 (item 3.5.1.3.b). Agitar vigorosamente por 30 s e, aps 4 min
(cronometrados), efetuar leitura no espectrofotmetro, em comprimento de
onda de 420 nm, ou no turbidmetro.
181
OBSERVAO:
A leitura deve ser realizada impreterivelmente entre 4 e
8 min, uma vez que o precipitado de BaSO4 decanta-se
rapidamente.
VANTAGEM
Baixo custo.
LIMITAO
Baixa sensibilidade.
3.6 COBRE, ZINCO, FERRO E MANGANS
3.6.1. PRINCPIO
tecido vegetal pode ser decomposto por via mida (item 2.3) e
a determinao do elemento realizada diretamente no extrato por
espectrometria de absoro atmica.

Espectrmetro de absoro atmica, com lmpada de catodo oco de Cu,
Zn, Fe e Mn.

b) Solues de cido clordrico: 6,0 moi L-1e 2,0 moi L-1.
c) Soluo analtica concentrada de cobre (com 100 mg L-1 de Cu): dissolver
0,393 9 de CuS04 5H20 em soluo de HN03 a 0,2 moi L-1.
d) Soluo analtica concentrada de ferro (com 100 mg L-1 de Fe): pesar e
dissolver 0,702 9 de sulfato ferroso amoniacal (NH4)2Fe(SO)4"6H20 em 50
mL de gua desionizada que contenha 10,0 mL de H2S04 concentrado e
completar o volume para 1000 mL com gua desionizada.
e) Soluo analtica concentrada de mangans (com 100 mg L-1 de Mn):
pesar 0,31 9 de MnS04"H20 e dissolver em soluo de HN03 a 0,2 moi
L-1, completando o volume para 1000 mL.
182
f) Soluo analtica concentrada de zinco (com 100 mg [I de Lnj!28"@(IIIg",,--
e dissolver 0,440 g de ZnS047H20 em soluo de HN03 0,2 moi L",
completando o volume para 1000 mL com esta soluo.
OBSERVAO
Para evitar problemas devidos a contaminaes e/ou
alteraes no estado fsico-qumico dos sais, recomenda-se
o uso de solues analticas concentradas disponveis no
comrcio.
g) Curva de calibrao mista de cobre, ferro, mangans e zinco: a partir das

solues analticas concentradas (itens 3.6.1.3.c, d, e, f). transferir, para
balo volumtrico de 100 mL, alquotas apropriadas para que a curva
de calibrao final se encontre dentro da faixa linear respectiva de cada
elemento, completando o volume, mantendo-se a mesma condio de
acidez final das amostras.
Para cada elemento, calibrar o equipamento com a curva de calibrao mista
(item 3.6.1.3.g) e proceder s leituras diretamente no extrato obtido a partir
da decomposio da amostra (item 2.3). Verificar o alinhamento da lmpada
e a adequao da chama (item 3.7).
3.7. REGRAS BSICAS PARA MANUTENO DE ROTINA EM

ESPECTRMETROS DE ABSORO ATMICA
Instrumentos em boas condies de operao devem ser considerados

prioridade em qualquer laboratrio ~e anlises. Para isso, necessrio
implantar um programa de manuteno (manuteno geral do instrumento,
manuteno no fornecimento de gs, manuteno dos componentes da
chama e manuteno dos componentes do forno), visando ao aumento da
vida til do instrumento, ao tempo de parada reduzido e melhoria geral no
183
desempenho do instrumento, dando ao operador maior confiana na validade
de seus resultados analticos. Este tpico foi extrado no manual operacional
da Embrapa Pecuria Sudeste.
3.7.1. MANUTENO GERAL DO INSTRUMENTO
Poeira e vapores condensados podem se acumular no invlucro

do instrumento e lquidos corrosivos podem espirrar no instrumento. Para
minimizar os danos, limpe o instrumento com pano macio, mido, usando
gua ou soluo detergente fraca. No use solventes orgnicos. Nas janelas
do compartimento da amostra e nas janelas da lmpada podem se acumular
poeira ou marcas digitais. Nesses casos, limpe as janelas com pano macio
umedecido com lcool isoproplico. Se as janelas no estiverem limpas, o
operador observar sinais de rudo das lmpadas e resultados analticos
no reprodutveis. Evitar a instalao do equipamento em locais onde haja
alta concentrao de poeira e vapores. O equipamento no dever ser
exposto incidncia direta de raios do sol e a corrente eltrica dever ser
estabilizada, visando ao aumento da vida til dos componentes eletrnicos.
Os componentes ticos vedados devero ser limpos por especialistas da
assistncia tcnica autorizada.
3.7.2. MANUTENO DO FORNECIMENTO DE GS
A chama tem a finalidade de transformar ons e molculas em tomos no

estado fundamental. Os gases mais apropriados para usa em espectrometria
de absoro atmica por chama so o ar ou o xido nitroso, empregados
como gases de suporte da combusto, e o acetileno, empregado como gs
combustvel. Cada gs fornecido ao instrumento por meio de sistema de
fornecimento dotado de tubos e mangueiras de borracha. Tubulao de cobre
pode ser utilizado para os gases oxidantes e'o acetileno s deve ser fornecido
por meio de tubulao de ao inoxidvel. Verificar regularmente as conexes
da rede de gases, para prevenir possveis vazamentos, especialmente quando
os cilindros so trocados, usando soluo de detergente ou mistura de etanol
e gua.
184
o tipo de chama mais utilizado em espectrometria de absoro atmica
a mistura ar-acetileno, numa proporo relativamente elevada de oxidante
emrelao ao combustvel (chama azul). A mudana na proporo oxidante:
combustvel pode alterar o equilbrio e pode melhorar significativamente a
eficincia de atomizao. A chama redutora (amarela) obtida aumentando-
se a quantidade de acetileno em relao ao ar, promovendo aumento da
pressoparcial de uma srie de produtos da combusto (por exemplo, CO);
isso facilita a atomizao de elementos com tendncias de formao de
xidos refratrios. Por outro lado, a chama oxidante (azul clara) obtida
diminuindo a quantidade de acetileno em relao ao ar, o que favorece
aqueles elementos cuja eficincia de atomizao se d pela formao de
xidos.
Quanto manuteno, deve-se verificar se as mangueiras de borracha
ligadas ao instrumento esto gastas ou rachadas. Alm disso, a cada troca de
carga dos gases, verificar se os reguladores e as vlvulas esto funcionando
corretamente. Por serem usados ou produzidos gases potencialmente
txicos na chama, necessrio usar um sistema de exausto apropriado,
com capacidade mnima de 6 rrr'/rnin , ou o recomendado pelo fabricante do
instrumento.
3.7.3. AR COMPRIMIDO
o ar pode ser fornecido ao instrumento a partir de cilindros ou de um

compressor de ar, sendo os cilindros fonte mais dispendiosa. Se for utilizado
ar comprimido produzido por um compressor, um conjunto de filtro e regulador
na linha de entrada para o instrumento dever ser instalado. O fornecimento
deve ter presso de entrada de 60 psi e o ar deve ser limpo, seco e livre de
leo. Excesso de rudo na leitura poder ser atribudo ao ar contaminado. O
conjunto de filtro de ar constitui um componente essencial do espectrmetro
de absoro atmica e sua incluso na instalao de fornecimento de ar
obrigatria. Semanalmente, verifique se o filtro contm acumulo de partculas
e de umidade. Quando necessrio, desmonte o conjunto de filtro de ar e limpe
o elemento filtrante, o vaso e os componentes da vlvula de drenagem.
185
3.7.4. ACETILENO
o acetileno o nico gs combustvel normalmente usado em

espectrometria de absoro atmica por chama. O gs deve ser empacotado
em acetona e ter grau de pureza de pelo menos 99,6% e especificao
"grau AA". A presso de entrada deve ser regulada e nunca exceder 15
psi. Verificar o manual de operaes do instrumento para que a presso
seja corrigida em conformidade com as exigncias do fabricante. Verificar
diariamente a presso do cilindro de acetileno, evitando que seja inferior
a 100 psi, para impedir que a acetona entre na linha de gs, provocando
degradao dos resultados analticos e causando danos ao instrumento.
3.7.5. XIDO NITROSO
O xido nitroso usado para a espectrometria de absoro atmica por

chama deve ser livre de leo. Se no for usado um regulador aquecido, pode
ocorrer a perda da regulagem, devida ao efeito de expanso por resfriamento.
Isto pode levar a resultados errados e criar o potencial para uma situao de
retorno de chama com unidades de controle manual de gs.
3.7.6. MANUTENO DOS COMPONENTES DA CHAMA
A manuteno dos componentes da chama deve ser rotineira, para

garantir o bom desempenho do seu equipamento. Esses componentes so
divididos em nebulizador, cmara de asperso e queimador.
3.7.7. ATOMIZAO POR CHAMA
O atomizador uma parte de extrema importncia na espectrometria

de absoro atmica, pois neste dispositivo sero formados os tomos que
absorvero a radiao proveniente da lmpada de catodo oco e em funo
disso ser determinada a concentrao do elemento de interesse. C atomizador
de chama mais comum possui um dispositivo chamado nebulizador, que
pode ser constitudo por uma agulha de metal ou um sistema de vidro.
Em qualquer dos casos, a funo do nebulizdor formar um aerossol da
186
soluo aquosa que se deseja analisar. Esse aerossol constitudo por
pequenas gotculas que entram em uma cmara de nebulizao e chegam
ao queimador arrastado pelos gases (combustvel e oxidante). O nebulizador
normalmente constitudo em ao inoxidvel e o queimador em titnio, para
resistir s elevadas temperaturas. A parte interna da cmara de nebulizao
deve ser de material inerte corroso, podendo ser metlico ou plstico
(OLIVEIRA et alo, 2000).
A rea do nebulizador do componente de chama consiste do tubo
capilar e do corpo do nebulizador. Tenha sempre cuidado para que o tubo
capilar usado para aspirar as solues esteja corretamente adaptado ao
capilar do nebulizador. Quaisquer vazamentos de ar, curvaturas estreitadas
ou pancadas causaro leituras instveis, no reprodutveis. Algumas vezes
o tubo capilar de plstico pode entupir e ser necessrio cortar a seo
entupida ou adaptar novo pedao de tubo capilar. Em qualquer caso, deve-
se verificar com cuidado, para ter certeza de que o tubo capilar esteja
corretamente adaptado ao capilar do nebulizador. Este tambm pode
apresentar entupimento. Se isto ocorrer, proceda da seguinte maneira:
apague a chama; remova o tubo capilar de polietileno; remova o nebulizador
de sua base e desmonte-o, conforme descrito no manual de operao
do instrumento. Coloque o nebulizador em um limpador ultrassnico que
contenha soluo de detergente lquido a 0,5 % (Triton X-100). Se este
procedimento no for eficaz, passe um arame de nebulizador livre de aparas
cuidadosamente atravs do nebulizador e em seguida repita o procedimento
de limpeza ultra-snica; monte e instale novamente o nebulizador de acordo
com as instrues. Caso formem bloqueios e se els no forem removidos,
o sinal analtico cair continuamente at que no se observe nenhuma
absorbncia. Os problemas com o nebulizador podem ser minimizados tendo-
se o cuidado de sempre aspirar de 50 a 500 mL de gua no final de cada dia
de trabalho.
3.7.8. CMARA DE ASPERSO
Quando a amostra sai do nebulizador, ela vai de encontro esfera de

impacto e se divide em gotculas do tipo aerossol. A eficincia da esfera
187
pode ser comprometida pela ocorrncia de ranhuras superficiais, nas quais
poder ocorrer acumulao de material slido. A reduo na eficincia da
esfera de impacto pode causar diminuio nos valores de absorbncia e
rudos no sinal analtico. Ao remover o nebulizador para inspeo, certificar-
se de que o mecanismo de ajuste funcione adequadamente e que a esfera
esteja posicionada corretamente sobre a sada do nebulizador.
Juntamente com o nebulizador e a esfera de impacto, a cmara
de asperso e o retentor de lquido devem tambm ser removidos para
limpeza, com detergente neutro e gua. Enxaguar completamente com gua
desionizada e secar todos os componentes. Encher novamente o retentor de
lquidos e montar a cmara de asperso, verificando possveis deformaes
nos anis de vedao ou nos bloqueios das entradas de gs. Verificar
diariamente o nvel do rejeito, descart-Io num tanque de armazenagem,
para posterior tratamento dos resduos.
3.7.9. QUEIMADOR
o componente final de interesse do sistema da chama o queimador.

Durante a aspirao de certas solues, podem se formar depsitos de
carvo e/ou sais no queimador, causando alterao na razo combustvel:
oxidante e no perfil da chama, corte potencial do feixe tico e degradao
do sinal analtico. Para minimizar o acmulo de sais, uma soluo diluda de
cido ntrico pode ser aspirada entre as amostras. Se os sais continuarem
a se acumular, desligar a chama e usar a tira de limpeza fornecida com o
instrumento. Introduza a tira na abertura do queimador e mova-a para trs e
para a frente atravs da abertura. Isto deve deslocar quaisquer partculas que
sero ento afastadas logo que a chama seja acesa e a gua aspirada. No
use objetos afiados, tais como lminas de barbear para limpar o queimador,
pois podem causar ranhuras na abertura, formando reas onde os sais e
o carvo possam se acumular .em velocidade acelerada. Se este tipo de
limpeza no for eficiente, remova o queimador, inverta-o e embeba-o em
gua morna com sabo. Uma escova facilitar a limpeza. Tambm pode
ser embebido em soluo de cido ntrico a 0,5% (v/v). Uma alternativa
para a limpeza so os banhos ultra-snicos com detergente no-inico
diludo. Aps a limpeza, enxge-o completamente com gua desionizada
188
e seque antes de instal-Io no instrumento. Nunca desmonte o queimador
para limpeza, pois se for montado incorretamente ocorrer vazamento de
misturas gasosas, com potencial para causar exploses. Esta manuteno
deve ser feita semanalmente.
Aps o trmino das anlises, deve-se aspirar de 50 a 100 mL de
gua desionizada, para limpar o nebulizador, a cmara de asperso e o
queimador.
3.7.10. PROGRAMA DE MANUTENO PERiDICA
Diariamente
Verificar o gs,
Verificar o sistema de exausto,
Esvaziar o receptculo de drenagem,
Limpar as janelas do compartimento de amostra e
Enxaguar a cmara de asperso com 100 mL de gua destilada.
Semanalmente
Desmontar a cmara de asperso e verificar a esfera de impacto e os
componentes do nebulizador e
Lavar a cmara de asperso e o retentor de lquidos, limpar o queimador,
trocar o lquido do retentor, verificar os anis de vedao, verificar o
conjunto de filtros de ar e limpar o instrumento com pano.
No momento da troca dos gases
Verificar vazamentos, presso dos reguladores e mangueiras de fornecimento
de gs.
3.8. BORO
3.8.1. AZOMETINA-H
3.8.1.1. PRINCPIO
Tcnica de espectrometria de absoro molecular, cuja determinao
baseada na formao de um complexo de colorao amarela resultante da
189
reaco
, do cido brico com o reagente azometina-H . (WHO, 1998, WOLF,
1971). Em solues aquosas, o reagente amarelado e se dissocia de acordo
com a seguinte reao (WOLF, 1971):
NI-l2
OH
+ &H
Aldedo
Q
I-hB03
fuO
s::P I
H03S
Salicllico Azometina- H
cido H
o cido brico desloca o equilbrio para a esquerda, aumentando a intensidade

da colorao amarela proporcionalmente concentrao de boro. Esse
deslocamento relativamente lento.

a) Cadinho de porcelana.
b) Forno do tipo mufla.
c) Tubos de ensaio de polipropileno.
d) Espectrofotmetro VIS.

b) cido clordrico, 0,1 moi L-1: dissolver 8,3 mL de HCI concentrado em
1000 mL com H20 destilada. Armazenar em frasco plstico.
c) Soluo de cido ascrbico-L a 1 %: pesar e dissolver 1 9 de cido
ascrbico-L em 100 mL de gua.
d) Soluo-tampo: pesar e dissolver 500 9 de acetato de amnio e 30 9
de EDTA em 800 mL de gua. Adicionar lentamente 250 mL de cido
actico glacial e homogeneizar.
e) Soluo de azometina-H: dissolver 0,4:5 9 de azometina-H em 100 mL
da soluo de cido ascrbico (item 3.8.1.3.a). Esta soluo deve ser
preparada semanalmente, armazenada em frasco escuro e conservada no
refrigerador.
f) Soluo analtica concentrada de boro (50,0 mg L-1): dissolver 0,286 9
de cido brico em HCI a 0,1 moi L-1, completar o volume para 1000 mL
com o cido. Armazenar em frasco plstico.
190
g) Curva de calibrao: transferir, para bales volumtricos de 100 mL,
0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 e 5,0 mL da soluo analtica concentrada
e completar o volume com HCI a 0,1 moi L-1, guardando em frascos
plsticos. Essas solues contm, respectivamente, 0,0; 0,25; 0,5; 1,0;
1,5; 2,0; e 2,5 mg L-l de boro.
3.8.1.4.1. Preparo do extrato

Incinerar 250 mg da amostra, seca e moda, a 500C durante cerca de
2 h. Dissolver as cinzas com 1 mL de soluo de HCI a 0,1 moi L-1
Homogeneizar.
3.8.1.4.2. Determinao
Transferir, para tubos de ensaio de polipropileno, alquota de 2,0 mL da
curva de calibrao ou da amostra. Juntar 2,0 mL da soluo-tampo e
homogeneizar. Adicionar 2,0 mL da soluo de azometina-H a 0,45% e
agitar. Aps 30 min, transferir as solues amarelo-avermelhadas para
tubos do espectrofotmetro e proceder s leituras em filtro azul, em 420
nm, acertando o zero do aparelho com HCI a 0,1 moi L".
VANTAGENS
b) Alta sensibilidade.
LIMITAES
a) Alto custo operacional.
b) Uso de reagentes txicos e irritantes (azornetina-H).
3.8.2. CURCUMINA
3.8.2.1. PRINCPIO
O mtodo fundamenta-se na reao entre o nion borato e a curcumina em
presena de cido oxlico, havendo a formao de um composto, constitudo
predominantemente de rubrocurcumina, solvel em lcool etlico e medido
espectrometricamente (WHO, 1998, WOLF, 1971).
191
a) Cadinhos de porcelana.
b) Forno do tipo mufla.
c) Copos plsticos.
d) Banho termostatisado.
e) Centrfuga.
f) Espectrofotmetro.

b) cido clordico, 0,1 moi l,": ver item 3.8.1.3.b.
c) lcool etlico 96G. L.
d) Curcumina.
e) cido oxlico.
f) cido clordrico.
g) Soluo de lcool etlico 96GL, livre de boro.
h) Soluo de curcumina em cido oxlico: dissolver 0,04 g de curcumina
finamente moda e 5,0 g de cido oxlico em 100 ml de lcool etlico a 95%.
Guardar em frasco escuro em refrigerador (preparar semanalmente).
i) Soluo analtica concentrada de boro (50,0 rnq.L"): ver item 3.8.1.3.f.
j) Curva de calibrao: ver item 3.8.1 .3.g
3.8.2.4.1. Preparo do extrato
Ver item 3.8.1.4.1.
3.8.4.2. Determinao
Transferir 1,0 mL do extrato ou da curva de calibrao para frascos plsticos
de 50 mL. Juntar 4,0 mL da soluo de curcumina em cido oxlico e
misturar. Colocar os frascos em banho-maria e mant-Ios a 55 3C, de
modo que a parte que contenha as solues fique uniformemente mergulhada.
Alternativa: colocar os frascos em estufa na mesma temperatura.
Deixar secar e conservar os frascos com as amostras no banho por mais 15
mino Retirar os frascos e esfriar em temperatura ambiente. Juntar exatamente
192
25 mL de lcool etlico (95% - 96%), friccionando com bastonete de vidro
com ponta de borracha at dissolver todo o resduo.
Transferir as solues para tubos do espectrmetro e ler (at 1 - 2 h aps),
usando filtro verde (540 nm), acertando o zero com soluo de Hei a 0,1
moi L .I
VANTAGENS
a) Alta sensibilidade.
b) Mtodo preciso.
LIMITAO
O extrato deve ser lido no mximo at 60 rrun aps a estabilizao da
colorao.
4. SISTEMA POLlVALENTE PARA DETERMINAO MULTIELEMENTAR EM

ANLISE DE PLANTAS
4.1. PRINCPIO
sistema polivalente por injeo em fluxo consiste na utilizao

de um nico sistema capaz de realizar diferentes determinaes. No so
necessrias modificaes no mdulo de anlise para a determinao de um
ou outro elemento. sistema polivalente foi projetado para determinao
de ferro, cobre, mangans, zinco, clcio, rnaqnsio e fsforo em plantas.
As medidas espectrofotomtricas podem ser realizadas aps apropriadas
modificaes dos reagentes, das suas concentraes, do volume de amostra
injetada e/ou do comprimento de onda (SILVA et ai., 1998a,b).
A determinao do ferro total baseia-se na reao entre o Fe(lI) e a 0-
fenantrolina, aps prvia reduo do F.e(lIl) do digerido por cido ascrbico.

A determinao de cobre explora o efeito cataltico dos ons cpricos
na oxidao dos ons frricos pelo tiossulfato. A colorao avermelhada
do complexo intermedirio [Fe(S203)]-2 decresce proporcionalmente
concentrao de cobre do digerido.
193
A formaldoxima atua como reagente crornoqeruco para determinao de
mangans. Em meio alcalino, ela forma soluo avermelhada com os ons
Mn (11). Como o ferro torna-se uma espcie potencialmente interferente,
emprega-se o KCN, pois complexa o ferro sem afetar o sinal analtico do
composto Mn-formaldoxima formado.
A determinao de zinco baseia-se na formao do complexo azul Zn-
Zincon.
A o-cresolftalena complexona (CPC) o reagente crornoqeruco
utilizado nas determinaes de clcio e magnsio, aps adio de cido
bis(aminoetil)glicoeter-N,N,N ' ,N '-tetraactico (EGTA) ou oxina e soluo-
tampo adequada para melhoria na seletividade. A presena de ferro em
concentraes> 10 mg L-' conduz reduo pronunciada do sinal analtico
do magnsio. Para minimizar esse efeito, a adio de 3,0% (m/v) de KCN ao
reagente R 1 deve ser empregada e nessa situao a concentrao de ferro
tolerada de aproximadamente 50 mg L-'.
A determinao do fsforo baseia-se na metodologia do amarelo de indofenol.
Em meio cido, o fsforo reage com os ons do reagente R 1 para formar
um complexo amarelo. Esta reao apresenta sensibilidade e seletividade
adequadas para anlises de plantas.
4.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

a) Bomba peristltica com 8 canais
c) Tubos de Tygon, para bombeamento.
d) Injetor-comutador de acrlico, do tipo 1 :3.
e) Espectrofotmetro com clula de fluxo.
f) Registrador potenciomtrico.
g) Tubos de polietileno (0,8 mm d. i.).
4.3. REAGENTES E SOLUES

Todas as solues devem ser preparadas com reagentes qumicos de grau
analtico e gua destilada e desionizada.
A matria orgnica mineralizada por via seca: 0,25 9 de tecido vegetal
seco, finamente modo e peneirado incinerado e os resduos so
194
recuperados em 5,0 mL de 1,0 moi L-l de HCI e diludos 5 vezes com gua,
apresentando concentrao final aproximada de 0,2 moi L-1 de HCI, sendo
esta a concentrao utilizada no fluxo transportador (C, Fig. 1).
Considerando-se os teores esperados de zinco, cobre, mangans, ferro,
clcio, magnsio e fsforo dos digeridos, curvas de calibrao mistas so
preparadas em 0,2 moi L-l de HCI contendo de 0,00 a 2,00 mg L-1 de Zn, Cu
e Mn + 0,0 a 10,0 mg L-l de Fe e Mg + 0,0 a 16,0 rnq.L" de P-P04' + 0,0
a 40,0 mg L-l de Ca. As solues-estoque so de 1000,0 mg.L-1 de Zn, Cu,
Fe ou Ca (com base em ZnS04, CuCI2, FeCI32H20 ou CaC03, em HCI) e de
250,0 rnq.L" de Mg ou P (MgS047H20 ou KH2P04).
Ferro: Rl (Fig. 2) - soluo com 2,0% (m/v) de cido ascrbico, preparada

diariamente e estocada em frasco escuro; R2 - soluo com 2,0 moi L:' de
acetato de amnio mais 0,25 % (m/v) de 1,10 o-fenantrolina (fen), preparada
a partir da solubilizao de 15,42 9 de NH4CH3COOH + 0,25 9 de fen em
100 mL de gua, e R3 - gua.
Cobre, Rl - soluo com 0,10 moi L-1 de tiossulfato de sdio, preparada a

partir da solubilizao de 2,48 9 Na2S203 em 100 mL de gua; R2 - gua
e R3 - soluo com 0,05 moi L-l de sulfato frrico, preparada a partir da
solubilizao de 1,3 9 de FeCI32H20 em 100 mL de gua.
Zinco, Rl - soluo com 2,0% (m/v) de cido ascrbico, preparada

diariamente e estocada em frasco escuro; R2 - soluo com 0,5 moi L-1 de
Na2B407 + 0,7 moi L-l de NaOH + 0,5% (m/v) de KCN, preparada a partir
da solubilizao de 2,80 9 de NaOH + 0,5 9 de KCN + 10,1 9 de Na2B407
em aproximadamente 80 mL de gua quente sob agitao, ajustando o pH
para 9,4 (2,0 moi l," de NaOH ou 6,0 moi L-l de HCI) e completando-se
o volume para 100 mL com gua e R3 - soluo com 0,04% (m/v) de
Zincon (2-carboxi-2' -hidroxi-5' -sulfoformazilbenzeno) + 0,37% (rn/v) de
formaldedo, preparada pela solubilizao de 0,04 9 de Zincon e 1,0 mL de
soluo-estoque com 37% (rn/v) de formaldedo padronizado.
Mangans, Rl - soluo com 2,0% (m/v) de cido ascrbico, R2 - soluo

com 2,0 moi L-l de NaOH + 3,0% (m/v) de KCN, dissolvidos em gua, e R3
- soluo com 0,5 moi L-1 de formaldoxima, preparada pela solubilizao de
195
7,0 9 de cloreto de hidroxilamina + 3,0 mL de formaldedo a 37 % (m/v), em
100 mL de gua.
Clcio, R1 - soluo com 0,5 moi L-1 de NaOH + 3,0% (rn/v) de KCN,
R2 - soluo-tampo (0,5 moi L-1de NH3-NH4, pH = 10,5) preparada pela
solubilizao de 26,7 9 de NH4CI + 20,0 9 NaOH em cerca de 800 mL de
gua, ajustando-se o pH para 10,5 e completando-se o volume com gua para
1.000 mL, e R3 - soluo com 0,01 % (rn/v) de o-cresolftalena complexona
(CPC) + oxina a 0,2% (m/v), preparada pela dissoluo de 0,002 9 de CPC
e 0,4 9 de oxina em 2,0 mL de 5,0 moi L-1de HCI, completando o volume
para 200 mL com gua.
Magnsio, R1 soluo com 0,5 moi L-1de NaOH + 3,0% (rn/v) de KCN, R2
- soluo-tampo (0,5 moi L-1 de NH3-NH4, pH = 10,5) + 4,5.10-3 moi L-1
de EGTA + 5,0.10-3 moi L-1de BaCI22H20, preparada pela solubilizao de
20,OgdeNaOH + 26,7gdeNH4CI + 1,21 gdeBaC122H20 + 1,71 gde
EGTA em 1000 mL de gua e R3 - soluo com 0,03% (m/v) de CPC.
Fsforo, R1 - gua; R2 - soluo com 1,6% (m/v) de molibdato de

amnio, preparada pela dissoluo de 16,0 9 de (NH4)6Mo7024-4H20 em
aproximadamente 800 mL de gua quente e completando-se o volume para
1000 mL com gua, e R3 - soluo com 0,08% (rn/v) de metavanadato de
amnio, preparada pela dissoluo de 0,80 9 de (NH4)V03 em gua quente,
adicionando-se 112,0 mL de HN03 concentrado e completando-se o volume
para 1.000 mL com gua.
4.4. PROCEDIMENTO
diagrama de fluxos mostrado na Fig. 2. comprimento da ala de

amostragem L, atravs da qual a amostra aspirada (4,0 rntrnin'l. de
50 cm (cerca de 250 ul.) para Fe, Cu, Zn e Mn, de 20 cm (cerca de 100
ul.) para P e Mg, ou de 10 cm (cerca de 50 ul.) para determinao de Ca.
Aps modificao da posio do injetor-comutador, a alquota da amostra
selecionada introduzida no fluxo transportador (4,0 mL rnin'). A zona de
196
amostra estabelecida rcebe os reagentes R" R2 e R3 (1,0 mL min'), passa
pelas bobinas B" B2 e B3(30,50 e 300 cm) e alcana a unidade de deteco.
A passagem da amostra processada atravs da clula de fluxo resulta em um
sinal transiente proporcional concentrao do analito contido na amostra,
monitorado no comprimento de onda adequado (Tabela 1). Aps o registro
do sinal analtico, o injetor-comutador retorna posio inicial na Fig. 2, para
que nova alquota da amostra seja introduzida no fluxo transportador.
W~----i s
C W
IC
Figura 2. Sistema polivalente por injeo em fluxo. IC = injetor-comutador,

A = amostra; L = ala de amostragem; C = fluxo transportador
(4,0 mL rnin'): R" R2, R3 = reagentes (1,0 mL rnin'): B" B2, B3 = bobinas
de reao (30, 50, 200 cm); D = detector, W = descarte. Linha pontilhada
= posio alternativa do IC com a movimentao da poro central; setas =
direo de bombeamento. Outras indicaes sobre as dimenses do sistema
encontram-se na Tabela 1.
197
Tabela 1. Concentraes dos reagents, comprimento de onda, linearidade e equaes
de calibrao para determinao de Fe, Cu, Mn, Zn, Ca, Mg e P em plantas
por sistema polivalente por injeo em fluxo.
Elemento L' . linearidad R, R, R3

cm nm e mg L-' 1,0 mL mino' 1,0 mL mino' 1_0 mL mino'
Ferro 50 512 at 10,0 2,0 % (m/v) 0,25 % (m/v) fen +

cido ascorbico 2,0 M NH.OAc
Zinco 50 630 2,0 2,0 % (m/v) 0,5 % (m/v) KCN + 0,04 % (m/v) Zincon +
cido ascorbico 0,7 mal L-' NaOH + 1,0 % (m/v) HCHO +
0,5 mal L-' Na,B.O, 0,02 mal L-' NaOH
Mangans 50 455 2,0 2,0 % (m/v) 3,0 % (m/v) KCN + 0,5 mal L-'
cido ascorbico 2,0 mal L-' NaOH formaldoxina
Cobre 50 550 2,0 0,10 mal L-' Na,S,03 H,O 0,050 mal L-' Fe (111)
Clcio 10 575 30,0 0,5 mal L-' NaOH + 0,5 mal L-' NH3/NH. 0,01 % (m/v) CPC +
3,0 % (m/v) KCN (pH 10,5) 0,2 % (m/v) oxina
Magnsio 20 570 10,0 0,5 mal L-' NaOH + 0,0045 mal L-' 0,03 % (w/v) CPC
3,0 % (m/v) KCN EGTA+
0,005 mal L-' Ba (11) +
0,5 mal L-' NH3/NH.
(pH 10,5)
Fsforo 20 420 30,0 H,O 1,6 % (m/v) 0,08 % (m/v) (NH.)V03

(NH')6 Mo, O, .4H,O
1. Ala de amostragem - dimetro 0,8 mm.
5. REFERNCIASBIBLIOGRFICAS
AOAC. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical

Chemists International. 16 ed., Arlington, 1995. v.1, cap.3.
KRUG, F.J. Mtodos de Decomposio de Amostras. IN: 111 Workshop sobre
Preparo de Amostras. So Carlos, SP. 2000. 148p.
MALAVOL TA, E.; VITTI, G.C.; OLIVEIRA, S.A., Avaliao do estado
nutricional das plantas: princpios e aplicaes. Piracicaba, Associao
Brasileira para Pesquisa da Potassa e do Fosfato, 1989, 201 p.
MILLS, H.A.: JONES JR., J.B. Plant Analysis Handbook 11. A practica
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Georgia: Micro-Macro Publishing, Inc., 1996. 422p.
MIYAZAWA, M.; PAVAN , M.A.; BLOCH, M.F.M. Determination of Ca, Mg,
K, Mn, Cu, Zn, Fe and P in coffee, soybean, corn, sunflower, and pasture
grass leaf tissues by a HCI Extraction Method. Communications in Soil
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NOGUEIRA, A.R.A., SOUZA, G.B., BATISTA, L.A.R., Determinao
Espectrofotomtrica de Nitrognio em Digeridos de Plantas em Sistema de
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OLIVEIRA, P.V., KRUG, F.J., NBREGA, J.A, Espectrometria de Absoro
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QUEVAUVILLER, P. Conclusions of the Workshop- improvements of trace
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WHO. Boron Environmental health criteria. No.204. A WHO monograph.
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WOLF, B. The determination of boron in soil extracts, plant materiais,
composts, manures, water and nutrient solutions, Soil Science and Plant
Analysis, 2 (5) 363-374 (1971).
199

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CAPTULO 8 - TECIDO VEGETAL

Ana Rita A. Nogueira'

Para a determinao dos teores de elementos qumicos individuais

2.2. DECOMPOSiO POR VIA SECA

2.2.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

2.2.3. REAGENTES E SOLUES

2.3.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

2.3.3. REAGENTES E SOLUES

Observao: A, B, C e D referem-se aos procedimentos,

A TENO: Lembre-se de que voc est manuseando

A) DECOMPOSICO COM MISTURA CIDA: CIDO NTRICO E CIDO

Transferir, para tubo de digesto, 0,50 9 ( 0,001 g) de amostra previamente

B) DECOMPOSIO COM CIDO NTRICO E PERXIDO DE HIDROGNIO

Transferir, para tubo de digesto, 0,50 g ( 0,001 g) de amostra previamente

OBSERVAO: Mistura adequada. para amostras com alto

C) DECOMPOSIO ASSISTIDA POR RADIAO MICROONDAS EM

tecido vegetal solubilizado com cido ntrico e perxido de hidrognio

por serem materiais que no absorvem energia das

D) DECOMPOSiO DE PLANTAS ASSISTIDA POR MICROONDAS COM

Pesar e transferir para frasco apropriado deO,5 a 5,0 9 ( 0,001 g) de amostra

E) DECOMPOSIO POR VIA MIDA COM CIDO SULFRICO

Pesar 0,20 9 ( 0,001 g) de amostra previamente seca a 65C por 48 a 72h

F) DECOMPOSIO POR VIA MIDA COM CIDO SULFRICO E PERXIDO

Transferir, para tubo de digesto, de 0,10 a 0,30 g ( 0,001 g) de amostra

2.4. EXTRAO COM SOLUO DE CIDOS DILUDOS (1,0 moi L" de

3.1.1. SEMIMICRO KJELDAHL

3.1.1.3. REAGENTES E SOLUES

3.1.2. ESPECTROFOTOMETRIA COM REAGENTE DE NESSLER

3.1.2.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.1.3. AZUL DE INDOFENOL - REAO DE BERTHELOT

3.1.3.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.1.3.3. REAGENTES E SOLUES

d) Soluo de NaOCI: pesar 5,0 9 de NaOH, 9,4 9 de Na2HP02,12H20 e 31,8

OBSERVAO: conservar em frasco escuro e na geladeira.

e) Soluo analtica de N-NH+4: pesar 4,714 9 de (NH)2S04' p.a., seco em

3.1.4. ANLISE POR INJEO EM FLUXO - REAO DE BERTHELOT

3.1.4.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

~==-=.~==== ..===========================.=.=-==--= =..==._=---=-=--=

3.2.1. AZUL DE MOLlBDNIO

3.2.1.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.2.1.3. REGENTES E SOLUES

3.2.2. AMARELO DE VANADATO

3.2.2.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.2.2.3. REAGENTES E SOLUES

3.3.1. ESPECTROMETRIA DE EMISSO ATMICA

3.1.1.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.1.1.3. REAGENTES E SOLUES

5. Os teores de Na e K nas amostras so obtidos a

3.4. CLCIO E MAGNSIO

3.4.1. ESPECTROMETRIA DE ABSORO ATMICA

3.4.1.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

1. Mtodo mais utilizado para determinao de Ca e Mg.

3.4.2. TITULAO COM EDTA

3.4.2.2. MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.4.2.3. REAGENTES E SOLUES

1) 1,0 mL de EDTA-Na2 a 0,01 moI L' equivalente a 0,4

3.5.1.2 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.5.1.3 REAGENTES E SOLUES

3.6 COBRE, ZINCO, FERRO E MANGANS

3.6.1.2 MATERIAIS E EQUIPAMENTOS

3.6.1.3 REAGENTES E SOLUES

g) Curva de calibrao mista de cobre, ferro, mangans e zinco: a partir das

3.7. REGRAS BSICAS PARA MANUTENO DE ROTINA EM

Instrumentos em boas condies de operao devem ser considerados